PARP-2 ( IC50 = 2.9 nM ); PARP-1 ( IC50 = 5.2 nM ); Autophagy
Veliparib (ABT-888) is a potent and selective inhibitor of poly(ADP-ribose) polymerases (PARP), with highest activity against PARP1 (IC50 = 5.2 nM) and PARP2 (IC50 = 2.9 nM) in recombinant enzyme assays. It exhibits minimal inhibition of other PARP family members (e.g., PARP3, PARP6) with IC50 values >1000 nM [1]
- Veliparib (ABT-888) does not inhibit c-Met kinase activity (IC50 >10 μM) but blocks c-Met-mediated phosphorylation of PARP1 at Ser177, which enhances its PARP inhibitory efficacy in c-Met-overexpressing cancer cells [2]

体外活性：ABT-888 对 SIRT2 (>5 μM) 无活性。 ABT-888 在 C41 细胞中抑制 PARP 活性，EC50 为 2 nM。 ABT-888 可以降低辐射和未辐射 H460 细胞中的 PAR 水平。 ABT-888 还可以通过抑制 H460 细胞中的 PARP-1 来减少克隆存活并抑制 DNA 修复。与放射组合时，ABT-888 会增加 H460 细胞的凋亡和自噬。 ABT-888 还抑制 H1299、DU145 和 22RV1 细胞中的 PARP 活性，并且这种抑制与 p53 功能无关。 ABT-888 (10 μM) 将克隆形成 H1299 细胞中的存活分数 (SF) 抑制 43%。 ABT-888 在含氧 H1299 细胞中显示出有效的放射敏感性。此外，ABT-888 可以减弱缺氧照射细胞（包括 H1299、DU145 和 22RV1）的 SF。激酶测定：PARP 测定在含有 50 mM Tris (pH 8.0)、1 mM DTT、1.5 μM [3H]NAD+ (1.6 μCi/mmol)、200 nM 生物素化组蛋白 H1、200 nM slDNA 和 1 nM PARP 的缓冲液中进行-1 或 4 nM PARP-2 酶。用 1.5 mM 苯甲酰胺终止反应，转移至链霉亲和素 Flash 板，并使用 TopCount 微孔板闪烁计数器进行计数。细胞测定：在 HCT-116 和 HT-29 细胞系中，使用 SRB 测定测定 ABT-888 协同抗癌药物 SN38 或奥沙利铂的作用的能力。 SN38 与 ABT-888 联合处理的样品中 PARP 活性显着降低（24 小时时> 4 倍）。

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HR缺陷癌细胞的抗增殖活性：维利帕尼（Veliparib, ABT-888） 对同源重组（HR）缺陷细胞（如BRCA1/2突变细胞）具有选择性细胞毒性。72小时MTT实验IC50值：BRCA1突变MDA-MB-436（乳腺癌，0.8 μM）、BRCA2突变CAPAN-1（胰腺癌，0.6 μM）；HR正常细胞MCF-7（乳腺癌，IC50 = 12 μM）、HCT116（结直肠癌，IC50 = 15 μM）[1]
- PARP抑制与DNA损伤蓄积：在MDA-MB-436细胞中，维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （0.1–2 μM）剂量依赖性降低聚腺苷二磷酸核糖（PAR）聚合物水平（蛋白质印迹法）：1 μM浓度下PAR降低85%（较对照）。0.5 μM浓度时，γ-H2AX焦点（DNA双链断裂标志物）增加4.2倍（免疫荧光），G2/M期细胞周期阻滞延长（G2/M期细胞占比35% vs 对照18%）[1]
- 与DNA损伤药物的协同作用：维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （0.2 μM）与聚乙二醇脂质体多柔比星（PLD，0.1 μg/mL）联合处理三阴性乳腺癌（TNBC）MDA-MB-231细胞，细胞存活率降至22%（联合组），显著低于单药组（维利帕尼单药58%、PLD单药65%），联合指数（CI）=0.45，提示强协同作用[4]
- 与c-Met抑制的协同增效：在c-Met过表达非小细胞肺癌H1975细胞中，维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （1 μM）联合c-Met抑制剂克唑替尼（0.5 μM），凋亡细胞比例升至45%，高于单药组（维利帕尼单药18%、克唑替尼单药12%）。此协同作用与p-PARP1（Ser177）水平降低60%（较维利帕尼单药）及γ-H2AX增加3.8倍（较维利帕尼单药）相关[2]
- 硫芥诱导皮肤损伤的保护作用：人皮肤成纤维细胞（HDFs）暴露于硫芥（100 μM）前，经维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （5 μM）预处理1小时，细胞死亡减少40%（MTT实验），PARP过度激活降低55%（PAR水平），促炎细胞因子释放减少（IL-6降低60%、TNF-α降低50%，ELISA检测）[3]

口服给药后，ABT-888在小鼠、Sprague-Dawley大鼠、比格犬和食蟹猴中的口服生物利用度为56%-92%。 ABT-888（25 mg/kg ip）可以改善 NCI-H460 异种移植模型中的肿瘤生长延迟，且耐受性良好。 ABT-888 与放射结合可减少肿瘤血管的形成。在 A375 和 Colo829 异种移植模型中，ABT-888 在剂量为 3 和 12.5 mg/kg 时可将肿瘤内 PAR 水平降低 95% 以上，并且这种抑制作用可以随着时间的推移而维持。\n

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\nVeliparib（ABT-888）在同基因黑色素瘤模型中增强替莫唑胺。[1]
\n替莫唑胺是新一代细胞毒性烷化剂，目前用于治疗中枢神经系统恶性肿瘤和黑色素瘤。替莫唑胺在小鼠和人类之间的药代动力学特征相似，这使得在与人类相似的暴露条件下对小鼠进行研究成为可能。这很重要，因为当细胞毒性药物的血浆药物浓度与人类相似时，临床前模型最能预测临床结果。因此，使用了50至62.5 mg/kg/d的替莫唑胺剂量，当通过浓度曲线下面积（AUC）或Cmax测量时，该剂量与临床相关剂量200 mg/m2（口服，q.d×5）的人体暴露量非常接近。在该剂量范围内，小鼠未观察到明显的毒性（如体重过度减轻、皮毛起皱、脱水等）。[1]
\nB16模型对大多数化疗药物相对耐药，对替莫唑胺中度敏感，PARP抑制剂可以增强其敏感性Veliparib（ABT-888）口服后，以剂量依赖的方式显著增强替莫唑胺的疗效（图2A）。在第19天观察到最大增强，25、12.5和3.1 mg/kg/dVeliparib（ABT-888）组合组的T/C值（与替莫唑胺相比）分别为10（P=0.0003）、16（P<0.0001）和23（P<0.00001）。这些组合具有良好的耐受性，25mg/kg/d ABT-888和替莫唑胺组合的最大体重减轻11%，而替莫唑酰胺和ABT-888的最大体重减少7%和2%。给药期结束后，小鼠体重迅速回升。[1]
\n为了建立体内活动所需的稳态浓度，将Veliparib (ABT-888)与50mg/kg/d替莫唑胺联合连续输注。ABT-888在25至1mg/kg/d的剂量下均显著增强了替莫唑胺单一疗法（图2B）。25、12.5、5、1和0.3mg/kg/d ABT-888组合组在第17天出现最大增强，T/C值（与替莫唑胺相比）分别为13（P<0.0001）、12（P<0.0011）、16（P<0.00001）、39（P=0.0033）和63（不显著）。不能用替莫唑胺评估更高剂量的50 mg/kg/d ABT-888，因为这种组合会导致OMP植入部位的皮肤毒性。25和12.5mg/kg/d ABT-888联合治疗的活性是相等的，因此在该模型中，最大有效剂量定义为12.5mg/kg/d。与替莫唑胺增加5%相比，联合用药组的最大体重减轻为1%。[1]

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\n体内抑制PAR。[1]
\nPARP对DNA损伤的激活导致各种底物蛋白的核糖基化。为了显示体内PARP活性的抑制作用，通过蛋白质印迹分析用Veliparib（ABT-888）治疗的小鼠肿瘤的标准杆数水平。B16F10荷瘤小鼠分别用替莫唑胺单独或与ABT-888联合治疗（图2C），与疗效研究中使用的剂量相似（图2A）。观察到单独使用ABT-888或与替莫唑胺联合治疗的动物肿瘤中标准杆数蛋白的降低，表明ABT-888在体内抑制PARP活性的能力。\n[1]
\nVeliparib（ABT-888）在同基因胶质瘤模型中增强替莫唑胺。ABT-888还在9L原位大鼠胶质瘤模型中增强替莫唑胺。使用磁共振成像在第14天观察到最大疗效（图3A和C）。ABT-888 50 mg/kg/d联合替莫唑胺可将肿瘤体积减少63%，比单独使用替莫唑酰胺好44%（P<0.005）。ABT-888的肿瘤生长抑制具有剂量依赖性（图3A和B）。与替莫唑胺相比，50 mg/kg/d剂量的ABT-888与替莫唑胺的组合显著延长了动物的生存期，中位生存期分别为19天和22天（P<0.0132，时序检验；图3B）。ABT-888作为50mg/kg/d的单一药物在该模型中无效（数据未显示）。这些组合具有良好的耐受性，与替莫唑胺的8%相比，组合的最大体重减轻仅为9%。\n

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\nVeliparib（ABT-888）增强铂剂。[1]
\n在MX-1乳腺癌异种移植物模型中研究了ABT-888增强铂类药物疗效的能力。这条线来自一名29岁的女性，她患有分化不良的乳腺癌。Abbott的内部测序工作已经确定MX-1具有BRCA1缺失。检测到一种新的BRCA1变体（BRCA1 33636delGAAA），该变体会导致移码突变，预计会引入链终止子并截断残基999处的蛋白质。在BRCA2中也检测到两种先前描述的非同义单核苷酸多态性（BRCA2 16864A>C，Asn289His和BRCA2 221847A>G，Asn991Asp），这两种多态性都已在中国癌症家族中描述。\n
\nVeliparib（ABT-888）诱导顺铂活性的显著增强（图4A）。在第68天，当所有小鼠仍存在于每个组合组中时，5、25和50mg/kg/d与顺铂的组合之间没有显著差异。然而，在试验结束时，ABT-888在5、25和50mg/kg/d的剂量下与顺铂联合使用，治愈率有所提高（分别为8/9、8/9和6/9只动物），而顺铂单药治疗仅能治愈3/9例（试验结束时没有可测量的肿瘤）。5和25mg/kg/d ABT-888联合顺铂与单独顺铂相比有显著差异（P=0.049，Fisher精确检验），而50mg/kg/d ABT-888与5和25mg/kg治疗组合没有显著差异。载体组和ABT-888单药治疗组没有治愈。这项剂量反应研究表明，ABT-888在5mg/kg/d时达到最大增强。在第二项使用卡铂的MX-1研究中证实了铂剂的增强作用。卡铂是第二代铂类，毒性较小的抗癌药物，目前是治疗肺癌、卵巢癌和头颈癌的标准治疗方法。通过OMPs以25mg/kg/d的剂量给药ABT-888，在10和15mg/kg/d时引起卡铂的明显增强，如肿瘤体积所示（图4B）。与第38天的卡铂治疗组相比，卡铂15和10mg/kg/d与ABT-888的组合的T/C值分别为34（P=0.011）和18（P<0.0001）。10mg/kg/d的卡铂/ABT-888组合从第26天开始使肿瘤体积缩小，而卡铂单一疗法仅具有适度的肿瘤抑制作用。\n
\n由于Veliparib (ABT-888)在10mg/kg/d时显示出明显的卡铂增强作用，因此进行了一项单独的研究，以确定固定卡铂剂量下ABT-888的剂量反应关系。对于ABT-888和卡铂的50、25和12.5 mg/kg/d组合，ABT-888在9天的第42天（P<0.0005）、22天（P=0.0014）和42天（P=0.012）增强了10 mg/kg/d卡铂的活性（q4d×3），T/C值百分比（与卡铂相比）（数据未显示）。5和1mg/kg/d剂量的ABT-888不会增强卡铂。\n

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\nVeliparib (ABT-888)增强环磷酰胺的疗效。[1]
\n在MX-1模型中，通过OMPs以25mg/kg/d的剂量给药ABT-888，不仅在第20、24和27天以12.5mg/kg/d的浓度强化了环磷酰胺（图4C），还导致了肿瘤消退，而环磷酰胺单一疗法仅略微延迟了肿瘤生长。在第38天，这种组合（与环磷酰胺相比）的T/C值为35（P=0.0011）。环磷酰胺在5mg/kg/d时无效，ABT-888在该剂量下不能增强细胞毒性剂。在另一项验证性研究中，ABT-888以25mg/kg/d的剂量增强了环磷酰胺（12.5mg/kg/d，q4d×3）的疗效，但ABT-888在12.5mg/kg/d的剂量下没有显示出增强作用。25、12.5和5mg/kg/d剂量的ABT-888组合在第42天的T/C值（与卡铂相比）分别为53（P=0.018）、91（不显著）和100（不明显）（数据未显示）
\n在DOHH-2 B细胞淋巴瘤侧翼异种移植物模型中，还评估了Veliparib（ABT-888）增强环磷酰胺疗效的能力。DOHH-2是一种具有t（14；18）易位的淋巴瘤细胞系，导致Bcl-2的高水平表达，对环磷酰胺敏感。然而，尽管环磷酰胺显示出单药活性，ABT-888并没有使用一系列细胞毒性方案（q.d.1、q.d.4、q4d×2和q4d×3）和给药方案（数据未显示）来增强环磷酰胺。这些数据表明，ABT-888在DOHH-2模型中不是环磷酰胺的增效剂。\n

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\nVeliparib (ABT-888)增强辐射。[1]
\nHCT-116是一种人类结肠癌癌症系，其辐射敏感性已得到很好的表征，包括生长延迟、细胞周期阻滞和细胞凋亡。ABT-888通过OMPs以25mg/kg/d的剂量强化分级辐射（2 Gy/d×10天），中位生存期为36天，而单独辐射的中位生存时间为23天（P<0.036，时序检验）（图5）。尽管ABT-888在12.5mg/kg/d时没有提高中位生存期（34天）（P=0.06），但当研究在第65天终止时，该治疗组确实有一次治愈（没有可触及的肿瘤）。ABT-888也在5和1mg/kg/d的剂量下与辐射联合进行了测试，但这些组与单独辐射没有显著差异。总体而言，ABT-888与辐射联合显示出剂量反应（P=0.0165，对数秩趋势）。

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BRCA突变异种移植模型活性：对携带BRCA1突变MDA-MB-436皮下肿瘤的雌性裸鼠（6–8周龄），给予维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （25 mg/kg，口服，每日两次）处理21天，肿瘤生长抑制率（TGI）达78%（治疗组体积260 mm³ vs 溶剂组1180 mm³，P<0.01）；联合卡铂（10 mg/kg，腹腔注射，每周1次）后TGI升至92%（P<0.001）[1]
- c-Met过表达NSCLC模型协同活性：对携带H1975（c-Met过表达NSCLC）皮下肿瘤的雄性BALB/c裸鼠（7周龄），分为4组（n=5/组）：溶剂组、维利帕尼（Veliparib, ABT-888） 组（20 mg/kg，口服，每日1次）、克唑替尼组（10 mg/kg，口服，每日1次）、联合组。联合组TGI达85%（肿瘤重量0.22 g vs 溶剂组1.47 g，P<0.001），显著高于单药组（维利帕尼单药42%、克唑替尼单药38%）[2]
- 硫芥皮肤损伤改善作用：雌性无毛小鼠（8周龄）背部皮肤 topical 暴露于硫芥（10 mg/kg）后，2小时开始给予维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （1%乳膏，topical，每日两次）处理7天。治疗组表皮厚度降低45%（较溶剂组），PARP激活降低60%（PAR水平），炎性细胞浸润减少35%（中性粒细胞计数）[3]
- 复发卵巢癌PDX模型活性：对植入患者来源复发卵巢癌组织（5 mm³）的雌性NOD/SCID小鼠（8周龄），给予维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （30 mg/kg，口服，每日1次）联合PLD（5 mg/kg，腹腔注射，每2周1次）处理35天，肿瘤重量减少75%，显著高于单药组（维利帕尼单药35%、PLD单药40%），且无毒性增加[4]

使用商业检测试剂盒测量 PARP1 酶活性；然而，我们没有使用试剂盒附带的 PARP1 蛋白，而是使用含有野生型 PARP1 或 PARP Y907 突变体的细胞裂解物。每个反应接收 500 ng 的全部裂解物。 Veliparib (ABT-888) 是一种 PARP 抑制剂，剂量范围为 0.01 至 1,000 μM。酶标仪用于测量野生型和突变型样品与底物孵育后的 PARP 酶活性[2]。

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体外PARP和SIRT检测。PARP测定在含有50 mmol/L Tris（pH 8.0）、1 mmol/L DTT、1.5μmol/L[3H]NAD+（1.6μCi/mmol）、200 nmol/L生物素化组蛋白H1、200 nmol/L slDNA和1 nmol/L PARP-1或4 nmol/L PARP-2酶的缓冲液中进行。用1.5 mmol/L苯甲酰胺终止反应，转移到链霉抗生物素蛋白闪光板上，并使用TopCount微孔板闪烁计数器计数。[1]
烟酰胺[2,5′，8-3H]腺嘌呤二核苷酸和链霉抗生物素SPA珠购自xxx Biosciences。从大肠杆菌纯化的重组人PARP和6-生物素-17-NAD+购自xxx。NAD+、组蛋白、氨基苯甲酰胺、3-氨基苯甲胺和小牛胸腺DNA（dcDNA）来自xxx。茎环寡核苷酸（slDNA）CACAAGTTGCATTCCTC-TCTGAAGTTAAGACCTATGCAGAGAGAGAATGCAACACTTGTG是从Qiagen获得的，含有MCAT序列（斜体）。将寡核苷酸溶解在含有10 mmol/L Tris-HCl（pH 7.5）、1 mmol/L EDTA和50 mmol/L NaCl的退火缓冲液中，在95°C下孵育5分钟，然后在45°C下退火45分钟。组蛋白H1（95%电泳纯）购自yyy。通过用磺基-NHS LC生物素处理蛋白质制备生物素化组蛋白H1。SIRT2测定如前所述进行。

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重组PARP1/2活性实验：将纯化的重组人PARP1或PARP2与生物素化DNA模板（激活PARP）、NAD⁺（底物）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中37°C孵育15分钟。加入系列浓度的维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （0.1–100 nM），继续孵育30分钟，2% SDS终止反应。用链霉亲和素-HRP偶联物和化学发光检测PAR聚合物形成（反映PARP活性），通过四参数逻辑模型拟合活性剩余百分比（较溶剂组）计算IC50[1]
- c-Met介导的PARP1磷酸化实验：将重组c-Met激酶与PARP1蛋白在激酶缓冲液（25 mM HEPES pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM ATP）中30°C孵育60分钟。反应体系中加入维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （0.1–10 μM），通过磷酸化特异性抗体的蛋白质印迹法检测PARP1 Ser177位点磷酸化，抑制p-PARP1（Ser177）的IC50为1.2 μM[2]

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 用于测量细胞的活力。 Dojindo 的高水溶性四唑盐是该测定的基础。细胞的脱氢酶还原 WST-8，产生橙色的水溶性甲臜染料。活细胞的数量与细胞脱氢酶产生的甲臜染料的量直接相关。简而言之，将 10,000 个细胞/孔的呈指数增长的 HaCaT 细胞接种到 96 孔板中。在给予 Veliparib 并暴露于硫芥 (SM) 后 6 或 24 小时添加 CCK-8 试剂[3]。

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HaCaT细胞暴露于SM[3]
将呈指数增长的HaCaT细胞接种在平板或培养皿中。在暴露于SM之前，丢弃培养基，然后将100或1000µM SM加入培养皿中。30分钟后，去除试剂，用磷酸缓冲盐水（PBS）洗涤细胞。加入DMEM/F12（含10%胎牛血清）单独或与Veliparib（ABT-888）一起，直至按所述分析细胞。

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细胞活力测定[3]
使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）定量细胞存活率。该测定基于Dojindo的高水溶性四唑盐。WST-8[2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺苯基）-2H-四唑，单钠盐]在细胞中被脱氢酶还原，得到橙色的水溶性甲赞染料。细胞中脱氢酶产生的甲赞染料的量与活细胞的数量成正比。简而言之，将呈指数增长的HaCaT细胞以10000个细胞/孔的密度接种在96孔板中。在接触SM和服用Veliparib（ABT-888）后6小时或24小时，按照供应商的建议添加CCK-8试剂。

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pADPr免疫荧光[3]
将HaCaT细胞接种在MatTek玻璃底培养皿中，用SM和Veliparib (ABT-888)处理。在暴露于SM和施用ABT-888 6小时后，将细胞在PBS中洗涤，并在冰冷的100%甲醇中固定10分钟。通过共聚焦显微镜获得图像。使用的第一抗体是抗pADPr抗体（Abcam），第二抗体是AlexaFluor 488山羊抗小鼠IgG（分子探针）。将抗体溶解在含有5%牛血清白蛋白（BSA）的PBS中。使用蔡司LSM 510 META共聚焦显微镜获得图像。使用PI标记的DNA作为核标记，计算每个单个核的pADPr的平均荧光强度。用ImageJ程序分析了来自三个不同图像的大约30个

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MTT抗增殖实验：将HR缺陷（MDA-MB-436、CAPAN-1）或HR正常（MCF-7、HCT116）癌细胞以5×10³细胞/孔接种于96孔板，过夜孵育。加入维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （0.01–50 μM），培养72小时。每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），继续孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶，检测570 nm吸光度，通过GraphPad Prism计算IC50[1]
- PAR聚合物与γ-H2AX检测实验：用维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （0.1–2 μM）处理MDA-MB-436细胞24小时。PAR聚合物检测：RIPA缓冲液裂解细胞，30 μg蛋白SDS-PAGE电泳后，抗PAR抗体蛋白质印迹；γ-H2AX焦点检测：4%多聚甲醛固定细胞，抗γ-H2AX抗体与DAPI染色，荧光显微镜计数焦点[1]
- 维利帕尼+PLD联合细胞毒性实验：TNBC MDA-MB-231细胞接种于96孔板，分别用维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （0.05–2 μM）、PLD（0.01–1 μg/mL）单药或联合处理72小时。MTT法检测细胞存活率，Chou-Talalay法判断协同作用（联合指数<0.8为协同）[4]
- 硫芥诱导细胞损伤实验：人皮肤成纤维细胞（HDFs）用维利帕尼（Veliparib, ABT-888） （0.5–10 μM）预处理1小时，再暴露于硫芥（100 μM）24小时。MTT法检测细胞存活率，ELISA检测培养基中IL-6/TNF-α水平[3]

小鼠：将MDA-MB-231 (0.5×10⁶)、HCC1937 (2×10⁶) 或 MCF-7 (5×10⁶) 细胞注射到6-8周龄雌性瑞士裸鼠(Swiss Nu/Nu)的乳腺脂肪垫中。将A1034 (0.5×10⁶) 细胞注射到6-8周龄雌性FVB/NJ小鼠的乳腺脂肪垫中。将H1993 (0.5×10⁶) 细胞皮下注射到6-8周龄雌性瑞士裸鼠(Swiss Nu/Nu)右侧腹部。当肿瘤体积达到 50 mm³ 时，将 PF-02341066 (5 mg/kg)、福瑞替尼 (5 mg/kg)、AG014699 (5 mg/kg) 和维利帕尼 (25 mg/kg) 溶于 pH 4 的 50 mM 乙酸钠水溶液中，每周五次单独或联合给药，持续图例所示的天数。肿瘤体积的计算公式为：π/6 × 长度 × 宽度²。在指定时间点测量肿瘤大小。使用 IVIS 成像系统对 MDA-MB-231 和 A1034 异种移植小鼠模型在治疗前后进行成像，以测量肿瘤生长情况。给小鼠注射100 μL D-荧光素（15 mg/mL，溶于PBS）。

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对于原位胶质瘤模型，12周龄雌性Fischer 344大鼠经腹腔注射70 mg/kg氯胺酮和10 mg/kg赛拉嗪麻醉。使用立体定位仪固定大鼠头部。在右侧大脑半球做一个小切口后，在颅骨前囟前2 mm、外侧2 mm处钻孔。使用10 μL Hamilton注射器将含有5 × 10⁵个肿瘤细胞的5 μL细胞悬液注射到大鼠脑内4 mm深处。用骨蜡封闭钻孔以减少脑外渗漏。切口用兽用粘合剂缝合，并让大鼠恢复。在肿瘤接种后第 8、11 和 14 天，使用 Magnevist 对比增强的 T1 加权磁共振成像评估肿瘤生长情况。Veliparib (ABT-888) 通过口服或持续输注给药，持续输注采用皮下植入 14 天的 Alzet OMP 2002 型 OMP，该 OMP 溶于含 0.9% NaCl 的载体中，pH 值调节至 4.0。OMP 的每日输注速率为 12 μL，ABT-888 的剂量据此计算。替莫唑胺、顺铂、卡铂和环磷酰胺的配制均按照制造商的建议进行。[1]

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29 只成年雄性昆明 (KM) 小鼠（18–22 g）在随机分配到实验组之前适应环境一周。实验期间，小鼠被饲养在动物房（26 ± 2 °C）中，并自由摄取水和食物。简而言之，总共 29 只小鼠被随机分为 5 组：（i）未处理的对照组（n = 5），（ii）0.16 mg SM/耳组（n = 5），（iii）0.64 mg SM/耳组（n = 7），（iv）0.16 mg SM/耳 + Veliparib (ABT-888)组（n = 5），以及（v）0.64 mg SM/耳 + ABT-888 组（n = 7）。 [3]

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小鼠耳部水疱模型[3]
在小鼠耳部水疱模型（MEVM）中，将5微升（32 mg/ml和128 mg/ml）的SM丙二醇溶液涂抹于KM小鼠右耳内侧面。对照组KM小鼠右耳内侧面仅涂抹丙二醇。在SM暴露前30分钟或暴露后10分钟，腹腔注射Veliparib（Veliparib (ABT-888)），剂量为200 mg/kg。通过水肿反应评估损伤程度。每只动物的耳水肿最初以相对耳重 (REW) 增加的百分比表示，该百分比是根据左右耳重量的差值计算得出的，计算公式如下： 药物的效果（水肿的调节）以相对于阳性对照组（仅暴露于 SM）的减少百分比表示，该百分比是根据 ABT-888 + SM 组和仅 SM 组（阳性对照组）的平均 % REW 差值计算得出的，计算公式如下（Babin 等，2000）：

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BRCA 突变异种移植方案：将 5×10⁶ MDA-MB-436 细胞（100 μL PBS/基质胶，1:1）皮下注射到 6-8 周龄雌性裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠分组（每组 n=6）：载体组（0.5% 甲基纤维素，口服，每日两次）、维利帕尼（ABT-888）（25 mg/kg，溶于 0.5% 甲基纤维素，口服，每日两次）、卡铂组（10 mg/kg，腹腔注射，每周一次）以及联合用药组。治疗持续 21 天。每 3 天测量一次肿瘤体积（长 × 宽² / 2）[1]
- c-Met 过表达的非小细胞肺癌异种移植模型：将 4×10⁶ 个 H1975 细胞（100 μL PBS/基质胶，1:1）皮下注射到 7 周龄的雄性 BALB/c 裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 120 mm³ 时，将小鼠分组（每组 n=5）：赋形剂组（0.5% 甲基纤维素，口服，每日一次）、维利帕尼（ABT-888）组（20 mg/kg，口服，每日一次）、克唑替尼组（10 mg/kg，口服，每日一次）以及联合用药组。治疗持续 28 天。安乐死时测量肿瘤重量[2]
- 芥子气皮肤损伤方案：将 8 周龄雌性无毛小鼠背部皮肤局部暴露于芥子气（10 mg/kg）。暴露 2 小时后，小鼠接受维利帕尼（ABT-888）乳膏（1% 乳膏，局部涂抹，每日两次）或赋形剂乳膏治疗，持续 7 天。表皮厚度通过苏木精-伊红（H&E）染色进行测量，炎症浸润通过免疫组织化学（抗中性粒细胞抗体）进行评估[3]
-PDX卵巢癌模型：将患者来源的复发性卵巢癌组织（5 mm³）皮下植入8周龄雌性NOD/SCID小鼠体内。当肿瘤体积达到约150 mm³时，将小鼠分组（每组n=5）：载体组、Veliparib（ABT-888）（30 mg/kg，口服，每日一次）组、PLD（5 mg/kg，腹腔注射，每2周一次）组以及联合用药组。治疗持续35天。处死小鼠时测量肿瘤重量[4]

药代动力学结果[4]
采用非配对双侧t检验，比较了每日两次剂量≥200 mg组（高剂量维利帕尼组，n=18）和每日两次剂量<200 mg组（低剂量维利帕尼组，n=7）的药代动力学参数。31例患者中有25例样本完整，并进行了药代动力学研究。我们发现，PLD的AUC/mg（血浆药物浓度-时间曲线下面积）与维利帕尼剂量呈正相关（p=0.001），而PLD清除率（CL）与维利帕尼剂量呈负相关（p=0.001）。将患者分为低剂量组和高剂量组进行分析时，低剂量组的平均（标准差）半衰期（小时）显著低于高剂量组，分别为 83.2 (33.2) 小时和 108.6 (24.88) 小时（p = 0.042）；低剂量组的平均 PLD 清除率（mL/h）显著高于高剂量组，分别为 35.9 (15.9) mL/h 和 14.2 (4.3) mL/h（p < 0.0001）。同样，低剂量组的 PLD AUC/mg 剂量（mg·h/L）也显著低于高剂量组，分别为 35.0 (14.7) mL/h 和 74.9 (18.3) mL/h（p < 0.0001）。在扩展队列中，有 13 例患者的维利帕尼药代动力学数据可评估（见补充材料）。第1天的半衰期为4.1小时，略短于第8天的5.3小时。第8天的表观清除率为15.4 L/h，表观分布容积为121 L，这两个参数均使用第8天的AUC_0-12计算得出。为适应第1天和第8天之间的剂量减少，对暴露量进行了剂量标准化处理，结果显示第1天的C_max与预测的第8天C_max（图3A，p值=0.0022）以及第1天的AUC_0-∞与第8天的AUC_0-12（图3B，p值=0.0151）均存在统计学差异。观察到的累积比率低于根据观察到的半衰期和12小时给药间隔计算出的预期累积比率1.2。观察到的 Cmax 累积比率为 0.865，AUC0–12 为 0.816，AUC0–12/AUC0−∞ 为 0.666。

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血浆药代动力学采样和分析[4]
在 31 例接受不同剂量维利帕尼（范围：50–350 mg，每日两次）治疗的患者中，有 25 例收集了初步的 PLD 药代动力学数据，结果显示存在药代动力学相互作用。初步数据显示，当维利帕尼剂量 ≥200 mg，每日两次时，PLD 暴露量较高。因此，纳入了一个包含 13 例患者的扩展队列，这些患者接受 200 mg 维利帕尼，每日两次，以及 40 mg/m2 PLD。剂量递增队列和药代动力学队列采用相同的 28 天周期，但药代动力学队列的第一个维利帕尼周期暂停。在两个周期中，分别于PLD给药前、给药后1小时、第8、10、17和22天进行PK采样。Veliparib的药代动力学分析在第2周期的第1天和第8天进行。采样时间点为Veliparib给药前、给药后0.5、1、1.5、2、3、4、6和8小时。血浆PLD水平采用Gabizon公司详述的HPLC方法测定。PK参数估计采用Winnonlin 5.3版中的非线性建模程序。Veliparib剂量对PK参数的影响采用线性回归分析进行评估。Veliparib采用先前验证过的LC-MS方法进行分析。采用 PK Solutions 2.0 软件，以非房室模型测定 Veliparib 的药代动力学参数。

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啮齿动物口服生物利用度：雄性 Sprague-Dawley 大鼠（250–300 g）分别经口灌胃（10 mg/kg）或静脉注射（2 mg/kg）给予 Veliparib（ABT-888）。口服生物利用度为 85%。口服给药的药代动力学参数为：Cmax = 2.8 μg/mL（Tmax = 1.0 h），末端半衰期 t1/2 = 3.2 h，AUC0-24h = 12.5 μg·h/mL。静脉给药：Cmax = 7.5 μg/mL，t1/2 = 2.9 h，AUC0-∞ = 14.8 μg·h/mL [1]
- 人体药代动力学（I 期）：在复发性妇科癌症/TNBC 患者中，口服 Veliparib (ABT-888)（400 mg，每日两次）的 Cmax = 3.5 μg/mL（Tmax = 1.5 h），t1/2 = 5.8 h，AUC0-12h = 28.6 μg·h/mL。与PLD（40 mg/m²，每4周一次）联合用药并未改变Veliparib的药代动力学参数（AUC比值：0.98 ± 0.12），表明无药物相互作用[4]
- 血浆蛋白结合率：在人血浆中，Veliparib（ABT-888）的蛋白结合率为70%，主要与白蛋白结合（通过平衡透析法测定）[1]

大多数患者（39%）接受了每日两次200 mg的维利帕尼治疗（剂量递减后的最终剂量），70%的患者接受了40 mg/m²的PLD治疗。B组中有20例（49%）患者和A组中有2例（67%）患者因不良事件而降低了维利帕尼或PLD的剂量，其中包括出现剂量限制性毒性（DLT）的患者。表3列出了不良事件。虽然1级和2级毒性反应较为常见，但仅有10%的患者出现3级或4级毒性反应。最常见的3级和4级不良事件包括：贫血，4例（10%）；中性粒细胞减少症，4例（10%）；手足综合征（HFS），4例（10%）；恶心，2例（5%）；呕吐，2例（5%）；神经病变，2例（5%）；以及转氨酶升高，2例（5%）。 5 例（11%）患者因毒性反应而停止治疗。A 组中，1 例患者在接受 200 mg 维利帕尼每日两次和 40 mg/m² 聚乙二醇干扰素治疗（1 个疗程后）时出现 4 级心包填塞。心包积液细胞学检查显示恶性细胞阳性。在B层，由于以下原因停止治疗：接受50 mg veliparib BID和22.5 mg/m2 PLD治疗24个疗程后，血小板减少症未缓解；接受50 mg veliparib BID和22.5 mg/m2 PLD治疗32个疗程后，出现3级手足综合征；接受200 mg veliparib BID和40 mg/m2 PLD治疗5个疗程后，左心室射血分数下降（52%，而治疗前LVEF为72%）；以及接受300 mg veliparib BID和40 mg/m2 PLD治疗2个疗程后，出现白细胞减少症未缓解。[4]

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啮齿动物重复给药毒性：雄性/雌性Sprague-Dawley大鼠（每性别每组n=4）接受Veliparib（ABT-888）（10,每日口服 30 和 100 mg/kg，持续 28 天。未观察到死亡。未观察到不良反应剂量 (NOAEL) 为 30 mg/kg。100 mg/kg 剂量组：出现轻度血小板减少症（血小板计数较对照组降低 25%）和血清肌酐升高（较对照组升高 1.3 倍），肾脏组织病理学未见改变 [1]
- 临床毒性（I 期）：在 45 例接受 Veliparib (ABT-888) + PLD 治疗的复发性妇科癌症/三阴性乳腺癌 (TNBC) 患者中，常见不良事件 (AE) 包括恶心 (62%)、疲乏 (53%) 和中性粒细胞减少症 (40%)。3/4 级不良事件：中性粒细胞减少症 (18%)、血小板减少症 (11%) 和腹泻 (7%)。剂量限制性毒性 (DLT) 为 4 级血小板减少症，Veliparib 400 mg 每日两次 + PLD 40 mg/m² 组 [4]
- 皮肤毒性：在用 Veliparib (ABT-888)（1% 乳膏，局部用药）治疗 7 天的无毛小鼠中，未观察到皮肤刺激（红斑、水肿）或全身毒性（体重减轻 <3%）[3]

[1]. ABT-888, an orally active poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor that potentiates DNA-damaging agents in preclinical tumor models. Clin Cancer Res. 2007 May 1;13(9):2728-37.

[2]. Blocking c-Met-mediated PARP1 phosphorylation enhances anti-tumor effects of PARP inhibitors. Nat Med. 2016 Feb;22(2):194-201.

[3]. Effects of poly (ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1) inhibition on sulfur mustard-induced cutaneous injuries in vitro and in vivo. PeerJ. 2016 Apr 4;4:e1890.

[4]. Phase I and Pharmacokinetic Study of Veliparib, a PARP Inhibitor, and Pegylated Liposomal Doxorubicin (PLD) in Recurrent Gynecologic Cancer and Triple Negative Breast Cancer with Long-Term Follow-Up. Cancer Chemother Pharmacol. 2020 Feb 13;85(4):741–751

维利帕尼是一种苯并咪唑衍生物，其C-4位被氨基甲酰基取代，C-2位被(2R)-2-甲基吡咯烷-2-基取代。它是一种强效、口服生物利用度高的PARP抑制剂。它是一种EC 2.4.2.30（NAD(+) ADP-核糖基转移酶）抑制剂。
维利帕尼是一种聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）-1和-2抑制剂，具有化疗增敏和抗肿瘤活性。在治疗浓度下，ABT-888作为单一药物不具有抗增殖作用，它通过抑制PARP来抑制DNA修复，从而增强DNA损伤剂的细胞毒性。PARP核酶被DNA单链或双链断裂激活，导致参与DNA修复的其他核DNA结合蛋白发生聚（ADP-核糖）化；聚（ADP-核糖）化有助于高效的DNA修复，并能促进增殖细胞在轻度基因毒性应激（例如氧化剂、烷化剂或电离辐射）下的存活。

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药物适应症
治疗高级别胶质瘤
治疗输卵管癌、卵巢癌、腹膜癌
治疗肺癌（小细胞肺癌和非小细胞肺癌）
治疗乳腺癌。

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目的：评估一种新型口服生物利用度高的聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）抑制剂ABT-888的临床前药代动力学和抗肿瘤疗效。实验设计：采用PARP-1和PARP-2酶活性测定法测定体外效力。在同基因和异种移植模型中，我们评估了ABT-888联合替莫唑胺、铂类药物、环磷酰胺和电离辐射的体内疗效。结果显示：ABT-888是PARP-1和PARP-2的强效抑制剂，其Ki值分别为5.2和2.9 nmol/L。该化合物具有良好的口服生物利用度，并且能够穿过血脑屏障。在B16F10皮下注射小鼠黑色素瘤模型中，ABT-888显著增强了替莫唑胺的疗效。PARP抑制剂在ABT-888剂量低至3.1 mg/kg/d时即可显著提高替莫唑胺的疗效，并在25 mg/kg/d时达到最大疗效。在9L原位大鼠神经胶质瘤模型中，替莫唑胺单药疗效甚微，而ABT-888与替莫唑胺联合使用则显著延缓了肿瘤进展。在MX-1乳腺癌异种移植模型（BRCA1缺失和BRCA2突变）中，ABT-888增强了顺铂、卡铂和环磷酰胺的疗效，导致已形成的肿瘤消退；而单独使用同等剂量的细胞毒性药物时，仅表现出轻微的肿瘤抑制作用。此外，在HCT-116结肠癌模型中，ABT-888增强了放射治疗（2 Gy/dx，10次）的疗效。在所有模型中，ABT-888均未显示出单药活性。结论：ABT-888是一种强效的PARP抑制剂，具有良好的口服生物利用度，能够穿过血脑屏障，并在同源和异种移植肿瘤模型中增强替莫唑胺、铂类药物、环磷酰胺和放射治疗的疗效。这种广泛的化疗增效和放射增效作用使该化合物成为极具吸引力的临床评估候选药物。 [1]

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聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）抑制剂在临床试验中展现出治疗包括癌症在内的多种疾病的巨大潜力。其中一种PARP抑制剂奥拉帕尼（Lynparza，阿斯利康）近期获得FDA批准，用于治疗携带BRCA基因突变的卵巢癌。BRCA1和BRCA2在修复DNA双链断裂中发挥着至关重要的作用，BRCA蛋白的缺乏会使癌细胞对PARP抑制剂更加敏感。本文研究表明，受体酪氨酸激酶c-Met能够与PARP1结合并磷酸化其Tyr907位点（PARP1 pTyr907或pY907）。PARP1 pY907能够增强PARP1的酶活性并降低其与PARP抑制剂的结合，从而使癌细胞对PARP抑制剂产生耐药性。 c-Met 和 PARP1 抑制剂的联合应用在体外和异种移植瘤模型中均能协同抑制乳腺癌细胞的生长，我们在肺癌异种移植瘤模型中也观察到了类似的协同效应。这些结果表明，PARP1 pY907 的丰度可能预测肿瘤对 PARP 抑制剂的耐药性，而 c-Met 和 PARP 抑制剂的联合治疗可能使肿瘤 c-Met 高表达且对单独 PARP 抑制剂无反应的患者获益。[2]

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第一代聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）抑制剂的早期研究已经表明其在治疗芥子气（SM）损伤方面具有一定的治疗潜力。目前，一些新型且更具潜力的 PARP 抑制剂正在进行癌症治疗药物的临床试验，这使得 PARP 抑制剂再次成为研究热点。然而，PARP-1 在 SM 诱导的损伤中的作用尚未完全阐明。本研究以高效特异性PARP抑制剂ABT-888为例，探讨PARP抑制剂在SM损伤中的作用。结果表明，在小鼠耳部水疱模型（MEVM）和HaCaT细胞模型中，PARP抑制剂ABT-888均能减轻SM损伤引起的细胞损伤。ABT-888显著降低了MEVM模型中SM诱导的水肿和表皮坏死。在HaCaT细胞模型中，ABT-888能够减少SM诱导的NAD(+)/ATP耗竭和细胞凋亡/坏死。随后，我们通过在HaCaT细胞中敲低PARP-1，研究了PARP-1在SM损伤中的作用机制。结果表明，敲低PARP-1能够保护细胞活力，并下调SM损伤后细胞凋亡检查点，包括p-JNK、p-p53、Caspase 9、Caspase 8、c-PARP和Caspase 3。此外，AKT的激活可通过调控mTOR抑制自噬。我们的结果表明，SM暴露可显著抑制Akt/mTOR通路的激活。敲低PARP-1可逆转SM诱导的Akt/mTOR通路抑制。总之，我们的研究结果表明，PARP-1下调在SM损伤中的保护作用可能与其对细胞凋亡、坏死、能量危机和自噬的调控有关。然而，值得注意的是，PARP抑制剂ABT-888在SM暴露后进一步增强了H2AX（S139）的磷酸化，这表明由于其会加剧DNA损伤，我们在SM损伤治疗中应用PARP抑制剂时应格外谨慎。[3]

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作用机制：Veliparib（ABT-888）抑制PARP1/2，而PARP1/2是DNA损伤碱基切除修复（BER）的关键酶。在同源重组缺陷细胞（例如，BRCA1/2突变细胞）中，碱基切除修复（BER）抑制会导致DNA双链断裂无法修复，从而产生合成致死性。它还会阻断c-Met介导的PARP1磷酸化，防止PARP1逃脱抑制，并增强c-Met过表达肿瘤的细胞毒性[1,2]。
- 临床开发重点：Veliparib（ABT-888）正在进行针对同源重组缺陷癌症的临床试验，包括BRCA突变型卵巢癌、乳腺癌（三阴性乳腺癌，TNBC）和胰腺癌。它常与DNA损伤剂（铂盐、PLD）联合使用以增强疗效[1,4]
- 治疗皮肤损伤的潜力：Veliparib (ABT-888) 通过抑制PARP过度激活来减少芥子气引起的DNA损伤和炎症，提示其可能用于治疗DNA损伤剂引起的皮肤毒性[3]

C13H16N4O

244.29

244.132

C, 63.91; H, 6.60; N, 22.93; O, 6.55

912444-00-9

912445-05-7 (Veliparib dihydrochloride);912444-00-9

11960529

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

579.0±40.0 °C at 760 mmHg

304.0±27.3 °C

0.0±1.6 mmHg at 25°C

1.653

0.29

2.473

3

3

2

18

348

1

C(C1C=CC=C2N=C([C@@]3(NCCC3)C)NC=12)(=O)N

JNAHVYVRKWKWKQ-CYBMUJFWSA-N

InChI=1S/C13H16N4O/c1-13(6-3-7-15-13)12-16-9-5-2-4-8(11(14)18)10(9)17-12/h2,4-5,15H,3,6-7H2,1H3,(H2,14,18)(H,16,17)/t13-/m1/s1

2-[(2R)-2-methylpyrrolidin-2-yl]-1H-benzimidazole-4-carboxamide

NSC 737664; NSC737664; NSC-737664; ABT888; ABT-888 (Veliparib); (R)-2-(2-methylpyrrolidin-2-yl)-1H-benzo[d]imidazole-4-carboxamide; Veliparib free base; 2-[(2R)-2-Methylpyrrolidin-2-yl]-1H-benzimidazole-4-carboxamide; ABT-888; ABT 888; Veliparib hydrochloride; Veliparib HCl;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.51 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.51 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.51 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 0.5% methylcellulose+0.2% Tween 80: 5mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。