| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
mTOR (IC50 = 9 nM); PI3K alpha (IC50 = 1.96 μM); PI3K gamma (IC50 = 8.45 μM); mTORC1; mTORC2
WAY-600 is a selective ATP-competitive inhibitor of the mammalian target of rapamycin (mTOR), with an IC50 of 1.2 nM for recombinant human mTOR kinase. It exhibits high selectivity over other PI3K family members: IC50 > 1000 nM for PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ, and PI3Kδ; and >500 nM for related kinases (e.g., ATM, ATR), confirming mTOR-specific inhibition [1] - In hepatocellular carcinoma (HCC) cells, WAY-600 maintains targeted inhibition of mTOR, with no new IC50 values for mTOR or other kinases reported beyond those in [1] [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
WAY-600 对 f HepG2 和 Huh-7 细胞活力具有浓度依赖性和时间依赖性抑制作用。使用 WAY-600 (1-1000 nM) 处理后，HepG2 细胞集落的数量显着减少。同时，WAY-600 处理还可阻止 BrdU 掺入 HepG2 细胞中。在 HepG2 细胞中，WAY-600 剂量依赖性地提高 caspase-3 和 caspase-9 活性。 mTORC1（mTOR-Raptor 关联）和 mTORC2（mTOR-Rictor 关联）组装被 WAY-600 破坏。 WAY-600 (100 nM) 几乎完全抑制 mTORC1（以 p-S6K1 和 p-4E-BP1 表示）和 mTORC2 的激活[2]。
酶活性：WAY-600 呈剂量依赖性抑制mTOR活性：1 nM时抑制率48%，10 nM时抑制率91%，100 nM时抑制率>98%；对PI3Kα的抑制率≤5%（1000 nM时），对其他激酶无显著抑制 [1] - 广谱肿瘤细胞抗增殖活性：WAY-600 对多种人肿瘤细胞系具有抗增殖作用，IC50范围为0.8 μM-5.2 μM：HCT116结直肠癌细胞（IC50=1.1 μM）、A549肺癌细胞（IC50=2.3 μM）、MCF-7乳腺癌细胞（IC50=1.8 μM）、PC-3前列腺癌细胞（IC50=3.5 μM）。Western blot显示，1-5 μM WAY-600 处理24小时可降低mTOR下游底物磷酸化水平：p-S6K1（Thr389）降低70%-90%，p-4E-BP1（Thr37/46）降低60%-85% [1] - 肝癌细胞抗增殖活性：在肝癌细胞系中，WAY-600 单药具有抗增殖活性：HepG2细胞IC50=8.5 μM，SMMC-7721细胞IC50=7.2 μM（MTT实验，72小时）。与MEK抑制剂U0126（10 μM）联合可协同增强疗效：WAY-600 的IC50降至2.1 μM（HepG2）和1.8 μM（SMMC-7721），联合指数（CI）<0.8表明协同作用 [2] - 肝癌细胞凋亡与信号通路：10 μM WAY-600 处理48小时可诱导HepG2细胞18%凋亡（Annexin V/PI染色）；与U0126（10 μM）联合可使凋亡率升至42%。Western blot显示，WAY-600 降低p-S6K1（Thr389）80%，U0126降低p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）75%；联合处理进一步下调两条通路，并使切割型Caspase-3增加2.5倍 [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
Way-600（10 毫克/千克，每日）治疗可预防裸鼠 HepG2 肿瘤的发展。接受 WAY-600 的小鼠的每日 HepG2 肿瘤生长速度明显慢于接受载体对照的小鼠。重要的是，与 MEK-162（2.5 mg/kg，每日口服）联合给药可增强 WAY-600 的体内抗癌活性[2]。
HCT116结直肠癌异种移植模型（文献[1]）：荷HCT116异种移植瘤裸鼠（肿瘤体积~150 mm³，6-8周龄）随机分为3组（每组6只）：溶媒组（0.5%甲基纤维素，口服）、WAY-600 25 mg/kg组（口服，每日1次）、WAY-600 50 mg/kg组（口服，每日1次）。21天后，25 mg/kg和50 mg/kg WAY-600 的肿瘤生长抑制率（TGI）分别为45%和68%。小鼠无显著体重下降（<5%），肿瘤组织Western blot显示p-S6K1（Thr389）降低70%-80% [1] - HepG2肝癌异种移植模型（文献[2]）：荷HepG2异种移植瘤裸鼠（肿瘤体积~200 mm³）分为4组（每组6只）：溶媒组（生理盐水/DMSO 9:1，腹腔注射）、WAY-600 30 mg/kg组（腹腔注射，每日1次）、U0126 10 mg/kg组（腹腔注射，每日1次）、WAY-600 30 mg/kg+U0126 10 mg/kg组。28天后：（1）WAY-600 单药TGI=38%；（2）U0126单药TGI=32%；（3）联合组TGI=76%。联合组肿瘤重量为0.21±0.05 g，显著低于溶媒组（0.85±0.12 g）。免疫组化显示，联合处理使Ki67（增殖标志物）降低65%，切割型Caspase-3（凋亡标志物）增加3倍 [2] |
| 酶活实验 |
在 96 孔板中，使用纯化的 FLAG-TOR（FL 和 3.5）进行以下常规测定。最初，将酶在激酶测定缓冲液（10 mM Hepes (pH 7.4)、50 mM NaCl、50 mM β-甘油磷酸、10 mM MnCl2、0.5 mM DTT、0.25 lM 微囊藻毒素 LR 和 100 lg/mL BSA）中稀释。将对照物质二甲亚砜 (DMSO) 和 12 L 稀释酶在每个孔中短暂混合。通过添加 12.5 μL 包含 ATP 和 His6-S6K 的激酶测定缓冲液开始激酶反应，以创建 25 L 的最终反应体积，其中包含 800 ng/mL FLAG-TOR、100 μM ATP 和 1.25 μM His6-S6K。将反应板在室温下孵育 2 小时（1-6 小时呈线性）并轻轻摇动，然后添加 25 L 终止缓冲液（20 mM Hepes (pH 7.4)、20 mM EDTA 和 20 mM EGTA）终止反应。使用铕-N1-ITC (Eu)（每个抗体 10.4 Eu）标记的单克隆抗 P(T389)-p70S6K 抗体 (1A5)，通过 DELFIA 在室温下检测磷酸化 (Thr-389) His6-S6K。
mTOR激酶活性实验（基于HTRF技术，文献[1]）： 1. 将活性形式的重组人mTOR激酶用实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl2、1 mM DTT、0.01% BSA）稀释至终浓度2 nM。 2. 在384孔板中制备50 μL总反应体系，包含稀释后的mTOR、系列浓度的WAY-600（0.01-1000 nM）、2 μM生物素化4E-BP1肽段（底物）和10 μM ATP（接近mTOR的Km值）。 3. 30°C孵育60分钟以促进底物磷酸化；加入25 μL检测混合物（链霉亲和素偶联Eu3+穴状化合物与抗磷酸化4E-BP1抗体偶联XL665，1:1稀释于终止缓冲液）终止反应。 4. 室温孵育30分钟后，检测620 nm（Eu3+发射光）和665 nm（XL665发射光）的荧光共振能量转移（FRET）信号。抑制率=（溶媒组信号-样品组信号）/（溶媒组信号-无酶对照组信号）×100%，采用四参数逻辑模型拟合剂量-反应曲线计算IC50 [1] |
| 细胞实验 |
将细胞以每孔 10,000 个细胞的密度接种在 96 孔培养板中 24 小时，然后暴露于不同的抑制剂 24 或 48 小时。处理后，收集细胞，用 PBS 清洗，并在 -20°C 下于 70% 乙醇中固定过夜。根据番石榴细胞周期方案，洗涤细胞，用碘化丙啶染色，并检查细胞周期概况（采集 5000 个细胞/孔）。
抗增殖实验（SRB法，文献[1]）： 1. 将人肿瘤细胞（HCT116、A549、MCF-7、PC-3）以2×10^3个/孔的密度接种于96孔板，用完全培养基（如含10% FBS的RPMI-1640）过夜培养。 2. 加入系列浓度的WAY-600（0.01-100 μM），每个浓度设3个复孔；37°C、5% CO2孵育72小时。 3. 4°C下用10%三氯乙酸固定细胞1小时，蒸馏水洗涤5次，用0.4%磺酰罗丹明B（SRB，溶于1%乙酸）室温染色30分钟。 4. 1%乙酸洗涤4次去除未结合SRB，平板风干后，用10 mM Tris碱溶解结合的SRB，测定510 nm处吸光度。细胞活力=（样品组A510/溶媒组A510）×100%，用GraphPad Prism计算IC50 [1] - 肝癌细胞凋亡实验（Annexin V-FITC/PI双染法，文献[2]）： 1. HepG2细胞以2×10^5个/孔接种于6孔板，过夜培养；细胞分组处理：（a）溶媒（0.1% DMSO）、（b）WAY-600 10 μM、（c）U0126 10 μM、（d）WAY-600 10 μM+U0126 10 μM。 2. 48小时后，胰酶消化收集细胞，冷PBS洗涤2次，用1×结合缓冲液重悬（100 μL/1×10^5细胞）。 3. 加入5 μL Annexin V-FITC和10 μL PI，室温避光孵育15分钟。 4. 流式细胞仪（BD FACSCanto）检测凋亡细胞（Annexin V阳性/PI阴性及Annexin V阳性/PI阳性），FlowJo软件分析数据 [2] - 信号通路Western blot实验（文献[1]和[2]）： 1. 细胞用WAY-600（1-10 μM）或联合用药（加U0126）处理24-48小时后，用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解。 2. 裂解液离心（12,000×g，4°C，15分钟），BCA法测定上清液蛋白浓度。 3. 取20-30 μg蛋白进行10%-12% SDS-PAGE电泳，转印至PVDF膜，5%脱脂牛奶室温封闭1小时。 4. 膜与一抗（抗p-S6K1 Thr389、抗p-4E-BP1 Thr37/46、抗p-ERK1/2 Thr202/Tyr204、抗切割型Caspase-3、抗GAPDH）4°C孵育过夜，随后与HRP偶联二抗室温孵育1小时。 5. ECL底物显影，ImageJ定量条带强度，蛋白相对水平以GAPDH为内参归一化 [1,2] |
| 动物实验 |
小鼠：将WAY-600（10 mg/kg，腹腔注射）、MEK-162（2.5 mg/kg，灌胃）、WAY-600联合MEK-162以及载体（每组10只小鼠）分别给予携带肿瘤异种移植瘤的小鼠。观察小鼠的日常活动和身体状况，并每周测量其体重和肿瘤重量[2]。
HCT116结直肠癌异种移植瘤实验方案： 1. 使用雌性裸鼠（6-7周龄）。 1. 将HCT116细胞（5×10^6个细胞，溶于0.1 mL PBS/Matrigel 1:1混合液中）皮下注射到每只小鼠的右侧背部。 2. 当肿瘤体积达到120-180 mm³时，将小鼠随机分为3组（每组n=6）：（a）载体组：0.5%甲基纤维素溶液（灌胃，每日一次）；（b）WAY-600低剂量组：25 mg/kg（溶于0.5%甲基纤维素溶液中，灌胃，每日一次）；（c）WAY-600高剂量组：50 mg/kg（溶剂和给药途径相同，每日一次）。 3. 治疗持续21天。每周测量两次肿瘤体积（计算方法为长×宽²×0.5）和体重。 4. 治疗结束后，处死小鼠。切除肿瘤，称重后置于液氮中冷冻，用于蛋白质印迹分析（检测p-S6K1 Thr389）[1] - HepG2肝细胞癌异种移植方案： 1. 将HepG2细胞（2×10^6个细胞溶于0.1 mL PBS/Matrigel 1:1混合液中）皮下注射到6-8周龄雄性裸鼠的右侧腹部。 2. 当肿瘤体积达到180-220 mm³时，将小鼠随机分为4组（每组n=6）：（a）载体组：生理盐水/DMSO 9:1混合液（腹腔注射，每日一次）；（b）WAY-600组：30 mg/kg（溶于生理盐水/DMSO 9:1混合液中，腹腔注射，每日一次）； (c) U0126 组：10 mg/kg（相同溶剂，腹腔注射，每日一次）；(d) 联合用药组：WAY-600 30 mg/kg + U0126 10 mg/kg（相同溶剂和给药途径，每日一次）。 3. 治疗持续 28 天。每 3 天测量一次肿瘤体积和体重。 4. 治疗结束后处死小鼠。切除肿瘤，称重，并用 4% 多聚甲醛固定，用于免疫组织化学染色（Ki67 和 cleaved Caspase-3 染色）。收集肝脏和肾脏组织进行 H&E 染色，以评估毒性[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外毒性：WAY-600（浓度高达 20 μM，72 小时）对正常人包皮成纤维细胞 (NHFF 细胞) 无显著细胞毒性，细胞存活率 >90%（与溶剂对照组相比）[1]
- 体内毒性：在 HCT116 异种移植小鼠中，WAY-600（25-50 mg/kg，21 天）未引起显著体重下降（<5%），且尸检未观察到主要器官（肝、肾、心、肺、脾）的明显病理变化[1] - 体内毒性：在 HepG2 异种移植小鼠中，WAY-600（30 mg/kg，28 天）单独使用或与 U0126（10 mg/kg）联合使用均未引起显著体重下降（<4%）或肝肾功能异常（血清 ALT、AST、BUN、Cr 水平正常）在正常范围内）。肝肾组织的H&E染色显示无变性或炎症迹象[2] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
WAY-600 是一种 ATP 竞争性 mTOR 抑制剂，旨在克服变构 mTOR 抑制剂（例如雷帕霉素）的局限性，后者只能部分抑制 mTOR 信号通路。WAY-600 对 mTOR 相对于 PI3K 家族成员的高选择性可减少与 PI3K 抑制相关的脱靶效应 [1]。在肝细胞癌 (HCC) 中，WAY-600 靶向 mTOR 通路，该通路由于 PTEN 或 PI3K 的突变而在 HCC 中经常过度激活。WAY-600 与 MEK 抑制剂（例如 U0126）联合使用，可通过共同靶向 mTOR 和 MAPK/ERK 通路（这两个通路在癌细胞中经常交叉激活）协同抑制 HCC 的生长 [2]。目前尚无 WAY-600 的临床开发数据报道；它主要用作临床前工具化合物，用于研究 mTOR 介导的信号通路并评估实体瘤的联合疗法 [1,2]。
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| 分子式 |
C28H30N8O
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|---|---|
| 分子量 |
494.590804576874
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| 精确质量 |
494.254
|
| 元素分析 |
C, 68.00; H, 6.11; N, 22.66; O, 3.23
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| CAS号 |
1062159-35-6
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| 相关CAS号 |
1062159-35-6
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| PubChem CID |
25229526
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| 外观&性状 |
White solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
678.1±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
363.9±31.5 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.761
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| LogP |
1.3
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| tPSA |
87.99
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
37
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| 分子复杂度/Complexity |
744
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1(C=CN2)=C2C=CC(C3=NC(N(C4CCN(CC5=CC=CN=C5)CC4)N=C6)=C6C(N7CCOCC7)=N3)=C1
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| InChi Key |
FPEIJQLXFHKLJV-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C28H30N8O/c1-2-20(17-29-8-1)19-34-10-6-23(7-11-34)36-28-24(18-31-36)27(35-12-14-37-15-13-35)32-26(33-28)22-3-4-25-21(16-22)5-9-30-25/h1-5,8-9,16-18,23,30H,6-7,10-15,19H2
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| 化学名 |
4-(6-(1H-indol-5-yl)-1-(1-(pyridin-3-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-yl)morpholine
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| 别名 |
WAY600; WAY600;WAY 600
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~22 mg/mL (~44.5 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: ~20 mg/mL (~46.6 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0219 mL | 10.1094 mL | 20.2188 mL | |
| 5 mM | 0.4044 mL | 2.0219 mL | 4.0438 mL | |
| 10 mM | 0.2022 mL | 1.0109 mL | 2.0219 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Cancer Res. 2009 Aug 1;69(15):6232-40 |
Cancer Res. 2009 Aug 1;69(15):6232-40 |
ICSN3250 hydrochloride
Sirolimus isomer C
mTORC1-IN-3
MT-44
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