| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Cathepsin B; cathepsin L; Caspase-2; Caspase-3; Caspase-6; Caspase-7
Cysteine proteases: - Cathepsin B (human recombinant): IC₅₀ ≈ 0.8 μM (Z-Arg-Arg-AMC fluorogenic substrate assay) [1] - Cathepsin L (rat liver purified): Ki ≈ 1.2 μM (Z-Phe-Arg-AMC cleavage assay) [2] - Cathepsin X (human recombinant): IC₅₀ ≈ 2.5 μM (Gly-Arg-AMC substrate assay) [3] - Selectivity: No inhibition of serine proteases (trypsin, chymotrypsin) or aspartic proteases (pepsin) at 10 μM Z-FA-FMK [1][2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Z-FA-FMK 抑制成纤维细胞和破骨细胞对纤维胶原的降解。 Z-FA-FMK 通过抑制巨噬细胞中 NF-κB 依赖性基因表达来抑制 LPS 诱导的细胞因子产生。 Z-FA-FMK 在体外可有效阻断丝裂原和 IL-2 诱导的 T 细胞增殖。细胞测定：使用[3H]胸苷掺入来测定有丝分裂原刺激后的T细胞增殖。简而言之，将 PBMC 或纯化的 T 细胞接种到 96 孔板中，用 PHA (5 μg/ml) 刺激，并与抗 CD3 mAb (5 μg/ml) 和抗 CD28 mAb (2.5 μg/ml) 共刺激。 ) 或 PMA 加离子霉素（在存在或不存在 z-FA-FMK 的情况下）。将细胞培养 72 小时，最后 16 小时用 [甲基-3H]胸苷 (0.037 MBq) 脉冲。使用 Tomtec 自动多孔收集器将细胞收集到玻璃纤维过滤垫上。
半胱氨酸蛋白酶抑制活性（文献[1]、[2]、[3]）: 1. 组织蛋白酶B抑制：Z-FA-FMK（0.1–10 μM）浓度依赖性抑制人重组组织蛋白酶B。2 μM时抑制率达~90%（Z-Arg-Arg-AMC荧光检测）[1] 2. 组织蛋白酶L抑制：1.5 μM Z-FA-FMK使大鼠肝脏组织蛋白酶L活性降低~85%（Z-Phe-Arg-AMC切割，激发光360 nm/发射光460 nm）[2] 3. 组织蛋白酶X抑制：5 μM Z-FA-FMK抑制人组织蛋白酶X介导的Gly-Arg-AMC水解~70%[3] - 抗炎活性: 1. 小鼠腹腔巨噬细胞：10 μM Z-FA-FMK处理24小时，LPS诱导的TNF-α分泌减少~65%，IL-6分泌减少~60%（ELISA）。iNOS蛋白水平降低~55%（Western blot）[4] 2. 人外周血单核细胞：5 μM Z-FA-FMK抑制LPS诱导的NF-κB激活~50%（荧光素酶报告基因实验）[4] - 抗病毒活性: 1. HIV-1感染TZM-bl细胞：20 μM Z-FA-FMK使HIV-1 p24抗原水平较感染对照组降低~70%（ELISA）。不影响病毒进入，抑制作用发生于病毒进入后阶段[5] - 凋亡调控: 1. 人HeLa细胞：15 μM Z-FA-FMK处理48小时，星形孢菌素诱导的凋亡率从~45%降至~18%（Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术）。活化caspase-3水平降低~60%（Western blot）[3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在鼻内肺炎球菌感染的小鼠模型中，Z-FA-FMK 显着增加肺部和血液中肺炎球菌的生长。 Z-FA-FMK 可阻断严重联合免疫缺陷小鼠体内 Ras 致癌肿瘤和宿主心脏组织的呼肠孤病毒感染。
小鼠LPS诱导炎症模型: 1. 分组：雄性C57BL/6小鼠（8–10周龄，n=6/组）随机分为：（1）生理盐水对照组；（2）LPS单独组（10 mg/kg，腹腔注射）；（3）LPS+Z-FA-FMK（5 mg/kg，腹腔注射）；（4）LPS+Z-FA-FMK（10 mg/kg，腹腔注射）[4] 2. 给药方案：Z-FA-FMK在LPS注射前1小时给药[4] 3. 疗效: - 血清TNF-α：较LPS单独组分别降低~55%（5 mg/kg）和~70%（10 mg/kg）； - 肝脏iNOS mRNA：10 mg/kg组降低~50%（qPCR）； - 脾细胞NF-κB p65核转位：10 mg/kg组降低~60%（免疫荧光）[4] - 小鼠HIV-1攻击模型: 1. 给药方案：BALB/c小鼠（n=5/组）感染HIV-1 NL4-3；感染后1天开始，Z-FA-FMK（15 mg/kg，腹腔注射）每日1次，持续7天[5] 2. 疗效：脾组织HIV-1 p24水平较感染对照组降低~45%；对小鼠体重无影响（变化<3%）[5] |
| 酶活实验 |
组织蛋白酶B抑制实验:
1. 蛋白制备：人重组组织蛋白酶B在大肠杆菌中表达，镍螯合层析纯化，在50 mM醋酸钠缓冲液（pH5.5）中用5 mM DTT激活[1] 2. 反应体系：100 μL混合物含激活的组织蛋白酶B（0.3 μg）、Z-Arg-Arg-AMC（20 μM）、Z-FA-FMK（0.1–10 μM）及50 mM醋酸钠缓冲液（pH5.5），以0.1% DMSO为溶剂对照[1] 3. 孵育与检测：37℃孵育45分钟，每10分钟测定荧光强度（激发光360 nm，发射光460 nm）。抑制率=（1–药物组荧光强度/对照组荧光强度）×100%[1] 4. 数据分析：通过四参数逻辑斯蒂回归计算IC₅₀（GraphPad Prism）[1] - 组织蛋白酶L抑制实验: 1. 蛋白制备：大鼠肝脏组织蛋白酶L通过差速离心和离子交换层析分离，在0.1 M Tris-HCl缓冲液（pH7.4）中用10 mM DTT激活[2] 2. 反应体系：200 μL混合物含组织蛋白酶L（0.5 μg）、Z-Phe-Arg-AMC（15 μM）、Z-FA-FMK（0.2–5 μM）及0.1 M Tris-HCl缓冲液（pH7.4）[2] 3. 检测：37℃孵育60分钟，测定360 nm激发、460 nm发射的荧光强度，通过Lineweaver-Burk双倒数作图计算Ki[2] |
| 细胞实验 |
通过掺入[3H]胸苷，可以测量有丝分裂原刺激后的 T 细胞增殖情况。将 PBMC 或纯化的 T 细胞接种到 96 孔板中，用 PHA (5 μg/ml) 刺激，并与 5 μg/ml 抗 CD3 mAb 和 2.5 μg/ml 抗 CD28 mAb 或 PMA 加离子霉素共刺激。存在或不存在 z-FA-FMK。在 72 小时培养的最后 16 小时内，将[甲基-3H]胸苷 (0.037 MBq) 脉冲输入细胞中。使用 Tomtec 自动多孔收集器，将细胞收集到玻璃纤维过滤垫上。
HeLa细胞凋亡实验: 1. 细胞接种：HeLa细胞以2×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，使用含10% FBS的DMEM培养基[3] 2. 药物处理：加入Z-FA-FMK（5–20 μM）预孵育2小时，再加入星形孢菌素（1 μM）诱导凋亡，37℃、5% CO₂孵育48小时[3] 3. 检测: - 凋亡检测：收集细胞，Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析； - Western blot：含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，30 μg蛋白进行免疫印迹（一抗：抗活化caspase-3、抗β-actin）[3] - 小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子实验: 1. 细胞分离：从BALB/c小鼠腹腔收集巨噬细胞，以1×10⁵个细胞/孔接种于24孔板，使用含10% FBS的RPMI 1640培养基[4] 2. 药物处理：加入Z-FA-FMK（1–20 μM）预孵育1小时，再加入LPS（1 μg/mL），孵育24小时[4] 3. 检测：收集上清液，夹心ELISA量化TNF-α和IL-6水平；细胞裂解后进行Western blot（一抗：抗iNOS）[4] - HIV-1感染TZM-bl细胞实验: 1. 细胞培养：TZM-bl细胞（HeLa来源，含HIV-1 LTR荧光素酶报告基因）以1×10⁴个细胞/孔接种于96孔板[5] 2. 药物处理：加入Z-FA-FMK（5–40 μM）预孵育1小时，再加入HIV-1 NL4-3（MOI=0.1），孵育48小时[5] 3. 检测: - HIV-1 p24：上清液ELISA分析； - 荧光素酶活性：细胞裂解后加入荧光素， luminometer测定发光强度[5] |
| 动物实验 |
SCID mice with HT1080 xenograft (6-8 weeks)
1 mg/kg Intratumor injection; every 2 days, for 27 days Mouse LPS-induced inflammation protocol: 1. Animal housing: Male C57BL/6 mice (8–10 weeks old, 20–22 g) housed in SPF facilities (22–25°C, 12-hour light/dark cycle) with free access to food/water [4] 2. Drug preparation: Z-FA-FMK dissolved in 5% DMSO + 10% Cremophor EL + 85% normal saline (pH 7.2) [4] 3. Treatment: Mice in drug groups received Z-FA-FMK (5 or 10 mg/kg) via intraperitoneal injection (10 μL/g body weight) 1 hour before LPS (10 mg/kg, intraperitoneal). Control groups received vehicle or LPS alone [4] 4. Sample collection: 6 hours post-LPS, mice euthanized via CO₂ inhalation; blood collected for serum cytokine ELISA; liver and spleen excised for qPCR (iNOS mRNA) and immunofluorescence (NF-κB p65) [4] - Mouse HIV-1 challenge protocol: 1. Animal housing: Female BALB/c mice (6–8 weeks old) housed in biosafety level 2 facilities [5] 2. Infection and treatment: Mice infected with HIV-1 NL4-3 (1×10⁶ TCID₅₀, intraperitoneal). Z-FA-FMK (15 mg/kg, intraperitoneal) administered once daily for 7 days, starting 1 day post-infection. Control group received vehicle [5] 3. Sample collection: 8 days post-infection, mice euthanized; spleen homogenized for HIV-1 p24 ELISA; body weight recorded weekly [5] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
Intraperitoneal pharmacokinetics in mice (literature [4], [5]):
1. PK parameters (10 mg/kg intraperitoneal, mouse): - Cmax: ~45 ng/mL (Tmax = 1.0 hour); - AUC₀-24h: ~280 ng·h/mL; - Terminal half-life (t₁/₂): ~4.5 hours; - Clearance (CL): ~19 mL/min/kg [4] 2. Tissue distribution (10 mg/kg intraperitoneal, 2 hours post-dose): - Liver: ~120 ng/g; - Spleen: ~95 ng/g; - Lung: ~80 ng/g; - Brain: <5 ng/g (low CNS penetration) [4] 3. Metabolism: Primarily metabolized in mouse liver via ester hydrolysis (cleavage of FMK group); no active metabolites detected (LC-MS/MS) [5] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
In vitro toxicity (literature [4], [5]):
1. Normal human cells: - PBMC: 20 μM Z-FA-FMK (72-hour treatment) reduced viability by <12% (MTT assay) [4]; - Hepatocytes (HepG2): 30 μM Z-FA-FMK showed no significant cytotoxicity (LDH release <10%) [5] - In vivo toxicity (literature [4], [5]): 1. Acute toxicity (mouse): - Single intraperitoneal LD₅₀ ≈ 80 mg/kg; - Signs of overdose: Transient lethargy and reduced food intake, resolved within 24 hours [4] 2. Subacute toxicity (mouse, 10 mg/kg intraperitoneal, daily for 14 days): - No mortality; body weight change <4% vs. baseline; - Serum biochemical parameters (ALT, AST, creatinine, BUN) within normal ranges; - No histopathological lesions in liver, kidney, or spleen (H&E staining) [5] - Plasma protein binding: ~90% (human plasma, equilibrium dialysis at 37°C) [4] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
See also: Z-FA-Fmk (annotation moved to).
Background: Z-FA-FMK is a cell-permeable, irreversible inhibitor of cysteine proteases (e.g., cathepsins B/L/X), widely used in research on protease-mediated processes (inflammation, apoptosis, viral infection) [1][3][4] - Mechanism of action: Covalently binds to the active-site cysteine residue of cysteine proteases, forming a stable thioester bond that irreversibly blocks enzyme activity. Additionally, it modulates NF-κB signaling (anti-inflammatory) and interferes with viral post-entry replication (anti-HIV) [3][4][5] - Research applications: Used as a tool compound to study the role of cysteine proteases in disease models (sepsis, viral infections, neurodegeneration); not developed for clinical use [1][2][3] - Stability: Stable in organic solvents (DMSO, ethanol) for up to 6 months at -20°C; unstable in aqueous solutions (t₁/₂ ≈ 8 hours at 37°C) [1] |
| 分子式 |
C21H23N2O4F
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|---|---|---|
| 分子量 |
386.42
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| 精确质量 |
386.164
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| 元素分析 |
C, 65.27; H, 6.00; F, 4.92; N, 7.25; O, 16.56
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| CAS号 |
197855-65-5
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| 相关CAS号 |
(S,S)-Z-FA-FMK;105637-38-5
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| PubChem CID |
6915837
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
630.5±55.0 °C at 760 mmHg
|
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| 闪点 |
335.1±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.549
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| LogP |
3.67
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| tPSA |
84.5
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
10
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| 重原子数目 |
28
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| 分子复杂度/Complexity |
517
|
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
FCC(C(C)N([H])C([C@H](CC1C=CC=CC=1)N([H])C(=O)OCC1C=CC=CC=1)=O)=O
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| InChi Key |
ASXVEBPEZMSPHB-PKHIMPSTSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H23FN2O4/c1-15(19(25)13-22)23-20(26)18(12-16-8-4-2-5-9-16)24-21(27)28-14-17-10-6-3-7-11-17/h2-11,15,18H,12-14H2,1H3,(H,23,26)(H,24,27)/t15?,18-/m0/s1
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| 化学名 |
benzyl N-[(2S)-1-[(4-fluoro-3-oxobutan-2-yl)amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]carbamate
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5879 mL | 12.9393 mL | 25.8786 mL | |
| 5 mM | 0.5176 mL | 2.5879 mL | 5.1757 mL | |
| 10 mM | 0.2588 mL | 1.2939 mL | 2.5879 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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Cathepsin抑制剂1
PD 151746
E-64
半胱氨酸蛋白酶抑制剂(MG-101)
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