Wortmannin (SL-2052; KY-12420)   中文名称: 渥曼青霉素

PI3K (IC50 = 3 nM); DNA-PK (IC50 = 16 nM); PLK3 (IC50 = 48 nM); ATM (IC50 = 150 nM); ATR (IC50 = 1.8 μM); MLCK (IC50 = 200 nM)
Wortmannin (SL-2052; KY-12420) (CAS#: 19545-26-7) is a PI3K inhibitor (Class III PI3K). [2]

沃特曼宁（0-100 nM；24-72 小时）以时间和剂量依赖的方式抑制 K562 细胞的增殖。24 小时、48 小时和 72 小时的 IC50 值分别为 25±0.10 nM、12.5±0.08 nM 和 6.25±0.11 nM[4]。由于沃特曼宁[6]的作用，YAP无法进入细胞核。

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沃特曼宁（SL-2052；KY-12420）（CAS#: 19545-26-7）在1 μM浓度下可抑制棘阿米巴在包囊培养基中3天内形成成熟包囊。[2]
透射电镜显示，经沃特曼宁（SL-2052；KY-12420）（CAS#: 19545-26-7）处理的阿米巴细胞质中仍残留有线粒体（箭头所示），表明PI3K抑制剂阻断了自噬的形成。[2]
沃特曼宁（SL-2052；KY-12420）（CAS#: 19545-26-7)-处理过的细胞在包囊形成过程中没有形成完整的双层壁。[2]

沃特曼宁（一组8只Scid小鼠，每日灌胃给予1 mg/kg沃特曼宁，共14天；另一组8只小鼠，前5天给予1.5 mg/kg沃特曼宁，之后剂量降至1 mg/kg，直至治疗结束）治疗可显著减缓人MCF-7乳腺癌异种移植瘤和鼠C3H乳腺肿瘤的生长。在已建立鼠C3H乳腺肿瘤的小鼠中，连续7天给予1 mg/kg沃特曼宁，肿瘤负荷较对照组降低了54%。在肿瘤植入后第1天开始，连续14天给予1 mg/kg沃特曼宁治疗，人MCF-7乳腺癌异种移植瘤的肿瘤负荷较对照组降低了97%[5]。

体外 PtdIns 3-激酶测定 [5]
\n从对照组和沃特曼宁处理组小鼠中取出 C3H 肿瘤、脑、肝和肾脏组织。将组织置于 4°C 下，用 Polytron 匀浆器在三倍体积的裂解缓冲液（20 mM Tris-HCl，pH 8.0，137 mM NaCl，10% 甘油，0.1% Triton X-100，1 mM MgCl2，1 mM CaCl2，1 mM 原钒酸钠，1 mM 苯甲基磺酰氟 (PMSF)，2 μg/ml 亮抑蛋白酶肽和 2 μg/ml 抑蛋白酶）中匀浆。细胞用磷酸盐缓冲液（1 mM KH₂PO₄、10 mM Na₂HPO₄、137 mM NaCl、2.7 mM KCl，pH 7.0）洗涤，并在 3 ml 裂解缓冲液中于 4 °C 孵育 20 分钟。组织匀浆和细胞裂解液以 16000 g 离心 5 分钟，上清液用 20 mM Tris-HCl（pH 8.0）、137 mM NaCl 和 1 mM EDTA 稀释至最终蛋白浓度为 0.01 至 0.1 μg 蛋白/μl。在混合反应组分之前，将 PtdIns 3-激酶抑制剂从 10 μl 二甲基亚砜中配制的储备液中干燥加入反应管中。孵育体系包含 30 μL 稀释的粗制、部分纯化或重组 PtdIns 3-激酶制剂，以及 10 μL PtdIns 或 D-3-脱氧-PtdIns (0.5 mg/mL) 作为底物（溶于 20 mM HEPES 缓冲液，pH 7.6）。反应通过加入 10 μM [³²P]-ATP (1 Ci/mmol) 启动。样品在 37 °C 孵育 45 分钟，加入 100 μL 1 N HCl 终止反应，并用 400 μL 1:1 氯仿/甲醇混合液萃取，然后在 2000 g 下离心 1 分钟。每个样品取 25 μL 下层有机相点样至多通道薄层色谱硅胶 60 板的单个泳道的预吸附条上。展开剂为65%正丙醇/35% 2 M乙酸。[³²P]标记产物通过磷光成像分析进行定量。3'-脱氧-PtdIns中PtdIns 3'位羟基的缺失阻止了3'位磷酸化，从而可以测定非PtdIns 3-激酶活性[12]。PtdIns 3-激酶活性通过从相应的含PtdIns样品中检测到的活性减去含D-3-脱氧-PtdIns样品中检测到的活性来确定。以PtdIns激酶活性表示的值代表PtdIns所有可能位点的磷酸化。以PtdIns 3-激酶活性表示的值仅代表PtdIns 3'-OH位点的磷酸化。酶活性抑制百分比的计算方法为：处理组平均值除以对照组平均值。\n

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\n\nMLCK 活性测定采用肽底物 (KKRPQRATSNVFS-NH2) 或肌球蛋白轻链。将肽底物 (24 μM) 在含有 25 mM Tris-HCl (pH 7.5)、0.5 mg/mL 牛血清白蛋白、4 mM MgCl2、0.5 mM CaCl2、2.6 nM 钙调蛋白、1.5 nM MLCK 和 400 μM ATP 的反应混合物中进行磷酸化，最终体积为 0.25 mL。在不添加ATP的情况下，于28℃预孵育10分钟后，加入ATP启动反应，并在30分钟后加入0.1 mL 10% (v/v)乙酸终止反应。肽底物（24 μM）在终体积为0.25 mL的反应混合物中进行磷酸化，该反应混合物包含以下成分：25 mM Tris-HCl (pH 7.5)、0.5 mg/mL牛血清白蛋白、4 mM MgCl₂、0.5 mM CaCl₂、2.6 nM钙调蛋白、1.5 nM MLCK和400 μM ATP。在不添加ATP的情况下，于28℃预孵育10分钟后，加入ATP启动反应。最后，在反应30分钟后，于该温度下加入0.1 mL 10% (v/v) 乙酸溶液。采用高效液相色谱法分析该混合物：色谱柱，Unisil Pack 5C18 4.6 × 150 mm；流动相，18% (v/v) 乙腈和0.1% (v/v) 三氟乙酸水溶液；流速，1.0 mL/min；温度，40 ℃；检测波长，220 nm。采用高效液相色谱法分析该混合物：色谱柱，Unisil Pack 5C18 4.6 × 150 mm；流动相，18% (v/v) 乙腈和0.1% (v/v) 三氟乙酸水溶液；流速，1.0 mL/min；温度，40 ℃；检测波长，220 nm。磷酸化形式与未磷酸化形式的峰面积比用于计算反应百分比。在上述条件下测得的比活性为 0.81 μmol/min/mg。肌球蛋白轻链 (108 μg/mL) 在含有 25 mM Tris-HCl (pH 7.5)、0.5 mg/mL 牛血清白蛋白、4 mM MgCl₂、0.5 mg/mL CaCl₂、4.2 nM 钙调蛋白、0.92 nM 酶和 10 μM [γ-³²P]ATP (100-900 cpm/pmol) 的反应混合物中进行磷酸化。在 30 ℃ 下，先进行 3 分钟的无 ATP 预孵育，然后加入 [γ-³²P]ATP 启动反应，5 分钟后加入 0.125 mL 三氯乙酸终止反应。将酸沉淀物收集在硝化纤维素膜过滤器上后，用四份 1 mL 的 5% (v/v) 三氯乙酸溶液洗涤。使用 Packard Tri-Carb 4530 型液体闪烁计数器和甲苯闪烁液，测量过滤器上的放射性。根据上述条件测得的比活度为 1.23 μmol/min/mg。

原代NK细胞用wortmannin（1 μM）预处理1小时，用RPMI 1640洗涤两次，然后用IL-15（10 ng/mL）处理24小时。DMSO用作对照。

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大鼠嗜碱性白血病2H3（RBL-2H3）细胞表面高亲和力免疫球蛋白E受体（FcεRI）的结合，在酪氨酸激酶Lyn和磷脂酰肌醇3-激酶（PI3-激酶）激活后，诱导组胺分泌和白三烯释放。沃特曼宁在浓度低至 1.0 nM 时即可抑制小牛胸腺部分纯化的 PI3 激酶活性，以及 RBL-2H3 细胞抗 PI3 激酶 p85 免疫沉淀物中的 PI3 激酶活性，IC50 值为 3.0 nM，但不抑制 PI4 激酶活性。沃特曼宁对 PI3 激酶的抑制是不可逆的。沃特曼宁对 FcεRI 介导的组胺分泌和白三烯释放的抑制率均高达 80%，IC50 值分别为 2.0 nM 和 3.0 nM。沃特曼宁对完整细胞中 PI3 激酶活性的抑制率也高达 80%，IC50 值为 2.0 nM，与体外 PI3 激酶活性以及组胺分泌和白三烯释放的抑制率几乎相同。利用抗沃特曼宁抗体，我们证实沃特曼宁在体外和完整细胞中均能与110 kDa蛋白结合，但不能与PI3激酶85 kDa调节亚基结合。此外，沃特曼宁衍生物作为PI3激酶抑制剂和组胺分泌抑制剂的效力呈正相关。沃特曼宁对酪氨酸激酶Lyn的激活没有影响。这些结果表明，PI3激酶参与了FcεRI刺激后组胺分泌的信号转导通路，而沃特曼宁通过与该酶的催化亚基直接相互作用来阻断这些反应[1]。

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我们研究了沃特曼宁对白血病细胞的抑制作用及其可能的机制。将K562细胞用不同浓度（3.125-100 nmol/L）的沃特曼宁处理0-72小时。采用 MTT 法评价沃特曼宁对 K562 细胞生长的抑制作用。通过 Annexin-V FITC/PI 双染流式细胞术和透射电镜 (TEM) 检测细胞凋亡。采用蛋白质印迹法和逆转录-聚合酶链式反应 (RT-PCR) 检测 p-Akt、Tp-Akt、NF-κBp65 和 IKK-κB 的表达。结果表明，沃特曼宁在体外以时间和剂量依赖的方式显著抑制 K562 细胞的生长并诱导其凋亡。沃特曼宁 24 小时的 IC50 值为 25±0.14 nmol/L。此外，沃特曼宁以剂量依赖的方式诱导 K562 细胞凋亡。透射电镜（TEM）显示，沃特曼宁处理的K562细胞出现了典型的凋亡形态学改变，例如染色质浓缩、核固缩、核碎裂和凋亡小体。此外，在沃特曼宁处理下，几种重要的细胞内蛋白激酶，如p-Akt、NF-κBp65和IKK-κB，在蛋白水平和转录水平上均以剂量依赖的方式发生不同程度的降解，但总Akt的表达未发生变化。研究表明，沃特曼宁可能通过下调生存信号通路（PI3K/Akt 和 NF-κB 通道）抑制 K562 白血病细胞的增殖并诱导其凋亡[4]。

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包囊形成实验：将棘阿米巴滋养体（4 × 10^5 个细胞/孔）接种于含有 3 ml 包囊培养基的 6 孔板中，培养基中添加 1 μM 沃特曼宁（SL-2052；KY-12420）（CAS#: 19545-26-7），并在 25°C 下孵育 3 天。孵育后，用台盼蓝染色，并在显微镜下观察细胞，然后加入 0.5% 十二烷基硫酸钠溶液 10 分钟以溶解滋养体和未成熟的包囊。包囊形成率通过血细胞计数器计数包囊来计算。[2]
对人角膜上皮细胞的细胞病变效应：将人角膜上皮 (HCE) 细胞以 1 × 10^4 个细胞/孔的密度接种于 96 孔培养板中。24 小时后，将单层 HCE 细胞与 沃特曼宁 (SL-2052; KY-12420) (CAS#: 19545-26-7)（浓度未指定，但根据包囊形成试验推测可能为 1 μM）在 37°C、5% CO2 条件下孵育 10 分钟至 5 小时。 沃特曼宁（SL-2052；KY-12420）（CAS#: 19545-26-7）对HCE细胞无细胞病变效应。[2]
对棘阿米巴的细胞病变效应：将棘阿米巴滋养体以1 × 10^4个细胞/孔的密度接种于96孔培养板中。24小时后，将单层棘阿米巴与0.00125% PHMB和1 μM 沃特曼宁（SL-2052；KY-12420）（CAS#: 19545-26-7）在25°C下孵育2小时。与单独使用 PHMB 相比，该组合对棘阿米巴的细胞病变作用增强，显示出与单独使用 0.02% PHMB 治疗相似的杀伤活性。[2]

溶于 DMSO 中，浓度为 0.4 mg/mL，使用前用 0.9% NaCl 稀释；剂量分别为 0.175、0.35 和 0.7 mg/kg；静脉注射人胰腺腺癌细胞 PK1，注射方式包括皮下注射和原位注射到 SCID 小鼠体内。
抗肿瘤活性研究[5]
将 0.25 mg 的 21 天缓释 17-雌二醇缓释片皮下植入 SCID 小鼠体内，24 小时后接种 C3H 和 MCF-7 激素依赖性乳腺癌细胞系。在研究期间，每 21 天植入一次 17-雌二醇缓释片。将小鼠乳腺 C3H 肿瘤碎片皮下植入 20 g 雌性 C3H 小鼠的右侧乳腺脂肪垫，方法如前所述。将 MCF-7 细胞（10~7 个）皮下注射到小鼠后肢。在研究过程中，每周三次进行二维测量以评估肿瘤负荷。肿瘤体积的计算公式为：肿瘤体积（ml）/肿瘤长度（cm）/肿瘤宽度（w）² = 2。在仅报告最终肿块的研究中，肿瘤在研究结束后切除并称重。沃特曼宁（Wortmannin）以0.1 mg/ml的浓度溶于含10%乙醇的0.1% Tween 20溶液中，每日剂量为1或1.5 mg/kg，连续给药14天。

在测试浓度下，沃特曼宁（SL-2052；KY-12420）（CAS#: 19545-26-7）未对人角膜上皮（HCE）细胞产生细胞病变效应。[2]

[1]. Inhibition of histamine secretion by wortmannin through the blockade of phosphatidylinositol 3-kinase in RBL-2H3 cells. J Biol Chem. 1993 Dec 5;268(34):25846-56.

[2]. Autophagy inhibitors as a potential antiamoebic treatment for Acanthamoeba keratitis. Antimicrob Agents Chemother. 2015 Jul;59(7):4020-5.

[3]. Polo-like kinases inhibited by wortmannin. Labeling site and downstream effects. J Biol Chem. 2007 Jan 26;282(4):2505-11.

[4]. Wortmannin inhibits K562 leukemic cells by regulating PI3k/Akt channel in vitro. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 2009 Aug;29(4):451-6.

[5]. Wortmannin inhibits the growth of mammary tumors despite the existence of a novel wortmannin-insensitive phosphatidylinositol-3-kinase. Cancer Chemother Pharmacol. 1999;44(6):491-7.

[6]. Wortmannin, a widely used phosphoinositide 3-kinase inhibitor, also potently inhibits mammalianpolo-like kinase. Chem Biol. 2005 Jan;12(1):99-107.

沃特曼宁是一种有机杂五环化合物，属于δ-内酯、乙酸酯和环酮类化合物。它具有多种生物活性，包括作为EC 2.7.1.137（磷脂酰肌醇3-激酶）抑制剂、抗冠状病毒剂、抗衰老剂、自噬抑制剂、青霉菌代谢物、放射增敏剂和抗肿瘤剂。沃特曼宁是绳状青霉（Penicillium funiculosum）和沃特曼氏塔拉霉（Talaromyces wortmannii）的甾体代谢物。该药物是一种非特异性共价磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂。沃特曼宁已在沃特曼氏塔拉霉中发现，并已有相关数据。沃特曼宁（Wortmannin）是从沃特曼青霉（Penicillium wortmannii）中分离得到的一种强效真菌代谢产物，它能选择性抑制磷脂酰肌醇3-激酶，并影响信号转导通路。(NCI)
它是一种由绳状青霉（Penicillium funiculosum）产生的雄烯二烯代谢产物，能抑制磷脂酰肌醇3-激酶，并抑制人肿瘤细胞系中T淋巴细胞的同种异体抗原特异性活化。它广泛应用于细胞生物学研究，并具有广泛的治疗潜力。

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它与大鼠嗜碱性白血病2H3 (RBL-2H3) 细胞表面的高亲和力免疫球蛋白E受体 (FcεRI) 结合，在酪氨酸激酶Lyn和磷脂酰肌醇3-激酶 (PI3-kinase) 的激活下，诱导组胺分泌和白三烯释放。沃特曼宁在浓度低至 1.0 nM 时即可抑制小牛胸腺部分纯化的 PI3 激酶活性以及 RBL-2H3 细胞抗 PI3 激酶 p85 免疫沉淀物中的 PI3 激酶活性，IC50 值为 3.0 nM，但不抑制 PI4 激酶活性。沃特曼宁对 PI3 激酶的抑制是不可逆的。沃特曼宁对 FcεRI 介导的组胺分泌和白三烯释放的抑制率达 80%，IC50 值分别为 2.0 nM 和 3.0 nM。沃特曼宁对完整细胞中的PI3激酶活性也表现出80%的抑制率，IC50值为2.0 nM，与体外PI3激酶活性、组胺分泌和白三烯释放的IC50值几乎相同。使用抗沃特曼宁抗体，我们证实沃特曼宁在体外和完整细胞中均能与110 kDa蛋白结合，但不能与PI3激酶的85 kDa调节亚基结合。此外，沃特曼宁衍生物作为PI3激酶抑制剂和组胺分泌抑制剂的效力呈正相关。沃特曼宁对酪氨酸激酶Lyn的激活没有影响。这些结果表明，PI3激酶参与FcεRI刺激后组胺分泌的信号转导通路，而沃特曼宁通过与该酶的催化亚基直接相互作用来阻断这些反应。 [1]

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Polo样激酶在有丝分裂中发挥着至关重要的作用。我们此前报道过沃特曼宁能有效抑制Polo样激酶1 (Plk1)。在本研究中，我们发现沃特曼宁也能强烈抑制Polo样激酶3 (Plk3)。为了进一步阐明这种抑制作用，我们鉴定了四甲基罗丹明-沃特曼宁缀合物AX7503在Plk1和Plk3上的标记位点。我们发现AX7503在Plk1和Plk3上的标记发生在保守的ATP结合位点残基上。此外，我们发现沃特曼宁在活细胞中抑制Plk3活性的浓度与抑制沃特曼宁靶标（如磷脂酰肌醇3-激酶）的常用浓度相当。重要的是，我们发现沃特曼宁对Plk3的抑制导致DNA损伤诱导的p53丝氨酸20磷酸化水平降低，表明沃特曼宁作用于Plk3的下游靶点。总之，我们的研究结果表明，沃特曼宁可以影响Plk3在细胞周期进程和DNA损伤检查点中的多种功能。利用AX7503鉴定Plk1和Plk3的标记位点可能有助于设计更有效的靶向Polo样激酶的抗癌化合物，也有助于Plk结构域的结构研究。[3]

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目的：磷脂酰肌醇（PtdIns）3-激酶是许多细胞功能的重要介质。由于沃特曼宁（一种强效且不可逆的p110 PtdIns 3-激酶抑制剂）的存在，PtdIns 3-激酶的研究得到了促进。本研究旨在探讨沃特曼宁的细胞生长抑制活性和抗肿瘤活性与其对磷脂酰肌醇3-激酶（PtdIns 3-Kase）的抑制作用之间的关系。方法：检测细胞和肿瘤组织中的PtdIns 3-Kase活性，并研究沃特曼宁的作用。结果：沃特曼宁在体内抑制小鼠C3H和人MCF-7乳腺肿瘤的生长。然而，沃特曼宁抑制C3H肿瘤生长的能力与肿瘤PtdIns 3-Kase活性的抑制无关。在C3H和MCF-7细胞培养裂解液、实体瘤以及正常小鼠组织匀浆中均检测到了沃特曼宁不敏感的PtdIns 3-Kase活性。除了对沃特曼宁（Wottermanin）抑制剂具有耐药性外，MCF-7细胞裂解液中的总PtdIns 3-激酶活性也对其他五种已知的p110 PtdIns 3-激酶抑制剂具有耐药性。从MCF-7细胞裂解液中部分纯化沃特曼宁不敏感的PtdIns 3-激酶表明，其活性不依赖于PtdIns 3-激酶p85调节亚基。结论：本研究结果表明，尽管在小鼠和人乳腺组织中存在一种对沃特曼宁不敏感的新型PtdIns 3-激酶，但沃特曼宁仍然能够抑制这些肿瘤的生长，提示沃特曼宁的抗肿瘤活性可能由其他靶点介导。 [5]

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沃特曼宁 (SL-2052; KY-12420) (CAS#: 19545-26-7) 是一种 PI3K 抑制剂，可通过抑制 Atg 蛋白和 LC3 蛋白的募集来阻断自噬的形成。在本研究中，沃特曼宁 (SL-2052; KY-12420) (CAS#: 19545-26-7) 的浓度为 1 μM。低浓度 PHMB (0.00125%) 与 沃特曼宁 (SL-2052; KY-12420) (CAS#: 19545-26-7) 联用可增强抗棘阿米巴的效果，同时最大限度地降低对角膜细胞的细胞毒性。[2]

C23H24O8

428.43

428.147

C, 64.48; H, 5.65; O, 29.88

19545-26-7

312145

White to light yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

615.6±55.0 °C at 760 mmHg

234-240ºC

326.1±31.5 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.591

0.81

109.11

0

8

4

31

921

5

O(C(C([H])([H])[H])=O)[C@]1([H])C([H])([H])[C@]2(C([H])([H])[H])C(C([H])([H])C([H])([H])[C@@]2([H])C2C(C3=C4C(=C([H])O3)C(=O)O[C@]([H])(C([H])([H])OC([H])([H])[H])[C@]4(C([H])([H])[H])C=21)=O)=O

QDLHCMPXEPAAMD-QAIWCSMKSA-N

InChI=1S/C23H24O8/c1-10(24)30-13-7-22(2)12(5-6-14(22)25)16-18(13)23(3)15(9-28-4)31-21(27)11-8-29-20(17(11)23)19(16)26/h8,12-13,15H,5-7,9H2,1-4H3/t12-,13+,15+,22-,23-/m0/s1

(1S,6bR,9aS,11R,11bR)-1-(methoxymethyl)-9a,11b-dimethyl-3,6,9-trioxo-3,6,6b,7,8,9,9a,10,11,11b-decahydro-1H-furo[4,3,2-de]indeno[4,5-h]isochromen-11-yl acetate.

SL 2052; SL2052; SL-2052; Wortmannin; 19545-26-7; Wartmannin; KY 12420; Antibiotic SL-2052; SL-2052; MFCD00133927; NSC221019;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~85 mg/mL (198.4 mM)
Water: <1 mg/mL (slightly soluble or insoluble)
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (4.85 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 1% DMSO +30% polyethylene glycol+1% Tween 80 : 8mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。