| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
A2AR ( Ki = 1.4 nM )
Adenosine A2A receptor (A2AR). [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
ZM241385 (1 μM;24-48 小时;PC12 细胞) 处理可拮抗 A2A 受体激动剂 CGS21680 引起的 A2A 受体 mRNA 和蛋白水平的显著上调[1]。ZM241385 (1.0 μM) 可部分抵消 A2AR 激动剂 CGS21680 (1.0 μM) 在 PC12 细胞中诱导的 Ca2+ 外流抑制,该抑制作用通过孵育 3 小时后的细胞外 Ca2+ 水平测定。[1] ZM241385 (1.0 μM) 可逆转 CGS21680 (1.0 μM) 在 PC12 细胞中引起的 A2AR mRNA 上调; CGS21680 使 A2AR mRNA 水平升高 5 倍以上,而与 ZM241385 联合处理则使这种激动剂增强的转录水平降低至接近对照水平。[1] Western blot 分析显示,ZM241385 降低了 CGS21680 (1.0 μM) 在 PC12 细胞中诱导的 A2AR 蛋白水平升高。[1] 与未处理的对照组相比,ZM241385 处理 6 小时后可显著提高 PC12 细胞中的 ATP 水平 (p<0.05)。[1] HPLC 分析显示,ZM241385 可使 CGS21680 (1.0 μM) 处理的 PC12 细胞中腺苷 (ADO) 的释放量降低约 50%,该结果在孵育 3 小时后测得。 [1]
ZM241385处理3小时后,PC12细胞中cAMP水平降低(p<0.05)。[1] ZM241385处理24小时后,PC12细胞中亚硝酸盐(一氧化氮的稳定代谢物)水平降低(p<0.05)。[1] ZM241385逆转了CGS21680诱导的PC12细胞中p44/42 MAPK(Erk1/2)的磷酸化,导致其水平低于未处理的对照细胞,如Western blot所示,该结果基于ZM241385预处理30分钟后与CGS21680共培养48小时。 [1] ZM241385 可拮抗 CGS21680 诱导的 PC12 细胞增殖加速,经 MTT 法检测,处理三天后结果显示细胞增殖加速。[1] ZM241385 可拮抗 A2AR 激动剂诱导的 PC12 细胞神经突生长增加;处理三天后,与单独使用 CGS21680 相比,ZM241385 可降低具有神经突的细胞比例。[1] ZM241385 可抑制激动剂促进的 PC12 细胞铁摄取;与单独使用 CGS21680 相比,在加入 FeSO4 (50 μM) 1 小时后,用 CGS21680 (1.0 μM) 和 ZM241385 (1.0 μM) 处理的细胞显示出细胞内铁水平降低。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
ZM241385(0.2 μg/只,0.4 μg/只;腹腔注射;每日一次;持续11周;雌性C57BL/6野生型小鼠)治疗可降低肿瘤体积,增加CD8+ T细胞活化和脾脏髓源性抑制细胞(MDSC)频率[4]。
与对照组相比,高剂量(0.4 μg/只)ZM241385单药治疗可显著降低总肿瘤体积(包括舌和食管)(p < 0.05或p < 0.01)。 在较高剂量下,ZM241385可增加脾脏CD8+ T细胞在IFN-γ ELISPOT检测中对p53和VEGFR2肽表位产生反应的频率,但这种增强未达到统计学意义(p > 0.05)。 较高剂量治疗ZM241385导致脾脏中髓源性抑制细胞(MDSC)频率降低(但对调节性T细胞(Treg)频率无影响)。[4] |
| 酶活实验 |
1. 本文描述了新型非黄嘌呤类腺苷受体拮抗剂ZM 241385(4-(2-[7-氨基-2-(2-呋喃基)[1,2,4]-三唑并[2,3-a][1,3,5]三嗪-5-基氨基]乙基)苯酚)的体外药理学特性,该拮抗剂对A2a受体亚型具有选择性。2. ZM 241385对A2a受体具有高亲和力。在大鼠嗜铬细胞瘤细胞膜中,ZM 241385可置换氚标记的5'-N-乙基羧酰胺腺苷(NECA)的结合,其pIC50值为9.52(95%置信区间,9.02-10.02)。在离体豚鼠Langendorff心脏模型中,ZM 241385拮抗了2-氯腺苷(2-CADO)和2-[对-(2-羧乙基)苯乙基氨基]-5'-N-乙基羧酰胺腺苷(CGS21680)引起的冠状动脉舒张作用,其pA2值分别为8.57(置信区间:8.45-8.68)和9.02(置信区间:8.79-9.24)。3. ZM 241385对A2b受体的亲和力较低,并拮抗腺苷在豚鼠主动脉中的舒张作用,其pA2值为7.06(置信区间:6.92-7.19)。4. ZM 241385对A1受体的亲和力较低。在大鼠大脑皮层膜中,ZM 241385 能置换氚标记的 R-苯基异丙基腺苷 (R-PIA),pIC50 为 5.69(置信区间:5.57-5.81)。在豚鼠心房中,ZM 241385 能拮抗 2-CADO 的缓脉作用,pA2 为 5.95(置信区间:5.72-6.18)。5. ZM 241385 对 A3 受体的亲和力较低。在表达于中国仓鼠卵巢细胞中的克隆大鼠 A3 受体上,ZM 241385 能置换碘标记的氨基苄基-5'-N-甲基羧酰胺腺苷 (AB-MECA),pIC50 为 3.82(置信区间:3.67-4.06)。 6. ZM 241385 在这些研究中使用的离体组织中,浓度比阻断 A2a 受体的浓度高三个数量级时,未观察到显著的额外药理作用[3]。
对于 A₁ 受体结合:制备大鼠大脑皮层粗膜。结合试验在室温下于 50 mM Tris-HCl (pH 7.4) 缓冲液中进行,使用 10 nM 氚标记的 R-PIA (³H-R-PIA) 作为放射性配体,并加入腺苷脱氨酶 (2 U ml⁻¹) 以去除内源性腺苷。测定非特异性结合。与 ZM241385 的竞争性研究给出了 pIC₅₀ 值。[3] 对于 A₂ₐ 受体结合:PC12 细胞膜的制备方法与皮层膜类似。在相同的缓冲液条件下,使用 40 nM 氚标记的 NECA (³H-NECA) 进行结合实验,并加入腺苷脱氨酶。ZM241385 竞争性抑制了结合,pIC₅₀ 为 9.52。[3] 对于 A₃ 受体结合:使用克隆并在 CHO 细胞中表达的大鼠 A₃ 腺苷受体。使用¹²⁵I-AB-MECA(N⁶-(3-[¹²⁵I]碘-4-氨基苄基-5'-N-甲基羧酰胺腺苷)进行放射性配体结合试验,具体方法如前所述。ZM241385 置换放射性配体的 pIC₅₀ 为 3.82。[3] 磷酸二酯酶活性测定:分离并培养喂食的雄性 Sprague-Dawley 大鼠的肝细胞。在 1 μM 环磷酸腺苷 (cAMP) 存在下,于 30 °C 下,采用 Thompson & Appleman 改良的两步法测定 cAMP 磷酸二酯酶活性。将 ZM241385(10 μM 和 1 mM)的作用与茶碱进行比较。[3] |
| 细胞实验 |
细胞系:PC12细胞
浓度:1 μM 孵育时间:24小时 结果:抑制了CGS21680诱导的A2A受体mRNA水平升高。 为了测定钙离子浓度,将PC12细胞培养于12孔板中,直至汇合度达到85-90%。为了评估ZM241385对Ca2+转运的影响,将细胞在不含Ca2+和Mg2+的D-PBS中用1.0 μM ZM241385预处理40分钟,然后用1.0 μM CGS21680继续孵育3小时。离心后,使用钙离子检测试剂盒测定上清液中的细胞外Ca2+浓度。 [1] 对于 mRNA 分析,将 PC12 细胞用 1.0 μM ZM241385 处理 6 小时,处理组添加或不添加 1.0 μM CGS21680。提取总 RNA 并进行逆转录。使用 SYBR Green 染料和 A2AR 特异性引物进行实时定量 PCR。采用 2-ΔΔCt 法计算相对基因表达量。[1] 对于 Western blot 分析,将 PC12 细胞用 1.0 μM ZM241385 处理 48 小时,处理组添加或不添加 1.0 μM CGS21680(或先预处理 30 分钟,再共培养 48 小时)。裂解细胞,通过 SDS-PAGE 分离蛋白质,转移至膜上,并用抗 A2AR 抗体或抗 p44/42 MAPK 和抗磷酸化 p44/42 MAPK 抗体进行检测。通过密度扫描法检测并定量条带。[1] 为测定ATP,将PC12细胞与1.0 μM ZM241385孵育6小时。收集细胞,提取细胞外液,并使用基于荧光素酶的检测方法测定细胞内ATP水平。[1] 为检测腺苷(ADO),将PC12细胞在含有1.0 μM CGS21680和1.0 μM ZM241385(或SMF)的D-PBS缓冲液中孵育3小时。收集细胞外液,并使用Novapak C18色谱柱,以磷酸二氢钾缓冲液(pH 5.5)和甲醇/水(60:40)的梯度洗脱(35分钟内0-40%)进行HPLC分析。通过与ADO标准品的保留时间进行比较来鉴定峰。 [1] 对于 cAMP 检测,将 5.0×10⁵ 个细胞置于含有 1.0 U/mL 腺苷脱氨酶的新鲜培养基中,并与 1.0 μM ZM241385 孵育 3 小时。收集细胞,用 0.1 M HCl 裂解 20 分钟,离心,并使用 cAMP 酶免疫测定试剂盒检测上清液。[1] 对于亚硝酸盐检测,将 PC12 细胞与 1.0 μM ZM241385 孵育 24 小时。收集培养基样品,并与 Griess 试剂混合。室温孵育 30 分钟后,在 548 nm 处测量吸光度,并与亚硝酸钠标准曲线进行比较。 [1] 为了测量神经突生长,将生长在盖玻片上的PC12细胞传代24小时后,更换为分化培养基(含1.0%马血清和25 ng/mL NGF)。细胞用1.0 μM CGS21680预处理30分钟,随后加入1.0 μM ZM241385继续培养三天。细胞用F-肌动蛋白偶联荧光鬼笔环肽染色,封片后成像。神经突长度至少为细胞直径1.5倍的细胞被计数为分化细胞。[1] 为了定量铁含量,将生长在48孔板中的PC12细胞与1.0 μM ZM241385(有或无1.0 μM CGS21680)孵育,然后暴露于50 μM FeSO4中2小时。细胞洗涤、冻存后用NaOH裂解。将样品与盐酸和高锰酸钾混合,在 60°C 下加热 2 小时,然后加入含有菲罗嗪、新铜灵、乙酸铵和抗坏血酸的检测溶液。在 550 nm 处读取吸光度,并与硫酸亚铁标准曲线进行比较。[1] |
| 动物实验 |
雌性 C57BL/6 WT 小鼠接受 4-硝基喹啉-N-氧化物(4NQO)治疗,剂量分别为 0.2 μg/只和 0.4 μg/只,每日腹腔注射,持续 11 周。ZM241385 溶于 DMSO、Cremopher 和 ddH2O 中,DMSO:Cremopher:ddH2O 的比例为 1:1:4。从实验第 16 周开始,每天对小鼠进行低剂量(0.2 μg ZM/只)或高剂量(0.4 μg ZM/只)的腹腔注射。在治疗前,小鼠先用 4NQO(饮用水中浓度为 100 μg/ml)处理 16 周,以诱导口腔鳞状细胞癌。[4]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在浓度比阻断 A₂ₐ 受体的浓度高三个数量级时,ZM241385 在离体组织中未显示出显著的额外药理作用。在浓度比 A₂ₐ 受体阻断浓度高 3-4 个数量级时,对卡巴胆碱诱导的心动过缓和异丙肾上腺素诱导的舒张作用有轻微的抑制作用。[3]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
4-[2-[[7-氨基-2-(2-呋喃基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-5-基]氨基]乙基]苯酚是一种二氨基-1,3,5-三嗪类化合物。
ZM241385 是一种强效、选择性的非黄嘌呤类腺苷A2A受体拮抗剂。它正在作为帕金森病(PD)的候选药物进行评估。文献指出,像ZM241385这样的A2A受体拮抗剂在临床应用中面临着一些药理学障碍,包括口服生物利用度低和血脑屏障(BBB)通透性差。该研究比较了静态磁场(SMF)暴露与ZM241385的作用,发现SMF在PC12细胞中重现了ZM241385的多种细胞效应,包括钙离子内流改变、ATP增加、cAMP减少、一氧化氮减少、p44/42 MAPK磷酸化降低、细胞增殖抑制和铁摄取减少,以及拮抗CGS21680诱导的效应。[1] |
| 分子式 |
C16H15N7O2
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|---|---|
| 分子量 |
337.34
|
| 精确质量 |
337.128
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| 元素分析 |
C, 56.97; H, 4.48; N, 29.07; O, 9.49
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| CAS号 |
139180-30-6
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| 相关CAS号 |
139180-30-6
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| PubChem CID |
176407
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.791
|
| LogP |
0.89
|
| tPSA |
127.39
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
25
|
| 分子复杂度/Complexity |
435
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O1C([H])=C([H])C([H])=C1C1N=C2N=C(N=C(N([H])[H])N2N=1)N([H])C([H])([H])C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])O[H]
|
| InChi Key |
PWTBZOIUWZOPFT-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H15N7O2/c17-14-20-15(18-8-7-10-3-5-11(24)6-4-10)21-16-19-13(22-23(14)16)12-2-1-9-25-12/h1-6,9,24H,7-8H2,(H3,17,18,19,20,21,22)
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| 化学名 |
4-[2-[[7-amino-2-(furan-2-yl)-[1,2,4]triazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-5-yl]amino]ethyl]phenol
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| 别名 |
ZM-241385; ZM241385; 139180-30-6; ZM241385; ZM 241385; ZM-241385; 4-(2-((7-amino-2-(furan-2-yl)-[1,2,4]triazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-5-yl)amino)ethyl)phenol; 4-(2-[7-Amino-2-(2-furyl)[1,2,4]triazolo[2,3-a][1,3,5]triazin-5-ylamino]ethyl)phenol; 4-[2-[[7-amino-2-(furan-2-yl)-[1,2,4]triazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-5-yl]amino]ethyl]phenol; 5NIC36BO71; ZM 241385
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ≥ 30 mg/mL (~88.9 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.17 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (6.17 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.17 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9644 mL | 14.8218 mL | 29.6437 mL | |
| 5 mM | 0.5929 mL | 2.9644 mL | 5.9287 mL | |
| 10 mM | 0.2964 mL | 1.4822 mL | 2.9644 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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