| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
YAP-TEAD interaction (YAP and TEAD1 transcription factor).
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 GST Pull-down 测试中，内源性 YAP 与 GST-TEAD(1209-426) 的结合被 YAP-TEAD-IN-1（肽 17）（2 μM）抑制。Kd 为 40 nM[1]。
YAP-TEAD-IN-1 TFA 是一种强效的竞争性肽抑制剂，可抑制 YAP-TEAD 相互作用，其 IC50 值为 25 nM。它是一种 17 肽（序列：Ac-Val-Pro-{Phe(3-Cl)}-{Hcy}-Leu-Arg-Lys-{Nle}-Pro-Ala-Ser-Phe-Cys-Lys-Pro-Pro-Glu-NH2），在 Hcy4 和 Cys13 残基之间形成二硫键。与天然 YAP 蛋白（YAP 50-171，Kd = 40 nM）相比，该肽对 TEAD1 蛋白具有更高的结合亲和力（Kd = 15 nM）。在GST下拉实验中，2 uM的YAP-TEAD-IN-1能有效抑制内源性YAP与GST-TEAD1（氨基酸209-426）的结合。该实验测得His-YAP（氨基酸209-426）的解离常数（Kd）为40 nM。通过阻断YAP-TEAD相互作用，该肽段抑制了参与细胞增殖、存活和迁移的基因转录，这些基因通常在YAP信号过度激活的癌细胞中高表达。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
YAP-TEAD-IN-1 TFA 的体内抗肿瘤疗效已在依赖 YAP-TEAD 活性的癌症（例如间皮瘤以及某些乳腺癌和肺癌）的小鼠异种移植模型中得到评估。在这些研究中，全身给药（通过静脉或腹腔注射）可抑制肿瘤生长，且通常呈剂量依赖性。该疗法与 YAP/TEAD 靶基因（例如 CTGF、CYR61、AXL）的下调以及 Ki-67 染色所反映的肿瘤细胞增殖减少相关。然而，YAP-TEAD-IN-1 的肽特性给体内应用带来了挑战，包括易受蛋白水解酶降解和快速肾清除，这可能会限制其生物利用度。因此，尽管它可作为验证 YAP/TEAD 作为治疗靶点的有效工具，但其临床应用仍受到限制。尽管如此，在动物模型中的应用已为靶向这种蛋白质-蛋白质相互作用提供了概念验证。
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| 酶活实验 |
利用多种体外生化技术，包括表面等离子共振 (SPR) 和等温滴定量热法 (ITC)，可以测定 YAP-TEAD-IN-1 TFA 与 TEAD 蛋白的结合亲和力。对于 SPR 分析，首先使用标准胺偶联化学方法将重组 TEAD1 蛋白固定在传感器芯片（例如 CM5 芯片）上。然后，将溶解于运行缓冲液（例如 HBS-EP+：10 mM HEPES，pH 7.4，150 mM NaCl，3 mM EDTA，0.05% P20）中的 YAP-TEAD-IN-1 TFA 以不同浓度（0.1 nM 至 1 uM）注入芯片。实时测量结合响应。每次注入后，使用可解离肽的缓冲液（例如 10 mM 甘氨酸-HCl，pH 2.0）再生芯片表面。结合速率常数 (ka) 和解离速率常数 (kd) 是通过将传感器图拟合到 1:1 Langmuir 结合模型来确定的。平衡解离常数 (Kd) 则通过 Kd = kd/ka 计算得出。为了评估竞争性抑制，通常采用 GST pull-down 实验。在该实验中，将 GST-TEAD1 融合蛋白（例如，TEAD1 氨基酸 209-426）固定在谷胱甘肽琼脂糖珠上。然后将这些珠子与重组 His 标签 YAP 蛋白（例如，YAP 氨基酸 50-171）在结合缓冲液（例如，50 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM NaCl，1 mM DTT，0.1% Nonidet P-40）中孵育，孵育过程中加入或不加入不同浓度的 YAP-TEAD-IN-1 TFA。经过充分洗涤后，用SDS上样缓冲液煮沸洗脱结合的蛋白质。然后用抗His标签抗体进行Western blot分析，以检测YAP。定量TEAD结合的YAP量，并计算肽抑制的IC50值。
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| 细胞实验 |
YAP-TEAD-IN-1 TFA 的细胞活性通常在具有高 YAP/TEAD 转录活性的癌细胞系（例如，NCI-H226 间皮瘤细胞或 MCF-7 乳腺癌细胞）中进行评估。为了评估细胞渗透性，将该肽溶解于合适的溶剂（例如，PBS 或含最高 0.1% DMSO 的细胞培养基）中，并以 0.01 μM 至 100 μM 的浓度加入细胞中，孵育 24-72 小时。然后，通过定量实时 PCR (qRT-PCR) 在 RNA 水平或通过蛋白质印迹法在蛋白水平检测 YAP/TEAD 靶基因（例如，CTGF、CYR61、AXL）的表达。对于 qRT-PCR，使用 TRIzol 试剂或商业 RNA 提取试剂盒从处理过的细胞中提取总 RNA。使用逆转录酶试剂盒将 RNA 逆转录为 cDNA。然后使用 SYBR Green Master Mix 和 CTGF、CYR61 以及管家基因（如 GAPDH）的基因特异性引物扩增 cDNA。基因表达倍数变化采用 ΔΔCt 法计算。对于蛋白质印迹实验，细胞在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的 RIPA 缓冲液中裂解。使用 BCA 法测定蛋白质浓度。等量的蛋白质经 SDS-PAGE 电泳分离后，转移至 PVDF 膜上，并用针对 CTGF、CYR61 和 β-肌动蛋白（作为上样对照）的一抗进行孵育。随后，将膜与 HRP 标记的二抗孵育，并通过化学发光法检测信号。此外，还可以使用 MTT 或 CellTiter-Glo 法评估细胞增殖和活力。
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| 动物实验 |
在体内疗效研究中，YAP-TEAD-IN-1 TFA 通常通过静脉注射 (iv) 或腹腔注射 (ip) 的方式给药于携带皮下移植的 YAP 依赖性癌细胞（例如 NCI-H226 或 MCF-7）异种移植瘤的免疫缺陷小鼠。典型的实验方案是将 5 × 10⁶ 个肿瘤细胞悬浮于 100 μL PBS 和 Matrigel 的 1:1 混合物中，皮下注射到 6-8 周龄的雌性无胸腺裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为治疗组（每组 n = 8-10）。YAP-TEAD-IN-1 TFA 配制于合适的载体中（例如，无菌 PBS 或 10% DMSO/30% PEG300/60% 生理盐水），浓度为 1-5 mg/mL。该肽类药物通过尾静脉注射或腹腔注射给药，剂量范围为5-30 mg/kg，通常每日一次或隔日一次，持续2-4周。对照组接受等体积的溶剂。每2-3天用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² × 0.5）。同时监测体重，作为毒性的一般指标。研究结束时，处死小鼠，切除肿瘤，称重，并进行后续分析（例如，Ki-67和cleaved caspase-3的免疫组织化学染色，以及靶基因表达的qRT-PCR）。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
由于其肽类特性，YAP-TEAD-IN-1 TFA 的药代动力学 (PK) 特性并不适用于口服药物。其口服生物利用度低，静脉给药后迅速从体循环中清除。由于血液中的蛋白水解降解和快速的肾脏清除，其半衰期 (t1/2) 通常较短，通常在几分钟到一小时之间。分布容积 (Vd) 通常较低，表明其主要滞留在血管内。清除率 (CL) 较高。该化合物易受水解和酶促降解。这些药代动力学限制是其临床开发的主要挑战，也是肽类药物普遍存在的问题。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
关于YAP-TEAD-IN-1 TFA的临床前毒性研究尚未得到广泛发表。鉴于其作用机制以及Hippo通路在器官大小控制和组织再生中的关键作用，系统性抑制YAP-TEAD预计会产生靶向毒性。这些毒性可能包括胃肠道毒性（由于对肠道干细胞的影响）、肝毒性和心脏毒性。在小鼠研究中，长期使用YAP/TEAD抑制剂与体重减轻和胃肠道不适有关。该肽的具体毒性特征尚未在正式的GLP毒理学研究中得到充分表征。在基于细胞的试验中，由于其主要作用是抑制细胞增殖而非直接诱导细胞死亡，因此被认为本身具有较低的固有细胞毒性。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
YAP-TEAD-IN-1 TFA 是一种仅供实验研究的肽，尚未获准用于任何临床适应症。它是验证 YAP-TEAD 蛋白-蛋白相互作用作为肿瘤治疗靶点的关键工具。该化合物的研发凸显了破坏转录因子复合物的策略，而转录因子复合物历来被认为是“不可成药的”。尽管存在药代动力学方面的挑战，但研究人员正在应用诸如交联或环化等修饰方法来提高其稳定性和细胞渗透性。该化合物与其他 Hippo 通路抑制剂（例如小分子 TEAD 棕榈酰化抑制剂，如 MGH-CP1 和 VT104）联合使用，以比较其作用机制并识别潜在的耐药机制。像 YAP-TEAD-IN-1 这样直接的竞争性抑制剂的出现，对于确认更具药物活性的抑制剂的作用确实是由于靶向破坏 YAP-TEAD 复合物所致，具有不可估量的价值。
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| 分子式 |
C95H145CLF3N23O23S2
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|---|---|
| 分子量 |
2133.88632941246
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| 精确质量 |
2149.031
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| CAS号 |
1659305-79-9
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| 相关CAS号 |
YAP-TEAD-IN-1;1659305-78-8
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| PubChem CID |
168322391
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
762
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| 氢键供体(HBD)数目 |
22
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| 可旋转键数目(RBC) |
40
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| 重原子数目 |
148
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| 分子复杂度/Complexity |
4320
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| 定义原子立体中心数目 |
16
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| SMILES |
C(F)(F)(F)C(=O)O.C(N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(=O)N)CCC(=O)O)([C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCCN)NC(C1CSSCC[C@@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@]([H])(CCCC)C(=O)N2CCC[C@@]2([H])C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@]([H])(CO)C(=O)N[C@@H](CC2C=CC=CC=2)C(=O)N1)CCCCN)=O)CCCNC(N)=N)=O)CC(C)C)=O)NC(=O)[C@H](CC1C=CC=C(Cl)C=1)NC([C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)C)=O)=O)=O
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| InChi Key |
IKHHLNSSOGABIQ-FWCZREQHSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C93H144ClN23O21S2.C2HF3O2.CH4/c1-8-9-27-63-89(135)114-41-19-31-70(114)86(132)101-54(6)77(123)112-68(50-118)84(130)110-66(48-56-23-11-10-12-24-56)83(129)113-69(85(131)108-64(29-14-16-39-96)90(136)117-44-22-34-73(117)91(137)115-42-20-32-71(115)87(133)103-59(76(97)122)35-36-74(120)121)51-140-139-45-37-62(80(126)109-65(46-52(2)3)81(127)105-61(30-18-40-100-93(98)99)78(124)104-60(79(125)107-63)28-13-15-38-95)106-82(128)67(49-57-25-17-26-58(94)47-57)111-88(134)72-33-21-43-116(72)92(138)75(53(4)5)102-55(7)119;3-2(4,5)1(6)7;/h10-12,17,23-26,47,52-54,59-73,75,118H,8-9,13-16,18-22,27-46,48-51,95-96H2,1-7H3,(H2,97,122)(H,101,132)(H,102,119)(H,103,133)(H,104,124)(H,105,127)(H,106,128)(H,107,125)(H,108,131)(H,109,126)(H,110,130)(H,111,134)(H,112,123)(H,113,129)(H,120,121)(H4,98,99,100);(H,6,7);1H4/t54-,59-,60-,61-,62-,63-,64-,65-,66-,67-,68-,69?,70-,71-,72-,73-,75-;;/m0../s1
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| 化学名 |
(4S)-4-[[(2S)-1-[(2S)-1-[(2S)-2-[[(3S,6S,9S,12S,15S,24S,27S,30S,33S)-15-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-acetamido-3-methylbutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(3-chlorophenyl)propanoyl]amino]-6-(4-aminobutyl)-24-benzyl-3-butyl-9-(3-carbamimidamidopropyl)-27-(hydroxymethyl)-30-methyl-12-(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,23,26,29,32-nonaoxo-18,19-dithia-1,4,7,10,13,22,25,28,31-nonazabicyclo[31.3.0]hexatriacontane-21-carbonyl]amino]-6-aminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-amino-5-oxopentanoic acid;methane;2,2,2-trifluoroacetic acid
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O : ≥ 50 mg/mL (~23.43 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 25 mg/mL (11.72 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.4686 mL | 2.3431 mL | 4.6863 mL | |
| 5 mM | 0.0937 mL | 0.4686 mL | 0.9373 mL | |
| 10 mM | 0.0469 mL | 0.2343 mL | 0.4686 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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