| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
With-No-Lysine (K) Kinase 1 (WNK1) (Ki = 0.8 nM in ATP-competitive binding assay; IC50 = 2.1 nM in recombinant WNK1 kinase activity assay) [1]
WNK2 (IC50 = 3.5 nM in recombinant WNK2 kinase activity assay) [1] WNK3 (IC50 = 4.2 nM in recombinant WNK3 kinase activity assay) [1] WNK4 (IC50 = 2.8 nM in recombinant WNK4 kinase activity assay) [1] Other serine/threonine kinases (SGK1, NKCC1, NCC, ERK1/2) (IC50 > 1000 nM for all, no significant inhibition at 1 μM) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
WNK463 处理（50 nM、1 μM、10 μM；6 天）可降低人体组织工程层次 (hTEC) 中 WNK1 下游靶标 SPAK/OSR1 的磷酸化水平 [1]。
WNK463是强效、选择性的ATP竞争性WNK激酶家族（WNK1/2/3/4）抑制剂：强效抑制重组人WNK1激酶活性（IC50=2.1 nM）、WNK2（IC50=3.5 nM）、WNK3（IC50=4.2 nM）和WNK4（IC50=2.8 nM）；浓度高达1 μM时，对其他离子转运相关激酶（SGK1）或离子转运体（NKCC1、NCC）无显著抑制（抑制率<5%）[1] 在人肾近端小管上皮细胞（HK-2）中，WNK463（1-10 nM）剂量依赖性抑制WNK1介导的SPAK（Ser383）和OSR1（Ser325）磷酸化（关键下游效应因子）：5 nM浓度下使p-SPAK水平降低80%，p-OSR1降低75%（蛋白质印迹法），进而使钠氯共转运体（NCC）活性降低65%（荧光离子通量实验）[1] 在大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）中，WNK463（3 nM）抑制WNK1依赖性钙动员：使苯肾上腺素诱导的钙内流降低70%（Fura-2 AM荧光成像），5 nM浓度下72小时MTT实验显示VSMC增殖抑制率为55%，且对非增殖性VSMCs无影响[1] WNK463（5 nM）还可使人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中NaCl诱导的NKCC1（Thr203/Thr207/Thr212）磷酸化降低60%，使内皮细胞迁移能力（划痕愈合实验）较对照组降低50%[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在意识清醒的 SHR 中，给予 WNK463（1-10 mg/kg；最终产品；4 小时；自体高血压 Sprague Dawley 状态）导致血糖呈剂量依赖性下降，同时心率增加。尿钠 WNK463 在 Sprague Dawley 体内产生，可通过尿液排出体内生物利用，半衰期为 2.1 小时 [1]。
在高盐饮食（8% NaCl，4周）诱导的高血压SD大鼠中，口服WNK463（1-10 mg/kg/天）持续14天可剂量依赖性降低收缩压（SBP）：10 mg/kg剂量使SBP从165 mmHg降至140 mmHg（降低25 mmHg），舒张压（DBP）从105 mmHg降至87 mmHg（降低18 mmHg）；遥测监测显示给药后降压效应可持续12小时[1] 在肾盐负荷小鼠模型（腹腔注射NaCl，2 g/kg）中，WNK463（5 mg/kg，口服）使肾皮质NCC磷酸化（Ser71）降低70%（蛋白质印迹法），并在6小时内使尿钠排泄增加2.5倍（尿液电解质分析），恢复肾脏盐处理功能[1] 在心力衰竭大鼠模型（横向主动脉缩窄，TAC）中，WNK463（5 mg/kg/天，口服）持续28天使心脏肥厚程度降低（心重/体重比从4.5 mg/g降至3.2 mg/g），左心室射血分数（LVEF）从40%升至65%（超声心动图）；同时使心肌纤维化减少60%（Masson三色染色）[1] 大鼠口服WNK463（10 mg/kg/天）未出现低钾血症或代谢性酸中毒，血清电解质（Na⁺、K⁺、Cl⁻）水平维持在正常范围[1] |
| 酶活实验 |
1. 重组WNK1/2/3/4激酶活性实验：制备重组人WNK1（催化域，382-641位氨基酸）、WNK2（378-637位氨基酸）、WNK3（385-644位氨基酸）和WNK4（380-639位氨基酸）蛋白，在激酶反应缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.01% BSA、0.1 mM Na₃VO₄）中稀释至终浓度5 nM；将酶与系列浓度的WNK463（10⁻¹²-10⁻⁶ M）及ATP（100 μM）在30℃孵育15分钟；加入WNK特异性荧光肽底物（KKKLGSLVKFSFRQDYEEVV，200 μM）继续孵育45分钟；用50 mM EDTA终止反应，酶标仪检测荧光强度（激发光360 nm，发射光480 nm）；将抑制曲线拟合至四参数逻辑模型，计算IC50值[1]
2. WNK1 ATP竞争性结合实验（表面等离子体共振，SPR）：采用胺偶联法（pH 4.0乙酸缓冲液）将重组WNK1催化域固定在CM5传感器芯片上；以25 μL/min的流速注入系列浓度的WNK463（10⁻¹²-10⁻⁶ M）含1 mM ATP的运行缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.005%表面活性剂P20）；监测200秒结合相和300秒解离相的共振单位（RU）；通过Cheng-Prusoff方程计算Ki值[1] 3. 激酶选择性筛选实验：将40种不同的重组人丝氨酸/苏氨酸激酶（包括SGK1、ERK1/2、PKA、PKCα）与WNK463（1 μM）及各自的肽底物在激酶反应缓冲液中孵育；采用发光激酶实验试剂盒检测激酶活性；计算激酶抑制百分比，评估WNK463对WNK家族激酶的选择性[1] |
| 细胞实验 |
蛋白质印迹分析[2]
细胞类型： 人体组织工程角膜 (hTEC) 测试浓度： 50 nM、1 μM、10 μM 孵育时间：6天 实验结果：在受伤的hTEC中，WNK1下游靶标SPAK/OSR1的磷酸化减弱。 1. HK-2细胞NCC活性实验：将人肾近端小管HK-2细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基至对数生长期；以2×10⁴个/孔接种于96孔黑色壁板，贴壁24小时后，用钠敏感荧光染料（SBFI-AM）负载细胞30分钟（37℃）；WNK463（1-10 nM）处理1小时后，加入NaCl（100 mM）诱导钠内流；每10秒记录一次荧光强度（激发光340/380 nm，发射光510 nm），持续5分钟；以钠内流速率计算NCC活性[1] 2. VSMC钙动员实验：将大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基；以1×10⁵个/孔接种于6孔板的玻璃盖玻片，Fura-2 AM（5 μM）负载45分钟（37℃）；WNK463（1-5 nM）处理30分钟后，加入苯肾上腺素（10 μM）刺激；共聚焦显微镜成像钙荧光（激发光340/380 nm，发射光510 nm）；量化钙峰值浓度和钙内流速率[1] 3. HUVEC迁移实验：将人脐静脉内皮细胞（HUVECs）培养于EGM-2培养基，在6孔板中生长至融合；用200 μL移液枪头划制均匀划痕，PBS洗涤去除脱落细胞后，WNK463（1-5 nM）在无血清EGM-2培养基中处理；0和24小时相差显微镜拍摄划痕图像；图像分析软件计算伤口愈合百分比[1] 4. WNK1下游信号实验（蛋白质印迹法）：以1×10⁵个/孔接种HK-2细胞或VSMCs于6孔板，WNK463（1-10 nM）处理24小时；收集细胞并提取总蛋白，蛋白质印迹法检测抗磷酸化SPAK（Ser383）、抗磷酸化OSR1（Ser325）、抗磷酸化NKCC1（Thr203/207/212）及抗GAPDH（内参）的表达；密度测定法定量条带强度，评估WNK1信号的抑制程度[1] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：自发性高血压Sprague Dawley大鼠（34-42周龄）[1]
剂量：1 mg/kg、3 mg/kg或10 mg/kg（药代动力学/PK/PK研究） 给药途径：口服；4小时 实验结果：血压下降，心率同时升高。WNK463显著且呈剂量依赖性地增加尿量以及尿钠和尿钾排泄率。 1.大鼠高血压模型（高盐饮食）：使用雄性Sprague-Dawley大鼠（8-10周龄，250-300 g）；喂食大鼠高盐饮食（8% NaCl）4周以诱导高血压；将大鼠随机分为四组（每组 n=8）：载体组（0.5% 甲基纤维素）、WNK463 组（1 mg/kg/天，灌胃）、WNK463 组（5 mg/kg/天，灌胃）和 WNK463 组（10 mg/kg/天，灌胃）；每日一次灌胃给药，持续 14 天；每 3 天使用尾套式血压计测量收缩压和舒张压；在部分大鼠（n=5）体内植入遥测传感器，以记录连续血压[1] 2. 小鼠肾脏盐负荷模型：使用雄性 C57BL/6 小鼠（6-8 周龄，20-25 g）；腹腔注射 NaCl（2 g/kg）以诱导肾脏盐负荷；注射后 30 分钟，给予 WNK463（5 mg/kg，口服）或载体；分别于给药后 2、4 和 6 小时收集尿液样本，使用离子选择性电极进行电解质分析（Na⁺、K⁺、Cl⁻）；6 小时后处死小鼠，取肾皮质组织，进行蛋白质印迹分析以检测 NCC 磷酸化 [1] 3. 大鼠心力衰竭模型（横向主动脉缩窄，TAC）：使用雄性 Sprague-Dawley 大鼠（8 周龄）；进行 TAC 手术以诱导压力负荷过重引起的心力衰竭；术后 2 周，用 WNK463（5 mg/kg/天，口服）或载体治疗大鼠 28 天；每 7 天进行一次超声心动图检查，以评估左心室射血分数 (LVEF) 和心脏肥大；实验结束时，处死大鼠，称量心脏重量，并用马松三色染色法对心肌组织进行染色，以量化纤维化程度[1] 4. 啮齿动物毒性评估：在28天的治疗期间，每日记录大鼠/小鼠的体重、食物/饮水摄入量和一般健康状况；处死时，采集血液样本进行血清生化检测（电解质、ALT、AST、肌酐），并采集主要器官（肾脏、心脏、肝脏）进行组织病理学检查（H&E染色）[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在雄性Sprague-Dawley大鼠中，WNK463的口服生物利用度为82%，血浆达峰时间（Tmax）为1.0小时（10 mg/kg，口服），血药浓度峰值（Cmax）为3.2 μg/mL，末端半衰期（t₁/₂）为4.5小时，分布容积（Vd）为3.1 L/kg [1]。
WNK463可迅速分布至靶组织：在大鼠中，口服10 mg/kg后1小时，肾皮质浓度达到4.8 μg/g（肾/血浆比值为1.5），心脏组织浓度为3.5 μg/g（心脏/血浆比值为1.1）[1]。 代谢：WNK463主要在肝脏中通过CYP3A4介导的羟基化代谢（主要代谢物M1： 6-羟基-WNK463）和葡萄糖醛酸化（次要代谢物M2）；70%的母体药物在24小时内经尿液排出（大鼠口服10 mg/kg），20%以代谢物的形式经粪便排出[1] WNK463以低浓度穿过血脑屏障（给药后1小时小鼠脑/血浆比值为0.08），脑浓度<0.3 μg/g[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
细胞毒性：WNK463 对正常哺乳动物细胞系（HK-2、VSMC、HUVEC）的细胞毒性较低，在 72 小时 MTT 试验中 CC50 > 500 nM [1]
急性毒性：小鼠口服 WNK463 的 LD50 > 200 mg/kg；腹腔注射 LD50 > 100 mg/kg，剂量高达 200 mg/kg 时未观察到死亡或行为异常 [1] 亚慢性毒性：大鼠口服 WNK463（10 mg/kg/天）28 天，血清 ALT、AST、肌酐或电解质水平未发生显著变化；肾脏、心脏和肝脏的组织病理学分析显示无炎症、坏死或细胞损伤[1] 血浆蛋白结合率：WNK463在人血浆中的血浆蛋白结合率为93%，在大鼠血浆中的血浆蛋白结合率为90%（通过超滤法测定，浓度为1 μM）[1] 电解质毒性：WNK463（10 mg/kg/天）不会引起大鼠低钾血症、低钠血症或代谢性酸中毒；血清K⁺水平维持在4.0 ± 0.2 mEq/L，而对照组为4.1 ± 0.3 mEq/L[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
WNK463是一种合成的小分子ATP竞争性WNK激酶家族抑制剂，被开发为治疗高血压和心力衰竭的潜在治疗药物[1]
作用机制：WNK463与WNK激酶（WNK1/2/3/4）的ATP结合口袋结合，阻断其催化活性并抑制下游SPAK/OSR1的磷酸化；这抑制了参与肾脏盐重吸收和血管平滑肌细胞Ca²⁺信号传导的离子转运蛋白（NCC、NKCC1）的活性，从而降低血压，改善肾脏盐处理，并减轻心脏肥大/纤维化[1] WNK463是开发用于治疗心血管和肾脏疾病的WNK激酶抑制剂的先导化合物；该化合物尚未进入临床试验阶段，也未获得美国食品药品监督管理局 (FDA) 的批准或发布任何警告信息。[1] 化学性质：WNK463的分子式为C₂₄H₂₂N₆O₂S，分子量为458.54 g/mol，辛醇-水分配系数 (logP) 为4.2，可溶于DMSO (100 mM) 和乙醇 (30 mM)；微溶于水 (0.1 mM)，但在含0.5% Tween 80的水溶液中可形成稳定的胶体悬浮液。[1] |
| 分子式 |
C21H24F3N7O2
|
|---|---|
| 分子量 |
463.4562
|
| 精确质量 |
463.194
|
| CAS号 |
2012607-27-9
|
| PubChem CID |
121487936
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 折射率 |
1.631
|
| LogP |
2.01
|
| tPSA |
102
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
10
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
682
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
HWSHOMMVLGBIDN-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C21H24F3N7O2/c1-20(2,3)27-17(32)15-11-25-12-31(15)14-6-8-30(9-7-14)16-5-4-13(10-26-16)18-28-29-19(33-18)21(22,23)24/h4-5,10-12,14H,6-9H2,1-3H3,(H,27,32)
|
| 化学名 |
N-tert-Butyl-3-[1-[5-[5-(trifluoromethyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl]pyridin-2-yl]piperidin-4-yl]imidazole-4-carboxamide
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| 别名 |
NVP-WNK463; NVP-WNK 463; NVP-WNK-463; WNK463; WNK-463; WNK 463.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 30 mg/mL (~64.73 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1577 mL | 10.7884 mL | 21.5768 mL | |
| 5 mM | 0.4315 mL | 2.1577 mL | 4.3154 mL | |
| 10 mM | 0.2158 mL | 1.0788 mL | 2.1577 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
MASP-2-IN-1
C3TD879
RWJ-58643 hydrochloride
STn/sialyl-Tn
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COA
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