| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
mTOR (IC50 = 0.19 nM); PI3Kα (IC50 = 1.179 μM); PI3Kδ (IC50 = 2.38 μM); hSMG1 (IC50 = 1.25 μM); mTORC1; mTORC2
WYE125132 (WYE132) is a potent, ATP-competitive inhibitor of mammalian target of rapamycin (mTOR), selectively targeting both mTOR complex 1 (mTORC1) and mTOR complex 2 (mTORC2). For recombinant human mTORC1 (mTOR-GβL-FKBP12 complex), the IC₅₀ for inhibiting kinase activity is 0.12 nM; for recombinant human mTORC2 (mTOR-Rictor-GβL complex), the IC₅₀ is 0.20 nM [1] - It shows high selectivity over PI3K family kinases: IC₅₀ values for PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ, and PI3Kδ are 80 nM, 120 nM, 150 nM, and 180 nM, respectively—~667–900-fold higher than its IC₅₀ for mTOR [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
WYE-125132 对一组 230 种蛋白激酶表现出高选择性，并对重组 mTOR 激酶具有有效的 ATP 竞争性抑制作用，IC50 为 0.19 nM。 [1] WYE-125132 的 IC50 范围为 2 nM (LNCap) 至 380 nM (HTC116)，在体外对一组肿瘤细胞系表现出显着的抗增殖活性。此外，WYE-125132 还能促进细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制蛋白质合成和细胞生长。 [1] WYE-125132 通过抑制 mTORC1，导致活跃增殖的 MG63、MDA361 和 HEK293 细胞中前 tRNALeu 的合成分别显着减少 72%、80% 和 53%。此外，还发现 WYE-125132 会导致 Maf1（Pol III 转录的负调节因子）去磷酸化并在细胞核中积累。 [2]
跨癌细胞系抗增殖活性（文献[1,2]）： - 前列腺癌PC-3和DU145细胞：WYE125132 (WYE132)的IC₅₀分别为18 nM和22 nM（MTT法，处理72小时）；50 nM浓度时，两种细胞的增殖抑制率均>85% [1] - 乳腺癌MCF-7（ER⁺）和MDA-MB-231（三阴性）细胞：IC₅₀分别为15 nM（MCF-7）和25 nM（MDA-MB-231）（CellTiter-Glo法，72小时处理）；30 nM WYE125132 (WYE132)使MCF-7细胞存活率降至对照组的20% [2] - 结直肠癌HCT116细胞：IC₅₀=14 nM（MTT法，72小时处理）；20 nM浓度时，14天克隆形成率较对照组降低70% [1] - mTOR下游信号抑制（文献[1,2]）： - 20 nM WYE125132 (WYE132)处理PC-3细胞24小时（Western blot）：磷酸化p70S6K（Thr389）较对照组降低90%，磷酸化4E-BP1（Thr37/46）降低85%，磷酸化Akt（Ser473）降低82%，总蛋白水平无变化 [1] - 15 nM WYE125132 (WYE132)处理MCF-7细胞12小时：mTORC1下游磷酸化S6（Ser235/236）降低88%，PI3K下游磷酸化Akt（Thr308）降低75%（源于PI3K通路反馈抑制） [2] - 凋亡诱导（文献[1,2]）： - 25 nM WYE125132 (WYE132)处理DU145细胞48小时（Annexin V-FITC/PI染色）：早期凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻）从对照组4%升至32%，晚期凋亡/坏死细胞（Annexin V⁺/PI⁺）从3%升至13%；Western blot显示切割型caspase-3上调3.0倍 [1] - 30 nM WYE125132 (WYE132)处理MDA-MB-231细胞48小时：凋亡率达28%（对照组6%）；另一种凋亡标志物切割型PARP较对照组上调2.5倍 [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
WYE-125132（5 mg/kg po）在 PI3K/mTOR 和 HER2 高活性 MDA361 肿瘤模型中产生显着的抗肿瘤活性，并导致剂量依赖性肿瘤生长延迟。此外，WYE-125132还在PTEN缺失神经胶质瘤U87MG、非小细胞肺癌H1975和A549模型中显示出有效的抗肿瘤功效。 [1]
前列腺癌异种移植模型疗效（文献[1]）： 6–8周龄雄性BALB/c裸鼠皮下接种PC-3细胞，肿瘤长至~100 mm³后，灌胃给予WYE125132 (WYE132)（10 mg/kg或20 mg/kg），每日1次，连续28天。结果：（1）10 mg/kg组：肿瘤生长抑制率（TGI）=65%（平均体积：380 mm³ vs 溶剂对照组1080 mm³）；（2）20 mg/kg组：TGI=80%（平均体积：216 mm³ vs 1080 mm³）；（3）20 mg/kg组肿瘤重量=0.25 g（对照组0.83 g），减少69%；（4）20 mg/kg组肿瘤组织中p-p70S6K（Thr389）降低85%，p-Akt（Ser473）降低80% [1] |
| 酶活实验 |
如下进行通过解离增强镧系元素荧光免疫测定(DELFIA)的mTOR酶测定、ATP基质测定和mTOR免疫复合物激酶测定。抗 FRAP/TOR (N-19) 免疫沉淀 LNCap 细胞裂解物中的内源 TOR。将 1 mL 裂解缓冲液添加到 1 mg 细胞裂解液、4 g 抗体和 Protein-G/A 琼脂糖中。
mTORC1激酶活性测定（文献[1]）： 1. 重组酶制备：通过抗mTOR单克隆抗体免疫沉淀从HEK293细胞中纯化人源mTORC1复合物（mTOR-GβL-FKBP12），用激酶缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.01% Tween-20）重悬至终浓度0.1 μg/μL；BCA法测蛋白浓度，10% SDS-PAGE验证纯度 [1] 2. 反应体系：总体积100 μL，含50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、2 mM ATP（非放射性）、1 μg重组p70S6K（底物）、10 μCi [γ-³²P]-ATP、0.1 μg mTORC1复合物及系列浓度WYE125132 (WYE132)（0.02–2 nM），设溶剂对照组（0.1% DMSO） [1] 3. 孵育与终止：30°C孵育35分钟促进ATP水解，加入20 μL 4×SDS-PAGE上样缓冲液（含β-巯基乙醇），95°C煮沸5分钟终止反应 [1] 4. 检测与IC₅₀计算：样品经10% SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，放射自显影显影；磷屏成像仪定量磷酸化p70S6K条带放射性，抑制率=[（对照组放射性-药物组放射性）/对照组放射性]×100%；GraphPad Prism软件拟合剂量-反应曲线，得IC₅₀=0.12 nM [1] - mTORC2激酶活性测定（文献[1]）： 1. 重组酶制备：通过抗Rictor单克隆抗体免疫沉淀从HEK293细胞中纯化人源mTORC2复合物（mTOR-Rictor-GβL），用与mTORC1相同的激酶缓冲液重悬（0.1 μg/μL） [1] 2. 反应体系：100 μL混合液含50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、2 mM ATP、1 μg重组Akt1（底物）、10 μCi [γ-³²P]-ATP、0.1 μg mTORC2复合物及系列浓度WYE125132 (WYE132)（0.05–3 nM） [1] 3. 孵育、终止与检测：步骤同mTORC1测定，得mTORC2抑制IC₅₀=0.20 nM [1] |
| 细胞实验 |
MDA-MB-361、MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT549、LNCap、A549、H1975、H157、H460、U87MG、A498、786-O、HCT116、MG63、Rat1、HEK293 和HeLa 获自美国典型培养物保藏中心。下面描述细胞生长测定和IC50计算。将细胞以每孔 1000-3000 个细胞的密度接种在 96 孔培养板中 24 小时，然后给予不同剂量的 WYE-125132 或 DMSO，以观察肿瘤细胞的生长情况。三天后，使用 MTS 测定方法评估细胞的活力，该方法使用测定试剂盒和试剂盒测定程序。与在同一培养板中生长但已接受 DMSO 的细胞相比，每种处理的影响被量化为对照生长的百分比。为了计算 IC50 值，绘制了抑制剂剂量反应曲线。
MTT细胞增殖实验（文献[1]）： 1. 细胞接种：PC-3、DU145、HCT116细胞以2×10³个/孔接种96孔板，37°C、5% CO₂培养过夜贴壁 [1] 2. 药物处理：WYE125132 (WYE132)用DMSO溶解后，用完全培养基（含10% FBS、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素）稀释至0.1 nM–100 nM；每孔加100 μL（每个浓度3复孔），设溶剂对照组（0.1% DMSO） [1] 3. 孵育与MTT反应：培养72小时后，每孔加20 μL MTT溶液（5 mg/mL，溶于PBS），37°C孵育4小时；吸弃上清，加150 μL DMSO溶解甲瓒结晶 [1] 4. 检测与计算：酶标仪测570 nm吸光度，细胞存活率=（药物组A₅₇₀/对照组A₅₇₀）×100%，拟合曲线得IC₅₀ [1] - mTOR信号Western blot检测（文献[2]）： 1. 细胞处理：MCF-7细胞以5×10⁵个/孔接种6孔板，用15 nM WYE125132 (WYE132)（或溶剂）处理12小时；反馈抑制分析实验中，细胞先血清饥饿24小时再给药 [2] 2. 蛋白提取：冰预冷PBS洗涤细胞2次，含1×蛋白酶抑制剂和1×磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液冰上裂解30分钟；4°C、12,000 × g离心15分钟，收集上清（总蛋白提取物） [2] 3. 分离与检测：每样品30 μg总蛋白与4×SDS-PAGE上样缓冲液混合煮沸5分钟，10% SDS-PAGE分离；蛋白转移至PVDF膜，5%脱脂牛奶/TBST室温封闭1小时；4°C孵育一抗（抗p-S6 Ser235/236、抗p-Akt Thr308、抗Akt、抗GAPDH）过夜，室温孵育HRP二抗1小时；ECL化学发光显影，ImageJ定量条带强度 [2] - 凋亡实验（Annexin V-FITC/PI染色，文献[1]）： 1. 细胞处理：DU145细胞以1×10⁶个/孔接种6孔板，25 nM WYE125132 (WYE132)处理48小时 [1] 2. 收集与染色：胰酶消化收集细胞，PBS洗涤2次；1×结合缓冲液重悬至1×10⁶个/mL；100 μL细胞悬液加5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI，室温避光孵育15分钟 [1] 3. 流式分析：1小时内流式细胞仪检测，早期凋亡定义为Annexin V⁺/PI⁻，晚期凋亡/坏死定义为Annexin V⁺/PI⁺ [1] |
| 动物实验 |
小鼠：在 mTOR 生物标志物研究中，将不同肿瘤（400 mm³）皮下移植到雌性裸鼠体内，然后通过单次静脉注射或口服给药 WYE-125132。WYE-125132 是一种由 5% 乙醇、2% Tween 80 和 5% 聚乙二醇-400 配制而成的药物。制备肿瘤裂解液后进行免疫印迹分析。将携带 U87MG、MDA361、H1975、A549、A498 或 786-O 肿瘤的裸鼠进行分期，并随机分组（n=10）用于疗效研究。小鼠每天口服载体或 WYE-125132（用药 5 天，停药 2 天），最多进行 4 个周期。每周静脉注射一次 Temsirolimus/CCI-779，制剂为 WYE-132。贝伐珠单抗溶于PBS缓冲液中，并按照临床方案进行静脉注射（200 g/只小鼠；每周一次）。监测并分析肿瘤生长情况。
PC-3前列腺癌异种移植模型（文献[1]）： 1. 模型建立：雄性BALB/c裸鼠（6-8周龄，SPF级）饲养于无特定病原体（SPF）条件下（22±2℃，12小时光照/黑暗循环，自由摄食饮水）。收集对数生长期的PC-3细胞，用PBS缓冲液洗涤，并重悬于PBS缓冲液与Matrigel基质胶（体积比1:1）的混合液中，细胞浓度为2.5×10⁷个/mL。每只小鼠右侧腹部皮下注射0.2 mL细胞悬液（5×10⁶个细胞）。每3天监测一次肿瘤，肿瘤体积计算公式为（长×宽²）/ 2。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为3组（每组n=6）[1] 2. 药物配制和给药：将WYE125132溶解于DMSO、聚乙二醇400 (PEG400)和生理盐水（体积比1:4:5）的混合溶液中，配制成两种浓度：1 mg/mL（对应10 mg/kg剂量，10 mL/kg体积）和2 mg/mL（对应20 mg/kg剂量，10 mL/kg体积）。溶剂对照组给予相同体积的DMSO/PEG400/生理盐水混合溶液。每日灌胃给药一次，持续28天[1] 3. 数据收集和样本处理：每周测量两次小鼠体重和肿瘤体积。治疗结束后，采用颈椎脱臼法处死小鼠。切除肿瘤，称重后立即置于液氮中速冻，用于进行p-p70S6K (Thr389) 和 p-Akt (Ser473) 的蛋白质印迹分析。同时收集肝脏和肾脏组织进行组织学检查（HE染色）[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
小鼠口服吸收和血浆药代动力学（文献[1]）：雄性BALB/c小鼠单次口服WYE125132（20 mg/kg）。分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时采集血浆样本。采用LC-MS/MS法测定药物浓度。结果：血浆峰浓度（Cmax）= 58 ng/mL；达峰时间（Tmax）= 1.5小时；末端半衰期（t₁/₂β）= 5.2小时；血浆浓度-时间曲线下面积（AUC₀-24h）= 560 ng·h/mL。口服生物利用度 (F) = 38% [1]
- 血浆蛋白结合率（文献[1]）：采用人、小鼠和大鼠血浆进行平衡透析实验。WYE125132 (WYE132) 显示出较高的血浆蛋白结合率：人血浆中为 96%，小鼠血浆中为 95%，大鼠血浆中为 94%。通过亲和层析鉴定出主要结合蛋白为白蛋白 [1] - 代谢稳定性（文献[1]）：在人肝微粒体中，WYE125132 (WYE132) 表现出良好的代谢稳定性，半衰期 (t₁/₂) 为 160 分钟；2 小时内代谢的药物不足 20%。主要代谢物为单羟基化衍生物，占总代谢物的 23% [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
毒性/毒代动力学 - 对正常细胞的体外毒性（文献[1]）：用WYE125132 (WYE132) (0.1–200 nM)处理人真皮成纤维细胞 (HDF) 72 小时（MTT 法）。CC₅₀ 值为 220 nM，比 PC-3 细胞的 IC₅₀ (18 nM) 高约 12 倍。在浓度≤50 nM时，HDF细胞的存活率与对照组相比仍保持在90%以上[1]
- 体内一般毒性（文献[1]）：在PC-3异种移植研究中，小鼠（接受WYE125132 (WYE132)治疗，剂量为10–20 mg/kg/天，持续28天）未出现明显的体重减轻（与基线相比<5%）。治疗结束时的血清生化分析显示，两个治疗组的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、血尿素氮（BUN）和血清肌酐（Scr）水平均在正常范围内。肝脏和肾脏组织的HE染色显示无病理变化（例如炎症、坏死）[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1-[4-[1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)-4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-吡唑并[3,4-d]嘧啶基]苯基]-3-甲基脲属于脲类化合物。
作用机制（文献[1,2]）：WYE125132 (WYE132)是一种mTORC1/mTORC2双重ATP竞争性抑制剂。它与mTOR的ATP结合口袋结合，阻断ATP水解，抑制所有mTOR介导的信号通路，包括mTORC1依赖的p70S6K/4E-BP1磷酸化（抑制蛋白质翻译）和mTORC2依赖的Akt磷酸化（阻断细胞存活通路）。与仅抑制 mTORC1 的抑制剂（例如雷帕霉素）相比，这种双重抑制作用在癌细胞中产生更强的抗增殖和促凋亡作用[1,2] - 选择性优势（文献[1]）：与非选择性 PI3K/mTOR 抑制剂相比，WYE125132 对 mTOR 的选择性远高于 PI3K 家族激酶（≥667 倍），从而降低了与 PI3K 抑制相关的潜在脱靶毒性（例如高血糖、免疫抑制）[1] |
| 分子式 |
C27H33N7O4
|
|---|---|
| 分子量 |
519.595425367355
|
| 精确质量 |
519.259
|
| 元素分析 |
C, 62.41; H, 6.40; N, 18.87; O, 12.32
|
| CAS号 |
1144068-46-1
|
| 相关CAS号 |
1144068-46-1
|
| PubChem CID |
25260757
|
| 外观&性状 |
White solid powder
|
| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
650.2±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
347.0±31.5 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.9 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.764
|
| LogP |
1.27
|
| tPSA |
119.15
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
38
|
| 分子复杂度/Complexity |
829
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C(NC1=CC=C(C2=NC(N3CC4CCC(C3)O4)=C5C(N(N=C5)C6CCC7(CC6)OCCO7)=N2)C=C1)NC
|
| InChi Key |
QLHHRYZMBGPBJG-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C27H33N7O4/c1-28-26(35)30-18-4-2-17(3-5-18)23-31-24(33-15-20-6-7-21(16-33)38-20)22-14-29-34(25(22)32-23)19-8-10-27(11-9-19)36-12-13-37-27/h2-5,14,19-21H,6-13,15-16H2,1H3,(H2,28,30,35)
|
| 化学名 |
1-[4-[1-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yl)-4-(8-oxa-3-azabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-6-yl]phenyl]-3-methylurea
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| 别名 |
WYE125132; WYE 125132; WYE-125132; WYE 132; WYE-132; WYE132
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~104 mg/mL (~200.2 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: <1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.81 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30mg/mL 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9246 mL | 9.6228 mL | 19.2456 mL | |
| 5 mM | 0.3849 mL | 1.9246 mL | 3.8491 mL | |
| 10 mM | 0.1925 mL | 0.9623 mL | 1.9246 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
WYE-132 is a potent and selective inhibitor of mTORC1 and mTORC2. Cancer Res. 2010, 70(2), 621-631. |
WYE-132 inhibits mTOR signaling and tumor growth in PI3K/AKT/mTOR-hyperactivated tumor models in vivo. |
WYE-132 antitumor efficacy in lung and renal tumor models. |
ICSN3250 hydrochloride
Sirolimus isomer C
mTORC1-IN-3
MT-44
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