| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Lymphocyte-specific protein tyrosine kinase (Lck): IC₅₀ ≈ 4 nM (recombinant human Lck kinase activity); non-Lck Src family kinases: Src (IC₅₀ > 100 nM), Fyn (IC₅₀ > 100 nM), Yes (IC₅₀ > 200 nM); other kinases: EGFR (IC₅₀ > 1000 nM), Abl (IC₅₀ > 1000 nM), demonstrating high selectivity for Lck [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
WH-4-023 和 Lck 上的 2 取代版本显示出可比的效力增加 [1]。
在重组人Lck激酶活性实验中：WH-4-023（0.1 nM–100 nM）浓度依赖性抑制Lck活性。4 nM时抑制率达50%（IC₅₀），100 nM时抑制率超过95%；对其他Src家族激酶交叉抑制作用微弱（如100 nM时对Src抑制率<10%），对非Src激酶无显著活性（如1000 nM时对EGFR抑制率<5%）[1] - 在抗CD3/CD28激活的小鼠脾脏T细胞中：WH-4-023（1 μM–10 μM）抑制T细胞活化。10 μM时：（1）IL-2分泌（ELISA检测）较溶剂对照组减少约70%；（2）CD69（T细胞早期活化标志物，流式细胞术检测）阳性细胞比例降低约65%；（3）Western blot显示Lck（Tyr394）及其下游效应分子ZAP-70（Tyr493）的磷酸化水平降低，而总Lck/ZAP-70蛋白水平无变化[1] - 在混合淋巴细胞反应（MLR）实验中（C57BL/6小鼠脾细胞与BALB/c小鼠脾细胞共培养）：WH-4-023（0.3 μM–10 μM）浓度依赖性抑制T细胞增殖。10 μM时，[³H]-胸腺嘧啶掺入量（增殖标志物）较对照组减少约80%[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠迟发型超敏反应（DTH，DNFB诱导耳炎症）模型中：小鼠分为对照组（溶剂）和WH-4-023处理组（3 mg/kg、10 mg/kg、30 mg/kg、100 mg/kg，口服灌胃）。第0天用DNFB致敏，第5天激发，药物从第3天至第5天每日给药1次。与对照组相比：（1）激发后24小时耳肿胀度（炎症指数）在3 mg/kg、10 mg/kg、30 mg/kg、100 mg/kg剂量下分别降低约20%、32%、40%、65%；（2）耳组织病理显示药物处理组炎症细胞（中性粒细胞、淋巴细胞）浸润减少[1]
- 在大鼠角叉菜胶诱导足肿胀模型中：大鼠分为对照组（溶剂）和WH-4-023处理组（30 mg/kg、100 mg/kg，口服灌胃）。第0天向 hind paw 注射角叉菜胶，给药在注射前1小时进行。分别在注射后1、3、6小时测量足体积。3小时（肿胀峰值）时：（1）足体积增加量在30 mg/kg、100 mg/kg剂量下分别较对照组抑制约35%、55%；（2）血清促炎细胞因子（TNF-α、IL-6，ELISA检测）水平在30 mg/kg、100 mg/kg剂量下分别降低约40%、60%[1] |
| 酶活实验 |
重组人Lck激酶活性测定实验：在大肠杆菌中表达重组人Lck（残基22–509，含激酶结构域），通过镍螯合亲和层析纯化。激酶反应在50 μL体系中进行，含50 mM Tris-HCl（pH7.5）、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、5 μM ATP（含[γ-³²P]ATP用于放射性标记）、20 μM Lck特异性肽底物（序列：EAIYAAPFAKKK），以及浓度为0.1 nM、0.3 nM、1 nM、3 nM、10 nM、30 nM、100 nM的WH-4-023（溶剂为对照）。混合物30℃孵育45分钟后，加入25 μL 0.5 M EDTA终止反应。取40 μL反应液点样至磷酸纤维素滤纸上，用0.75%磷酸洗涤3次（每次10分钟）以去除未掺入的ATP。滤纸干燥后加入闪烁液，通过液体闪烁计数器测定放射性强度。抑制率按（1–药物组放射性/对照组放射性）×100%计算，使用绘图软件将抑制率拟合至四参数逻辑斯蒂剂量-反应曲线，确定IC₅₀值[1]
- 非Lck激酶选择性实验：采用与上述相同的反应条件，使用重组Src、Fyn、Yes、EGFR或Abl激酶结构域及其各自的特异性肽底物。WH-4-023测试浓度最高达1000 nM，通过闪烁计数量化激酶活性，评估交叉抑制情况[1] |
| 细胞实验 |
小鼠脾脏T细胞分离与活化实验：从6–8周龄C57BL/6小鼠中获取脾脏，机械解离并裂解红细胞制备单细胞悬液，通过尼龙毛柱分离富集T细胞。纯化的T细胞（2×10⁶个细胞/mL）重悬于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素的RPMI 1640培养基中，在37℃（5% CO₂）下用WH-4-023（0 μM、1 μM、3 μM、10 μM）预处理1小时，随后用包被于平板的抗小鼠CD3（5 μg/mL）和可溶性抗小鼠CD28（2 μg/mL）刺激24小时[1]
- IL-2分泌检测（ELISA）：刺激24小时后收集细胞培养上清，1000×g离心5分钟去除细胞碎片。微孔板用捕获抗小鼠IL-2抗体4℃包被过夜，室温下用含5%脱脂牛奶的PBS-Tween 20封闭1小时，加入上清液（或IL-2标准品）孵育2小时。洗涤后加入生物素偶联的检测抗小鼠IL-2抗体孵育1小时，再加入链霉亲和素-HRP孵育30分钟。加入TMB底物，用2 M H₂SO₄终止反应，测定450 nm处吸光度，通过标准曲线计算IL-2浓度[1] - CD69表达检测（流式细胞术）：收集刺激后的T细胞，用含2%胎牛血清的PBS洗涤2次，4℃避光条件下用荧光素偶联的抗小鼠CD69抗体孵育30分钟。再次洗涤后重悬于PBS，用流式细胞仪分析，量化CD69阳性细胞百分比，以未刺激T细胞作为阴性对照[1] - Lck/ZAP-70磷酸化检测（Western blot）：用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解刺激后的T细胞，BCA法测定蛋白浓度。每泳道上样30 μg总蛋白，经10% SDS-PAGE分离后转印至PVDF膜，室温下用5%脱脂牛奶封闭1小时。膜用抗磷酸化Lck（Tyr394）、总Lck、抗磷酸化ZAP-70（Tyr493）、总ZAP-70及抗β-actin（内参）一抗4℃孵育过夜。洗涤后用HRP偶联二抗室温孵育1小时，增强化学发光（ECL）显影，ImageJ定量条带灰度值[1] - 混合淋巴细胞反应（MLR）实验：将C57BL/6小鼠脾细胞（反应细胞）与BALB/c小鼠脾细胞（刺激细胞，30 Gy照射以抑制增殖）按1:1比例（2×10⁵个细胞/孔）在96孔板中共培养，培养开始时加入WH-4-023（0 μM、0.3 μM、1 μM、3 μM、10 μM）。孵育72小时后，每孔加入1 μCi [³H]-胸腺嘧啶，继续孵育18小时。将细胞收集至玻璃纤维滤纸上，通过β计数器测定放射性强度，评估T细胞增殖[1] |
| 动物实验 |
小鼠迟发型超敏反应（DTH）模型：雌性C57BL/6小鼠（6-8周龄，18-22 g）饲养于SPF级动物房（22-25℃，12小时光照/黑暗循环），自由摄食饮水。第0天（致敏），剃除小鼠背部毛发，涂抹100 μL 0.5% DNFB丙酮/橄榄油（1:1）溶液。第5天（激发），在小鼠右耳涂抹20 μL 0.2% DNFB溶液（左耳作为对照）。WH-4-023溶解于由5% DMSO、10% Cremophor EL和85%生理盐水组成的溶剂中。各药物组分别于第3、4和5天每日一次灌胃给予WH-4-023，剂量分别为3 mg/kg、10 mg/kg、30 mg/kg或100 mg/kg（10 μL/g体重）。对照组灌胃给予等体积的溶剂。24小时后处死小鼠，使用数字游标卡尺测量耳厚度（炎症指数 = 右耳厚度 – 左耳厚度）。取右耳组织，用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，用于炎症细胞浸润的组织病理学分析[1]
- 大鼠角叉菜胶诱导的足爪水肿模型：雄性Sprague-Dawley大鼠（200–220 g）饲养于SPF级动物房。WH-4-023溶解于与迟发型超敏反应（DTH）模型相同的溶剂中。将大鼠随机分为对照组（溶剂组）和药物组（30 mg/kg、100 mg/kg，灌胃给药，每组 n=6）。给药 1 小时后，将 0.1 mL 1% 角叉菜胶生理盐水皮下注射至右后爪足底（左爪作为对照）。分别于注射后 1、3 和 6 小时使用体积描记器测量爪体积（水肿指数 = 右爪体积 – 左爪体积）。注射后 6 小时，处死大鼠，并通过心脏穿刺采集血液。离心（3000×g，15 分钟）分离血清，并使用大鼠特异性 ELISA 试剂盒检测血清中 TNF-α 和 IL-6 的水平 [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在急性毒性评估中（C57BL/6小鼠单次口服300 mg/kg剂量的WH-4-023）：给药后7天内未观察到死亡或明显的临床毒性症状（例如，嗜睡、腹泻、体重减轻>10%）。7天时的血清生化分析（ALT、AST、肌酐、BUN）显示，药物治疗组和对照组小鼠之间无显著差异，表明未观察到明显的急性肝毒性或肾毒性[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
N-(2,4-二甲氧基苯基)-N-[2-[4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯胺基]-4-嘧啶基]氨基甲酸(2,6-二甲基苯基)酯属于哌嗪类化合物。
WH-4-023 是一种新型、高效且口服有效的 Lck 小分子抑制剂，属于 2-氨基嘧啶氨基甲酸酯类化合物。它对 Lck 的选择性远高于其他 Src 家族和非 Src 激酶，从而最大限度地减少了脱靶效应，使其成为研究 Lck 介导的生物学过程的宝贵工具[1]。 - WH-4-023 的抗炎机制涉及抑制 Lck 激酶活性，从而阻断 Lck 依赖的 T 细胞活化（IL-2 分泌减少、CD69 表达降低）和 T 细胞增殖（混合淋巴细胞反应抑制）。这表明其在T细胞介导的炎症性疾病（例如类风湿性关节炎、银屑病）和自身免疫性疾病中具有潜在的治疗应用价值[1] - WH-4-023在动物模型（迟发型超敏反应和爪水肿）中表现出良好的口服生物活性，在剂量≥30 mg/kg时具有显著的抗炎作用。这种口服活性支持其作为开发靶向Lck的口服抗炎药物的先导化合物的潜力[1] |
| 分子式 |
C32H36N6O4
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|---|---|---|
| 分子量 |
568.67
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| 精确质量 |
568.279
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| CAS号 |
837422-57-8
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
11844351
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
743.2±70.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
403.3±35.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.5 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.637
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| LogP |
3.42
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| tPSA |
92.29
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
42
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| 分子复杂度/Complexity |
826
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
NBTNHSGBRGTFJS-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C32H36N6O4/c1-22-7-6-8-23(2)30(22)42-32(39)38(27-14-13-26(40-4)21-28(27)41-5)29-15-16-33-31(35-29)34-24-9-11-25(12-10-24)37-19-17-36(3)18-20-37/h6-16,21H,17-20H2,1-5H3,(H,33,34,35)
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| 化学名 |
2,6-dimethylphenyl (2,4-dimethoxyphenyl)(2-((4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)pyrimidin-4-yl)carbamate
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 0.77 mg/mL (1.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 7.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 0.77 mg/mL (1.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 7.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7585 mL | 8.7924 mL | 17.5849 mL | |
| 5 mM | 0.3517 mL | 1.7585 mL | 3.5170 mL | |
| 10 mM | 0.1758 mL | 0.8792 mL | 1.7585 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
AG01
FRK Recombinant Human Active Protein Kinase
FYN Y531F Recombinant Human Active Protein Kinase
Scr-IN-2
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