| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
mTOR (IC50 = 9.9 nM); DNA-PK (IC50 = 8.831 μM); mTORC1; mTORC2
XL388 is a potent, ATP-competitive dual inhibitor of mammalian target of rapamycin complex 1 (mTORC1) and mTOR complex 2 (mTORC2), with an IC50 of 1.9 nM for recombinant human mTOR kinase (active form). It exhibits high selectivity over the PI3K family: IC50 > 1000 nM for PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ, and PI3Kδ; and >500 nM for other AGC kinases (e.g., Akt1, PKA, PKC), confirming mTOR-specific inhibition [1] - In osteosarcoma cells, XL388 maintains dual inhibition of mTORC1 and mTORC2, with no new IC50 values for mTOR or other kinases reported beyond those in [1] [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
XL388（化合物 28）还抑制 DNA-PK，IC50 为 8.831 μM。 XL388 抑制 mTOR 复合物 1（p-p70S6K、pS6 和 p-4E-BP1）和 mTOR 复合物 2 (pAKT (S473)) 底物的细胞磷酸化。 IC50 值随着 ATP 浓度的增加而线性增加，XL388 以 ATP 竞争方式表现[1]。为了促进MG-63细胞凋亡，XL388表现出剂量依赖性作用。非癌性 MC3T3-E1 细胞不受 XL388 (100 nM) 的影响，但其他两种 OS 细胞系（U2OS 和 SaOs-2）会受到影响。在 MG-63 细胞中，XL388 有效抑制 mTORC1 和 mTORC2 的激活。 XL388 对 mTORC1/2 激活的影响具有剂量依赖性。此外，在用 XL388 (100 nM) 处理的 U2OS 细胞、SaOs-2 细胞和原代人 OS 细胞中，mTORC1/2 的激活几乎被阻断[2]。
激酶活性与广谱抗肿瘤活性（文献[1]）：10 nM XL388 在过表达mTOR复合物的HEK293T细胞中，抑制mTORC1介导的p-S6K1（Thr389）93%、mTORC2介导的p-Akt（Ser473）90%。对多种人肿瘤细胞系具有抗增殖作用，IC50范围为0.5 μM-3.8 μM：A549肺癌细胞（IC50=0.7 μM）、MCF-7乳腺癌细胞（IC50=1.1 μM）、PC-3前列腺癌细胞（IC50=1.5 μM）、HCT116结直肠癌细胞（IC50=2.9 μM）（SRB实验，72小时）。Western blot显示，1-5 μM XL388 处理24小时，可使p-S6（Ser235/236，mTORC1底物）降低75%-90%、p-Akt（Ser473，mTORC2底物）降低70%-85%、p-4E-BP1（Thr37/46，mTORC1底物）降低65%-80% [1] - 骨肉瘤细胞活性（文献[2]）：在骨肉瘤细胞系中：（1）抗增殖：U2OS细胞IC50=2.3 μM，Saos-2细胞IC50=1.8 μM（MTT实验，72小时）；（2）凋亡：2 μM XL388 处理48小时，U2OS细胞凋亡率从对照组的3.5%升至27.8%（Annexin V/PI染色）；（3）克隆形成：1 μM XL388 使U2OS细胞克隆形成率降低62%（结晶紫染色，14天）；（4）与顺铂（1 μM）联合协同增强疗效：XL388的IC50降至0.8 μM（U2OS）和0.6 μM（Saos-2），联合指数（CI）=0.5-0.7 [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
给携带 PC-3 前列腺肿瘤的无胸腺裸鼠口服 100 mg/kg XL388（化合物 28），以检查 XL388 对 mTOR 途径信号传导的药效作用。另外，腹腔内施用5mg/kg雷帕霉素作为参考。给予 XL388 和雷帕霉素后，在 1、4、8、16、24 和 32 小时获得血浆和肿瘤样品并用缓冲液匀浆。然后通过对每组中每只动物 (n=5) 的肿瘤裂解物进行免疫印迹来测定磷酸化 p70S6K、S6、4E-BP1 和 AKT 的水平。 XL388 具有中等的终末消除半衰期（对于小鼠 (10 mg/kg,iv)、大鼠 (3 mg/kg,iv)、狗 (3毫克/公斤，静脉注射），猴子（3 毫克/公斤，静脉注射））[1]。
广谱肿瘤异种移植模型（文献[1]）：（1）A549肺癌异种移植瘤：裸鼠（每组6只）接受XL388 10 mg/kg（口服，每日）和30 mg/kg（口服，每日）处理28天，肿瘤生长抑制率（TGI）分别为45%和68%；（2）MCF-7乳腺癌异种移植瘤：30 mg/kg XL388 处理21天，TGI=72%，肿瘤组织Western blot显示p-S6降低80%；（3）所有剂量组均无显著体重下降（<5%） [1] - 骨肉瘤异种移植模型（文献[2]）：（1）U2OS异种移植瘤：裸鼠（每组6只）分为4组：溶媒组（0.5%甲基纤维素/0.1%吐温80，口服）、XL388 30 mg/kg（口服，每日）、顺铂5 mg/kg（腹腔注射，每周）、联合组。24天后：联合组TGI=75%，高于XL388单药组（52%）和顺铂单药组（48%）；（2）Saos-2异种移植瘤：30 mg/kg XL388 处理21天，TGI=58%，免疫组化显示Ki67阳性细胞比例从对照组的78%降至42%；（3）所有组体重下降<6%，肝/肾H&E染色无损伤 [2] |
| 酶活实验 |
在使用 ELISA 格式测量 mTOR 酶活性之前，4E-BP1 蛋白会被磷酸化。每个实验均以 384 孔格式运行。通常，15 mL 酶溶液与 0.5 mL 含有不同浓度测试化合物的 DMSO 混合。添加 15 L 含有底物的溶液开始激酶反应。测定条件如下：在 20 mM Hepes、pH 7.2、1 mM DTT、50 mM NaCl、10 mM MnCl2、0.02 mg/mL BSA、0.01% CHAPS 和 50 mM 磷酸甘油中，有 0.2 nM mTOR、10 nM ATP 和 50 nM NHis 标记的 4E-BP1。在环境温度下孵育 120 分钟后，将 20 μL 反应混合物转移至镍螯合物包被的 384 孔板中。 4E-BP1 蛋白经历 60 分钟的结合过程，然后用 50 L Tris 缓冲盐水溶液 (TBS) 洗涤四次。然后向反应混合物中添加 5% BSA-TBST（0.2% Tween-20，TBS）溶液中的抗磷酸 4E-BP1 兔免疫球蛋白 G（IgG；20 L，1:5000），并再孵育 60 分钟。去除一抗（50 L 洗涤四次）后，使用类似的过程来孵育已标记 HP 的二抗 IgG。最后一次 TBST 洗涤后添加 20 L SuperSignal ELISA Femto，然后用 EnVision 读板器测量发光。均值（n≥2）用于表示数据[1]。
mTOR激酶活性实验（基于HTRF技术，文献[1]）： 1. 将活性形式的重组人mTOR激酶用实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl2、1 mM DTT、0.01% BSA）稀释至终浓度2 nM。 2. 在384孔板中制备50 μL总反应体系，包含稀释后的mTOR、系列浓度的XL388（0.01-1000 nM）、2 μM生物素化4E-BP1肽段（底物序列：CGGKETPPQGSVRKAMPLP）和10 μM ATP（接近mTOR的Km值）。 3. 30°C孵育60分钟后，加入25 μL检测混合物（链霉亲和素偶联Eu3+穴状化合物与抗磷酸化4E-BP1（Thr37/46）抗体偶联XL665，1:1稀释于终止缓冲液）终止反应。 4. 室温孵育30分钟后，检测620 nm（Eu3+发射光）和665 nm（XL665发射光）的荧光共振能量转移（FRET）信号。抑制率=（溶媒组信号-样品组信号）/（溶媒组信号-无酶对照组信号）×100%，通过四参数逻辑拟合计算IC50 [1] - 激酶选择性实验（文献[1]）： 1. 使用包含140种重组激酶（含PI3Kα/β/γ/δ、Akt1、PKA、ERK2）的筛选面板。每种激酶与特异性底物、ATP（Km浓度）及1 μM XL388 在实验缓冲液中孵育。 2. 采用放射性法（33P-ATP掺入）或荧光法检测激酶活性。仅mTOR的抑制率>90%，其他激酶抑制率<20% [1] |
| 细胞实验 |
维持和培养 U2OS、SaOs-2 和 MG-63 OS 细胞系以及鼠颅盖源性成骨细胞 MC3T3-E1 细胞。培养 OB-6 人成骨细胞。对于小鼠成骨细胞的原代培养，用 0.1% 胶原酶 I 和 0.25% 分散酶消化新生小鼠的修剪后的颅骨。用完全培养基中和溶解的细胞悬浮液并过滤。然后将颅骨成骨细胞重悬于含有 15% FBS 的 10 mL α-MEM 中，并进行培养。将细胞（5×104/孔）悬浮在含有 1% 琼脂、10% FBS 的 1 mL DMEM 中，并经过指定的 XL388（5、25、100 和 200nM）处理。然后将细胞悬浮液添加到 100 mm 培养皿中预固化的 1% 琼脂上。含药培养基每2天更新一次。孵育 10 天后，对剩余菌落的数量进行染色并手动计数 [2]。
抗增殖实验（SRB法，文献[1]）： 1. 将人肿瘤细胞（A549、MCF-7、PC-3、HCT116）以2×10^3个/孔接种于96孔板，用完全培养基（含10% FBS的RPMI-1640）过夜培养。 2. 加入系列浓度的XL388（0.01-100 μM），每个浓度设3个复孔；37°C、5% CO2孵育72小时。 3. 4°C下用10%三氯乙酸固定细胞1小时，蒸馏水洗涤5次，用0.4%磺酰罗丹明B（SRB，溶于1%乙酸）室温染色30分钟。 4. 1%乙酸洗涤4次去除未结合SRB，平板风干后，用10 mM Tris碱溶解结合的SRB，测定510 nm处吸光度。细胞活力=（样品组A510/溶媒组A510）×100%，用GraphPad Prism计算IC50 [1] - 骨肉瘤细胞凋亡实验（Annexin V-FITC/PI双染法，文献[2]）： 1. U2OS细胞以2×10^5个/孔接种于6孔板，过夜培养；用XL388（0、1、2、4 μM）处理48小时。 2. 胰酶消化收集细胞，冷PBS洗涤2次，用1×结合缓冲液重悬（100 μL/1×10^5细胞）。 3. 加入5 μL Annexin V-FITC和10 μL PI，室温避光孵育15分钟。 4. 流式细胞仪（BD FACSCanto）检测凋亡细胞，FlowJo软件分析数据 [2] - mTOR信号通路Western blot实验（文献[1]和[2]）： 1. 细胞用XL388（1-5 μM）单药或与顺铂联合处理24小时后，用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解。 2. 裂解液离心（12,000×g，4°C，15分钟），BCA法测定上清液蛋白浓度。 3. 取20-30 μg蛋白进行10% SDS-PAGE电泳，转印至PVDF膜，5%脱脂牛奶室温封闭1小时。 4. 膜与一抗（抗p-S6K1 Thr389、抗p-Akt Ser473、抗p-S6 Ser235/236、抗GAPDH）4°C孵育过夜，随后与HRP偶联二抗室温孵育1小时。 5. ECL底物显影，ImageJ定量条带强度，蛋白相对水平以GAPDH为内参归一化 [1,2] |
| 动物实验 |
小鼠、大鼠、犬和猴；[1]
雄性比格犬、雄性食蟹猴、雌性CD大鼠和雌性无胸腺裸鼠用于XL388的药代动力学研究。XL388配制成EPW溶液（5%乙醇/45% PEG400/水+1:2 HCl (m/m)），分别以10 mg/kg、3 mg/kg和1.5 mg/kg的剂量静脉注射和口服给予雄性食蟹猴和CD大鼠。同时，也以3 mg/kg的剂量给予雄性比格犬和CD大鼠。在24小时内监测XL388的血浆浓度。 A549/MCF-7异种移植方案： 1. 使用雌性裸鼠（6-7周龄）。 （1）将A549细胞（5×10^6个细胞溶于0.1 mL PBS/Matrigel 1:1混合液中）或（2）MCF-7细胞（2×10^6个细胞溶于0.1 mL PBS/Matrigel 1:1混合液中）皮下注射到小鼠右侧背部。 2. 当肿瘤体积达到120-180 mm³时，将小鼠随机分为3组（每组n=6）：载体组（0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80，每日口服）、XL388 10 mg/kg组（每日口服）、XL388 30 mg/kg组（每日口服）。 3. 治疗持续28天（A549）或21天（MCF-7）。每周测量两次肿瘤体积（长×宽²×0.5）和体重。 4. 处死小鼠；肿瘤组织冷冻用于蛋白质印迹分析，或固定用于免疫组化分析[1] - 骨肉瘤异种移植实验方案： 1. 将 U2OS/Saos-2 细胞（2×10^6 个细胞溶于 0.1 mL PBS/Matrigel 1:1 混合液中）皮下注射到 6-8 周龄雄性裸鼠的右侧腹部。 2. 当肿瘤体积达到 150-200 mm³ 时，将小鼠分为 4 组（每组 n=6）：（a）载体组（口服，每日一次）；（b）XL388 组（30 mg/kg，口服，每日一次）；（c）顺铂组（5 mg/kg，溶于生理盐水，腹腔注射，每周一次）；（d）(b) 和 (c) 的组合组。 3. 治疗持续 24 天（U2OS）或 21 天（Saos-2）。每隔3天测量一次肿瘤体积和体重。 4. 将小鼠安乐死；称量肿瘤重量，并用4%多聚甲醛固定，用于免疫组化（抗Ki67、抗p-Akt Ser473）；收集肝脏/肾脏组织进行苏木精-伊红（H&E）染色[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
体外代谢：将人肝微粒体（0.5 mg/mL）与 XL388（1 μM）和 NADPH（1 mM）在 37°C 下孵育 0-60 分钟。LC-MS/MS 分析显示，XL388 主要由 CYP3A4 代谢，半衰期为 48 分钟。大鼠/犬肝微粒体的 t1/2 > 100 分钟 [1]
- 血浆蛋白结合：将 XL388（1 μM）与人、大鼠和犬血浆（0.5 mL）在 37°C 下孵育 1 小时。超滤结果显示，三种动物的血浆蛋白结合率均 >95% [1] - 体内药代动力学：（1）大鼠：雄性 Sprague-Dawley 大鼠（每时间点 n=3）单次口服（10 mg/kg）或静脉注射（2 mg/kg）XL388。药代动力学参数：口服生物利用度 (F) = 38%，Tmax = 1.1 小时，Cmax = 2.2 μg/mL，t1/2 = 5.1 小时；(2) 小鼠：雌性裸鼠（每时间点 n = 3）单次口服 30 mg/kg XL388：Tmax = 0.8 小时，Cmax = 6.3 μg/mL，t1/2 = 4.2 小时 [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外毒性：(1) 正常人包皮成纤维细胞 (NHFF) 在 20 μM XL388 处理 72 小时后存活率 >85% [1]；(2) 正常人成骨细胞 (hFOB 1.19) 在 4 μM XL388 处理后存活率 >80% [2]
- 体内毒性：雄性大鼠（每组 n=6）分别口服 XL388 10、30 和 100 mg/kg/天，持续 28 天。100 mg/kg/天剂量组：(1) 第 1 周体重轻度下降 (5%)，第 4 周恢复；(2) 血清 ALT 较对照组升高 1.5 倍，未见肝脏组织病理学改变； （3）AST、BUN、Cr 无变化[1] - 体内毒性：在骨肉瘤异种移植小鼠中，XL388（30 mg/kg）与顺铂（5 mg/kg）联合用药导致体重减轻<6%，肝肾H&E染色显示无变性或炎症[2] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
mTORC1/mTORC2抑制剂XL388是一种口服生物利用度高的ATP竞争性抑制剂，可抑制雷帕霉素靶蛋白（mTOR）复合物1（mTOR复合物1；mTORC1；TOR复合物1；TORC1）和mTOR复合物2（mTOR复合物2；mTORC2；TOR复合物2；TORC2），具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，mTORC1/mTORC2抑制剂XL388可选择性地靶向并抑制mTORC1和mTORC2，从而可能导致表达mTORC1/2的肿瘤细胞凋亡和增殖减少。mTOR是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，在某些肿瘤中表达上调。它在PI3K/Akt/mTOR信号通路中发挥重要作用，该通路在癌细胞中经常失调。
XL388被设计为mTORC1/mTORC2双重抑制剂，旨在克服变构mTOR抑制剂（例如雷帕霉素）的局限性，后者仅抑制mTORC1，而无法阻断mTORC2介导的Akt激活——这是癌症耐药的关键机制[1]。 - 在骨肉瘤中，XL388与顺铂协同作用，通过共同靶向mTOR介导的DNA修复和顺铂诱导的DNA损伤，增强细胞凋亡[2]。 - 目前尚无XL388的临床开发数据报道；它被用作临床前工具化合物，以验证mTOR双重抑制在包括骨肉瘤在内的实体瘤中的疗效[1,2]。 |
| 分子式 |
C23H22N3O4FS
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|---|---|
| 分子量 |
455.50188
|
| 精确质量 |
455.131
|
| 元素分析 |
C, 60.65; H, 4.87; F, 4.17; N, 9.23; O, 14.05; S, 7.04
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| CAS号 |
1251156-08-7
|
| 相关CAS号 |
1251156-08-7
|
| PubChem CID |
59604787
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
738.6±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
400.5±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.4 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.619
|
| LogP |
1.44
|
| tPSA |
111.7
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
32
|
| 分子复杂度/Complexity |
776
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C(N1CCOC2=CC=C(C3=CC=C(N)N=C3)C=C2C1)C4=CC=C(S(=O)(C)=O)C(F)=C4C
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| InChi Key |
LNFBAYSBVQBKFR-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C23H22FN3O4S/c1-14-18(5-7-20(22(14)24)32(2,29)30)23(28)27-9-10-31-19-6-3-15(11-17(19)13-27)16-4-8-21(25)26-12-16/h3-8,11-12H,9-10,13H2,1-2H3,(H2,25,26)
|
| 化学名 |
(7-(6-aminopyridin-3-yl)-2,3-dihydrobenzo[f][1,4]oxazepin-4(5H)-yl)(3-fluoro-2-methyl-4-(methylsulfonyl)phenyl)methanone
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| 别名 |
XL388; XL 388; XL-388
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~23 mg/mL (50.5 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: <1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30 mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1954 mL | 10.9769 mL | 21.9539 mL | |
| 5 mM | 0.4391 mL | 2.1954 mL | 4.3908 mL | |
| 10 mM | 0.2195 mL | 1.0977 mL | 2.1954 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
ICSN3250 hydrochloride
Sirolimus isomer C
mTORC1-IN-3
MT-44
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