β2-adrenoceptor
Vilanterol trifenatate is a novel long-acting agonist of the human β2-adrenoceptor (β2-AR). Its binding affinity (pKi) at the β2-AR is 9.42 ± 0.02. It shows selectivity for β2-AR over β1-AR and β3-AR subtypes. [1]

维兰特罗三芬酯对 β2-AR 相对于其他 β-AR 受体亚型（β2 和 β3）的选择性是通过测试维兰特罗在表达人 β1-、β2- 和 β2- 的 CHO 细胞中引起浓度依赖性 cAMP 增加的能力来确定的。 β3-AR。 Vilanterol 被证明对 β2-AR 具有高度选择性，其选择性比 β2- 和 β3-AR 亚型至少高 1000 倍。该分析结果表明，在 Gpp(NH)p 存在的情况下，[3H]Vilanterol 的低亲和力 pKD 为 9.44±0.07 (n=4)，高亲和力 pKD 为 10.82±0.12 (n=4)，低亲和力 pKD 为 10.82±0.12 (n=4)。在没有 Gpp(NH)p 的情况下，亲和力 pKD 9.47±0.17 (n=4)。此外，在不存在 Gpp(NH)p (37°C) 的情况下，观察到 [3H]Vilanterol 的低亲和力 pKD 为 9.52±0.24 (n=4)[1]。三芬那酯维兰特罗是一种新型吸入长效 β2 激动剂，在体外具有固有的 24 小时活性，正在开发中与吸入皮质类固醇糠酸氟替卡松联合治疗慢性阻塞性肺病和哮喘[2]。维兰特罗是一种新型长效 β2 激动剂 (LABA)，具有固有的 24 小时活性，用于每日一次临床治疗慢性阻塞性肺疾病 (COPD) 和哮喘，与吸入型新型皮质类固醇糠酸氟替卡松联合使用，同样具有 24 小时活性[3]。

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在使用表达人肾上腺素受体的重组CHO细胞进行的cAMP功能活性研究中，vilanterol 显示出对β2-AR相对于β1-和β3-AR的高选择性，其选择性优于福莫特罗和茚达特罗，与沙美特罗相当。其对β2-AR的功能效力 (pEC50) 为 9.92 ± 0.06。Vilanterol 的内在效能与茚达特罗相当，显著高于沙美特罗，但低于福莫特罗和异丙肾上腺素。 [1]
在细胞cAMP持久性和再激活研究中，vilanterol 显示出长的作用持久性（浓度比，CR = 3.4），与茚达特罗 (CR = 2.4) 相当，且长于福莫特罗 (CR = 280)。在拮抗剂洗脱后，它也表现出再激活活性 (CR = 5.0)，与沙美特罗和茚达特罗相似，但福莫特罗则不然。 [1]
在电场刺激 (EFS) 的豚鼠气管中，vilanterol 显示出强效的松弛作用 (pEC50 = 8.62 ± 0.27) 和快速的起效时间 (5.8 ± 0.5 分钟)，显著快于沙美特罗。它表现出长的持久性（洗脱后60分钟时 CR = 1.3），并在拮抗剂洗脱后能重新发挥松弛作用。 [1]
在人精确切割肺切片 (PCLS) 中，vilanterol 引起浓度依赖性的支气管扩张，其EC50值分别为 0.6 ± 0.2 nM（组胺诱导收缩）和 0.3 ± 0.1 nM（卡巴胆碱诱导收缩）。其起效时间 (t1/2 = 3.1 ± 0.3 分钟) 显著快于沙美特罗 (t1/2 = 8.3 ± 0.8 分钟)，并且作用持续时间长，在治疗后22小时仍保持显著的支气管扩张作用。 [1]

化合物13f（维拉托醇）在体外具有高效力、选择性、起效快和作用持续时间长，并且被发现在体内持续时间长、在大鼠中口服生物利用度低，并且被快速代谢。13f（维拉托醇）的结晶盐被鉴定为具有适合吸入给药的性质[2]。

对于 [3H]Vilanterol，进行了涉及饱和、缔合和解离的结合动力学研究，以计算平衡解离常数 (KD)、受体总数 ( Bmax)、结合率 (kon) 和解离率 (koff)。将膜与浓度逐渐增加的 [3H]Vilanterol (0.01-1.3 nM) 一起孵育 5 小时以实现饱和结合（体积为 1.4 mL，以防止配体耗尽）。过滤前将膜与不同浓度的 [3H]Vilanterol (0.1-1.9 nM) 一起孵育长达 1 小时，以促进缔合结合。将膜与固定浓度的 [3H]Vilanterol (1.1 nM) 预孵育 1 小时，以促进解离结合。然后通过在结合缓冲液（10 μM 冷维兰特罗）中稀释来触发解离，并在过滤前继续孵育不同的时间长达 8 小时。与 [3H]Vilanterol 一样，[3H]CGP12177 也可实现饱和结合（浓度升至约 0.01-2.8 nM）。竞争性结合置换研究，其中将膜与固定浓度的 [3H]Vilanterol (0.2 nM) 和浓度不断增加的未标记激动剂/拮抗剂一起孵育 5 小时，然后过滤，以确定β2-AR激动剂和拮抗剂的亲和力。为了保证结合曲线是单相的，在完成所有竞争结合置换研究期间存在 100 µM Gpp(NH)p [1]。

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进行放射性配体饱和结合实验以确定[3H]vilanterol与CHO细胞膜表达的人β2-AR的结合亲和力。实验在环境温度（20-22°C）下于96孔深孔板中进行，使用结合缓冲液。将膜与递增浓度的[3H]vilanterol (~0.01-1.3 nM) 孵育5小时。使用10 μM ICI118551确定非特异性结合。通过快速真空过滤到GF/B滤纸上终止结合，随后洗涤并进行液体闪烁计数。分析数据以确定平衡解离常数 (KD) 和总受体数 (Bmax)。实验在存在或不存在100 μM Gpp(NH)p的条件下进行，以研究高亲和力和低亲和力激动剂结合状态。 [1]
进行放射性配体竞争结合置换实验以确定各种β2-AR激动剂和拮抗剂的亲和力 (Ki)。将CHO β2-AR膜与固定浓度的[3H]vilanterol (~0.2 nM) 以及递增浓度的未标记竞争剂在100 μM Gpp(NH)p存在下孵育5小时。通过过滤终止结合并进行定量。使用Cheng-Prusoff方程将IC50值转换为Ki。 [1]

DiscoveRx cAMP（全细胞）肾上腺素能β1、β2和β3激动剂测定[5]
HitHunter DiscoveRx cAMP测定使用分裂酶互补读数来捕获整个细胞或从细胞膜产生的cAMP含量。测定中使用的分裂酶是β-半乳糖苷酶，通过发光读数进行测量。简言之，表达人β1、β2或β3的CHO细胞在室温下解冻，在PBS中稀释并离心。然后将细胞以（200万个细胞/mL）重悬于含有10µM IBMX的不含酚红的DMEM中。将20000个细胞加入含有受试化合物的384孔板中并孵育30-45分钟。根据HitHunter DiscoveRx试剂盒说明书测量cAMP含量。基本上，裂解细胞，并加入抗cAMP的抗体以及两个β-gal片段，一个与cAMP连接（酶供体），一个至19酶受体，形成活性酶。底物被活性酶水解，用于EFC检测（发光）β-gal活性。在Viewlux上读取之前，将最终测定混合物在室温下孵育以平衡3小时。将所有化合物以10mM的浓度溶解在DMSO中，并且对于所有测定，DMSO浓度在整个板上是恒定的。将所有数据标准化为每个板上16个高和16个低对照孔的平均值。然后对归一化数据进行四参数逻辑拟合，以确定pEC50和最大渐近线值。所引用的值为算术平均值±SEM。通过将试验化合物获得的最大渐近线比率除以异丙肾上腺素获得的最大渐近线比率来确定本征活性（IA）。内在活性的引用值是几何平均值以及95%置信下限和置信上限。通过从效力产生的β2 pEC50中减去β1或β3的pEC50来确定选择性比。

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进行cAMP积累测定以评估β-AR亚型选择性、功能效力和内在效能。使用稳定表达人β1-、β2-或β3-AR的CHO细胞。对于选择性和效力测定，将细胞重悬于含有磷酸二酯酶抑制剂的刺激缓冲液中。将细胞加入含有vilanterol或其他激动剂系列稀释液的板中，孵育后，使用基于时间分辨荧光共振能量转移的LANCE cAMP检测试剂盒定量细胞cAMP水平。 [1]
对于持久性和再激活研究，在四种条件下处理β2-AR CHO细胞：对照（载体）、激动剂洗脱、含拮抗剂（索他洛尔）的对照、激动剂与拮抗剂共同洗脱。对细胞进行孵育、洗涤和再刺激。测量cAMP产量。根据EC50值的变化计算浓度比 (CR)，以量化持久性（激动剂洗脱）和再激活（激动剂+拮抗剂洗脱）。 [1]
使用CHO β2-AR膜通过荧光偏振cAMP测定法测量内在效能。将膜与ATP存在下的激动剂一起孵育。加入荧光cAMP示踪剂和抗cAMP抗体，测量荧光偏振。偏振度的变化与cAMP浓度成反比，表明受体激活水平。 [1]

Pharmacokinetic studies in rats.[5]
Male Han Wistar rats (bodyweight about 250 g) were fasted for 18 h prior to dose administration. 13f (Vilanterol) acetate salt was formulated as a solution in DMSO-PEG 200- distilled water (10:30:60, v/v/v) for oral dosing, and DMSO-saline (10:90, v/v) for intravenous dosing. Rats were dosed orally by gavage tube or intravenously via a tail vein at nominal dose levels of 2 mg 13f base/kg or 0.25 mg 13f base/kg respectively. Blood samples were taken by cardiac puncture at 0.03 (intravenous only), 0.08, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 2, 3 (oral only), 4, 6, and 8 h post dose (n=2 animals/time-point). Plasma was prepared from blood by centrifugation, and analyzed for 13f content by LCMS/MS. Non-compartmental methods were used to calculate pharmacokinetic parameters from plasma concentration vs time profiles.

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Guinea pig trachea studies were ethically reviewed. Tracheal strips from Dunkin-Hartley guinea pigs were mounted under tension in tissue baths containing oxygenated Krebs buffer with indomethacin. Tissues were maintained at 37°C. Contractile responses were induced by electrical field stimulation (EFS). To measure relaxant effects, cumulative concentration-response curves (CRCs) for β2-agonists were generated. Tissues were washed to remove agonist, and CRCs were repeated 60 minutes later to assess persistence. Onset time was measured as the time to reach half-maximal inhibition for an approximate EC50 concentration. [1]
For reassertion studies in guinea pig trachea, strips were superfused with vilanterol until maximal inhibition of EFS was achieved. Vilanterol was then removed, and tissues recovered for 1 hour. Tissues were then perfused with the antagonist sotalol until blockade equilibrated. Sotalol was removed, and superfusion continued for 2 hours to observe if the relaxant effect reasserted. [1]

[1]. J Pharmacol Exp Ther. 2013 Jan;344(1):218-30.

[2]. Synthesis and structure-activity relationships of long-acting beta2 adrenergic receptor agonists incorporating metabolic inactivation: an antedrug approach. J Med Chem . 2010 Jun 10;53(11):4522-30. doi: 10.1021/jm100326d.

维兰特罗三苯甲酸盐是维兰特罗与一当量三苯乙酸结合制得的三苯乙酸盐。它与糠酸氟替卡松联合用于治疗慢性阻塞性肺疾病相关的支气管痉挛。它是一种β-肾上腺素能激动剂和支气管扩张剂。它含有维兰特罗(1+)结构域。

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维兰特罗三苯甲酸盐是一种新型长效β2-肾上腺素能受体激动剂（LABA），专为每日一次吸入给药而开发。其药理学特性包括对β2-肾上腺素能受体具有亚纳摩尔级的亲和力、高受体选择性、起效迅速以及在人体呼吸道组织中作用持续24小时。 [1]
该药物用于治疗哮喘和慢性阻塞性肺疾病（COPD），可与吸入性糖皮质激素（ICS）联合用于治疗哮喘和COPD，也可与长效毒蕈碱受体拮抗剂（LAMA）联合用于治疗COPD。[1]
其作用持续时间延长并不能完全用从正构受体位点缓慢解离动力学来解释。提出的机制可能涉及一种“微动力学”模型，其中高亲脂性分子（计算的log P = 3.2）分布到细胞膜中，形成储存库，从而延长与受体的相互作用。[1]

C44H49CL2NO

774.76836

773.288

C, 68.21; H, 6.38; Cl, 9.15; N, 1.81; O, 14.45

503070-58-4

Vilanterol; 503068-34-6; Vilanterol-d4 trifenatate; 2021249-10-3; 503070-58-4 (trifenatate)

44482554

White to off-white solid powder

131.9-134.2℃

9.104

128.48

5

8

20

54

778

1

OC1=CC=C([C@@H](O)CNCCCCCCOCCOCC2=C(Cl)C=CC=C2Cl)C=C1CO.O=C(O)C(C3=CC=CC=C3)(C4=CC=CC=C4)C5=CC=CC=C5

KLOLZALDXGTNQE-JIDHJSLPSA-N

InChI=1S/C24H33Cl2NO5.C20H16O2/c25-21-6-5-7-22(26)20(21)17-32-13-12-31-11-4-2-1-3-10-27-15-24(30)18-8-9-23(29)19(14-18)16-28;21-19(22)20(16-10-4-1-5-11-16,17-12-6-2-7-13-17)18-14-8-3-9-15-18/h5-9,14,24,27-30H,1-4,10-13,15-17H2;1-15H,(H,21,22)/t24-;/m0./s1

4-[(1R)-2-[6-[2-[(2,6-dichlorophenyl)methoxy]ethoxy]hexylamino]-1-hydroxyethyl]-2-(hydroxymethyl)phenol;2,2,2-triphenylacetic acid

GW-642444; GW 642444-X; GW 642444 X; GW642444; GW-642444; GW 642444X; Anoro Ellipta; Breo Ellipta

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 50~100 mg/mL (64.5~129.1 mM)
Ethanol: ~14 mg/mL

配方 1 中的溶解度: 2 mg/mL (2.58 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2 mg/mL (2.58 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 2 mg/mL (2.58 mM) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。