AR-LBD (Ki = 267 nM)
Androgen Receptor (AR) - amino-terminal transcriptional activation domain AF-1 (amino acids 244-360) and carboxy-terminal ligand binding domain (LBD) (no specific Ki value provided); Androgen Receptor Splice Variants (AR-SVs) [1]

UT-155 以 267 nM 的 Ki 与 AR-LBD 结合。 UT-155 在抑制 R1881 诱导的野生型 AR 反式激活方面的效力是恩杂鲁胺的 6-10 倍。尽管 UT-155 以类似的方式拮抗野生型和突变型 AR，但恩杂鲁胺对抗 W742L 突变型 AR 的效果比对抗野生型 AR 低两倍。当应用于 LNCaP 细胞时，UT-155 将 0.1 nM R1881 诱导的 PSA 和 FKBP5 基因表达抑制在 10 至 100 nM 之间，其效力是恩杂鲁胺的 5-10 倍[1]。

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抑制AR反式激活：HEK-293细胞转染人AR cDNA、GRE-LUC报告基因和CMV-renilla LUC内参基因，转染24小时后，用不同剂量UT-155与0.1nM R1881联合处理，48小时后进行荧光素酶活性检测，显示AR反式激活受抑制（IC50值未明确提供）[1]
- 与孕激素受体（PR）交叉反应，对盐皮质激素受体（MR）和糖皮质激素受体（GR）交叉反应极小：HEK-293细胞分别转染AR、PR、GR、MR cDNA及GRE-LUC和CMV-renilla LUC，转染24小时后，UT-155与对应配体（0.1nM R1881、孕酮、地塞米松、醛固酮）联合处理，48小时后荧光素酶活性检测显示上述交叉反应特征[1]
- 强效抑制AR靶基因表达：LNCaP和LNCaP-EnzR细胞用活性炭处理血清培养2天，加入0.1nM R1881和不同剂量（1、10、100、1000、10000nM）UT-155处理24小时，提取RNA后实时PCR定量PSA和FKBP5表达（以GAPDH为内参归一化）[1]
- 降低AR蛋白表达：LNCaP细胞用活性炭处理血清培养2天，在有或无0.1nM R1881条件下用UT-155处理约24小时，提取蛋白后用AR-N20抗体进行Western blot（actin为内参），显示AR表达降低；表达AR全长（AR-FL）的AD1细胞经UT-155处理24小时后，Western blot同样检测到AR表达下降[1]
- 不影响PR和ER表达：T47D细胞接种于生长培养基，经不同剂量UT-155处理后，Western blot检测PR、ER和actin表达，显示PR和ER水平无明显降低[1]
- 诱导AR降解：LNCaP细胞用10μM UT-155、50μM环己酰亚胺单独或联合处理不同时间，提取蛋白后Western blot检测AR和actin（n=3次实验定量），显示AR降解加速；LNCaP细胞在0.1nM R1881存在下，用10μM UT-155单独或与10μM MG-132、10μM硼替佐米联合处理9小时，Western blot显示蛋白酶体抑制剂可逆转AR降低，证明AR降解依赖蛋白酶体途径[1]
- 降低AR和AR-SV表达：22RV1细胞用活性炭处理血清培养，在0.1nM R1881存在下用不同剂量UT-155处理约24小时，AR-N20抗体Western blot（actin为内参）显示AR和AR-SV表达降低；表达AR-V567es的D567es细胞和表达AR及AR-SV的LNCaP-95细胞经UT-155处理24小时后，Western blot同样检测到AR和AR-SV表达下降[1]
- 抑制AR-SV诱导的靶基因表达：22RV1细胞用活性炭处理血清培养，用溶媒或不同剂量（10、100、1000、10000nM）UT-155处理48小时，实时PCR显示FKBP5表达较溶媒组降低（p<0.05）[1]
- 不改变AR mRNA水平：LNCaP细胞用活性炭处理血清培养2天，在0.1nM R1881存在下用溶媒、UT-155或UT-69（0.001–10000nM）处理24小时，实时PCR（以GAPDH为内参）显示AR mRNA水平无变化（n=3）[1]
- 不抑制AR向雄激素反应元件（ARE）募集：LNCaP细胞血清饥饿2天，用10μM UT-155预处理30分钟，再用0.1nM R1881处理2小时，DNA-蛋白复合物交联后免疫沉淀AR，实时PCR检测显示AR向PSA增强子ARE的募集未受抑制（n=3，均值±标准误）[1]
- 抑制AR阳性前列腺癌细胞增殖：LNCaP、LNCaP-abl、LNCaP-EnzR细胞用活性炭处理血清培养，在0.1nM R1881存在下用溶媒或UT-155（1pM–10μM）处理，3天换液重处理，6天后SRB法检测细胞活力显示强效增殖抑制（n=3，均值±标准误）；AR阴性Hela细胞用1–30μM UT-155处理，抑制作用微弱[1]
- 抑制AR-SV表达前列腺癌细胞增殖：22RV1和LNCaP-95细胞用活性炭处理血清培养，无R1881刺激下用不同浓度UT-155处理，6天后SRB法检测显示细胞增殖受抑制[1]

正如预期的那样，恩杂鲁胺对 22RV1 肿瘤的生长没有影响，但 UT-155 显着抑制 22RV1 异种移植物的生长 53%，这与体外抗增殖作用一致。在接受 UT-155 治疗的动物中，肿瘤重量、PSA 以及 AR 和 AR-SV 的表达显着下降 [1]。

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抑制LNCaP异种移植瘤生长：选取完整NSG小鼠（n=6–8只/组），每只小鼠 flank 皮下接种500万LNCaP细胞（与matrigel混合），待肿瘤体积达100–200mm³时随机分组，实验组每日皮下注射100mg/kg UT-155，对照组给予溶媒，每周测量两次肿瘤体积，处死时记录肿瘤重量，肿瘤组织蛋白提取物中PSA水平降低，表明肿瘤生长受抑制[1]
- 抑制22RV1异种移植瘤生长：选取去势NSG小鼠（n=6–8只/组），皮下接种22RV1细胞，肿瘤形成后随机分组，实验组每日皮下注射100mg/kg UT-155，阳性对照组每日皮下注射30mg/kg恩杂鲁胺，对照组给予溶媒，每周测量三次肿瘤体积，处死时记录肿瘤重量，肿瘤组织蛋白Western blot显示AR表达降低，证实抗肿瘤效力[1]
- 抑制患者来源异种移植瘤（Pr-3001）生长：选取去势NSG小鼠（n=8–10只/组），每只皮下接种1mm³ Pr-3001组织块，肿瘤生长后随机分组，实验组每日皮下注射100mg/kg UT-155，对照组给予溶媒，每周测量三次肿瘤体积，与溶媒组相比生长抑制显著（p<0.05）[1]

UT-155 是一种选择性雄激素受体 (AR) 拮抗剂，对 AR-RBD 的 Ki 值为 267 nM。除了相互竞争与 LBD 的结合外，UT-69 和 UT-155 还会在 24 小时后降低 AR 蛋白水平，这与报道的转录活性下降类似。我们评估了 SARD 对激素快速诱导的 NDRG1 和 MT2A 基因前体 mRNA 的影响，以确定表达的减少是否是抑制 AR 活性所必需的，或者雄激素从 LBD 中竞争性取代是否足以抑制转录。活动。

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AR-LBD结合实验：将GST标记的纯化人AR-LBD蛋白与1nM ³H mibolerone共同孵育，加入不同浓度UT-155竞争结合位点，通过检测放射性信号位移确定结合亲和力（Ki值）[1]
- AR-AF-1稳态荧光实验：将1μM纯化AR-AF-1蛋白与UT-155预孵育至少30分钟，测量稳态荧光发射光谱，同时校正溶媒单独或含UT-155的溶媒背景，以评估结合作用[1]
- AR-AF-1核磁共振（NMR）结合实验：将500μM UT-155（溶于氘代DMSO）单独或与5μM GST（阴性对照）、5μM GST-AF-1纯化蛋白混合加入NMR管，在不同磁场（δ ppm）下检测核自旋强度，分析7–8ppm区间（对应UT-155芳香环）的峰形变化以确认结合[1]
- AR-AF-1 WaterLOGSY结合实验：将200μM UT-155单独或与2μM纯化GST-AR-AF-1混合，进行WaterLOGSY实验以验证与AR-AF-1的特异性结合[1]
- AR N端结构域片段结合实验：克隆、表达并纯化多种AR N端结构域片段（分子量包含26kDa GST标签），将500μM UT-155与5μM各片段孵育，通过NMR实验确定结合区域为AR-AF-1的244–360位氨基酸[1]

根据细胞系，用不同的密度和含血清培养基在96孔板中培养细胞。使用细胞滴度 glo 测定（Promega，麦迪逊，威斯康星州）或磺胺罗丹明 B (SRB) 评估活力，如图所示。

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AR反式激活荧光素酶实验：HEK-293细胞转染人AR cDNA、GRE-LUC报告质粒和CMV-renilla LUC内参质粒，转染24小时后，用梯度剂量UT-155与0.1nM R1881联合处理，孵育48小时后检测荧光素酶活性，评估AR反式激活抑制效果并计算IC50[1]
- 受体交叉反应荧光素酶实验：HEK-293细胞分别转染AR、PR、GR、MR cDNA及GRE-LUC和CMV-renilla LUC质粒，转染24小时后，UT-155与特异性配体（AR用0.1nM R1881、PR用孕酮、GR用地塞米松、MR用醛固酮）联合处理，48小时后检测荧光素酶活性，评估与其他类固醇受体的交叉反应性[1]
- AR靶基因表达实时PCR实验：LNCaP或LNCaP-EnzR细胞用活性炭处理血清培养2天，加入0.1nM R1881和UT-155（1、10、100、1000、10000nM）处理24小时，提取总RNA，实时PCR定量PSA和FKBP5 mRNA水平，以GAPDH为内参归一化[1]
- AR/AR-SV蛋白表达Western blot实验：LNCaP、AD1、22RV1、D567es、LNCaP-95、T47D细胞经相应处理后收获并提取蛋白，用AR-N20、AR-C-19（检测AR）、PR、ER、actin或GAPDH抗体进行Western blot，通过光密度定量分析相对蛋白表达水平[1]
- AR降解动力学实验：LNCaP或22RV1细胞用10μM UT-155、50μM环己酰亚胺单独或联合处理不同时间点，提取蛋白后Western blot检测AR和actin， blot定量结果（n=3）以半对数坐标绘图并拟合最佳曲线，分析AR降解速率[1]
- AR降解途径实验：LNCaP细胞用活性炭处理血清培养2天，在0.1nM R1881存在下，用溶媒、10μM UT-155单独或与10μM MG-132、10μM硼替佐米联合处理9小时，提取蛋白后Western blot检测AR和GAPDH，通过光密度定量评估蛋白酶体抑制剂对AR降解的影响[1]
- 细胞增殖SRB实验：LNCaP、LNCaP-abl、LNCaP-EnzR、Hela、22RV1、LNCaP-95细胞接种于相应培养基，用指定浓度UT-155处理（部分加0.1nM R1881），3天后换液重处理，培养6天后用SRB法检测细胞活力[1]
- AR招募ChIP-PCR实验：LNCaP细胞血清饥饿2天，用10μM UT-155预处理30分钟，再用0.1nM R1881刺激2小时，DNA-蛋白复合物交联后免疫沉淀AR，实时PCR检测AR向PSA增强子ARE区域的招募情况[1]

[1]. Novel Selective Agents for the Degradation of Androgen Receptor Variants to Treat Castration-Resistant Prostate Cancer. Cancer Res. 2017 Nov 15;77(22):6282-6298.

UT-155 is a potent and selective androgen receptor degrader (SARD) designed to treat castration-resistant prostate cancer by targeting both wild-type AR and AR splice variants (AR-SVs) [1]
UT-155 binds to two distinct regions of AR: the amino-terminal transcriptional activation domain AF-1 (amino acids 244–360) and the carboxy-terminal ligand binding domain (LBD), representing a novel mechanism of action as AF-1 had not been targeted for AR degradation previously [1]
The AR degradation induced by UT-155 is mediated through the proteasome pathway, as demonstrated by the reversal of degradation in the presence of proteasome inhibitors (MG-132, bortezomib) [1]
UT-155 exhibits greater inhibitory potency against AR function compared to approved AR antagonists such as enzalutamide and bicalutamide [1]
UT-155 shows cross-reactivity with the progesterone receptor (PR) but minimal cross-reactivity with the mineralocorticoid receptor (MR) or glucocorticoid receptor (GR), and does not reduce the expression of the estrogen receptor (ER) [1]
The (R)-isomer of UT-155 binds only to the AR AF-1 domain (not LBD) but still inhibits AR transactivation, promotes AR degradation, inhibits LNCaP cell proliferation, and reduces R1881-induced FKBP5 gene expression at comparable concentrations to the parent compound [1]
UT-155 does not alter AR mRNA levels, indicating that its effect on AR is post-transcriptional (protein degradation) rather than transcriptional inhibition [1]

C20H15F4N3O2

405.345618486404

405.11

C, 59.26; H, 3.73; F, 18.75; N, 10.37; O, 7.89

2031161-35-8

(R)-UT-155;2031161-54-1

122640156

White to off-white solid powder

3.1

78

2

7

4

29

664

1

C[C@](CN1C=CC2=C1C=CC(=C2)F)(C(=O)NC3=CC(=C(C=C3)C#N)C(F)(F)F)O

CFSAYQVTXBMPRF-IBGZPJMESA-N

InChI=1S/C20H15F4N3O2/c1-19(29,11-27-7-6-12-8-14(21)3-5-17(12)27)18(28)26-15-4-2-13(10-25)16(9-15)20(22,23)24/h2-9,29H,11H2,1H3,(H,26,28)/t19-/m0/s1

(2S)-N-[4-cyano-3-(trifluoromethyl)phenyl]-3-(5-fluoroindol-1-yl)-2-hydroxy-2-methylpropanamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.17 mg/mL (5.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 21.7 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.17 mg/mL (5.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 21.7 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.17 mg/mL (5.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 21.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。