| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
PKC:11.9 nM (Ki)
TPPB specifically targets protein kinase C (PKC). It is a highly potent, selective, and cell-permeable activator that binds with high affinity (Ki = 11.9 nM). Upon binding, TPPB enhances the non-amyloidogenic processing of amyloid precursor protein (APP) by promoting the α-secretase pathway. This leads to an increase in the secretion of the neuroprotective sAPPα fragment while simultaneously decreasing the production of amyloid-β (Aβ) peptides, which are implicated in Alzheimer's disease pathology. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在 1 μM 的剂量下，TPPB（化合物 5e） 可显著增加阿尔茨海默病患者来源细胞系中的 sAPPα 分泌 [1]。在 PC12 细胞中，TPPB 会因抗 Aβ25-35 而引起神经毒性。在 1 μM 的剂量下，TPPB 可以抵消 Aβ25-35 造成的细胞损伤。Aβ25-35 处理会抑制 Akt、PKC、MARCKS 和 MAPK 的磷酸化；而 TPPB 可增加这些磷酸化。TPPB 可抑制 Aβ25-35 诱导的 caspase-3 活化 [2]。
使用阿尔茨海默病患者来源的细胞系，大多数研究化合物在 1 μM 浓度下可显著增强 sAPPα 分泌，而 TPPB（化合物 5e） 和化合物 5f 在 0.1 μM 浓度下即可达到此效果。在 1 μM 浓度下，化合物 5c-h 对 sAPPα 分泌的增强作用高于对照化合物 8-(1-癸炔基)苯并内酰胺 (BL)。值得注意的是，高亲脂性配体 5i（Ki 值为 11 nM）未表现出活性。另一方面，其饱和类似物 5j（Ki 值和 ClogP 值相近）在分泌酶测定中仍保持活性。在增生研究中，化合物 5f 在 100 μg 时显示出轻微的反应，化合物 5e 在 300 μg 时也显示出轻微的反应，表明 5f 的效力比 PKC 激活剂 mezerein 低约 30 倍，比 TPA 低约 100 倍。化合物 5e 的活性比 5f 低约 3 倍。基于其他强效 PKC 配体的不饱和效应，我们预测化合物 5e 在大多数检测中将保持生物活性，但其促肿瘤活性会显著降低。因此，化合物 5e 成为寻找能够调节淀粉样蛋白加工的阿尔茨海默病治疗药物的可行候选化合物。[1] 在之前的研究中，研究人员报道蛋白激酶 C (PKC) 激活剂 TPPB 可通过增加 α-分泌酶活性来调节 APP 加工。在本研究中，他们进一步研究了 TPPB 对 Aβ(25-35) 诱导的 PC12 细胞神经毒性的潜在神经保护作用。结果表明，浓度为 1 μM 的 TPPB 可拮抗 Aβ(25-35) 诱导的细胞损伤，这已通过 MTT 检测、LDH 释放和形态学变化得到证实。此外，PKC、Akt 和 MAPK 抑制剂均可阻断 TPPB 对细胞活力的神经保护作用。实验还表明，TPPB 可以增加 Akt、PKC、MARCKS 和 MAPK 的磷酸化水平，而这些磷酸化过程会被 Aβ(25-35) 处理抑制。此外，TPPB 抑制了 Aβ(25-35) 诱导的 caspase-3 活化。综上所述，本实验表明 TPPB 对 PC12 细胞中 Aβ(25-35) 诱导的神经毒性具有抑制作用，并可能提示其在阿尔茨海默病 (AD) 治疗中的潜在应用价值。[2] 体外实验表明，TPPB 具有强大的 PKC 激活活性。它能够抑制神经毒性肽 Aβ25-35 诱导的 caspase-3 活化，表明其具有神经保护作用。在 1 μM 的浓度下，TPPB 可以拮抗 Aβ25-35 诱导的细胞损伤。在源自阿尔茨海默病患者的细胞系中，1 μM 的 TPPB 显著增强了 sAPPα 的分泌。此外，它还能增加下游信号分子（如 Akt、PKC、MARCKS 和 MAPK）的磷酸化，而这些分子会被 Aβ25-35 处理所抑制。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
增生试验。[1]
TPPB（化合物 5e） 和 5f 被评估在剃毛的 Sencar 近交系小鼠背部局部涂抹后诱导增生的能力。增生程度以表皮细胞层数来评估（表 2）。5e 和 5f 的效力与 TPA 和美泽瑞因的效力进行了比较。单次涂抹 1 μg TPA 或单次涂抹 3 μg 美泽瑞因后即可观察到可检测到的增生。5f 在 100 μg 时显示出轻微的反应，5e 在 300 μg 时也显示出轻微的反应，表明 5f 的效力比美泽瑞因低约 30 倍，比 TPA 低约 100 倍。5e 的活性比 5f 低约 3 倍。四次涂抹后观察到类似的关系，但增生程度略有增加。 将TPPB局部涂抹于Sencar近交系小鼠剃毛后的背部后，评估其诱导增生的效果，结果显示300 μg剂量下有中等程度的增生反应[1]。 在体内，TPPB的活性已在小鼠模型中进行了评估。将TPPB局部涂抹于Sencar近交系小鼠剃毛后的背部后，在300 μg剂量下观察到轻微的增生反应。这表明TPPB可以在活体生物体内发挥生物学效应，但其全身效应和在疾病模型中的疗效仍需进一步研究。 |
| 酶活实验 |
sAPPα 的测定。[1]
采用常规免疫印迹技术测定分泌型 sAPPα 的浓度，具体方法参照文献报道并稍作修改。将每组培养皿/处理组的沉淀蛋白提取物上样至新鲜制备的 8% 丙烯酰胺 Tris-HCl 迷你胶中，并进行 SDS-PAGE 电泳分离。上样量根据每组培养皿的总细胞蛋白量进行校正。然后将蛋白电泳转移至 PVDF 膜上。用 5% 脱脂奶粉封闭膜以阻断非特异性结合。封闭后的膜与市售抗体 6E10 (1:500) 于 4℃ 孵育过夜，该抗体可识别条件培养基中的 sAPPα。洗涤后，将膜与辣根过氧化物酶标记的抗小鼠 IgG 二抗于室温孵育。最后，使用增强化学发光法检测信号，并用 Hyperfilm ECL 进行曝光。使用BioRad GS-800校准扫描密度计和Multianalyst软件，通过密度分析法对条带强度进行定量。 体外受体结合实验用于测定TPPB与PKC的亲和力。这些实验通常包括将化合物与PKC制剂和一种与同一结合位点竞争的放射性标记配体一起孵育。测定置换50%结合配体所需的TPPB浓度（IC50），并计算抑制常数（Ki）。对于TPPB，该方法测得的Ki值为11.9 nM。 |
| 细胞实验 |
将 2×10⁴ 个嗜铬细胞瘤 PC12 细胞接种于 96 孔板的每个孔中 24 小时后，用一系列浓度的 TPPB（0.1、0.5、1、5、10、20 μM）孵育细胞。12 至 24 小时后，将原培养基更换为含有终浓度为 0.5 g/L MTT 的培养基，孵育 4 小时。采用 MTT 法评估细胞活力[2]。当检测细胞活力、LDH 和 caspase-3 时，先用 1 μM TPPB（溶于 DMSO）或溶剂预处理细胞 1 小时，再用 20 μM Aβ 处理 24 小时。当检测蛋白质磷酸化时，先用 1 μM TPPB 预处理细胞 1 小时，再用 20 μM Aβ 处理 2 小时。当使用各种激酶抑制剂时，在TPPB处理前30分钟加入，然后暴露于Aβ损伤。对于磷酸化激酶测定，在药物处理前24小时，将原培养基替换为含0.5% FBS的DMEM培养基。[2]
MTT法[2] 使用MTT法评估细胞活力。简而言之，将2 × 10⁴个细胞接种于96孔板的每个孔中24小时后，用一系列浓度的药物孵育细胞。12至24小时后，将原培养基替换为含有终浓度为0.5 g/L MTT的培养基，孵育4小时。然后弃去培养基，加入DMSO进行比色测定。在Tecan Sunrise Eliza-Reader酶标仪上，于λ = 570/630 nm处测定吸光度，并自动扣除背景信号。结果以对照组细胞的百分比表示。 乳酸脱氢酶 (LDH) 释放测定[2] 根据制造商提供的方案，测定受损细胞释放的 LDH。简而言之，在药物处理后的指定时间点，收集细胞，并在 250 g 下离心 10 分钟。然后小心地将 100 μL 上清液转移到光学透明 96 孔板的相应孔中。向每个孔中加入 100 μL 反应混合物后，将样品在室温下孵育 30 分钟（避光）。使用酶标仪测量 500 nm 处的吸光度。自动扣除背景信号后计算细胞毒性百分比。结果以对照组的百分比表示。 蛋白质印迹分析[2] 将20微克蛋白质与5×上样缓冲液（0.313 M Tris-HCl (pH 6.8)，25 °C，10% SDS，0.05%溴酚蓝，50%甘油）和20×还原剂（2 M DTT）混合，煮沸5分钟，然后上样至7.5% SDS-聚丙烯酰胺凝胶。电泳后，将蛋白质电转移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。将膜用5%脱脂奶粉饱和，然后在4℃下与一抗（β-actin 1:10,000，磷酸化PKC 1:1,000，磷酸化MARCKS 1:1,000，磷酸化Akt和Akt 1:1,000，磷酸化MAPK和MAPK 1:1,000，caspase-3 1:1,000，均溶于牛血清白蛋白）孵育过夜。用Tris缓冲盐溶液（TBS）轻柔摇晃洗涤30分钟后，将膜在室温下与辣根过氧化物酶标记的抗小鼠/兔IgG二抗（溶于脱脂奶粉）孵育1小时。使用ECL化学发光Western Blotting检测试剂盒显色。 夹心ELISA[2] 采用夹心ELISA法测定磷酸化Akt、Akt和裂解型caspase-3的活性。简而言之，药物处理后，收集细胞并用裂解缓冲液处理。超声破碎和离心后，将上清液转移至新的微量离心管中，并于-70℃保存备用。检测前，将样品于-160℃冻干20小时，然后重悬于样品缓冲液中。随后，按照制造商说明书加入检测抗体、二抗和底物。在酶标仪上于450 nm处测定信号，结果以对照组的百分比表示。 体外细胞实验用于研究TPPB的功能活性。一种常用的方法是，在有或无TPPB的情况下，用神经毒性物质（如Aβ25-35）处理PC12细胞或其他神经元细胞系。随后评估细胞活力以确定该化合物的神经保护作用。另一种方法是利用源自阿尔茨海默病患者的细胞系，测量TPPB处理后sAPPα和Aβ肽的分泌情况，从而证实其对APP加工的调节作用。 |
| 动物实验 |
增生研究。[1]
小鼠在治疗开始时为7周龄，处于毛发生长周期的休止期。化合物溶解于0.2 mL丙酮中，分别每周涂抹一次或两次，共涂抹四次。每种剂量的化合物治疗两只动物，最后一次涂抹后72小时处死动物。从每只动物身上取下两块处理过的皮肤，用中性缓冲福尔马林固定，并用苏木精-伊红染色进行组织学分析（切片染色由美国马里兰州盖瑟斯堡的American Histolabs公司完成）。使用了TPA（12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯）和美泽瑞因。 已开展TPPB的体内动物实验，以研究其对皮肤的影响。在一项研究中，将TPPB局部涂抹于Sencar近交系小鼠剃毛后的背部。随后对动物进行监测，观察其是否出现增生反应，结果在 300 μg 剂量下观察到了该反应。该模型有助于评估化合物的生物活性及其在体内诱导细胞增殖的潜力。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
TPPB的药代动力学(PK)特性已得到表征，可用于研究。该化合物的分子量为501.54，分子式为C27H30F3N3O3。例如，在体内研究中，TPPB可配制成浓度为4 mg/mL的溶液，溶剂为10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80和45%生理盐水。该粉末在-20°C下储存可稳定长达3年。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
TPPB的毒理学数据有限。在一项小鼠局部应用研究中，300 μg剂量下观察到轻微的增生反应。这表明该化合物可在应用部位产生生物效应，但其全身毒性和治疗安全性尚未完全确定。与所有研究用化合物一样，应谨慎处理。
|
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
蛋白激酶C (PKC) 参与淀粉样前体蛋白 (APP) 的加工。β-分泌酶和γ-分泌酶对APP的异常加工会导致39-43个氨基酸的Aβ片段的产生，该片段具有神经毒性，并被认为在阿尔茨海默病的发病机制中起着关键作用。PKC激活可增强α-分泌酶的活性，从而减少β-分泌酶产生的淀粉样蛋白产物。本文描述了10种新型苯并[a]内酰胺V8基PKC激活剂的合成，这些激活剂的侧链具有不同的饱和度和亲脂性，并通过酰胺基团连接到芳香环上。测得的佛波酯与PKCα结合的抑制Ki值在纳摩尔范围内，并与其亲脂性相关。在合成的10种苯并[a]内酰胺化合物中，化合物5g和5h表现出最佳的结合亲和力。利用源自阿尔茨海默病患者的细胞系，大多数研究化合物在 1 μM 浓度下显著增强了 sAPPα 的分泌，而化合物 5e (TPPB) 和 5f 在 0.1 μM 浓度下即可达到此效果。在 1 μM 浓度下，化合物 5c-h 增强 sAPPα 分泌的效果优于对照化合物 8-(1-癸炔基)苯并内酰胺 (BL)。值得注意的是，高亲脂性配体 5i (Ki = 11 nM) 未显示活性。另一方面，其饱和类似物 5j（具有相似的 Ki 和 ClogP 值）在分泌酶活性测定中仍保持活性。在增殖研究中，化合物 5f 在 100 μg 剂量下显示出中等程度的反应，化合物 5e 在 300 μg 剂量下也显示出中等程度的反应，表明 5f 的效力比 PKC 激活剂 mezerein 低约 30 倍，比 TPA 低约 100 倍。化合物 5e 的活性比 5f 低约 3 倍。基于其他强效 PKC 配体的不饱和效应，我们预测化合物 5e 在大多数测试中仍将保持生物活性，但其促肿瘤活性将显著降低。因此，化合物 5e 是寻找能够调节淀粉样蛋白加工的阿尔茨海默病治疗药物的可行候选化合物。[1] 鉴于目前的研究结果，我们认为像 5e (TPPB) 这样能够增强 sAPPα 分泌的化合物值得进一步研究，作为治疗阿尔茨海默病的潜在药物。此类化合物可单独使用，也可与β-分泌酶抑制剂联合使用，以减少神经毒性β-淀粉样蛋白肽的形成，从而延缓疾病进展[1]。阿尔茨海默病（AD）的病理特征是海马中存在老年斑，这些老年斑主要由胞外沉积的β-淀粉样蛋白（Aβ）多肽组成。大量研究表明，正是这种Aβ肽的沉积和聚集导致神经元功能障碍，最终发展为痴呆。减少Aβ沉积或减轻其神经毒性一直是AD治疗的目标之一[2]。本文的实验结果表明，新型PKC激活剂TPPB可以保护PC12细胞免受Aβ25-35的损伤，这一结果已通过细胞活力检测和形态学变化得到证实。 TPPB可通过PKC介导的信号通路纠正Aβ25-35诱导的Akt、PKC、MARCKS和MAPK磷酸化水平的降低，并抑制Aβ诱导的caspase-3活化。其他PKC激动剂（如PMA）已被证实可通过激活PKC增加sAPPα的释放并减少Aβ肽的分泌。然而，PMA的致癌性限制了其临床应用。其他PKC激动剂（如bryostatin 1和甲基偶氮甲基乙酸酯）也能增加sAPPα的释放，但它们激活α-分泌酶的确切机制尚不清楚。TPPB可通过增加α-分泌酶活性和减少Aβ分泌来调节APP的加工；本研究数据表明，TPPB可抑制Aβ25-35诱导的神经毒性。考虑到sAPPα和Aβ在AD病理生理学中的不同作用以及上述激酶潜在的神经保护作用，我们推测TPPB可能具有治疗AD的潜力，但仍需进一步研究。[2]
其他信息：TPPB又名激活剂V。其IUPAC名称为(2E,4E)-N-[(2S,5S)-5-(羟甲基)-1-甲基-3-氧代-2-丙-2-基-2,4,5,6-四氢-1,4-苯并二氮杂环辛-8-基]-5-[4-(三氟甲基)苯基]戊-2,4-二烯酰胺。它在DMSO中的溶解度为125 mg/mL。该化合物为黄色至橙色固体。 |
| 分子式 |
C27H30N3O3F3
|
|---|---|
| 分子量 |
501.5406
|
| 精确质量 |
501.223
|
| 元素分析 |
C, 64.66; H, 6.03; F, 11.36; N, 8.38; O, 9.57
|
| CAS号 |
497259-23-1
|
| PubChem CID |
9935767
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
728.8±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
394.6±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.5 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.572
|
| LogP |
3.09
|
| tPSA |
85.16
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
36
|
| 分子复杂度/Complexity |
806
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
CC(C)[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC2=C(N1C)C=CC(=C2)NC(=O)/C=C/C=C/C3=CC=C(C=C3)C(F)(F)F)CO
|
| InChi Key |
WOLVEMPZUIFSII-IHHOKICGSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C27H30F3N3O3/c1-17(2)25-26(36)32-22(16-34)15-19-14-21(12-13-23(19)33(25)3)31-24(35)7-5-4-6-18-8-10-20(11-9-18)27(28,29)30/h4-14,17,22,25,34H,15-16H2,1-3H3,(H,31,35)(H,32,36)/b6-4+,7-5+/t22-,25-/m0/s1
|
| 化学名 |
(2E,4E)-N-[(2S,5S)-5-(hydroxymethyl)-1-methyl-3-oxo-2-propan-2-yl-2,4,5,6-tetrahydro-1,4-benzodiazocin-8-yl]-5-[4-(trifluoromethyl)phenyl]penta-2,4-dienamide
|
| 别名 |
tppb; 497259-23-1; alpha-APP Modulator; (2S,5S)-(E,E)-8-(5-(4-(Trifluoromethyl)phenyl)-2,4-pentadienoylamino)benzolactam; CHEMBL331344; (2E,4E)-N-((2S,5S)-5-(hydroxymethyl)-2-isopropyl-1-methyl-3-oxo-1,2,3,4,5,6-hexahydrobenzo[e][1,4]diazocin-8-yl)-5-(4-(trifluoromethyl)phenyl)penta-2,4-dienamide; (2E,4E)-N-[(2S,5S)-5-(hydroxymethyl)-1-methyl-3-oxo-2-propan-2-yl-2,4,5,6-tetrahydro-1,4-benzodiazocin-8-yl]-5-[4-(trifluoromethyl)phenyl]penta-2,4-dienamide; PKC Activator V;
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~249.23 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (4.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 22.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (4.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 22.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9939 mL | 9.9693 mL | 19.9386 mL | |
| 5 mM | 0.3988 mL | 1.9939 mL | 3.9877 mL | |
| 10 mM | 0.1994 mL | 0.9969 mL | 1.9939 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
