| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
P2X4 Receptor
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| 体外研究 (In Vitro) |
5-BDBD 的 IC50 为 0.75 μM，浓度依赖性地抑制表达 rP2X4R 的 HEK293 细胞中 10 μM ATP 产生的电流 [1]。 5-BDBD 导致 EC50 从 4.7 μM 增加至 15.9 μM，从而导致 ATP 浓度响应曲线向右移动 [1]。 P2X1R、P2X2aR、P2X2bR、P2X3R、P2X4R 和 P2X7R 都可以使用 5-BDBD 来区分 [1]。
P2X受体（P2XR）是一个ATP门控离子通道家族，在许多可兴奋和不可兴奋细胞中表达。尽管在过去的几十年里，这些受体的结构和功能有了很大的进步，但仍然缺乏针对P2XRs亚型，特别是P2X4R的特异性和强效拮抗剂。在这里，研究人员详细研究了P2X4R拮抗剂5-（3-溴苯基）-1,3-二氢-2H-苯并呋喃并[3,2-e]-1,4-二氮杂卓-2-酮（5-BDBD）对大鼠P2X4R介导的ATP诱导电流的影响，并比较了其在另一只大鼠P2XR中的特异性。研究人员发现，5-BDBD是一种强效的P2X4R拮抗剂，在ATP刺激前和期间应用2分钟时，IC50为0.75μM。此外，在10μM浓度下，5-BDBD不影响ATP诱导的P2X2aR、P2X2bR和P2X7R电流幅度或受体脱敏模式。然而，在10μM而非0.75μM的浓度下，5-BDBD分别抑制了P2X1R和P2X3R门控电流13%和35%。此外，研究人员在大鼠海马切片中进行的长期增强实验中研究了5-BDBD的作用，发现这种拮抗剂可以部分降低LTP，这种反应被认为部分由内源性P2X4Rs介导。这些结果表明，5-BDBD可用于研究P2X4R在中枢神经系统中的内源性作用，当它们在同一组织中共表达时，这种拮抗剂可以区分P2X4R和其他P2XR[1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
5-BDBD（28 mg/kg；腹膜内注射；每天一次，持续 9 天）可以实现对反复 NTG 注射引起的基础痛觉过敏的整个出疹反应 [2]。
研究人员使用了一种反复间歇性给予硝酸甘油（NTG）的动物模型，该模型与CM非常相似。使用von Frey细丝试验评估了NTG诱导的基础和急性机械超敏反应。然后，研究人员检测了三叉神经尾侧核（TNC）中Iba1免疫反应性（Iba1-IR）和P2X4R的表达。为了了解小胶质细胞和P2X4R对CM中枢敏化的影响，研究人员研究了小胶质细胞活化抑制剂米诺环素和P2X4R拮抗剂5-BDBD是否改变了NTG诱导的机械性痛觉过敏。此外，研究人员还评估了5-BDBD对TNC内c-Fos和降钙素基因相关肽（CGRP）表达的影响。 结果：慢性间歇性给予NTG可导致急性和慢性基础机械性痛觉过敏，伴有小胶质细胞活化和P2X4R表达上调。米诺环素显著降低了基底痛超敏反应，但没有改变NTG诱导的急性痛觉过敏。米诺环素也减少了小胶质细胞的活化。5-BDBD完全阻断了NTG诱导的基础和急性痛觉过敏。这种作用与NTG诱导的TNC中c-Fos蛋白和CGRP释放增加的显著抑制有关。 结论：研究结果表明，阻断小胶质细胞活化可能对预防偏头痛慢性化有作用。此外，研究人员推测P2X4R可能与TNC中的小胶质细胞神经元信号有关，这有助于CM的中枢敏化[2]。 |
| 细胞实验 |
受体转染和电流测量。[1]
用大鼠P2XR进行实验。HEK293细胞常规保存在含有10%（v/v）胎牛血清和100µg/ml庆大霉素的DMEM中。细胞以每35mm培养皿500000个细胞的密度铺板。使用2µg DNA和5µl LipofectAMINE 2000试剂在2ml无血清Opti-MEM中接种细胞24小时后进行瞬时转染。孵育4.5小时后，用正常培养基替换转染混合物。实验在转染后24-48小时进行。在记录之前，转染的细胞被机械分散并在35毫米的培养皿上重新培养2-10小时。使用全细胞膜片钳记录技术在室温下对细胞进行电生理实验。使用Axopatch 200B膜片钳放大器记录电流，并使用低通贝塞尔滤波器在2kHz下进行滤波。使用Flaming Brown水平拉拔器，将由硼硅酸盐玻璃制成的贴片电极热抛光至2-4M的最终尖端电阻Ω. 使用pClamp 9软件包结合Digidata 1322A模数转换器捕获并存储所有当前记录。贴片电极填充有含有以下物质（单位为mM）的溶液：142 NaCl、1 MgCl2、10 EGTA和10 HEPES，用10 M NaOH将pH值调节至7.35。内溶液的渗透压为306 mOsm。浴液含有以下物质（单位为mM）：142 NaCl、3 KCl、1 MgCl2、2 CaCl2、10葡萄糖和10 HEPES，用10 M NaOH将pH值调节至7.35。该溶液的渗透压为295–305 mOsm。每天在浴缓冲液中制备ATP，并使用快速溶液更换系统进行应用。在二甲亚砜中制备5-BDBDB储备溶液，并将等分试样储存在-20°C下。记录了夹在-60 mV下的单个细胞的电流反应。浓度-反应数据是从施加到单个细胞的ATP浓度范围的记录中收集的，每次施加之间的洗脱间隔为1-5分钟，并归一化为最高电流幅度。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：雄性C57BL/6小鼠[2]
剂量：28 mg/kg 给药途径：腹腔注射；每日一次，连续9天 实验结果：预防硝酸甘油诱导的机械性过敏。 海马切片制备。[1] 断头后，将脑组织迅速浸入冰冷的解剖缓冲液中，该缓冲液含有（单位：mM）：212.7蔗糖；5 KCl；1.25 NaH2PO4；3 MgSO4；1 CaCl2；26 NaHCO3；以及10葡萄糖；pH 7.4。解剖海马，并使用振动切片机从中间三分之一处获得横切片（厚度为400 µm）。将脑片转移至含有饱和95% O₂/5% CO₂的人工脑脊液（aCSF）的界面储存室，并在37℃下至少放置1小时。之后，将脑片置于aCSF中，或在记录前分别用5-BDBD、PPADS或AF-353孵育1小时。aCSF的成分（单位：mM）为：124 NaCl；5 K₁；1.25 NaH₂PO₄；1.0 MgCl₂；2.0 CaCl₂；26 NaHCO₃；10葡萄糖；pH 7.4。随后将单个脑片转移至记录室，使其完全浸没在aCSF中，并持续灌注（2 ml/min）。 长时程增强（LTP）实验。 [1] 使用连接至刺激隔离器的双极电极，在Schaffer侧支通路处，每隔15秒对对照组和5-BDBD孵育的海马进行电刺激（双相恒流刺激，200 μs），并在放射层记录电刺激信号，以观察CA1区场突触后电位（fEPSP）。记录电极为充满人工脑脊液（ACSF）的玻璃微电极（1–2 MΩ）。在每次实验开始时，通过逐渐增加刺激强度，直至达到最大反应的50%，绘制刺激-反应曲线。在20分钟的稳定基线期后，通过θ节律刺激（TBS）诱发长时程增强（LTP）。TBS包含5组刺激，组间间隔为10秒。每个刺激序列包含10个5 Hz的脉冲串，每个脉冲串包含4个100 Hz的脉冲。TBS刺激后，数据采集持续1小时。数据采集使用细胞外放大器和数据采集板（美国国家仪器公司，德克萨斯州奥斯汀），并通过Igor Pro软件进行控制。LTP值通过将fEPSP归一化，并将基线值设为100%来构建。LTP的幅度在TBS刺激后40至60分钟之间观察到。为了解小胶质细胞和P2X4R对NTG诱导的痛觉过敏的影响，我们用小胶质细胞抑制剂米诺环素或P2X4R选择性拮抗剂5-BDBD处理动物。米诺环素和5-BDBD均溶解于DMSO溶液中，DMSO溶液用作溶剂对照。在注射硝酸甘油/生理盐水之前，立即给予小鼠米诺环素/载体或5-BDBD/载体[14, 15]。测试日小鼠的处理方法如下：小鼠适应测试室后，15-20分钟后测量机械阈值基线值，然后腹腔注射米诺环素（30 mg/kg）、5-BDBD（28 mg/kg）或载体；之后注射硝酸甘油/生理盐水，2小时后测试急性机械反应。此过程每隔一天重复一次，持续9天。[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
总之，我们已将5-BDBD鉴定为一种特异性的P2X4R拮抗剂。此类分子的开发将有助于明确P2XR在生理过程中的作用，并有助于设计用于治疗涉及这些受体的疾病的特异性药物。[1]在我们的研究中，CGRP免疫反应性纤维主要分布于三叉神经核（TNC）的浅层，这些纤维主要与伤害性信息的处理相关。5-BDBD预处理减轻了NTG诱导的TNC中CGRP免疫反应性的变化，从而调节了三叉神经系统的激活。P2X4R诱导CGRP释放的细胞机制可能与脑源性神经营养因子（BDNF）有关。先前的研究表明，在体外和体内，ATP刺激的小胶质细胞均可通过P2X4R信号通路释放BDNF。此外，BDNF可通过trkB受体调节感觉神经元中CGRP的表达和释放。慢性偏头痛的发生与三叉神经感觉通路的中枢敏化有关，该过程涉及小胶质细胞活化和P2X4R表达增加。抑制小胶质细胞可能有效预防偏头痛慢性化，但对终止急性偏头痛发作无效。此外，我们推测P2X4R可能参与三叉神经核（TNC）中的小胶质细胞-神经元信号传导。抑制P2X4R功能可能是慢性偏头痛的一种潜在治疗选择。[2]
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| 分子式 |
C17H11BRN2O2
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|---|---|
| 分子量 |
355.1854
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| 精确质量 |
354
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| 元素分析 |
C, 57.49; H, 3.12; Br, 22.50; N, 7.89; O, 9.01
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| CAS号 |
768404-03-1
|
| PubChem CID |
9841560
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| LogP |
3.505
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| tPSA |
58.09
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
1
|
| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
481
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
BrC1=C([H])C([H])=C([H])C(=C1[H])C1C2=C(C3=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C3O2)N([H])C(C([H])([H])N=1)=O
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| InChi Key |
NKYMVQPXXTZHSF-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H11BrN2O2/c18-11-5-3-4-10(8-11)15-17-16(20-14(21)9-19-15)12-6-1-2-7-13(12)22-17/h1-8H,9H2,(H,20,21)
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| 化学名 |
5-(3-bromophenyl)-1,3-dihydro-[1]benzofuro[3,2-e][1,4]diazepin-2-one
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| 别名 |
5-BDBD; 768404-03-1; 5-(3-Bromophenyl)-1,3-dihydro-2H-benzofuro[3,2-e]-1,4-diazepin-2-one; 5 BDBD;5BDBD; 5-(3-bromophenyl)-1,3-dihydro-[1]benzofuro[3,2-e][1,4]diazepin-2-one; CHEMBL2180179; DTXSID30431707; 5-(3-bromophenyl)-1,3-dihydro-(1)benzofuro(3,2-e)(1,4)diazepin-2-one;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~62.5 mg/mL (~175.96 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.86 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.86 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More
配方 3 中的溶解度: 9.8 mg/mL (27.59 mM) in 15% Solutol HS 15 10% Cremophor EL 35% PEG 400 40% water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8154 mL | 14.0770 mL | 28.1539 mL | |
| 5 mM | 0.5631 mL | 2.8154 mL | 5.6308 mL | |
| 10 mM | 0.2815 mL | 1.4077 mL | 2.8154 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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