| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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描述：TWS119 是一种吡咯并嘧啶类化合物，是一种新型、高效且选择性/特异性的 GSK-3β（糖原合成酶激酶-3β）抑制剂，具有在体内干细胞生物学和治疗中的潜在应用价值。它能够诱导神经元分化，可能对干细胞生物学有所帮助。在无细胞实验中，它对 GSK-3β 的抑制 IC50 为 30 nM。在使用小鼠 P19 EC 细胞时，它从吡咯并嘧啶类化合物库中筛选出来，是一种能够选择性诱导神经元分化的物质。 TWS119 的 Kd 值为 126 nM，能与 GSK-3β 强力结合。TWS119 与 GSK-3β 结合可改变复合物的活性，并引发后续的转录事件，最终诱导神经元的产生。此外，TWS119 通过一种不同于传统 Wnt 信号通路的机制促进小鼠胚胎干细胞 (mESC) 的神经元分化。
| 靶点 |
GSK-3β (IC50 = 30 nM)
Target: GSK-3β (IC50 = 30 nM for kinase inhibitory activity; KD = 126 ± 11 nM by SPR)[1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
用 1 μM TWS119 处理 P19 单层细胞，可使 30-40% 的细胞特异性分化为神经元谱系，该结果基于对具有正确神经元形态的 TuJ1 阳性细胞的计数（通过标准胚状体 (EB) 形成方案并同时进行 TWS119 处理，神经元分化率高达 60%）。表面等离子共振 (SPR) 测量结果表明，TWS119 与 GSK-3 具有很强的结合亲和力 (KD = 126 nM)，IC50 为 30 nM，进一步支持了这一结论。[1] 研究发现，TWS119 能有效诱导小鼠胚胎癌细胞和 ES 细胞的神经元分化。 [2] TWS119 处理肝星状细胞 (HSC) 可降低 β-catenin 的磷酸化水平，诱导 β-catenin 核转位，提高谷氨酰胺合成酶的生成，抑制平滑肌肌动蛋白和 Wnt5a 的合成，但促进胶质纤维酸性蛋白、Wnt10b 和成对样同源域转录因子 2c 的表达。[3] TWS119 可显著上调 Tcf7、Lef1 和其他 Wnt 靶基因（如 Jun、Ezd7（编码 Frizzled-7）和 Nlk（编码 Nemo 样激酶））的表达，并触发 β-catenin 的快速积累（通过密度测定法平均增加 6.8 倍）。TWS119 可剂量依赖性地降低 T 细胞特异性杀伤作用和 IFN-γ 的释放，同时维持 IL-2 的产生。[4]根据最近的一项研究，在多克隆激活的人类T细胞中，TWS119处理可诱导Wnt信号通路。与对照激活的T细胞不同，后者会以TWS119剂量依赖的方式分化为CD45RO(+)CD62L(-)效应表型，而这些T细胞则维持着天然的CD45RA(+)CD62L(+)表型。由于TWS119诱导的Wnt信号通路抑制了细胞分裂，T细胞的扩增受到抑制。此外，T细胞活化后的脱颗粒和IFN-γ产生（两者均为T细胞效应功能的指标）也受到损害。TWS119处理的T细胞无法利用自分泌IL-2进行扩增可能是导致T细胞分裂受阻的原因。这是因为TWS119处理会降低IL-2R的表达。 [5]
体外：TWS119（1-5 μM）诱导30-40%的P19细胞分化为单层培养中具有特征性神经元形态的神经元（TuJ1阳性）；采用胚状体形成方案，神经元分化率最高可达 60%。 用TWS119处理 2 天，随后在不含化合物的培养基中培养 2 天，神经元比例增加至 40-60%，表明长时间暴露于早期分化信号不利于后期神经元成熟。 免疫荧光染色显示，在更长时间的培养（在添加 B27 的神经基础培养基中培养长达 2 周）后，TuJ1 阳性细胞表达巢蛋白（神经祖细胞标记物）、神经丝蛋白-M、Map2(a+b)、NeuN、谷氨酸和突触蛋白 I。 在小鼠胚胎干细胞（D3 细胞系）中，400 nM 的TWS119诱导了约 50-60% 的神经元分化，如 TuJ1、Map2(a+b) 和神经丝蛋白-M 染色所示。 蛋白质印迹分析显示：与非活性对照 TWS121 相比，TWS119 (3 μM，24 小时) 可提高 P19 细胞中 β-catenin 的水平。 TCF/LEF 报告基因检测显示，TWS119 以剂量依赖的方式激活 β-catenin 诱导的 TCF/LEF 报告基因活性，在 10 μM 浓度下处理 36 小时后，活性提高了 11 倍。 亲和层析法将 TWS119 固定化后，特异性结合了两个分子量约为 47 和 49 kDa 的蛋白条带，鉴定为 GSK-3β（经 LC/MS 和 Western blot 验证）。[1] TWS119 通过靶向 GSK-3β 诱导小鼠胚胎癌细胞和 ES 细胞的神经元分化。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
当给予 30 mg/kg 的 TWS119 时，细胞表面表达低水平 CD44 和高水平 CD62L 的细胞群。[4]
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| 酶活实验 |
酶活性测定：亲和层析：用含0.4% Nonidet P-40的PY缓冲液裂解P19细胞。将蛋白提取物（300 μg）加入到源自活性或非活性TWS类似物的亲和层析载体（AS-101、AS-102、AS-119、AS-113、AS-121）上。4°C振荡1小时后，用磁珠缓冲液洗涤载体三次。竞争性实验中，使用含50 μM TWS119的磁珠缓冲液。用SDS上样缓冲液洗脱结合的蛋白，经10% Tris-甘氨酸SDS-PAGE分离，并用银染或抗GSK-3β抗体进行Western blot检测。在~47和49 kDa处发现两条条带特异性结合活性类似物衍生的载体，且该结合可被游离的TWS119阻断。[1]
表面等离子共振(SPR)：通过EDC偶联将GST-GSK-3β融合蛋白固定在S系列CM5生物传感器芯片上。以递增浓度（0、2、4、8、16、32、62.5、125、250、500和1000 nM）注入TWS119 90秒，并追踪其解离300秒。假设结合比例为1:1，用于测定动力学和热力学结合常数。通过四次独立实验，确定TWS119与GSK-3β结合的平均亲和力(KD)为126 ± 11 nM。[1] GSK-3β激酶抑制活性：TWS119表现出强效抑制作用，IC50 = 30 nM（提供的方法细节未在正文中完全描述）。[1] |
| 细胞实验 |
所有大鼠随机分为四组，具体如下：假手术组大鼠接受相同的手术操作，但不插入线芯，并给予1 mL二甲基亚砜（1% DMSO生理盐水）；MCAO后，载体组大鼠接受1 mL DMSO；MCAO后4小时，rtPA组大鼠接受rtPA（10 mg/kg，Actilyse®）。 MCAO后4小时，rtPA+TWS119组大鼠接受腹腔注射TWS119（30 mg/kg，溶于1 mL 1% DMSO）。
细胞实验：将P19 EC细胞（克隆P19Ta1Luc-17，稳定转染pTα1-Luc报告基因，包含1.1 kb大鼠Tα1微管蛋白5'侧翼区）以每孔2000个细胞的密度接种于白色384孔板中，培养基为含5% FBS的MEMα培养基。接种12小时后，加入终浓度为5 μM的化合物，其中包括TWS119。4天后，裂解细胞并测定荧光素酶活性。初步筛选结果通过βIII-微管蛋白/TuJ1抗体直接免疫染色和神经元形态观察进行确认。[1] 免疫细胞化学：细胞用4%多聚甲醛PBS溶液固定20分钟。所用一抗：βIII-微管蛋白（TuJ1）小鼠单克隆抗体（1:500），兔多克隆抗体（1:2000）；微管相关蛋白Map2(a+b)小鼠单克隆抗体（1:1000）；神经丝蛋白M小鼠单克隆抗体（1:100）；NeuN小鼠单克隆抗体（1:100）；巢蛋白小鼠单克隆抗体（1:1000）；突触蛋白I兔多克隆抗体（1:1000）；谷氨酸兔多克隆抗体（1:300）。二抗为Cy2或Cy3标记的抗兔或抗小鼠抗体（1:500）。使用尼康Eclipse TE2000显微镜以200倍放大倍率对细胞进行成像。[1] TCF/LEF报告基因检测：将P19细胞接种于100 mm培养皿中，并使用FuGENE6转染试剂将6 μg pTOPFASH（包含四个LEF-1/TCF-1共识结合位点、一个最小启动子和一个萤火虫荧光素酶报告基因）和3 μg海肾荧光素酶对照报告基因共转染。24小时后，用胰蛋白酶消化细胞，并将细胞重新接种于96孔板中。接种12小时后，在含5% FBS的MEMα培养基中，用TWS119（或在培养皿中用RA）处理细胞。36小时后，裂解细胞并检测荧光素酶活性。萤火虫荧光素酶活性以海肾荧光素酶活性进行标准化。 10 μM 的 TWS119 处理 36 小时后，细胞数量增加了 11 倍。[1] 表型鉴定：将 P19 细胞用 1-5 μM 的 TWS119 处理 2 天，然后在添加 2% FBS 的无化合物 MEMα 培养基中培养 2-14 天（或添加 B27 的神经基础培养基培养 10 天以上），之后进行固定和免疫染色。观察到 TuJ1 阳性细胞具有神经元形态（圆形胞体，不对称的多突起）。大多数 TuJ1 阴性细胞巢蛋白（nestin）染色呈阳性。未检测到 GFAP（胶质细胞标记物）或 MF20（肌肉细胞标记物）阳性细胞。[1] 小鼠胚胎干细胞分化：将未分化的 D3 胚胎干细胞培养在明胶包被的培养皿中，培养基为含有 15% 血清替代物和 LIF 的胚胎干细胞生长培养基。在相似的条件下，用 400 nM TWS119 处理细胞，并通过 TuJ1、Map2(a+b) 和神经丝蛋白-M 的免疫染色证实了神经元分化（50-60%）。[1] |
| 动物实验 |
所有大鼠随机分为四组，具体如下：假手术组大鼠接受相同的手术操作，但不插入线芯，并给予1 mL二甲基亚砜（1% DMSO生理盐水）；MCAO后，载体组大鼠接受1 mL DMSO；MCAO后4小时，rtPA组大鼠接受rtPA（10 mg/kg，Actilyse®）；MCAO后4小时，rtPA+TWS119组大鼠接受腹腔注射TWS119（30 mg/kg，溶于1 mL 1% DMSO）。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
3-[[6-(3-氨基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基]苯酚属于吡咯类化合物。
补充信息：TWS119是通过在P19 EC细胞中利用神经元分化特异性荧光素酶报告基因（pTα1-Luc）筛选激酶导向的组合文库而发现的。该化合物通过抑制GSK-3β发挥作用，导致β-catenin稳定并转位至细胞核，β-catenin与TCF/LEF DNA结合蛋白相互作用以调节转录。该机制参与Wnt信号通路。GSK-3β是一种多功能丝氨酸/苏氨酸激酶，在胚胎发育、细胞命运决定、转录调控、代谢、肿瘤发生和神经系统疾病中均有活性。 TWS119无需胚状体形成或维甲酸处理即可诱导神经发生，提示了一种决定细胞命运的早期过程的新机制。该化合物可能通过经典的Wnt信号通路或其他新机制促进神经诱导或神经祖细胞的存活。[1] TWS119是细胞表型筛选中发现的小分子化合物的一个例子，可用于选择性地控制干细胞的增殖和分化。它能诱导小鼠胚胎干细胞的神经元分化，并可能为控制干细胞命运的分子机制提供新的见解，这在体内干细胞生物学和治疗方面具有潜在的应用价值。[2] |
| 分子式 |
C18H14N4O2
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|---|---|
| 分子量 |
318.3294
|
| 精确质量 |
318.111
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| 元素分析 |
C, 67.92; H, 4.43; N, 17.60; O, 10.05
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| CAS号 |
601514-19-6
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| 相关CAS号 |
TWS119 TFA;1507095-58-0
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| PubChem CID |
9549289
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| 外观&性状 |
Off-white to yellow solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
646.0±55.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
344.5±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.0 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.753
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| LogP |
3.54
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| tPSA |
97.05
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
24
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| 分子复杂度/Complexity |
424
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O(C1=C([H])C([H])=C([H])C(=C1[H])O[H])C1C2C([H])=C(C3C([H])=C([H])C([H])=C(C=3[H])N([H])[H])N([H])C=2N=C([H])N=1
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| InChi Key |
VPVLEBIVXZSOMQ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H14N4O2/c19-12-4-1-3-11(7-12)16-9-15-17(22-16)20-10-21-18(15)24-14-6-2-5-13(23)8-14/h1-10,23H,19H2,(H,20,21,22)
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| 化学名 |
3-((6-(3-aminophenyl)-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)oxy)phenol
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| 别名 |
TWS-119; TWS 119; TWS119
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~64 mg/mL (201.0 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: <1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 30mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1414 mL | 15.7070 mL | 31.4139 mL | |
| 5 mM | 0.6283 mL | 3.1414 mL | 6.2828 mL | |
| 10 mM | 0.3141 mL | 1.5707 mL | 3.1414 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Status | Interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT01087294 | Active Recruiting |
Procedure: Allogeneic stem cell transplant Procedure: Leukapheresis |
Leukemia, B-cell Lymphoma, Hodgkins |
National Cancer Institute (NCI) |
August 4, 2010 | Phase 1 |
TWS119 activates Wnt signaling in CD8+ T cells. Nat Med. 2009 Jul;15(7):808-13. |
Wnt signaling inhibits CD8+ T cell proliferation and effector differentiation |
CDKL5/GSK3-IN-1
GSK-3β inhibitor 23
GSK3β-IN-1
GSK-3β inhibitor 25
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COA
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463611831
