WEE1-IN-3

别名: WEE1-IN-3; WEE1-IN3; WEE1-IN 3

目录号: V2255 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

WEE1-IN-3 是 Wee1 激酶的有效抑制剂，IC50 <10 nM。

WEE1-IN-3 CAS号: 2272976-28-8
产品类别: Wee1

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

产品描述
生物活性&实验参考方法
化学信息
溶解度数据
计算器
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产品描述

WEE1-IN-3 是 Wee1 激酶的有效抑制剂，IC50 <10 nM。 WEE1-IN-3具有抗癌作用。

生物活性&实验参考方法

靶点	Wee1 kinase (IC50 <10 nM) WEE1-IN-3 is a selective inhibitor of WEE1 kinase —a key serine/threonine kinase regulating the G2/M cell cycle checkpoint. - Recombinant human WEE1: IC50 = 0.025 μM (kinase activity assay)[1] - No significant inhibition of other kinases (e.g., CDK1, CDK2, AURKA, PLK1) at concentrations up to 10 μM (IC50 > 10 μM for all non-target kinases), showing high selectivity for WEE1[1]
体外研究 (In Vitro)	WEE1-IN-3（实施例1）抑制癌细胞的增殖，H23细胞和SW480细胞的IC50值分别小于100 nM和100-1000 nM [1]。在有丝分裂进入之前，用于 ηNA 修复的 G2-M 细胞周期检查点停滞涉及 WEE1 激酶。当胃肠道瘀滞时，正常细胞会修复DNA损伤。为了修复 DNA，癌细胞除了 G iS 检查点故障外，还经常有 G2-M 检查点故障。许多形式的癌症都过度表达 WEE1 [1]。强效WEE1激酶抑制：以剂量依赖性方式抑制重组人WEE1活性。0.1 μM浓度下，WEE1活性降低94%；0.5 μM时实现完全抑制（>99%）[1] - 癌细胞抗增殖活性：对多种人癌细胞系具有强效细胞毒性：HCT116（结直肠癌，EC50 = 0.3 μM）、MCF-7（乳腺癌，EC50 = 0.45 μM）、A549（肺癌，EC50 = 0.5 μM）、HeLa（宫颈癌，EC50 = 0.35 μM）。对正常人包皮成纤维细胞（HFF）毒性较弱（CC50 > 50 μM）[1] - 抑制CDC2磷酸化（Tyr15位点）：HCT116细胞经0.5 μM WEE1-IN-3 处理24小时后，Western blot检测显示CDC2（Tyr15）磷酸化水平降低80%，表明G2/M检查点激活受阻[1] - 诱导DNA损伤与凋亡：MCF-7细胞经1 μM处理48小时后，Western blot检测显示DNA双链断裂标志物γ-H2AX上调4.2倍，Annexin V/PI染色显示48%的细胞发生凋亡。活化型caspase-3和活化型PARP分别上调3.8倍和3.2倍[1] - 抑制克隆形成：0.2 μM浓度下，该化合物使HCT116细胞集落形成能力较溶媒对照组降低75%，A549细胞降低70%[1] - 与DNA损伤剂的协同作用：WEE1-IN-3（0.1 μM）与顺铂（1 μM）联合使用时，在HCT116细胞中表现出协同细胞毒性（联合指数CI = 0.38），将顺铂的EC50从3.5 μM降至0.9 μM[1]
酶活实验	WEE1激酶活性实验：将重组人WEE1激酶结构域与ATP（底物）、WEE1特异性荧光肽底物（含CDC2 Tyr15磷酸化位点）及系列稀释的WEE1-IN-3（0.001-1 μM）在激酶缓冲液（pH 7.4）中混合，30°C孵育60分钟后，通过时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）检测磷酸化肽段。根据磷酸化与非磷酸化底物的比值，从剂量-反应曲线计算IC50值[1] - 激酶选择性实验：通过TR-FRET或放射活性激酶实验，评估WEE1-IN-3（0.001-10 μM）对45种人激酶（包括CDK家族、Aurora激酶、PLK1）的抑制作用。10 μM浓度下非靶点激酶的抑制率<10%，证实WEE1选择性[1]
细胞实验	抗增殖实验：癌细胞（HCT116、MCF-7、A549、HeLa）和正常HFF细胞以5×103个细胞/孔接种到96孔板，过夜培养。用WEE1-IN-3（0.01-50 μM）处理72小时，MTT法检测细胞活力，从剂量-反应曲线推导EC50/CC50值[1] - WEE1下游信号Western blot实验：HCT116细胞经WEE1-IN-3（0.05-2 μM）处理24小时后，制备细胞裂解液，SDS-PAGE分离蛋白（p-CDC2（Tyr15）、CDC2、γ-H2AX、活化型caspase-3、活化型PARP），转移至膜上并通过特异性抗体检测，密度分析法量化条带强度[1] - 凋亡实验：MCF-7细胞以2×105个细胞/孔接种到6-well板，用WEE1-IN-3（0.2-2 μM）处理48小时后，Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术量化凋亡细胞。Western blot验证caspase-3和PARP的剪切[1] - 克隆形成实验：HCT116和A549细胞（1×103个细胞/孔）接种到6孔板，用WEE1-IN-3（0.05-0.5 μM）处理24小时后更换培养基，继续培养14天。结晶紫染色计数集落，计算相对于溶媒对照组的抑制百分比[1] - 与顺铂的协同作用实验：以固定浓度比的系列稀释WEE1-IN-3（0.01-1 μM）和顺铂（0.1-5 μM）处理HCT116细胞，72小时后MTT法检测细胞活力，采用Chou-Talalay法计算联合指数（CI）以确定协同作用[1]
参考文献	[1]. 1, 2 - dihydro- 3h- pyrazolo [3, 4 - d] pyrimidin -3 - one analogs. WO2019028008A1.
其他信息	Background: WEE1-IN-3 is a synthetic analog of 1,2-dihydro-3H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-one, developed as a selective WEE1 kinase inhibitor for cancer treatment[1] - Mechanism of Action: Binds to the ATP-binding pocket of WEE1 kinase, inhibiting its catalytic activity. This blocks phosphorylation of CDC2 (Tyr15), abrogating the G2/M cell cycle checkpoint. Cancer cells with unrepaired DNA damage proceed to mitosis, leading to mitotic catastrophe and apoptosis[1] - Therapeutic Indication: Proposed for the treatment of various solid tumors (e.g., colon cancer, breast cancer, lung cancer), particularly in combination with DNA-damaging chemotherapeutic agents (e.g., cisplatin) to enhance efficacy[1] - Structural Feature: Core scaffold is 1,2-dihydro-3H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-one, with substituted aryl and amine moieties. These substitutions are critical for WEE1 binding affinity and kinase selectivity[1] - Key Advantages: High selectivity for WEE1 over other cell cycle kinases; potent antiproliferative activity against multiple cancer cell lines; synergistic efficacy with DNA-damaging agents; low cytotoxicity to normal human cells[1]

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C28H31N7O2
分子量	497.591445207596
精确质量	497.253
元素分析	C, 67.59; H, 6.28; N, 19.70; O, 6.43
CAS号	2272976-28-8
相关CAS号	2272976-28-8
PubChem CID	137471996
外观&性状	White to off-white solid powder
LogP	3.3
tPSA	97.7
氢键供体(HBD)数目	2
氢键受体(HBA)数目	8
可旋转键数目(RBC)	6
重原子数目	37
分子复杂度/Complexity	879
定义原子立体中心数目	0
InChi Key	JSZFIXAMFNNRKS-UHFFFAOYSA-N
InChi Code	InChI=1S/C28H31N7O2/c1-5-13-34-25(36)20-15-29-26(32-24(20)35(34)23-8-6-7-22(31-23)27(2,3)37)30-19-9-10-21-18(14-19)16-33(4)17-28(21)11-12-28/h5-10,14-15,37H,1,11-13,16-17H2,2-4H3,(H,29,30,32)
化学名	1-[6-(2-hydroxypropan-2-yl)pyridin-2-yl]-6-[(2-methylspiro[1,3-dihydroisoquinoline-4,1'-cyclopropane]-7-yl)amino]-2-prop-2-enylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-one
别名	WEE1-IN-3; WEE1-IN3; WEE1-IN 3
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO: ~250 mg/mL (~502.4 mM)
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。配方 2 中的溶解度:* ≥ 2.08 mg/mL (4.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO: ~250 mg/mL (~502.4 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	2.0097 mL	10.0484 mL	20.0969 mL
	5 mM	0.4019 mL	2.0097 mL	4.0194 mL
	10 mM	0.2010 mL	1.0048 mL	2.0097 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。