Wortmannin (SL-2052; KY-12420)   中文名称: 渥曼青霉素

PI3K (IC50 = 3 nM); DNA-PK (IC50 = 16 nM); PLK3 (IC50 = 48 nM); ATM (IC50 = 150 nM); ATR (IC50 = 1.8 μM); MLCK (IC50 = 200 nM)

Wortmannin（0-100 nM；24-72 小时）以时间和剂量依赖性方式抑制 K562 细胞的增殖。 24小时、48小时和72小时的IC50值分别为25±0.10 nM、12.5±0.08 nM和6.25±0.11 nM[4]。由于 Wortmannin，YAP 无法进入细胞核[6]。

渥曼青霉素（一组 8 只 Scid 小鼠每天口服灌胃剂量为 1 毫克/千克的渥曼青霉素，共 14 天。在前 5 天，第二组 8 只小鼠接受渥曼青霉素 1.5 毫克/千克，然后按剂量在剩余的治疗期间降低至 1 mg/kg）治疗显着减缓了人类 MCF-7 乳腺癌异种移植物和鼠 C3H 乳腺肿瘤的生长。在患有小鼠 C3H 乳腺肿瘤的小鼠中，与对照组相比，连续 7 天服用 1 mg/kg 渥曼青霉素可使肿瘤负荷减少 54%。肿瘤植入一天后开始进行 1 mg/kg 渥曼青霉素治疗 14 天后，与对照相比，人类 MCF-7 乳腺癌异种移植物的负担减少了 97%[5]。

体外PtdIns 3-激酶测定[5]
从对照组和经Wortmannin处理的小鼠中采集C3H肿瘤、脑、肝和肾。在4°C下，使用polytron均质器在三个体积的裂解液（20 mM Tris-HCl，pH 8.0，137 mM NaCl，10%甘油，0.1%Triton X-100，1 mM MgCl2，1 mM CaCl2，1 mmol原钒酸钠，1 mM苯甲基磺酰脲（PMSF），2 lg ml）中均质化组织。用磷酸盐缓冲盐水（1 mM KH2PO4、10 mM Na2HPO4、137 mM NaCl、2.7 mM KCl pH 7.0）洗涤细胞，并在3 ml裂解液中于4°C下孵育20分钟。组织匀浆和细胞裂解物在16000 g下离心5分钟，上清液在20 mM Tris-HCl、pH 8.0、137 mM NaCl和1 mM EDTA中稀释至0.01至0.1 lg蛋白质ll）1的®nal蛋白质浓度。在混合反应组分之前，将PtdIns 3-激酶抑制剂从10l二甲亚砜中制备的原料中干燥到反应管中。孵育包含30升稀释的粗品、部分纯化的®或重组PtdIns 3-激酶制剂，其中10升PtdIns或D-3-脱氧-PtdIns（0.5 mg ml）1溶于20 mM HEPES中，pH 7.6）作为底物。通过加入10 lM[32P]-ATP（1 Ci/mmol）引发反应。样品在37°C下孵育45分钟，加入100升1 N HCl淬灭，用400升1:1氯仿/甲醇提取，然后在2000克下离心1分钟。对于每个样品，在多通道薄层色谱硅胶60板的单个通道的预吸收条上点取25升低级有机相。板在65%正丙醇/35%2M乙酸中显影。[32P]-标记产物通过磷光分析进行定量。3-脱氧PtdIns中PtdIns的3位没有羟基，可以防止3磷酸化，并允许测量非PtdIns 3-激酶活性[12]。通过从相应的含PtdIns样品中减去含D-3-脱氧-PtdIns样品中检测到的活性来测定PtdIns 3-激酶活性。以PtdIns激酶活性表示的值表示PtdIns所有可能位置的磷酸化。以PtdIns 3-激酶活性表示的值表示仅在PtdIns的3-OH位置磷酸化。酶活性的抑制百分比是通过平均处理值除以平均对照值的商来计算的。

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使用肽底物 (KKRPQRATSNVFS-NH2) 或肌球蛋白轻链测定 MLCK 活性。肽底物 (24 μM) 在含有 25 mM Tris-HCl (pH 7.5)、0.5 mg/mL 牛血清白蛋白、4 mM MgCl2、0.5 mM CaCl2、2.6 nM 钙调蛋白、1.5 nM MLCK 和 400 的反应混合物中磷酸化。最终体积为 0.25 mL 的 μM ATP。在没有 ATP 的情况下在 28 ℃ 下预孵育 10 分钟后，通过在 28 ℃ 下添加 ATP 启动反应，并在 30 分钟后添加 0.1 mL 10% (v/v) 乙酸终止反应。肽底物 (24 μM) 在终体积为 0.25 mL 的反应混合物中进行磷酸化，其成分如下：25 mM Tris-HCl (pH 7.5)、0.5 mg/mL 牛血清白蛋白、4 mM MgCl2、0.5 mM CaCl2 、2.6 nM 钙调蛋白、1.5 nM MLCK 和 400 μM ATP。在没有 ATP 的情况下在该温度下预孵育 10 分钟后，在 28 ℃ 下添加 ATP 来启动反应。 30 分钟后，在该温度下添加 0.1 mL 10% (v/v) 乙酸，结束。通过高效液相色谱分析混合物：柱，Unisil Pack 5C18 4.6 X 150 mm；溶剂，18% (v/v) 乙腈，0.1% (v/v) 三氟乙酸水溶液；流速，1.0毫升/分钟；温度，40℃；检测，220 nm 处吸光度。使用高效液相色谱分析混合物：柱，Unisil Pack 5C18，4.6 X 150 mm；溶剂，18% (v/v) 乙腈；和 0.1% (v/v) 三氟乙酸水溶液；流速，1.0毫升/分钟；温度，40℃；和检测，220 nm处的吸光度。磷酸化形式的峰面积与非磷酸化形式的峰面积之比用于计算反应的百分比。在上述情况下测得的比活性为0.81μmol/min/mg。肌球蛋白轻链 (108 μg/mL) 在含有 25 mM Tris-HCl (pH 7.5)、0.5 mg/mL 牛血清白蛋白、4 mM MgCl2、0.5 mg/mL CaCl2、4.2 nM 钙调蛋白、0.92 nM 的反应混合物中磷酸化酶和 10 μM[γ-32P]ATP (100-900 cpm/pmol)。在没有 ATP 的情况下预孵育 3 分钟后，在 30 ℃ 下添加 [γ-32P]ATP 来启动反应，并在 5 分钟后添加 0.125 mL 三氯乙酸来终止反应。在硝酸纤维素膜过滤器上收集后，用四份 1 mL 等份的 5% (v/v) 三氯乙酸洗涤可酸沉淀的材料。使用 Packard Tri-Carb 液体闪烁光谱仪 4530 型和甲苯闪烁液，测量过滤器上的放射性。 1.23 μmol/min/mg 是根据条件确定的比活度。

原代 NK 细胞用渥曼青霉素 (1 μM) 预处理 1 小时，用 RPMI 1640 洗涤两次，然后用 IL-15 (10 ng/mL) 处理 24 小时。使用 DMSO 作为对照。

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大鼠嗜碱性白血病2H3（RBL-2H3）细胞的高亲和力免疫球蛋白E受体（FcεRI）的表面结合在酪氨酸激酶Lyn和磷脂酰肌醇3-激酶（PI3激酶）激活后诱导组胺分泌和白三烯释放。Wortmannin以低至1.0 nM的浓度和3.0 nM的IC50值抑制了来自小牛胸腺的部分纯化的PI3激酶的活性，以及来自RBL-2H3细胞的抗PI3激酶p85免疫沉淀物中的PI3酶活性，但没有抑制PI4激酶活性。渥曼青霉素对PI3激酶的抑制是不可逆的。Wortmannin抑制Fc epsilon RI介导的组胺分泌和白三烯释放高达80%，IC50值分别为2.0和3.0 nM。Wortmannin在完整细胞中抑制PI3激酶活性高达80%，IC50值为2.0 nM，几乎与PI3激酶在体外的IC50值以及组胺分泌和白三烯释放的IC50值相等。使用抗渥曼青霉素抗体，我们已经证明渥曼青霉素在体外和全细胞中都能与110 kDa的蛋白质结合，但不能与PI3激酶85 kDa的调节亚基结合。此外，渥曼青霉素衍生物作为PI3激酶抑制剂和组胺分泌抑制剂的效力之间呈正相关。Wortmannin对酪氨酸激酶Lyn的激活没有影响。这些结果表明，PI3激酶参与了Fc epsilon RI刺激后组胺分泌的信号转导通路，渥曼青霉素通过与该酶的催化亚基直接相互作用阻断了这些反应[1]

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研究了渥曼青霉素对白血病细胞的抑制作用及其可能机制。用不同浓度（3.125-100nmol/L）的渥曼青霉素处理K562细胞0-72h。采用MTT法评估渥曼青霉素对K562细胞生长的抑制作用。通过Annexin-V FITC/PI双标细胞术和透射电子显微镜（TEM）检测细胞凋亡。通过蛋白质印迹和逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）测定p-Akt、T-p-Akt，NF-kappaBp65和IKK-kappaB的表达。我们的结果表明，渥曼青霉素在体外以时间和剂量依赖的方式明显抑制K562细胞的生长并诱导其凋亡。渥曼青霉素24小时的IC（50）值为25+/-0.14 nmol/L。此外，渥曼青霉素以剂量依赖的方式诱导K562细胞凋亡。透射电镜显示，经渥曼青霉素处理的K562细胞出现典型的凋亡形态学变化，如染色质凝缩、核固缩、核断裂和凋亡小体。此外，当与渥曼青霉素一起培养时，几种重要的细胞内蛋白激酶，如p-Akt、NF-kappaBp65和IKK-kappaB，在蛋白质水平和转录水平上都以剂量依赖的方式经历了不同程度的降解，但总Akt的表达没有变化。结论：渥曼青霉素可能通过下调存活信号通路（PI3K/Akt和NF-kappaB通道）来抑制K562白血病细胞的增殖并诱导其凋亡[4]。

抗肿瘤活性研究 [5]
将 0.25 mg 的 21 天缓释 17-雌二醇缓释片皮下植入 SCID 小鼠体内，24 小时后接种 C3H 和 MCF-7 激素依赖性乳腺癌细胞系。在整个研究期间，每隔 21 天植入一次额外的 17-雌二醇缓释片。如前所述，将小鼠乳腺C3H肿瘤碎片皮下植入20克雌性C3H小鼠的右侧乳腺脂肪垫。将MCF-7细胞（10⁷个）皮下注射到小鼠后肢。在研究期间，每周三次进行二维测量以评估肿瘤负荷。肿瘤体积的计算公式为：肿瘤体积…ml† × 肿瘤长度…cm† × 肿瘤宽度…cm† × 2 = 2。在仅报告最终肿块的研究中，肿瘤在研究结束后切除并称重。沃特曼宁（Wortmannin）以0.1 mg/ml的浓度溶于含10%乙醇的0.1% Tween 20溶液中，每日剂量为1或1.5 mg/kg，连续给药14天。

溶于 DMSO 中，浓度为 0.4 mg/mL，使用前用 0.9% NaCl 稀释; 0.175、0.35 和 0.7mg/kg；静脉注射

将人胰腺腺癌细胞 PK1 皮下注射和原位注射到 SCID 小鼠体内。

[1]. Inhibition of histamine secretion by wortmannin through the blockade of phosphatidylinositol 3-kinase in RBL-2H3 cells. J Biol Chem. 1993 Dec 5;268(34):25846-56.

[2]. Autophagy inhibitors as a potential antiamoebic treatment for Acanthamoeba keratitis. Antimicrob Agents Chemother. 2015 Jul;59(7):4020-5.

[3]. Polo-like kinases inhibited by wortmannin. Labeling site and downstream effects. J Biol Chem. 2007 Jan 26;282(4):2505-11.

[4]. Wortmannin inhibits K562 leukemic cells by regulating PI3k/Akt channel in vitro. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 2009 Aug;29(4):451-6.

[5]. Wortmannin inhibits the growth of mammary tumors despite the existence of a novel wortmannin-insensitive phosphatidylinositol-3-kinase. Cancer Chemother Pharmacol. 1999;44(6):491-7.

[6]. Wortmannin, a widely used phosphoinositide 3-kinase inhibitor, also potently inhibits mammalianpolo-like kinase. Chem Biol. 2005 Jan;12(1):99-107.

沃特曼宁是一种有机杂五环化合物，属于δ-内酯、乙酸酯和环酮类化合物。它具有多种生物活性，包括作为EC 2.7.1.137（磷脂酰肌醇3-激酶）抑制剂、抗冠状病毒剂、抗衰老剂、自噬抑制剂、青霉菌代谢产物、放射增敏剂和抗肿瘤剂。
沃特曼宁是绳状青霉（Penicillium funiculosum）和沃特曼氏塔拉霉（Talaromyces wortmannii）的甾体代谢产物。该药物是一种非特异性共价磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂。
沃特曼宁已在沃特曼青霉菌（Talaromyces wortmannii）中被发现，并有相关数据。
沃特曼宁是一种从沃特曼青霉菌（Penicillium wortmannin）中分离得到的强效真菌代谢产物，可选择性抑制磷脂酰肌醇3-激酶，并影响信号转导通路。(NCI)
一种由绳状青霉菌（Penicillium funiculosum）产生的雄烯二烯代谢产物，可抑制磷脂酰肌醇3-激酶，并抑制人肿瘤细胞系中T淋巴细胞的同种异体抗原特异性活化。它广泛应用于细胞生物学研究，并具有广阔的治疗潜力。

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大鼠嗜碱性白血病2H3 (RBL-2H3) 细胞表面高亲和力免疫球蛋白E受体 (FcεRI) 的结合，在酪氨酸激酶Lyn和磷脂酰肌醇3-激酶 (PI3-激酶) 激活后，诱导组胺分泌和白三烯释放。沃特曼宁在浓度低至1.0 nM时即可抑制小牛胸腺部分纯化的PI3-激酶的活性，以及RBL-2H3细胞抗PI3-激酶p85免疫沉淀物中的PI3-激酶活性，IC50值为3.0 nM，但不抑制PI4-激酶活性。沃特曼宁对PI3-激酶的抑制是不可逆的。沃特曼宁对FcεRI介导的组胺分泌和白三烯释放的抑制率均高达80%，IC50值分别为2.0 nM和3.0 nM。沃特曼宁对完整细胞中PI3激酶活性的抑制率也高达80%，IC50值为2.0 nM，与体外PI3激酶活性以及组胺分泌和白三烯释放的IC50值几乎相同。我们利用抗沃特曼宁抗体证实，沃特曼宁在体外和完整细胞中均能与110 kDa蛋白结合，但不能与PI3激酶85 kDa调节亚基结合。此外，沃特曼宁衍生物作为PI3激酶抑制剂和组胺分泌抑制剂的效力呈正相关。沃特曼宁对酪氨酸激酶Lyn的活化没有影响。这些结果表明，PI3激酶参与了FcεRI刺激后组胺分泌的信号转导通路，而沃特曼宁通过与该酶的催化亚基直接相互作用来阻断这些反应。[1]

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Polo样激酶在有丝分裂过程中发挥着至关重要的作用。我们之前报道过沃特曼宁能有效抑制Polo样激酶1 (Plk1)。在本研究中，我们发现沃特曼宁也能强烈抑制Polo样激酶3 (Plk3)。为了进一步表征这种抑制作用，我们鉴定了四甲基罗丹明-沃特曼宁缀合物AX7503在Plk1和Plk3上的标记位点。结果发现，AX7503在Plk1和Plk3上的标记发生在保守的ATP结合位点残基上。此外，我们发现，在常用抑制沃特曼宁（wortmannin）靶点（如磷脂酰肌醇3-激酶）的浓度下，沃特曼宁能够抑制活细胞中的Plk3活性。重要的是，我们发现沃特曼宁对Plk3的抑制作用导致DNA损伤诱导的p53丝氨酸20位点磷酸化水平降低，这表明沃特曼宁作用于Plk3的下游靶点。综上所述，我们的研究结果表明，沃特曼宁能够影响Plk3在细胞周期进程和DNA损伤检查点的多种功能。利用 AX7503 鉴定 Plk1 和 Plk3 的标记位点可能有助于设计更有效的靶向 Polo 样激酶的癌症治疗化合物，也可能有助于 Plk 结构域的结构研究。[3]

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目的：磷脂酰肌醇 (PtdIns) 3-激酶是许多细胞功能的重要介质。由于存在强效的不可逆 p110 PtdIns 3-激酶抑制剂沃特曼宁，PtdIns 3-激酶的研究得到了促进。本研究旨在探讨沃特曼宁的细胞生长抑制活性和抗肿瘤活性与磷脂酰肌醇3-激酶（PtdIns 3-Kase）抑制之间的关系。方法：检测细胞和肿瘤组织中的PtdIns 3-Kase活性，并研究沃特曼宁的作用。结果：沃特曼宁在体内抑制小鼠C3H和人MCF-7乳腺肿瘤的生长。然而，沃特曼宁抑制C3H肿瘤生长的能力与肿瘤PtdIns 3-Kase活性的抑制无关。在C3H和MCF-7细胞培养裂解液、实体瘤以及正常小鼠组织匀浆中均检测到了沃特曼宁不敏感的PtdIns 3-Kase活性。除了对沃特曼宁的抑制作用具有抵抗性外，MCF-7 细胞裂解液中的总 PtdIns 3-激酶活性也对另外五种已知的 p110 PtdIns 3-激酶抑制剂具有抵抗性。从 MCF-7 细胞裂解液中部分纯化沃特曼宁不敏感的 PtdIns 3-激酶，结果表明其活性与 PtdIns 3-激酶 p85 调节亚基无关。结论：本研究结果表明，尽管小鼠和人类乳腺组织中存在新的沃特曼宁不敏感的 PtdIns 3-激酶，沃特曼宁仍能抑制这些肿瘤的生长，这提示沃特曼宁的抗肿瘤活性可能由其他靶点介导。[5]

C23H24O8

428.43

428.147

C, 64.48; H, 5.65; O, 29.88

19545-26-7

312145

White to light yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

615.6±55.0 °C at 760 mmHg

234-240ºC

326.1±31.5 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.591

0.81

109.11

0

8

4

31

921

5

O(C(C([H])([H])[H])=O)[C@]1([H])C([H])([H])[C@]2(C([H])([H])[H])C(C([H])([H])C([H])([H])[C@@]2([H])C2C(C3=C4C(=C([H])O3)C(=O)O[C@]([H])(C([H])([H])OC([H])([H])[H])[C@]4(C([H])([H])[H])C=21)=O)=O

QDLHCMPXEPAAMD-QAIWCSMKSA-N

InChI=1S/C23H24O8/c1-10(24)30-13-7-22(2)12(5-6-14(22)25)16-18(13)23(3)15(9-28-4)31-21(27)11-8-29-20(17(11)23)19(16)26/h8,12-13,15H,5-7,9H2,1-4H3/t12-,13+,15+,22-,23-/m0/s1

(1S,6bR,9aS,11R,11bR)-1-(methoxymethyl)-9a,11b-dimethyl-3,6,9-trioxo-3,6,6b,7,8,9,9a,10,11,11b-decahydro-1H-furo[4,3,2-de]indeno[4,5-h]isochromen-11-yl acetate.

SL 2052; SL2052; SL-2052; Wortmannin; 19545-26-7; Wartmannin; KY 12420; Antibiotic SL-2052; SL-2052; MFCD00133927; NSC221019;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~85 mg/mL (198.4 mM)
Water: <1 mg/mL (slightly soluble or insoluble)
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (4.85 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 1% DMSO +30% polyethylene glycol+1% Tween 80 : 8mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。