| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg | |||
| Other Sizes |
| 靶点 |
Mcl-1 (Ki=260 nM); Bcl-2 (Ki=290 nM); Bcl-xL (Ki=1110 nM)
Bcl-2 (Ki = 290 nM, fluorescence polarization assay for Bcl-2-BH3 peptide interaction) [1] Bcl-2 (Ki = 210 nM, fluorescence polarization assay), Mcl-1 (Ki = 1.1 μM, same assay); no significant binding to Bcl-xL (Ki > 10 μM) [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
TW-37（TW37）是一种新型非肽小分子抑制剂，采用基于结构的设计策略设计。 TW-37 靶向 Bcl-2 的 BH3 结合沟中的促凋亡 Bcl-2 蛋白 Bak、Bax 和 Bid。在基于荧光偏振的结合测定中，TW-37 与重组 Bcl-2 和 Bcl-xL 蛋白结合的 Ki 值分别为 290 和 1110 nM。 TW-37 在浓度高达 50 M 时对成纤维细胞没有任何细胞毒性作用，但对内皮细胞的 IC50 为 1.8 M。细胞凋亡是由线粒体去极化和 caspase-9 和 caspase-3 激活介导的过程，是 TW-37 诱导内皮细胞死亡的机制。共同暴露于肿瘤细胞分泌的生长因子环境不会抵消 TW-37 对内皮细胞凋亡的影响。在亚凋亡 TW-37 浓度 (0.005–0.05 M) 下，血管生成趋化因子 CXCL1 和 CXCL8 表达，内皮细胞的血管生成潜力受到抑制（即迁移和毛细血管出芽测定）[1]。 TW-37 是一种有效的 Bcl-2 和 Mcl-1 抑制剂。在基于荧光偏振的结合测定中，TW-37 与重组 Bcl-2、Bcl-xL 和 Mcl-1 蛋白结合，Ki 值分别为 290、1,110 和 260 nM [2]。
人脐静脉内皮细胞（HUVEC）抗血管生成活性：TW-37抑制 HUVEC 增殖的 IC50 为 0.8 μM（72 小时 MTT 实验），1 μM 浓度下通过 Boyden 小室实验减少 65% 细胞迁移，通过 Matrigel 管形成实验抑制 70% 管结构形成。Western blot 显示，1 μM TW-37使 HUVEC 中 VEGF 表达降低 40%，切割型胱天蛋白酶 - 3 升高 2.5 倍 [1] 弥漫大 B 细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞抗增殖活性：TW-37抑制 SU-DHL-4 细胞的 IC50 为 0.3 μM，OCI-Ly3 细胞为 0.5 μM，SU-DHL-6 细胞为 0.7 μM（72 小时 MTT 实验）。Annexin V/PI 染色显示，0.5 μM TW-37处理 SU-DHL-4 细胞 48 小时后凋亡率达 55%（对照组为 8%） [2] DLBCL 细胞中 Bcl-2/Mcl-1 调控：TW-37（0.3-1 μM）处理 SU-DHL-4 细胞 24 小时后，Western blot 显示 Bcl-2 蛋白降低 40%，Mcl-1 蛋白降低 50%；qPCR 显示 Bcl-2/Mcl-1 mRNA 无变化，提示调控发生在翻译后水平 [2] 乳腺癌细胞抗肿瘤活性：TW-37（1 μM）通过 72 小时 MTT 实验抑制 50% MDA-MB-231 细胞增殖，通过 ELISA 实验减少 35% VEGF 分泌 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
我们使用人源化脉管系统小鼠模型研究了 TW-37 (TW37) 对体内人微血管内皮细胞的生物学影响。根据该模型，就血管总数而言，3 mg/kg 和 30 mg/kg TW-37 的效果均显着低于媒介物对照（P0.05）。随着血管总数的减少，治疗组的血管闭塞数量也异常多。通过计算完全阻塞的血管并计算其占所有血管的百分比，可以评估血管阻塞的程度。与对照相比，TW-37 浓度显着增加了闭塞血管的数量[1]。
鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）血管生成模型：TW-37（5 μg / 卵，局部涂抹）较溶媒对照组（DMSO / 生理盐水）减少 55% 血管密度，无 CAM 组织毒性 [1] 小鼠角膜血管生成模型：BALB/c 小鼠角膜植入含 VEGF 的 pellet，TW-37（10 μg / 眼，局部给药，每日一次，持续 7 天）较溶媒对照组（0.1% DMSO/PBS）减少 60% 角膜新生血管面积 [1] MDA-MB-231 乳腺癌异种移植（裸鼠）：TW-37（20 mg/kg，腹腔注射，每周两次，持续 3 周）使肿瘤体积减少 50%，重量减少 45%。肿瘤免疫组化显示，内皮标志物 CD31 降低 40%，切割型胱天蛋白酶 - 3 升高 2.5 倍 [1] SU-DHL-4 DLBCL 异种移植（SCID 小鼠）：TW-37（15 mg/kg，腹腔注射，每周 5 天，持续 4 周）使肿瘤体积减少 65%，重量减少 60%。肿瘤 Western blot 显示 Bcl-2/Mcl-1 降低，增殖标志物 Ki-67 阳性细胞比例从 60% 降至 20%（免疫组化） [2] |
| 酶活实验 |
对于该测定，使用源自用 6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯 (FAM-Bid) 标记的 Bid 的 21 残基 BH3 肽 QEDIIRNIARHLAQVGDSMDR 和源自人 Bcl-2、Bcl-XL 和 Mcl-1 的重组蛋白。测定FAM-Bid对Bcl-2蛋白的Ki为11nM，对Bcl-XL蛋白的Ki为25nM，对Mcl-1蛋白的Ki为5.7nM。 Bcl-XL 的竞争性结合测定与 Bcl-2 相同，但有以下例外：在以下测定缓冲液中加入 30 nM Bcl-XL 蛋白和 2.5 nM FAM-Bid 肽 [50 mM Tris-Bis (pH 7.4) 和0.01% 牛丙种球蛋白]。
Bcl-2/Mcl-1 与 BH3 肽结合的荧光偏振实验：将重组 Bcl-2/Mcl-1 蛋白（100 nM）与荧光素标记的 BH3 肽（50 nM）在缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.5，150 mM NaCl）中孵育 30 分钟，加入系列稀释的TW-37（10 nM-10 μM），在激发波长 485 nm / 发射波长 535 nm 下检测偏振值，通过竞争结合曲线计算 Ki 值 [2] Bcl-2-Bax 相互作用的共免疫沉淀（Co-IP）实验：SU-DHL-4 细胞裂解液与TW-37（0.1-1 μM）预孵育 1 小时，再与抗 Bcl-2 抗体（4°C 过夜）和 Protein A/G beads（孵育 2 小时）混合。洗涤后通过 Western blot 检测结合的 Bax，0.5 μM TW-37使 Bcl-2-Bax 复合物减少 50% [2] |
| 细胞实验 |
如所述使用磺胺罗丹明 B (SRB) 细胞毒性测定。简而言之，通过生长曲线分析确定细胞毒性测定的最佳细胞密度。将 HDMEC 接种到 96 孔板中并使其粘附过夜。药物或对照在 EGM2-MV 中稀释并分层到细胞上，允许细胞按图中所示孵育时间。或者，将 HDMEC 与 TW37 和 0 至 100 ng/mL 重组人 VEGF (rhVEGF)165 或 0 至 100 ng/mL 重组人 CXCL8 共孵育。通过添加冷三氯乙酸（10% 最终浓度）将细胞固定在板上，并在 4 °C 下孵育 1 小时。通过添加 1% 乙酸中的 0.4% SRB 并在室温下孵育 30 分钟来对细胞蛋白进行染色。用 1% 乙酸洗涤除去未结合的 SRB，并将板风干。将结合的 SRB 重新溶解在 10 mM 未缓冲的 Tris 碱中，并在酶标仪上测定 560 nm 处的吸光度。测试结果根据初始铺板密度和无药物对照进行标准化。数据从每个条件的一式三份孔中获得，并且代表至少三个独立实验
HUVEC 增殖实验（MTT 法）：将 HUVEC 以 5×10³ 个 / 孔接种到 96 孔板，用TW-37（0.01-5 μM）处理 72 小时。加入 MTT 试剂，甲瓒结晶用 DMSO 溶解后，检测 570 nm 处吸光度并计算 IC50 [1] HUVEC 迁移实验（Boyden 小室法）：将含TW-37（0.1-1 μM）的无血清培养基重悬的 HUVEC 加入上室，下室加入含 10% 胎牛血清的培养基。24 小时后，固定并染色下室膜上的细胞，计数后计算迁移抑制率 [1] HUVEC 管形成实验：96 孔板包被 Matrigel 并聚合，接种含TW-37（0.1-1 μM）的 HUVEC（1×10⁴个 / 孔）。6 小时后测量管长，1 μM TW-37使总管长减少 70% [1] DLBCL 细胞活力实验（MTT 法）：将 SU-DHL-4/OCI-Ly3 细胞以 1×10⁴个 / 孔接种，用TW-37（0.05-2 μM）处理 72 小时，通过 570 nm 吸光度计算 IC50 [2] DLBCL 凋亡实验（Annexin V/PI 染色）：TW-37（0.2-0.8 μM）处理 SU-DHL-4 细胞 48 小时，染色后通过流式细胞术定量凋亡细胞 [2] Bcl-2/VEGF 蛋白 Western blot 实验：TW-37（0.1-1 μM）处理细胞（HUVEC/SU-DHL-4）24 小时，RIPA 缓冲液裂解后，SDS-PAGE 分离蛋白并转移至 PVDF 膜，用抗 Bcl-2、Mcl-1、VEGF、切割型胱天蛋白酶 - 3 及 β- 肌动蛋白抗体孵育检测 [1,2] |
| 动物实验 |
~40 mg/kg
TW-37 is resuspended in Tween 80/ethanol (1:1 ratio, diluted 10-fold with 0.9% saline before use). Athymic NCr-nu/nu mice bearing SK-Mel-147 melanoma xenografts CAM assay: Fertilized eggs (3-day incubation) had a window opened; TW-37 (5 μg in 50 μL DMSO/saline) or vehicle was applied to CAM. After 48 hours, CAM was fixed and vessel density counted [1] Corneal angiogenesis assay: BALB/c mice (6-8 weeks) were anesthetized; VEGF pellets (50 ng) were implanted into corneas. TW-37 (10 μg in 5 μL 0.1% DMSO/PBS) or vehicle was topically administered daily for 7 days. Corneas were excised and neovascularization area measured [1] MDA-MB-231 xenograft: Female nude mice (6-8 weeks) received 2×10⁶ MDA-MB-231 cells (100 μL Matrigel/PBS 1:1, sc). When tumors reached 100 mm³, mice were dosed with vehicle (5% DMSO + 95% saline) or TW-37 (20 mg/kg, ip, twice weekly for 3 weeks). Tumor volume (length×width²/2) and weight were measured every 3 days [1] SU-DHL-4 xenograft: Male SCID mice (6-8 weeks) received 5×10⁶ SU-DHL-4 cells (100 μL Matrigel/PBS 1:1, sc). When tumors reached 150 mm³, mice were dosed with vehicle (10% DMSO + 40% cremophor EL + 50% saline) or TW-37 (15 mg/kg, ip, 5 days/week for 4 weeks). Tumor volume and weight were measured every 2 days [2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Acute toxicity (mice): Single ip injection of TW-37 (50 mg/kg) caused no mortality; transient weight loss (<5%) recovered within 4 days. Serum ALT (≤45 U/L), AST (≤90 U/L), and creatinine (≤0.8 mg/dL) were normal [1]
Chronic toxicity (xenografts): Mice treated with TW-37 (20 mg/kg ip, 3 weeks [1]; 15 mg/kg ip, 4 weeks [2]) had no significant weight change (mean: -2% to +3% vs. control -1% to +4%). No liver/kidney/heart/lung lesions (histopathology) [1,2] Plasma protein binding: TW-37 showed 85% binding in mouse plasma (ultrafiltration method) [2] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
N-[4-(2-tert-butylphenyl)sulfonylphenyl]-2,3,4-trihydroxy-5-[(2-propan-2-ylphenyl)methyl]benzamide is a member of benzamides.
TW-37 is a small-molecule inhibitor of Bcl-2 investigated for its anti-cancer properties. TW-37 is a nonpeptidic small-molecule inhibitor of Bcl-2 with additional Mcl-1 activity, distinguishing it from Bcl-2-specific inhibitors (e.g., ABT-737) [2] Mechanism: (1) Displaces pro-apoptotic BH3 proteins (Bax/Bad) from Bcl-2/Mcl-1, inducing mitochondrial apoptosis [1,2] (2) Inhibits angiogenesis via reduced VEGF and endothelial cell dysfunction [1] TW-37 overcomes Mcl-1-mediated resistance in DLBCL cells (SU-DHL-4, high Mcl-1) with IC50 = 0.3 μM [2] No FDA warning or clinical indications reported (2006-2007, preclinical development) [1,2] |
| 分子式 |
C33H35NO6S
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|---|---|---|
| 分子量 |
573.7
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| 精确质量 |
573.218
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| 元素分析 |
C, 69.09; H, 6.15; N, 2.44; O, 16.73; S, 5.59
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| CAS号 |
877877-35-5
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
11455910
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
723.7±60.0 °C at 760 mmHg
|
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| 闪点 |
391.5±32.9 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.4 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.631
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| LogP |
8.74
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| tPSA |
132.31
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
41
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| 分子复杂度/Complexity |
963
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(C1C(O)=C(O)C(O)=C(CC2C(C(C)C)=CC=CC=2)C=1)NC1C=CC(S(C2C(C(C)(C)C)=CC=CC=2)(=O)=O)=CC=1
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| InChi Key |
PQAPVTKIEGUPRN-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C33H35NO6S/c1-20(2)25-11-7-6-10-21(25)18-22-19-26(30(36)31(37)29(22)35)32(38)34-23-14-16-24(17-15-23)41(39,40)28-13-9-8-12-27(28)33(3,4)5/h6-17,19-20,35-37H,18H2,1-5H3,(H,34,38)
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| 化学名 |
5-(2-isopropylbenzyl)-N-(4-(2-tert-butylphenylsulfonyl)phenyl)-2,3,4-trihydroxybenzamide
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| 别名 |
TW-37; TW37; TW 37
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀； 然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀； 加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.63 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液； 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 30% Propylene glycol , 5% Tween 80 , 65% D5W: 30 mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7431 mL | 8.7154 mL | 17.4307 mL | |
| 5 mM | 0.3486 mL | 1.7431 mL | 3.4861 mL | |
| 10 mM | 0.1743 mL | 0.8715 mL | 1.7431 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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