HDAC6 ( IC50 = 15 nM ); HDAC8 ( IC50 = 854 nM ); HDAC1 ( IC50 = 16400 nM )

体外活性：Tubastatin A 对所有 11 种 HDAC 异构体均具有显着选择性，并且对除 HDAC8 之外的所有异构体保持超过 1000 倍的选择性，其中 HDAC8 的选择性约为 57 倍。在同型半胱氨酸 (HCA) 诱导的神经变性测定中，Tubastatin A 从 5 μM 开始，对 HCA 诱导的神经元细胞死亡表现出剂量依赖性保护作用，在 10 μM 时几乎完全保护。 100 ng/mL 的 Tubastatin A 可增强 Foxp3+ T 调节细胞 (Treg) 对体外 T 细胞增殖的抑制作用。当 α-微管蛋白在生肌过程早期过度乙酰化时，C2C12 细胞中的图巴他汀 A 治疗会导致肌管形成受损。然而，当肌管中的α-微管蛋白过度乙酰化时，就会发生肌管伸长。最近的一项研究表明，原子力显微镜 (AFM) 测试表明，图巴他汀 A 治疗可增加细胞弹性，且不会对小鼠卵巢癌细胞系 MOSE-E 和 MOSE-L 中的肌动蛋白微丝或微管网络产生剧烈变化。激酶测定：酶抑制测定由位于宾夕法尼亚州 Malvern 的 Reaction Biology Corporation 使用 Reaction Biology HDAC Spectrum 平台进行。 (www.reactionbiology.com) HDAC1、2、4、5、6、7、8、9、10 和 11 检测使用分离的重组人蛋白； HDAC3/NcoR2 复合物用于 HDAC3 测定。 HDAC1、2、3、6、10 和 11 测定的底物是来自 p53 残基 379-382 的荧光肽 (RHKKAc)； HDAC8 的底物是基于 p53 (RHKAcKAc) 残基 379-382 的荧光二酰肽。乙酰基-Lys（三氟乙酰基）-AMC 底物用于 HDAC4、5、7 和 9 测定。将图巴他汀 A 溶解在 DMSO 中，并以 10 剂量 IC50 模式进行测试，从 30 μM 开始进行 3 倍系列稀释。对照化合物曲古抑菌素 A (TSA) 在 10 剂量 IC50 中进行测试，从 5 μM 开始进行 3 倍连续稀释。 IC50 值通过曲线拟合剂量/反应斜率来提取。细胞测定：如前所述，从胎儿 Sprague-Dawley 大鼠（胚胎第 17 天）的大脑皮层获得原代皮层神经元培养物。所有实验均在电镀后 24 小时开始。在这些条件下，细胞不易受到谷氨酸介导的兴奋性毒性的影响。对于细胞毒性研究，用温 PBS 冲洗细胞，然后置于含有 5.5 g/L 葡萄糖、10% 胎牛血清、2 mM L-谷氨酰胺和 100 μM 胱氨酸的最低必需培养基 (Invitrogen) 中。通过向培养基中添加谷氨酸类似物同型半胱氨酸（HCA；5 mM）来诱导氧化应激。 HCA 由 100 倍浓缩溶液稀释而成，并调节至 pH 7.5。结合 HCA，用指定浓度的图巴他汀 A 处理神经元。 24小时后通过MTT测定（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）方法评估活力。

每日治疗 0.5mg/kg 的 Tubastatin A 可抑制 HDAC6，从而促进炎症和自身免疫小鼠模型中的 Tregs 抑制活性，包括多种形式的实验性结肠炎和完全主要组织相容性复合体 (MHC) 不相容的心脏同种异体移植排斥反应。

反应生物学 HDAC Spectrum 平台用于执行酶抑制实验。分离的重组人蛋白用于 HDAC1、2、4、5、6、7、8、9、10 和 11 测定； HDAC3/NcoR2 复合物用于 HDAC3 测试。源自 p53 残基 379-382 (RHKKAc) 的荧光肽用作 HDAC1、2、3、6、10 和 11 检测的底物；源自 p53 残基 379-382 (RHKAcKAc) 的荧光二酰基肽用作 HDAC8 的底物。对于 HDAC4、5、7 和 9 测定，使用乙酰基-Lys（三氟乙酰基）-AMC 底物。将图巴他汀 A 溶解在 DMSO 中后，使用从 30 μM 开始的 3 倍连续稀释方案在 10 剂量 IC50 模式下进行测试。使用从 5 μM 开始的 3 倍连续稀释，在 10 剂量 IC50 中测试对照化合物曲古抑菌素 A (TSA)。对剂量/反应斜率进行曲线拟合即可得出 IC50 值。

胎儿 Sprague-Dawley 大鼠（胚胎第 17 天）的大脑皮层用于培养初级皮层神经元。电镀后二十四小时，开始所有实验。在这些情况下，谷氨酸介导的兴奋性毒性不会损害细胞。将细胞用温 PBS 洗涤，然后放入含有 5.5 g/L 葡萄糖、10% 胎牛血清、2 mM L-谷氨酰胺和 100 μM 胱氨酸的基本必需培养基中进行细胞毒性研究。将谷氨酸类似物同型半胱氨酸 (HCA；5 mM) 添加到培养基中以引起氧化应激。 HCA是通过稀释已浓缩100倍并调节pH至7.5的溶液来制备的。除了 HCA 之外，还用指定浓度的图巴他汀 A 处理神经元。 MTT 测定（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑）用于测定 24 小时后的活力。

[1]. Rational Design and Simple Chemistry Yield a Superior, Neuroprotective HDAC6 Inhibitor, Tubastatin A J. Am. Chem. Soc., 2010, 132 (31), pp 10842-10846.

[2]. Histone deacetylase 6 and heat shock protein 90 control the functions of Foxp3(+) T-regulatory cells. Mol Cell Biol. 2011 May;31(10):2066-78.

[3]. Dysferlin interacts with histone deacetylase 6 and increases alpha-tubulin acetylation. PLoS One. 2011;6(12):e28563.

[4]. Actin filaments play a primary role for structural integrity and viscoelastic response in cells. Integr Biol (Camb). 2012 May;4(5):540-9.

[5]. HDAC6 Inhibition Promotes Transcription Factor EB Activation and Is Protective in Experimental Kidney Disease. Front Pharmacol. 2018 Feb 1;9:34.

[6]. Target deconvolution of HDAC pharmacopoeia reveals MBLAC2 as common off-target. Nat Chem Biol. 2022 Apr 28.

C20H21N3O2.HCL

371.86

371.14

C, 64.60; H, 5.96; Cl, 9.53; N, 11.30; O, 8.60

1310693-92-5

1310693-92-5 (HCl); 1252003-15-8

Solid powder

CN1CCC2=C(C1)C3=CC=CC=C3N2CC4=CC=C(C=C4)C(=O)NO.Cl

LJTSJTWIMOGKRJ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C20H21N3O2.ClH/c1-22-11-10-19-17(13-22)16-4-2-3-5-18(16)23(19)12-14-6-8-15(9-7-14)20(24)21-25;/h2-9,25H,10-13H2,1H3,(H,21,24);1H

N-hydroxy-4-[(2-methyl-3,4-dihydro-1H-pyrido[4,3-b]indol-5-yl)methyl]benzamide;hydrochloride

AG-CR-13900; TubA; Tubastatin A hydrochloride; Tubastatin A HCl; TSA HCl

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Solubility in Formulation 1: ≥ 2.62 mg/mL (7.05 mM) (saturation unknown) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

---

Solubility in Formulation 2: ≥ 2.62 mg/mL (7.05 mM) (saturation unknown) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.

---

View More

Solubility in Formulation 3: ≥ 2.08 mg/mL (5.59 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 20.8 mg/mL clear DMSO stock solution to 400 μL PEG300 and mix evenly; then add 50 μL Tween-80 to the above solution and mix evenly; then add 450 μL normal saline to adjust the volume to 1 mL.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

---

Solubility in Formulation 4: ≥ 2.08 mg/mL (5.59 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 20.8 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of 20% SBE-β-CD physiological saline solution and mix evenly.
Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.

---

Solubility in Formulation 5: ≥ 2.08 mg/mL (5.59 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 20.8 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of corn oil and mix evenly.

---

Solubility in Formulation 6: ≥ 0.52 mg/mL (1.40 mM) (saturation unknown) in 1% DMSO 99% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

---

Solubility in Formulation 7: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 30 mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。