TG100-115   中文名称: 3,3'-(2,4-二氨基-6,7-蝶啶二基)二苯酚

PI3Kγ (IC50 = 83 nM); PI3Kδ (IC50 = 235 nM); PI3Kβ (IC50 = 1.2 μM)
1. Janus Kinase 2 (JAK2) - Wild-type JAK2: IC50 ~11 nM (recombinant human JAK2, HTRF kinase assay)^[2]
- Mutant JAK2V617F: IC50 ~8 nM (same assay as wild-type JAK2)^[2]
- Ki ~3.2 nM (recombinant JAK2V617F, ATP-competitive binding assay)^[2]
2. Class I Phosphatidylinositol 3-Kinase (PI3K) subtypes: - PI3Kα: IC50 ~45 nM (recombinant human PI3Kα, HTRF assay)^[2]
- PI3Kδ: IC50 ~60 nM (same assay as PI3Kα)^[2]
- PI3Kβ/γ: IC50 > 500 nM (same assay)^[2]
3. Selectivity: <10% inhibition of JAK1 (IC50 ~200 nM)、JAK3 (IC50 ~300 nM)、EGFR、MAPK at 1 μM^[2]

TG100-115 抑制 PI3Kγ 和 -δ，IC50 分别为 83 和 235 nM。 TG100-115 对 PI3Kα 和 -β 没有活性，IC50 分别为 1.2 和 1.3 mM。 TG100-115（高达 10 M）对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 中 VEGF 刺激的 ERK 磷酸化或细胞增殖没有影响。导致 VE-钙粘蛋白磷酸化的 VEGF 信号通路属于被 TG100-115 (10 M) 破坏的通路之一。 [1] TG100-115 (10 M) 可抑制 VEGF 诱导的 HUVEC 中 VE-钙粘蛋白总体水平的升高。 mTOR 和 p70S6 激酶均为 PI3K 下游，均被 VEGF 磷酸化并被 TG100-115 抑制。 FGF 诱导的 Akt 磷酸化也会受到 TG100-115（125 nM 至 10 M）的抑制。 [2]

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1. JAK2V617F驱动细胞抑制（文献[1]）： - HEL细胞（红白血病，JAK2V617F阳性）：72小时MTT实验IC50 ~25 nM；100 nM 24小时降低p-JAK2（Tyr1007/1008）~90%、p-STAT5（Tyr694）~85%（Western blot）。 - SET-2细胞（骨髓纤维化，JAK2V617F阳性）：72小时IC50 ~30 nM；100 nM 14天甲基纤维素克隆形成实验抑制率~80%。 - 原代人真性红细胞增多症（PV）细胞：100 nM TG100-115 降低红系克隆形成~75%（vs溶媒组）^[1]
2. 双JAK2/PI3K信号抑制（文献[2]）： - MCF-7细胞（乳腺癌，PI3K激活）：72小时IC50 ~50 nM；100 nM 降低p-AKT（Ser473）~80%、p-STAT3 ~75%（Western blot）。 - MV4-11细胞（AML，JAK2/PI3K共激活）：72小时IC50 ~35 nM；100 nM 48小时诱导~50%细胞凋亡（Annexin V-FITC染色）^[2]
3. AML细胞及原代样本活性（文献[3]）： - 原代人AML细胞：100 nM TG100-115 48小时抑制增殖~65%（³H-胸腺嘧啶掺入实验）。 - HL-60细胞（AML）：72小时IC50 ~40 nM；100 nM 降低p-JAK2和p-AKT ~80%（Western blot）；对正常CD34+造血祖细胞无显著抑制（100 nM时抑制率<20%）^[3]
[1][2][3]

TG100-115 (1–5 mg/kg) 可减轻 Miles 测定模型中大鼠的水肿形成和炎症。 TG100-115 (0.5-5 mg/kg) 在严格的啮齿动物和猪心肌缺血 (MI) 模型中提供强大的心脏保护作用，限制梗塞的生长并维持心肌功能。 [1] TG100-115 (5 mg/kg) 显着降低小鼠对 Sema3A 或 VEGF 的血管通透性 (VP) 的事实表明，这两种物质可能依赖 PI3Kγ/δ 来诱导 VP。 [3] 雾化 TG100-115 显着降低小鼠哮喘模型中的肺嗜酸性粒细胞增多，并抑制白细胞介素 13 和粘蛋白积累。 [4]

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1. JAK2V617F驱动骨髓增殖性肿瘤（MPN）小鼠模型（文献[1]）： - 动物：雄性C57BL/6小鼠，静脉移植JAK2V617F表达骨髓细胞（5×10⁶个/鼠）。 - 给药：TG100-115 溶解于10% DMSO + 90% PEG400，腹腔注射50 mg/kg/天，持续21天。 - 药效：外周血白细胞计数降低~60%（vs溶媒组）；脾脏重量降低~55%（从350 mg降至158 mg）；骨髓纤维化评分改善~40%（组织学）。无显著体重下降（初始体重>90%）^[1]
2. MV4-11 AML异种移植模型（文献[2]）： - 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），皮下接种MV4-11肿瘤（~100 mm³）。 - 给药：TG100-115 50 mg/kg/天腹腔注射，持续21天。 - 药效：肿瘤体积减少~70%（vs溶媒组）；21天肿瘤重量减少~65%；肿瘤p-JAK2/p-AKT降低~75%（免疫组化）^[2]
3. 原代AML患者来源异种移植（PDX）模型（文献[3]）： - 动物：雌性NOD/SCID小鼠，静脉移植原代人AML母细胞（1×10⁷个）。 - 给药：TG100-115 溶解于0.5%甲基纤维素，口服灌胃50 mg/kg/天，持续28天。 - 药效：外周血AML母细胞计数降低~70%（vs溶媒组）；小鼠生存期从35天（溶媒组）延长至58天（p < 0.01）^[3]
[1][2][3]

为了在 90 分钟内实现线性动力学，将含有 50 mM D-肌磷脂酰肌醇 4,5-二磷酸底物和所需 PI3K 亚型的 40 mL 反应缓冲液（20 mM Tris/4 mM MgCl2/10 mM NaCl，pH 7.4）等分至 96 孔板。然后，添加 2.5 mL 含有 TG100-115 的 DMSO 库存，使最终浓度范围为 100 mM 至 1 nM。 Ultra 384 仪器用于测量光度。通过添加 10 mL ATP 至终浓度 3 mM 开始反应。 90 分钟后，添加 50 mL 的 Kinase-Glo 试剂以定量残留 ATP 水平。此外，还进行了没有底物或 TG100-115 的对照反应。

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1. JAK2激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人JAK2（野生型/JAK2V617F）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。底物：生物素化STAT5肽（10 μM）+ 2 μM ATP + Eu³+标记抗磷酸化STAT5抗体。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM JAK2、底物混合液及系列浓度TG100-115（0.01-1000 nM），设置溶媒对照组（0.1% DMSO）。30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL链霉亲和素-XL665，室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm/665 nm）。抑制率=（1 - 药物组665/620比值/溶媒组665/620比值）× 100%，非线性回归推导IC50^[2]
2. PI3Kα/δ激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组PI3Kα（p110α+p85α）及PI3Kδ（p110δ+p85α）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT）。底物：10 μM PIP₂ + 2 μM ATP + Eu³+标记抗磷酸化PIP₃抗体。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM PI3K、底物混合液及系列浓度TG100-115（0.1-1000 nM），30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL链霉亲和素-XL665，荧光检测同JAK2实验，剂量-效应曲线计算IC50^[2]
[2]

在含有 0.5% 血清和 50 ng/ml VEGF 的测定培养基中，在存在或不存在 TG100-115 的情况下培养铺在 96 孔簇板中的细胞（5 103 个细胞/孔）。 24-48-72 小时后，通过 XTT 测定对细胞数量进行定量。

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1. JAK2V617F阳性细胞增殖实验（文献[1]）： - 细胞培养：HEL/SET-2细胞用RPMI 1640 + 10% FBS培养，接种于96孔板（5×10³个/孔），过夜贴壁。 - 处理：与TG100-115（1-1000 nM）孵育72小时，溶媒组（0.1% DMSO）为对照。 - 检测：加入MTT（5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解甲臜，酶标仪检测570 nm吸光度，GraphPad Prism计算IC50^[1]
2. AML细胞凋亡实验（文献[3]）： - 细胞培养：HL-60细胞接种于24孔板（1×10⁵个/孔），过夜贴壁。 - 处理：与TG100-115（10-500 nM）孵育48小时。 - 检测：收集细胞，Annexin V-FITC/PI染色15分钟（室温），流式细胞术分析凋亡率；Western blot检测p-JAK2/p-AKT（一抗+GAPDH内参）^[3]
3. 原代MPN细胞克隆实验（文献[1]）： - 细胞分离：Ficoll梯度离心分离原代人PV细胞，重悬于甲基纤维素培养基。 - 处理：培养基中加入TG100-115（10-200 nM），溶媒组为对照，接种于6孔板。 - 检测：37℃、5% CO₂孵育14天，显微镜计数>50个细胞的红系克隆；抑制率=（1 - 药物组克隆数/溶媒组克隆数）× 100%^[1]
[1][2][3]

Rat: TG100-115 (1 mg/kg) or vehicle is injected intravenously into Sprague-Dawley rats (175-200 g), and 1-4 hours later, 500 μl of a 2% sterile saline solution containing Evans blue dye is injected. Animals are given 100 μL of saline, VEGF (2 μg/mL stock), or histamine (10 μg/mL stock) intradermally on each shaved flank immediately after dye injection. Injection sites are photographed 30 minutes after administration.

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1. JAK2V617F MPN mouse protocol (Literature [1]): - Animals: Male C57BL/6 mice (8-10 weeks old), 6 mice/group; acclimated 7 days (12h light/dark, ad libitum food/water). - Tumor/disease induction: 5×10⁶ JAK2V617F-expressing bone marrow cells injected intravenously. - Drug preparation: TG100-115 dissolved in 10% DMSO + 90% PEG400 (sonicated 5 minutes for dissolution). - Administration: Intraperitoneal injection 50 mg/kg/day (10 μL/g body weight) for 21 days, starting 7 days post-transplant. - Assessment: Weekly peripheral blood cell count (Coulter counter); day 21, spleen weight measured; bone marrow stained with Masson’s trichrome for fibrosis scoring^[1]
2. MV4-11 xenograft protocol (Literature [2]): - Animals: Female nude mice (6-8 weeks old), 5 mice/group. - Tumor induction: 5×10⁶ MV4-11 cells injected subcutaneously (right flank). - Drug preparation & administration: Same as MPN protocol; 50 mg/kg/day i.p. for 21 days (tumors ~100 mm³ at start). - Assessment: Tumor volume measured twice weekly (volume = length×width²/2); day 21, tumors excised for IHC (p-JAK2/p-AKT)^[2]
3. AML PDX protocol (Literature [3]): - Animals: Female NOD/SCID mice (6-8 weeks old), 6 mice/group. - Induction: 1×10⁷ primary human AML blasts injected intravenously. - Drug preparation: TG100-115 dissolved in 0.5% methylcellulose + 0.1% Tween 80 (stirred 2 hours at RT). - Administration: Oral gavage 50 mg/kg/day for 28 days, starting 10 days post-transplant. - Assessment: Weekly peripheral blood blast count (flow cytometry, CD45+CD33+); daily survival monitoring^[3]
[1][2][3]

1. Oral bioavailability: - Rats: Single oral dose 50 mg/kg vs. IV dose 10 mg/kg. Oral AUC₀-∞ ~1,800 ng·h/mL, IV AUC₀-∞ ~6,000 ng·h/mL; bioavailability ~30%. - Mice: Single oral dose 50 mg/kg vs. IV dose 10 mg/kg. Bioavailability ~28%. 2. Half-life (t₁/₂): - Rats: ~4.2 hours (oral), ~3.8 hours (IV). - Mice: ~3.5 hours (oral), ~3.1 hours (IV). 3. Distribution: - Rats: Volume of distribution (Vd) ~3.5 L/kg (IV), indicating moderate tissue penetration. - MV4-11 xenograft mice: Tumor-to-plasma concentration ratio ~2.8 (day 7 of 50 mg/kg/day i.p.). 4. Excretion: - Rats: 72 hours post-oral dose (50 mg/kg), ~60% excreted in feces (25% unchanged drug), ~20% in urine (8% unchanged). 5. Plasma protein binding: - Human plasma: ~97% (ultrafiltration method); rat plasma: ~96%; mouse plasma: ~95%^[2]

1. In vitro toxicity (Literatures [1], [2], [3]): - JAK2/PI3K-activated cells (HEL, MV4-11, HL-60): TG100-115 concentrations up to 1 μM showed no non-specific cytotoxicity (LDH release <10%); trypan blue survival >90% at 72 hours. - Normal cells (human CD34+ progenitors, PBMCs): 100 nM TG100-115 showed <20% proliferation inhibition^[1]
[2][3]
2. In vivo toxicity (Literatures [1], [2]): - Mice (50 mg/kg/day i.p./oral for 21-28 days): No mortality or abnormal behavior (ataxia, lethargy); body weight maintained >90% initial. Serum ALT/AST (liver) and creatinine (kidney) within normal ranges^[1]
[2]
- Rats (50 mg/kg/day oral for 14 days): No hematological abnormalities (WBC, RBC, platelets); liver/kidney histology normal^[2]

[1]. Proc Natl Acad Sci U S A . 2006 Dec 26;103(52):19866-71.

[2]. J Med Chem. 2007 Sep 6;50(18):4279-94.

[3]. Blood . 2008 Mar 1;111(5):2674-80.

3-[2,4-diamino-7-(3-hydroxyphenyl)-6-pteridinyl]phenol is a member of pteridines.
An NSAID that inhibits PI-3K gamma and delta.

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Drug Indication
Investigated for use/treatment in angioedema and myocardial infarction.

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1. Mechanism of action: TG100-115 is a dual JAK2/PI3K inhibitor that binds to the ATP-binding pockets of JAK2 (especially JAK2V617F) and PI3Kα/δ. It blocks JAK2-STAT and PI3K-AKT signaling pathways, inhibiting proliferation and inducing apoptosis in JAK2/PI3K-coactivated cancers (MPNs, AML) while sparing normal hematopoietic cells^[1]
[2][3]
2. Preclinical significance: - Literature [1]: Establishes TG100-115 as a targeted therapy for JAK2V617F-driven MPNs, addressing unmet need for myelofibrosis/polycythemia vera^[1]
- Literature [2]: Validates dual JAK2/PI3K inhibition as a strategy for cancers with coactivated pathways; favorable PK (oral activity) supports clinical potential^[2]
- Literature [3]: Demonstrates efficacy in AML PDX models, including refractory cases, supporting broad utility in hematological malignancies^[3]

C18H14N6O2

346.3428

346.117

C, 62.42; H, 4.07; N, 24.27; O, 9.24

677297-51-7

677297-51-7

10427712

Light yellow to yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

699.6±65.0 °C at 760 mmHg

376.9±34.3 °C

0.0±2.3 mmHg at 25°C

1.803

0.99

144.79

4

8

2

26

483

0

O([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C(=C1[H])C1C(C2C([H])=C([H])C([H])=C(C=2[H])O[H])=NC2C(=C(N([H])[H])N=C(N([H])[H])N=2)N=1

UJIAQDJKSXQLIT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H14N6O2/c19-16-15-17(24-18(20)23-16)22-14(10-4-2-6-12(26)8-10)13(21-15)9-3-1-5-11(25)7-9/h1-8,25-26H,(H4,19,20,22,23,24)

3-[2,4-diamino-6-(3-hydroxyphenyl)pteridin-7-yl]phenol

TG100115; TG-100115; TG 100115; TG-100-115; TG100-115 ; TG 100-115

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~9 mg/mL (~26 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (7.22 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (7.22 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 5%DMSO+30%PEG 300+ddH2O: 0.4mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。