| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
By obstructing the VHL, the powerful, non-toxic, and cell-permeable chemical probe VH-298 causes the hypoxic response. With Kd values of 90 and 80 nM in isothermal titration calorimetry and competitive fluorescence polarization assay, VH-298 is a highly powerful inhibitor of the VHL:HIF-α interaction. VH-298 quickly binds to the VHL complex and takes time to disassociate. When VH-298 is used at a 50 μM concentration, it barely affects more than 100 evaluated cellular kinases, GPCRs, and ion channels in vitro. Cells can pass through VH-298 and it is not hazardous to them. VH-298's permeability is determined to be 19.4 nm s -1 through measurement. VH-298 causes hydroxylated HIF-α to accumulate on-target in a concentration- and time-dependent manner in human cell lines, such as HeLa cancer cells and renal cell carcinoma 4 (RCC4) cells. VH-298 raises EPO mRNA levels by 2.5 times in RCC4-HA-VHL but not in VHL-null RCC4-HA, suggesting that endogenous EPO synthesis can be stimulated by pharmacological inhibition of VHL. While VH-298 and hypoxia both work well to raise PHD2 and HK2 protein levels, in HFF, VH-298 therapy causes a greater increase in BNIP3 protein levels than hypoxia treatment[1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
通过阻碍 VHL，强大、无毒且可渗透细胞的化学探针 VH-298 会引起缺氧反应。 VH-298 在等温滴定量热法和竞争性荧光偏振测定中的 Kd 值为 90 和 80 nM，是 VHL:HIF-α 相互作用的高效抑制剂。 VH-298 快速与 VHL 复合物结合，并需要一段时间才能解离。当 VH-298 以 50 μM 浓度使用时，它几乎不会影响 100 多种体外评估的细胞激酶、GPCR 和离子通道。细胞可以通过VH-298，并且对它们没有危险。经测量确定VH-298的磁导率为19.4 nm s -1 。 VH-298 导致羟基化 HIF-α 在人类细胞系（例如 HeLa 癌细胞和肾细胞癌 4 (RCC4) 细胞）中以浓度和时间依赖性方式在靶点上积累。 VH-298 在 RCC4-HA-VHL 中使 EPO mRNA 水平提高 2.5 倍，但在 VHL 缺失的 RCC4-HA 中则不然，这表明 VHL 的药理抑制可以刺激内源性 EPO 合成。虽然 VH-298 和缺氧都能很好地提高 PHD2 和 HK2 蛋白水平，但在 HFF 中，VH-298 治疗比缺氧治疗更能导致 BNIP3 蛋白水平增加[1]。
VH298 在多种细胞系（如HeLa、HFF、U2OS、RCC4）中以浓度和时间依赖性的方式稳定羟基化的HIF-α亚基（HIF-1α和HIF-2α），从而导致HIF靶基因（如CA9、GLUT1、PHD2、PHD3、BNIP3、HK2、EPO）在mRNA和蛋白水平上的上调。[1] 细胞热位移实验（CETSA）证明了其直接的靶点结合，显示用VH298处理的HeLa细胞裂解液中VHL（而非PHD2）发生了显著的热稳定化。[1] 化学蛋白质组学质谱分析证实，可连接的VH298类似物能够选择性捕获并置换CRL2VHL复合物，支持其靶向特异性。[1] VH298 可诱导HIF依赖性转录活性，表现为HRE-荧光素酶报告基因活性的剂量依赖性增加以及HIF靶基因的qRT-PCR分析结果。其细胞活性和透膜性均优于前代化合物VH032。[1] VH298（浓度高达150-500 µM）在一系列成纤维细胞、肿瘤和非肿瘤细胞系中，通过CellTiter-Glo活力检测，显示出可忽略的细胞毒性。其无活性的顺式差向异构体（cisVH298）也无毒性，表明潜在毒性并非由VHL抑制引起。[1] |
| 酶活实验 |
等温滴定量热法 (ITC): 实验使用ITC200微量量热仪进行。将VH298溶液（300 µM）滴定到含有VHL-ElonginB:ElonginC (VBC) 复合物（30 µM）的溶液中。解离常数 (Kd) 从结合等温线计算得出。[1]
竞争性荧光偏振 (FP) 实验: 实验在384孔板中进行。每个孔含有VBC蛋白（15 nM）、FAM标记的HIF-1α肽段（10 nM，Kd = 3 nM）以及递减浓度的VH298（从50 µM开始进行两倍稀释）。测量荧光偏振（激发光485 nm，发射光520 nm）。确定IC50值，并使用置换结合模型反推计算出Kd值。[1] 表面等离子体共振 (SPR): VH298 溶于DMSO，并在SPR缓冲液（20 mM HEPES, 150 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.005% Tween 20, pH 7.0）中稀释，以创建浓度梯度（31.25 nM 至 1 µM，最终DMSO浓度2%）。溶液在10°C下流经固定有VBC蛋白的传感芯片。通过将传感图拟合到1:1结合模型来确定结合速率常数 (kon) 和解离速率常数 (koff)。[1] |
| 细胞实验 |
细胞培养与处理: 人源细胞系（HFF、HeLa、U2OS、RCC4）在补充了胎牛血清、L-谷氨酰胺和抗生素的DMEM中培养。为诱导缺氧，细胞在1% O2条件下孵育。细胞用VH298或对照化合物（如DMSO、PHD抑制剂IOX2/FG-4592）处理指定的时间。[1]
免疫印迹 (Western Blot): 细胞在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA或Tris裂解液中裂解。蛋白质通过SDS-PAGE分离，转印至膜上，并用针对HIF-1α、HIF-1α-OH (Pro564)、HIF-2α、CA9、GLUT1、PHD2、PHD3、BNIP3、HK2、VHL和β-肌动蛋白（CTL细胞用SMC1）的一抗进行探测。使用HRP标记的二抗和化学发光法进行检测。[1] 定量实时聚合酶链式反应 (qRT-PCR): 从处理后的细胞中提取RNA，进行逆转录，并使用SYBR Green进行qRT-PCR分析。HIF靶基因（CA9、GLUT1、PHD2、EPO）的mRNA水平通过β-肌动蛋白或TATA结合蛋白 (TBP) mRNA进行标准化。[1] 细胞热位移实验 (CETSA): HeLa细胞裂解液用VH298（100 µM）或载体在室温下处理10-30分钟。等分样品在不同温度（40.4-55.4°C）下加热3分钟，冷却后离心。通过免疫印迹分析上清液中的VHL和PHD2含量。条带强度相对于最低温度对照进行量化。[1] 免疫共沉淀 (Co-IP): HeLa细胞裂解液（在1% Triton X-100缓冲液中）与羟基化HIF-1α (Pro564) 特异性抗体或对照IgG孵育过夜。加入Protein-G-琼脂糖珠以捕获免疫复合物。洗涤后，洗脱结合蛋白并通过免疫印迹检测总HIF-1α。[1] 平行人工膜渗透性实验 (PAMPA): 使用预涂覆的PAMPA板测量VH298的渗透性。将化合物溶液（10 µM，溶于PBS，pH 7.4）加入供体室，将PBS加入受体室。在室温下孵育5小时后，通过UPLC-MS/MS定量两个室中的化合物浓度。根据化合物的分布计算有效渗透率 (Pe)。[1] 细胞毒性实验: 将细胞接种于384孔板中，并用VH298或其无活性的顺式差向异构体处理24小时。使用CellTiter-Glo发光细胞活力检测法（通过测量ATP含量）评估细胞活力。用酶标仪测量发光值。对于细胞毒性T淋巴细胞（CTL），在处理24小时后，通过DAPI染色和流式细胞术评估细胞死亡。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
VH298 是一种高质量的化学探针，可通过选择性抑制 HIF-α 羟基化下游的 VHL:HIF-α 相互作用来研究缺氧信号通路，其机制不同于 PHD 酶抑制剂。它为开发靶向缺氧信号通路的疗法（例如用于治疗贫血或缺血性疾病）提供了一个起点。[1]
该化合物还具有作为 VHL 配体用于 PROTAC（蛋白水解靶向嵌合体）设计的潜在用途，在较低浓度下，其 HIF 稳定活性与其 E3 连接酶募集功能可以分离。[1] |
| 分子式 |
C27H33N5O4S
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|---|---|---|
| 分子量 |
523.6470
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| 精确质量 |
523.225
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| CAS号 |
2097381-85-4
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
122199236
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| 外观&性状 |
Off-white to pink solid powder
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| LogP |
2.5
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| tPSA |
164
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
37
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| 分子复杂度/Complexity |
931
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| 定义原子立体中心数目 |
3
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| SMILES |
S1C([H])=NC(C([H])([H])[H])=C1C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])C([H])([H])N([H])C([C@]1([H])C([H])([H])[C@]([H])(C([H])([H])N1C([C@]([H])(C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])N([H])C(C1(C#N)C([H])([H])C1([H])[H])=O)=O)O[H])=O
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| InChi Key |
NDVQUNZCNAMROD-RZUBCFFCSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H33N5O4S/c1-16-21(37-15-30-16)18-7-5-17(6-8-18)12-29-23(34)20-11-19(33)13-32(20)24(35)22(26(2,3)4)31-25(36)27(14-28)9-10-27/h5-8,15,19-20,22,33H,9-13H2,1-4H3,(H,29,34)(H,31,36)/t19-,20+,22-/m1/s1
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| 化学名 |
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9097 mL | 9.5484 mL | 19.0967 mL | |
| 5 mM | 0.3819 mL | 1.9097 mL | 3.8193 mL | |
| 10 mM | 0.1910 mL | 0.9548 mL | 1.9097 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Biophysical and structural characterization of VH298, a new potent VHL inhibitor.. From: Potent and selective chemical probe of hypoxic signalling downstream of HIF-α hydroxylation via VHL inhibition.Nat Commun.2016 Nov 4;7:13312. |
VH298 induces concentration- and time-dependent on-target specific accumulation of hydroxylated HIF-α in human cell lines.. From: Potent and selective chemical probe of hypoxic signalling downstream of HIF-α hydroxylation via VHL inhibition.Nat Commun.2016 Nov 4;7:13312. |
VHL inhibitors induce HIF-α transcriptional activity in various cell lines.. From: Potent and selective chemical probe of hypoxic signalling downstream of HIF-α hydroxylation via VHL inhibition.Nat Commun.2016 Nov 4;7:13312. |
Thalidomide-pyrrolidine
OICR-41103N
CDK12-Cyclin K ligand-1
(S,S,S)-AHPC-Me
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COA
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