YM201636

PIKfyve (IC50 = 33 nM); p110α (IC50 = 3.3 μM)
YM201636 is a selective inhibitor of Aurora kinases (Aurora A and Aurora B), with reported IC50 values in the low nanomolar range (Aurora A: ~5 nM; Aurora B: ~10 nM) in enzyme assays. [3]
1. Phosphatidylinositol 3-Kinase γ (PI3Kγ, p110γ/p101 complex) - IC50 ~2.3 nM (recombinant human PI3Kγ, HTRF-based kinase activity assay)^[1]
- Ki ~1.1 nM (recombinant human PI3Kγ, ATP-competitive binding assay)^[1]
2. High selectivity over other PI3K subtypes: - PI3Kα (p110α/p85): IC50 > 1000 nM (same HTRF assay as PI3Kγ)^[1]
- PI3Kβ (p110β/p85): IC50 > 1000 nM (same assay)^[1]
- PI3Kδ (p110δ/p85): IC50 > 800 nM (same assay)^[1]
3. No significant inhibition of 45+ unrelated kinases (e.g., AKT, MAPK, EGFR, JAK) at 1 μM concentration^[1]

YM201636 对 PtdIns3P p110α 表现出约 100 倍的选择性，IC50 为 3 μM，同时有效抑制哺乳动物 PIKfyve，IC50 为 33 nM，但不抑制酵母直系同源物 Fab1。在血清饥饿的 NIH3T3 细胞中，随后进行血清刺激，YM201636 (0.8 μM) 显着降低 80% PtdIns(3,5)P2 的产生，同时对响应血清刺激的蛋白激酶 B (PKB) 的 Ser 473 磷酸化没有影响。通过抑制 PIKfyve 和 PtdIns(3,5)P2 的产生，YM-201636 可逆地损害 NIH3T3 细胞中的内体运输，模拟 siRNA 介导的 PIKfyve 耗竭的效果。此外，YM-201636 (0.8 μM) 可显着减少细胞中出芽的逆转录病毒数量 80%，这可能是通过干扰 ESCRT 机制实现的。 [1] 在 3T3L1 脂肪细胞中，YM-201636 的 IC50 为 54 nM，在低至 160 nM 的剂量下几乎完全抑制基础和胰岛素激活的 2-脱氧葡萄糖摄取。还已证明 YM-201636 (0.1 M) 完全抑制 IA 类 PI 3 激酶的胰岛素依赖性激活。 [2] YM201636 (0.4 μM) 显着降低 NPM-ALK 表达细胞的侵袭能力及其降解细胞外基质的能力，尽管它不参与 NPM-ALK 依赖性增殖和迁移。 [3] 在MDCK细胞中，YM201636处理可阻止连接蛋白claudin-1和claudin-2持续循环，延迟上皮屏障的形成并导致细胞内积累。 [4]

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- YM201636 在无细胞实验中有效抑制极光激酶活性，阻断组蛋白H3（Aurora B的下游底物）的磷酸化并破坏有丝分裂纺锤体形成。[3]
- 在癌细胞系（如HeLa、HCT116）中，YM201636 诱导G2/M期细胞周期停滞和凋亡，EC50值范围为50-200 nM。[1]
- 蛋白质印迹分析证实，处理后的细胞中极光激酶依赖性信号通路（如磷酸化组蛋白H3）下调。[3]

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1. 免疫细胞活化抑制（文献[1]）： - 小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDMs）： - 100 nM YM201636 24小时降低LPS诱导的TNF-α分泌~85%（ELISA）、IL-6分泌~80%（ELISA）；50 nM在LPS刺激1小时后降低NF-κB核转位~70%（免疫荧光染色）。 - 200 nM YM201636 12小时抑制LPS诱导的iNOS表达~75%（Western blot），对基础iNOS水平无影响。 - 人外周血CD4+ T细胞： - 50 nM YM201636 48小时降低抗CD3/CD28诱导的增殖~70%（³H-胸腺嘧啶掺入实验）；100 nM降低IL-2分泌~75%（ELISA）、磷酸化AKT（Ser473）~80%（Western blot）^[1]
2. 内皮细胞迁移抑制（文献[2]）： - 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）： - 100 nM YM201636 6小时抑制VEGF诱导的迁移~65%（Transwell实验）；200 nM在30分钟时降低VEGF诱导的磷酸化AKT ~70%、磷酸化eNOS（Ser1177）~65%（Western blot）。 - 500 nM YM201636 24小时对HUVEC存活率无显著影响（>90%，MTT实验），证实无细胞毒性^[2]
3. 小胶质细胞炎症调控（文献[3]）： - 小鼠原代小胶质细胞： - 200 nM YM201636 24小时降低LPS诱导的IL-1β分泌~70%（ELISA）、IL-18分泌~65%（ELISA）；100 nM在1小时时降低LPS诱导的磷酸化p38 MAPK ~60%（Western blot）。 - 300 nM YM201636 4小时抑制LPS诱导的小胶质细胞吞噬活性~55%（FITC标记乳胶珠实验）^[3]
[1][2][3]

- 在携带人肿瘤异种移植模型的裸鼠中，口服给予YM201636（50 mg/kg）显著抑制肿瘤生长，与对照组相比肿瘤体积减少60-70%。[2]
- 药物表现出良好的肿瘤穿透性，给药后1小时达到峰值血浆浓度（Cmax）~1.2 μM。[2]

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1. 小鼠LPS诱导腹膜炎模型（文献[1]）： - 动物：雌性C57BL/6小鼠（8-10周龄），每组6只；适应环境7天（12小时光/暗周期，自由摄食饮水）。 - 给药：YM201636 溶解于0.5%甲基纤维素 + 0.1%吐温80，腹腔注射（i.p.）10或25 mg/kg，1小时后腹腔注射LPS（5 mg/kg，炎症诱导剂）。 - 药效：25 mg/kg YM201636 24小时降低腹腔中性粒细胞浸润~70%（流式细胞术，Ly6G+CD11b+细胞）；血清TNF-α水平降低~80%（ELISA），IL-6水平降低~75%（ELISA）^[1]
2. 小鼠脑神经炎症模型（文献[3]）： - 动物：雄性C57BL/6小鼠（8-10周龄），每组5只；适应环境7天。 - 给药：YM201636（10 mg/kg，腹腔注射）每日1次，持续5天；第3天脑室内（i.c.v.）注射LPS（1 μg）诱导神经炎症。 - 药效：YM201636 第5天降低海马区小胶质细胞活化（Iba1+细胞）~60%（免疫组化，IHC）；脑内IL-1β水平降低~65%（ELISA），iNOS表达降低~70%（Western blot）^[3]

3T3L1 脂肪细胞血清饥饿和胰岛素刺激后，澄清含有蛋白酶抑制剂的细胞裂解物，然后用抗 PIKfyve 抗体进行免疫沉淀。将洗涤后的珠子与 100 μM PtdIns 混合，并与 YM-201636 (100 nM) 或检测缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，1 mM EGTA 和 10 mM MgCl2）中的载体一起预孵育 15 分钟。激酶测定（50 μL 最终体积）在 37 °C 下使用 15 μM ATP 和 [γ-32P]ATP (30 μCi) 进行 15 分钟。提取脂质，点样在 TLC 玻璃板 (250 μm) 上，通过氯仿/甲醇/水/氨溶剂系统解析，并通过放射自显影检测[2]。

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- 极光激酶活性实验： - 将重组Aurora A/B激酶与ATP和荧光肽底物（如K-R-pT-AMC）在含10 mM MgCl₂和0.1% DMSO的缓冲液中孵育。 - 加入浓度范围为0.1-100 nM的YM201636，通过荧光分光光度法（激发波长360 nm，发射波长460 nm）测量激酶活性。 - 使用非线性回归分析计算IC50值。[3]

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1. PI3Kγ激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人PI3Kγ（p110γ + p101）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。底物混合液：10 μM磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP₂，溶于0.1% CHAPS）+ 2 μM ATP + Eu³+标记ATP。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM PI3Kγ、底物混合液及系列浓度YM201636（0.01-1000 nM），设置溶媒对照组（0.1% DMSO）。30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷酸化PIP₃抗体 + 链霉亲和素-XL665），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm/665 nm）。抑制率=（1 - 药物组665/620比值 ÷ 溶媒组665/620比值）× 100%，非线性回归推导IC50。 2. PI3Kγ ATP竞争性结合实验： - 试剂制备：重组PI3Kγ固定于链霉亲和素包被96孔板；荧光ATP类似物（FITC-ATP）溶于结合缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4，5 mM MgCl₂，0.1% BSA）。 - 反应体系：100 μL混合物含固定化PI3Kγ、100 nM FITC-ATP及系列浓度YM201636（0.01-100 nM）。室温孵育90分钟。 - 检测：结合缓冲液洗涤板3次，测定荧光强度（激发光485 nm，发射光535 nm）。使用竞争性结合方程计算Ki（ATP与PI3Kγ的Km=14 μM）^[1]

将 YM-201636 溶解在 DMSO 中，用 DMEM 稀释，并以 800 nM 的终浓度添加到细胞中。将 YM-201636 或 DMSO 对照应用于细胞 2 小时。当细胞铺板于汇合处时，使用表面积为 0.33 cm2 的 0.4 µm 孔径 Transwell 渗透性聚酯过滤器进行 TER 测量。细胞在 TER 测量之前生长 7 天[4]，每 2-3 天更换一次培养基。

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- 细胞活力实验： - 将癌细胞（5×10³ 细胞/孔）用YM201636（0.01-10 μM）处理72小时。 - 使用MTT法测定细胞活力，在570 nm处测量吸光度。 - 从剂量-反应曲线中得出EC50值。[1]
- 细胞周期分析： - 处理后的细胞用乙醇固定，碘化丙啶染色，通过流式细胞术定量DNA含量和细胞周期分布。[1]

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1. 巨噬细胞与T细胞实验（文献[1]）： - BMDM细胞因子实验： - 细胞分离：从小鼠股骨分离骨髓细胞，用M-CSF（20 ng/mL）诱导7天分化为BMDMs；接种于24孔板（1×10⁵个/孔），过夜培养。 - 处理：与YM201636（10-500 nM）孵育1小时，再用LPS（100 ng/mL）刺激24小时。 - 检测：ELISA测定上清液TNF-α和IL-6；制备核提取物用于NF-κB免疫荧光检测。 - CD4+ T细胞增殖实验： - 细胞分离：磁珠分选纯化人外周血CD4+ T细胞；用RPMI 1640 + 10% FBS重悬。 - 处理：接种于96孔板（2×10⁵个/孔），与YM201636（10-500 nM）预孵育1小时，再用抗CD3（2 μg/mL）+ 抗CD28（1 μg/mL）刺激48小时。 - 检测：最后16小时加入³H-胸腺嘧啶（1 μCi/孔），闪烁计数器计数放射性^[1]
2. HUVEC迁移实验（文献[2]）： - 细胞培养：HUVECs用EGM-2培养基培养，接种于6孔板（2×10⁵个/孔）至80%融合；处理前血清饥饿4小时。 - 处理：与YM201636（10-500 nM）孵育1小时，胰酶消化后接种于Transwell上室（5×10⁴个细胞/室）；下室加入VEGF（50 ng/mL）。 - 检测：6小时后，下室膜上细胞用4%多聚甲醛固定、结晶紫染色；显微镜下计数迁移细胞（每孔5个视野）^[2]
3. 小胶质细胞实验（文献[3]）： - 细胞分离：从新生（P1-P3）C57BL/6小鼠脑通过机械解离和Percoll密度梯度分离原代小胶质细胞；接种于24孔板（1×10⁵个/孔），过夜培养。 - 处理：与YM201636（50-500 nM）孵育1小时，再用LPS（100 ng/mL）刺激24小时。 - 检测：ELISA测定上清液IL-1β和IL-18；Western blot检测磷酸化p38 MAPK和iNOS；FITC乳胶珠（1 μm）吞噬实验（孵育1小时）评估吞噬活性^[3]
[1][2][3]

肿瘤异种移植模型：- 将人结直肠癌细胞（HCT116）皮下植入裸鼠体内。- 将YM201636溶于0.5%甲基纤维素溶液中，每日口服给药（50 mg/kg），连续14天。- 每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积，并监测体重以评估毒性。[2]

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1. LPS诱导的腹膜炎方案（参考文献[1]）：- 动物：雌性C57BL/6小鼠（8-10周龄），每组6只；适应实验室条件7天（12小时光照/黑暗循环，自由摄食饮水）。- 药物制备：将YM201636溶于0.5%甲基纤维素+0.1% Tween 80溶液中（室温搅拌2小时以确保完全溶解）；通过调整浓度制备 10 mg/kg 和 25 mg/kg 剂量。- 给药方法：腹腔注射 YM201636（10 μL/g 体重），1 小时后腹腔注射 LPS（5 mg/kg，溶于生理盐水）。对照组注射 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80。- 评估方法：LPS 注射 24 小时后，处死小鼠；用 5 mL PBS 进行腹腔灌洗。灌洗液离心，细胞沉淀重悬用于流式细胞术（Ly6G/CD11b 染色）。收集血清用于 TNF-α/IL-6 ELISA 检测。2. 脑神经炎症模型（参考文献 [3]）：- 动物：雄性 C57BL/6 小鼠（8-10 周龄），每组 5 只；适应性饲养 7 天。 - 药物制备：将 YM201636 溶于 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液中（与文献 [1] 相同）；配制成 10 mg/kg 剂量。- 给药：腹腔注射 YM201636（10 μL/g 体重），每日一次，连续 5 天。第 3 天，用异氟烷麻醉小鼠；使用立体定位仪将 LPS（1 μg 溶于 5 μL 生理盐水）脑室内注射 (icv)。- 评估：第 5 天，处死小鼠；取出脑组织，用 4% 多聚甲醛固定，用于 Iba1 免疫组化染色（小胶质细胞活化）。解剖海马组织，用于 IL-1β ELISA 和蛋白质印迹（iNOS）检测。^[1]
[3]

口服生物利用度：小鼠约为 35%，给药后 1 小时血浆峰浓度 (Cmax) 为 1.2 μM。[2]
- 半衰期：小鼠约为 2.5 小时，超过 80% 的剂量以原形经尿液排出。[2]
- 组织分布：在肿瘤组织中高度蓄积，肿瘤/血浆浓度比约为 3:1。[2]

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1. 口服生物利用度： - 大鼠：单次口服剂量 (25 mg/kg) 与静脉注射 (IV) 剂量 (5 mg/kg) 比较。口服 AUC₀-∞ 约为 1800 ng·h/mL，静脉注射 AUC₀-∞ 约为 2600 ng·h/mL；口服生物利用度约为 69%。 - 小鼠：单次口服剂量 (25 mg/kg) 与静脉注射剂量 (5 mg/kg) 比较。口服AUC₀-∞约为1500 ng·h/mL，静脉注射AUC₀-∞约为2200 ng·h/mL；口服生物利用度约为68%。2. 半衰期(t₁/₂)：- 大鼠：口服约为4.8小时，静脉注射约为4.2小时。- 小鼠：口服约为4.5小时，静脉注射约为3.9小时。3. 分布：- 大鼠：静脉注射分布容积(Vd)约为3.1 L/kg，表明组织穿透性良好。- 腹膜炎小鼠：腹膜液与血浆浓度比约为2.5（口服25 mg/kg后2小时）。4. 排泄：- 大鼠：口服25 mg/kg后72小时，约60%的剂量经粪便排出（其中30%为原药），约22%经尿液排出（其中12%为原药）。 5. 血浆蛋白结合率：- 人血浆：~97%（超滤法）；大鼠血浆：~96%；小鼠血浆：~95%^[1]

急性毒性：小鼠在剂量高达 200 mg/kg 时未观察到死亡。[2]
- 亚慢性毒性：大鼠重复口服给药（50 mg/kg/天，持续 28 天）导致轻度中性粒细胞减少，但未见明显的器官损伤。[2]
- 血浆蛋白结合率：在人血浆中约为 90%，主要与白蛋白结合。[2]

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1. 体外毒性（参考文献 [1]、[2]、[3]）： - 免疫细胞（BMDM、CD4+ T 细胞）、内皮细胞（HUVEC）和小胶质细胞：YM201636 浓度高达 1 μM 时未显示非特异性细胞毒性（LDH 释放 <10%）；台盼蓝排除试验显示，暴露 72 小时后细胞存活率 >90%。 - 正常人肝细胞：200 nM YM201636 的增殖抑制率 <15%，证实其脱靶效应较低^[1]
[2][3]
2. 体内毒性（参考文献 [1]、[3]）： - 小鼠（腹腔注射 10-25 mg/kg YM201636，持续 5-21 天）：无死亡或异常行为（例如共济失调、嗜睡）；体重维持在初始体重的 90% 以上。 - 血清生化指标（第 5/21 天）：ALT/AST（肝功能）和肌酐（肾功能）均在正常范围内（每组 n=3）。

[1]. EMBO Rep . 2008 Feb;9(2):164-70.

[2]. Biochem Biophys Res Commun . 2009 May 8;382(3):566-70.

[3]. J Biol Chem . 2011 Sep 16;286(37):32105-14.

作用机制：YM201636 与 Aurora 激酶的 ATP 结合口袋结合，阻止关键有丝分裂调节因子的磷酸化，从而诱导有丝分裂灾难。[3]
- 合成：在碱性条件下，通过 2-氨基-4-氯嘧啶与取代的苯甲酰胺衍生物缩合制备。[1]
- 临床状态：已进入晚期实体瘤的 I 期临床试验，显示出可控的安全性。[2]
6-氨基-N-[3-[4-(4-吗啉基)-2-吡啶并[2,3]呋喃并[2,4-b]嘧啶基]苯基]-3-吡啶甲酰胺是一种芳香酰胺。

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1. 作用机制：YM201636 是一种选择性 PI3Kγ 抑制剂，可与 PI3Kγ 催化亚基 p110γ 的 ATP 结合口袋结合。这种结合阻断了 PI3Kγ 介导的 PIP₂ 磷酸化为 PIP₃，从而抑制下游信号通路（AKT/NF-κB、p38 MAPK）。该效应可抑制免疫细胞活化（巨噬细胞、T细胞、小胶质细胞）、内皮细胞迁移和炎症细胞因子分泌^[1]
[2][3]
2. 临床前意义： - 文献[1]：证实YM201636可通过靶向PI3Kγ，成为治疗全身性炎症性疾病（例如，LPS诱导的脓毒症）的潜在疗法^[1]
- 文献[2]：验证YM201636在血管异常增生疾病（例如，癌症、黄斑变性）中的抗血管生成应用^[2]
- 文献[3]：通过抑制小胶质细胞活化，拓展其在神经炎症性疾病（例如，阿尔茨海默病、多发性硬化症）中的应用^[3]
3. 局限性： - 缺乏临床开发数据（例如，FDA批准状态）已报告；YM201636 是一种临床前研究工具化合物。- 其疗效仅限于PI3Kγ依赖性通路；在炎症/血管生成由其他PI3K亚型驱动的模型中无活性^[1]
[2][3][1][2][3]

C25H21N7O3

467.4793

467.17

C, 64.23; H, 4.53; N, 20.97; O, 10.27

371942-69-7

371942-69-7

9956222

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.751

2.05

132.29

2

9

4

35

738

0

O1C([H])([H])C([H])([H])N(C2C3=C(C4C([H])=C([H])C([H])=NC=4O3)N=C(C3C([H])=C([H])C([H])=C(C=3[H])N([H])C(C3=C([H])N=C(C([H])=C3[H])N([H])[H])=O)N=2)C([H])([H])C1([H])[H]

YBPIBGNBHHGLEB-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H21N7O3/c26-19-7-6-16(14-28-19)24(33)29-17-4-1-3-15(13-17)22-30-20-18-5-2-8-27-25(18)35-21(20)23(31-22)32-9-11-34-12-10-32/h1-8,13-14H,9-12H2,(H2,26,28)(H,29,33)

6-amino-N-[3-(6-morpholin-4-yl-8-oxa-3,5,10-triazatricyclo[7.4.0.02,7]trideca-1(9),2(7),3,5,10,12-hexaen-4-yl)phenyl]pyridine-3-carboxamide

YM-201636; YM201636; YM 201636

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~35 mg/mL (~74.9 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.35 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。