8-Br-cGMP   中文名称: 8-溴鸟苷3,5-环磷酸钠盐

PKG (protein kinase G)

8-Bromo-cGMP 钠（1-100 μM；8 小时）可以以浓度依赖性方式增强 LLC-PK1 细胞对 CsA 毒性的抵抗力 [3]。 HO-1 蛋白合成由 8-Bromo-cGMP 钠（1-100 μM；16 小时）以浓度依赖性方式诱导 [3]。

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本研究使用培养的近端肾小管上皮细胞（LLC-PK1），研究了心钠素（ANP）对环孢素A（CsA）诱导的细胞毒性的影响。用ANP（1-100nM）预孵育以浓度依赖的方式保护LLC-PK1细胞免受CsA诱导的毒性。当用8-溴cGMP（1-100微M）或抗氧化血红素加氧酶（HO）代谢产物胆红素（0.1-10微M）预孵育细胞时，观察到与ANP相当的细胞保护作用。ANP或cGMP在对细胞保护有效的浓度下使HO-1蛋白水平升高。此外，与ANP或8-Bromo-cGMP一起孵育会导致HO活性增加，即细胞裂解物中胆红素的形成（高达基础水平的3倍）。锡原卟啉IX（SnPP；19 microM）是HO活性的抑制剂，完全消除了ANP诱导的细胞保护作用。我们的研究结果表明，HO-1是肾细胞中ANP和cGMP的细胞靶标。HO-1的诱导和随后抗氧化代谢物的形成可能是ANP保护CsA依赖性肾毒性并保护肾功能的新途径。[3]

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ANP和cGMP的保护作用[3]
与CsA一起孵育（48小时）导致明显的细胞毒性和细胞存活率降低。在1-100 nM（8小时）的ANP预孵育下，CsA毒性以浓度依赖的方式降低，存活细胞分数提高了70%（图1）。在较短的预孵育时间后，ANP的细胞保护作用不太明显，当CsA和ANP同时添加到细胞中时无法检测到（未显示）。膜渗透性cGMP类似物8-Bromo-cGMP（1-100μM）也观察到类似的细胞保护作用。8-Bromo-cGMP在1-100μM的浓度下，以浓度依赖的方式增加了LLC-PK1细胞对CsA毒性的抵抗力，并将细胞存活率提高了65%（图2）。在这些条件下，单独使用ANP和8-溴cGMP对细胞存活率没有显著影响（未显示）。[3]

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ANP和cGMP增加HO活性和表达[3]
细胞暴露于ANP或8-Bromo-cGMP16小时。通过测量HO代谢物胆红素的形成来评估细胞裂解液中的HO活性。ANP（0.1-1μM）使HO活性随浓度增加，比基础水平高出2.9倍（图5）。当细胞与8-Bromo-cGMP（0.1-100μM）一起孵育时，也得到了类似的结果。在8-溴cGMP存在的情况下，检测到HO活性的浓度依赖性刺激，最大增加2.4倍（图6）。HO活性的刺激对应于HO-1蛋白合成的增加，见图7、图8。ANP（1-100 nM）和8-Bromo-cGMP（1-100μM）以浓度依赖的方式诱导HO-1蛋白的合成，并分别使基础HO-1蛋白表达增加3.1倍和3.7倍，见图7、图8。

在用长春新碱治疗直至载体治疗的第一小时的小鼠中，8-溴-cGMP钠（0.3、1、3.0nmol；鞘内注射；测试前10分钟）显着且剂量依赖性地增加甩尾潜伏期。在 4 周龄时体重为 20 克的雄性 ICR 小鼠中观察到的水平。当在甩尾潜伏期后一天以 0.05 mg/kg 的剂量给予小鼠长春新碱，然后每周两次给予 0.125 mg/kg 的剂量，持续六周时，长春新碱可引起小鼠难以忍受的神经病变 [4]。在 C57BL/6 背景（19–35 g）上，8-溴-cGMP 钠（10 mg/kg；静脉注射；单剂量）会引起 WT 同窝小鼠和 eNOS-Tg 小鼠的血管舒张反应 [5]。

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大鼠福尔马林试验用于评估环鸟苷单磷酸（cGMP）类似物8-Bromo-cGMP对腰髓伤害性和cGMP依赖性蛋白激酶I（蛋白激酶G；PKG-I）表达的影响。鞘内（i.t.）输送低剂量的8-溴-cGMP（0.1-0.25μmol）减少了脊髓中的伤害性行为和福尔马林诱导的PKG-i上调。中等剂量（0.5-1μmol i.t.）没有效果，高剂量（2.5μmol i.t.）引起痛觉过敏，与PKG-i表达和PKG-i片段的进一步增加有关。为了解释这些剂量依赖性的相反效应，我们评估了各种cGMP靶点的潜在参与：蛋白激酶G、环核苷酸门控阳离子通道（CNG）、磷酸二酯酶（PDE2和PDE3）和AMPA受体。PKG抑制剂Rp-8-溴-cGMP不会拮抗8-bromo-cGMP的镇痛作用，但会引起镇痛作用。CNGs、PDE2和PDE3抑制剂对福尔马林诱发的伤害性行为没有影响。然而，S-AMPA拮抗了8-Bromo-cGMP的镇痛作用。由于在体外发现8-溴-cGMP会降低AMPA受体电流，因此直接或间接降低AMPA感受器电流可能有助于8-溴-cMP的镇痛作用。另一方面，8-溴-cGMP诱发的镇痛作用似乎在很大程度上独立于PKG-I、CNG、PDE2和PDE3。PKG抑制剂的镇痛作用表明，强烈的PKG激活可能是“高剂量”8-Bromo-cGMP诱发痛觉过敏的原因。[2]

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一氧化氮（NO）在调节血管张力方面起着关键作用。过表达内皮NO合酶[eNOS转基因（Tg）]的小鼠的全身血管阻力（SVR）比野生型（WT）小鼠低20%。然而，由于eNOS Tg小鼠组织匀浆中的eNOS酶活性高出10倍，这种体内效应相对较小。我们假设eNOS过表达的影响会因NO信号传导的改变和/或其他血管调节途径的改变而减弱。在异氟烷麻醉的开胸小鼠中，与野生型小鼠相比，eNOS抑制使eNOS Tg小鼠的SVR显著增加，这与NO合成增加一致。与野生型小鼠相比，eNOS Tg中对硝普钠（SNP）的血管舒张作用减少，而对磷酸二酯酶-5阻断和8-Bromo-cGMP（8-Br-cGMP）的血管扩张反应得以维持，这表明鸟苷酸环化酶对NO的反应性减弱，这得到了鸟苷酸循环酶活性降低的支持。没有证据表明eNOS解偶联，因为清除活性氧（ROS）在eNOS Tg小鼠中产生的血管舒张作用更小，而在eNOS抑制后，WT和eNOS Tg鼠对ROS清除的血管舒张反应相似。有趣的是，抑制血管张力的其他调节剂[包括环氧化酶、细胞色素P-450 2C9、内皮素、腺苷和钙激活的K（+）通道]对eNOS Tg或WT小鼠的SVR没有显著影响，而WT和eNOS Tg小鼠对ATP敏感的K（＋）和电压依赖性的K（＋＋）通道阻断的明显血管收缩反应相似。总之，eNOS过表达的血管舒张作用因NO反应性减弱而减弱，可能在鸟苷酸环化酶水平，没有证据表明eNOS解偶联或适应其他血管调节途径[5]。

cGMP可能抑制或促进脊髓中伤害性刺激的突触传递。因此，先前观察到的NO的双重作用与cGMP的双重作用相对应，cGMP诱导的痛觉过敏明显涉及PKG- i的激活和上调，而cGMP诱导的抗痛觉作用与PKG无关。由于抗伤感受作用所需的cGMP少得多，因此抗伤感受似乎是主要作用。[1]

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HO活性[3]
将150mm培养皿中的汇流LLC-PK1细胞在对照培养基、ANP或8-Bromo-cGMP存在下孵育16小时。用于测定HO活性的方法遵循Motterlini及其同事发表的方案。简而言之，孵育后，用磷酸缓冲盐水洗涤细胞两次，轻轻刮掉培养皿，并离心（1000×g，在4°C下离心10分钟）。将细胞沉淀悬浮在MgCl2（2 mM）磷酸盐（100 mM）缓冲液（pH 7.4）中，在-70°C下冷冻，解冻3次，最后在冰上超声处理，然后在4°C下以18000×g离心10分钟。将上清液（400μl）加入NADPH生成系统，该系统含有0.8 mM NADPH、2 mM葡萄糖-6-磷酸、0.2 U葡萄糖-6-磷酸-1-脱氢酶和2 mg大鼠肝细胞质蛋白，由105000×g上清液部分制备，作为胆绿素还原酶、磷酸钾缓冲液（100 mM，pH 7.4）和氯化血红素（10μM）的来源，最终体积为200μl。反应在37°C下在黑暗中进行1小时，并通过加入1ml氯仿终止。使用石英比色皿通过464和530 nm之间的吸收差计算提取的胆红素（胆红素的消光系数为40 mM−1×cm−1）。HO活性以每小时每毫克内皮细胞蛋白形成的胆红素皮摩尔数来测量。基础HO活性在200至600 pmol胆红素/mg蛋白/h的范围内。

细胞活力测定 [3]
细胞类型： LLC-PK1 细胞 (ATCC CL 101)
测试浓度： 1-100 μM
孵育持续时间：8小时
实验结果：LLC-PK1细胞对环孢素A（CsA）毒性的耐受性增加，且呈浓度依赖性和增强细胞活力提高高达 65%。

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蛋白质印迹分析 [3]
细胞类型： LLC-PK1 细胞 (ATCC CL 101)
测试浓度： 1-100 μM
孵育持续时间：16 hrs（小时）
实验结果：以浓度依赖性方式诱导 HO-1 蛋白的合成。

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细胞活力分析[3]
在含有15%胎牛血清的100μl培养基中，将LLC-PK1细胞以2×104个细胞/孔的速度接种在96孔微量滴定板上。在37°C下孵育24小时后，细胞达到融合，并在ANP、胆红素或8-Bromo-cGMP存在下孵育8小时。在ANP前10分钟加入SnPP。然后，在不洗掉先前添加的试剂的情况下，将CsA给予细胞。在37°C下继续孵育48小时，然后进行细胞毒性试验。如前所述，通过用结晶紫染色来测量细胞存活率。这种比色测试可以评估孵育程序后剩余的活细胞。用磷酸缓冲盐水洗涤细胞，用甲醇固定5分钟，然后用0.1%结晶紫溶液染色10分钟。用自来水洗涤3次后，用0.1M柠檬酸三钠在50%乙醇中洗脱染料10分钟。使用微量滴定板读数器测量630nm处的光密度。

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蛋白质印迹分析[3]
如上所述，LLC-PK1在150mm培养皿中培养。用对照培养基、ANP或8-Bromo-cGMP孵育16小时后，如前所述洗涤和提取细胞。蛋白质（100μg）用于十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳后，将蛋白质转移到硝化纤维膜上，使用大鼠HO-1多克隆抗体鉴定HO-1蛋白质含量。根据制造商的说明，用辣根过氧化物酶化学发光系统观察抗原抗体复合物。使用计算机辅助视频密度测定法对HO-1蛋白含量进行定量。

本研究采用大鼠福尔马林模型评估环磷酸鸟苷（cGMP）类似物8-溴-cGMP对腰椎脊髓痛觉和cGMP依赖性蛋白激酶I（蛋白激酶G；PKG-I）表达的影响。鞘内注射低剂量8-溴-cGMP（0.1–0.25 μmol）可降低痛觉行为和福尔马林诱导的脊髓PKG-I表达上调。中剂量（0.5–1 μmol）无此作用，而高剂量（2.5 μmol）则引起痛觉过敏，并伴有PKG-I表达进一步增加和PKG-I阻断。为了解释这些剂量依赖性的相反效应，我们评估了各种cGMP靶点的潜在参与：蛋白激酶G（PKG）、环核苷酸门控阳离子通道（CNG）、磷酸二酯酶（PDE2和PDE3）以及AMPA受体。PKG抑制剂Rp-8-溴-cGMP并未拮抗8-溴-cGMP的镇痛作用，反而产生了镇痛效果。CNG、PDE2和PDE3抑制剂对福尔马林诱发的伤害性行为没有影响。然而，S-AMPA拮抗了8-溴-cGMP的镇痛作用。由于体外实验发现8-溴-cGMP可降低AMPA受体电流，因此AMPA受体电流的直接或间接降低可能有助于8-溴-cGMP的镇痛作用。另一方面，8-溴-cGMP 诱导的镇痛作用似乎很大程度上独立于 PKG-I、CNG、PDE2 和 PDE3。PKG 抑制剂的镇痛作用表明，强烈的 PKG 激活可能是高剂量 8-溴-cGMP 诱导痛觉过敏的原因。[2]\n

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\n\n为了更深入地了解 cGMP 在 NO 诱导的痛觉过敏和镇痛中的作用，我们评估了不同剂量脊髓内注射的 8-溴-cGMP 对大鼠后爪注射福尔马林后伤害性行为和脊髓中 PKG-I 表达改变的影响。此外，我们还评估了包括 CNG 通道、PDE2 和 PDE3 以及 AMPA 受体在内的 PKG 非依赖性 cGMP 靶点的参与情况。 [2]
\n本研究使用雄性Sprague-Dawley大鼠（330-370 g）。药物通过腰椎鞘内（it）导管（12-13 cm聚乙烯管）注入，注入量为10 μl人工脑脊液（ACSF），随后用10 μl ACSF冲洗。10分钟后，将50 μl 5%福尔马林皮下注射到一只后爪的背侧。由一位不知晓分组情况的观察者记录大鼠的畏缩反应，持续60分钟，每隔1分钟记录一次。福尔马林注射后1-96小时处死大鼠，并取出腰椎脊髓。[2]
\n我们首先评估了cGMP类似物8-溴-cGMP对福尔马林致痛行为和腰椎脊髓中PKG-I表达的影响（每组5-8只动物）。我们还评估了 PKG 抑制剂 Rp-8-溴-cGMP（PKG 激活剂）的作用是否被拮抗。在研究的第二部分，我们探讨了 cGMP 调控但 PKG 非依赖性通路可能参与其中。因此，我们评估了 CNG 通道抑制剂 L-顺式-地尔硫卓（0.5 mg 肠溶）、PDE2 抑制剂赤式-羟基-壬基-腺嘌呤（EHNA，0.25 μmol 肠溶）、PDE3 抑制剂米力农（5 和 10 mg/kg 腹腔注射）以及 S-AMPA 对 8-溴-cGMP 诱导效应的影响（每组 4 至 6 只大鼠）。剂量选择基于既往研究，且处于耐受剂量的上限。该研究的每个部分都包括六只对照动物（ACSF it）。[2]

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\n\n全身血管NO信号传导的改变。[5]
\n为了证实先前的观察结果，即eNOS导致eNOS-Tg小鼠全身血管床的血管张力降低，我们首先研究了eNOS抑制剂l-NAME（100 mg/kg）对10只野生型和10只eNOS-Tg小鼠的影响。随后，为了研究 NO 信号转导通路的变化，我们测定了对 eNOS 依赖性血管舒张剂乙酰胆碱（ACh，200 μg/kg）（10 只 WT 小鼠和 10 只 eNOS-Tg 小鼠）、NO 供体硝普钠（SNP，300 μg/kg）（15 只 WT 小鼠和 15 只 eNOS-Tg 小鼠）、PDE5 抑制剂 EMD-360527（EMD，30 mg/kg）（10 只 WT 小鼠和 10 只 eNOS-Tg 小鼠）或 PKG 激活剂 8-溴-cGMP（8-Br-cGMP，10 mg/kg）（10 只 WT 小鼠和 10 只 eNOS-Tg 小鼠）的全身血管舒张反应。

[1]. Nitric oxide attenuates overexpression of Giα proteins in vascular smooth muscle cells from SHR: Role of ROS and ROS-mediated signaling. PLoS One. 2017 Jul 10;12(7):e0179301.

[2]. Dual effects of spinally delivered 8-bromo-cyclic guanosine mono-phosphate (8-bromo-cGMP) in formalin-induced nociception in rats. Neurosci Lett. 2002 Oct 31;332(2):146-50.

[3]. Atrial natriuretic peptide reduces cyclosporin toxicity in renal cells: role of cGMP and heme oxygenase-1. Free Radic Biol Med. 2002 Jan 1;32(1):56-63.

[4]. Possible involvement of the spinal nitric oxide/cGMP pathway in vincristine-induced painful neuropathy in mice. Pain. 2005 Sep;117(1-2):112-20.

[5]. Vasomotor control in mice overexpressing human endothelial nitric oxide synthase. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2007 Aug;293(2):H1144-53.

8-溴-3',5'-环鸟苷酸钠是一种有机钠盐，其抗衡离子为8-溴鸟苷3',5'-环磷酸。它是一种可透过细胞膜的cGMP类似物，能够激活蛋白激酶G (PKG)。其激活PKG1α的效力是cGMP的4.3倍，并能促进体外气管和血管平滑肌组织的舒张。它具有蛋白激酶G激动剂和肌肉松弛剂的作用。它含有8-溴-3',5'-环鸟苷酸(1-)基团。

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自发性高血压大鼠(SHR)的血管平滑肌细胞(VSMC)中一氧化氮(NO)水平降低，这可能是导致Giα蛋白过度表达的原因，而Giα蛋白的过度表达已被证实是SHR高血压发病机制的一个促成因素。本研究旨在探讨NO供体S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺（SNAP）提高细胞内NO水平是否能减弱自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC）中Giα蛋白的过度表达，并探索其潜在机制。采用特异性抗体进行Western blotting检测Giα蛋白的表达以及ERK1/2、生长因子受体和c-Src的磷酸化水平。SNAP处理SHR VSMC 24小时后，Giα-2和Giα-3蛋白的过度表达和过度增殖均显著降低，且该作用不能被可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂1H(1,2,4)恶二唑(4,3-a)喹喔啉-1-酮（ODQ）逆转。然而，MEK抑制剂PD98059可使SNAP诱导的Giα蛋白表达降低恢复至对照水平。此外，SNAP处理后，SHR血管平滑肌细胞（VSMC）中超氧阴离子生成增加、NAD(P)H氧化酶活性增强、AT1受体、Nox4、p22phox和p47phox蛋白过表达、TBARS和蛋白羰基水平升高、PDGF-R、EGF-R、c-Src和ERK1/2磷酸化水平升高等指标均恢复至对照水平。这些结果表明，NO通过非cGMP依赖性机制降低SHR VSMC中Giα-2/3蛋白的过表达和过度增殖，并涉及ROS及其介导的EGF-R/PDGF-R和MAP激酶信号通路的转录激活。[1]

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本研究利用培养的近端肾小管上皮细胞（LLC-PK1），探讨了心房利钠肽（ANP）对环孢素A（CsA）诱导的细胞毒性的影响。用ANP（1-100 nM）预孵育可浓度依赖性地保护LLC-PK1细胞免受CsA诱导的毒性作用。用8-溴-cGMP（1-100 μM）或抗氧化剂血红素加氧酶（HO）代谢产物胆红素（0.1-10 μM）预孵育细胞时，观察到与ANP相当的细胞保护作用。ANP或cGMP在有效保护细胞的浓度下可提高HO-1蛋白水平。此外，用ANP或8-溴-cGMP孵育可增加HO活性，即细胞裂解液中胆红素的生成（最高达基础水平的3倍）。HO活性抑制剂锡原卟啉IX（SnPP；19 μM）可完全消除ANP诱导的细胞保护作用。我们的研究结果表明，HO-1是肾细胞中ANP和cGMP的靶点。HO-1的诱导及其后续抗氧化代谢物的生成可能是ANP保护肾脏免受CsA依赖性肾毒性并维持肾功能的新途径。[3] 逆行信使NO被认为能够促进或抑制脊髓中伤害性刺激的突触传递。这两种可能性之间的选择可能取决于释放到突触间隙中的NO分子数量。NO诱导的痛觉过敏被认为是通过激活cGMP/PKG通路介导的。作为佐证，我们发现高剂量PKG激活剂cGMP类似物8-溴-cGMP可诱导痛觉过敏。然而，低剂量脊髓内注射8-溴-cGMP可显著降低福尔马林试验中的伤害性行为。这种效应似乎与PKG无关，因为PKG抑制剂Rp-8-Br-cGMPS不仅无法逆转该效应，反而具有叠加效应。其他潜在的cGMP靶点，包括CNG通道、PDE2和PDE3，可能也与8-溴-cGMP诱发的镇痛作用无关，因为相对高剂量的相应拮抗剂——CNG通道拮抗剂L-顺式-地尔硫卓、PDE2拮抗剂EHNA和PDE3拮抗剂米力农——对伤害性行为没有影响。最近的研究发现，8-溴-cGMP能够抑制海马神经元中谷氨酸诱导的AMPA受体电流，且该作用独立于PKG激活，提示8-溴-cGMP可能直接或间接阻断AMPA受体。在本研究中，鞘内注射S-AMPA完全消除了“低剂量”8-溴-cGMP的镇痛作用。结合已报道的体外研究结果，可以推测，AMPA受体诱发的兴奋性突触后电位（EPSP）的降低可能是低剂量8-溴-cGMP发挥镇痛作用的原因之一。然而，我们尚不清楚8-溴-cGMP是直接靶向AMPA受体，还是通过引起超极化从而非特异性地降低AMPA受体诱发的EPSP。因此，8-溴-cGMP镇痛作用的直接靶点仍然未知。正如先前研究所示，福尔马林处理可提高脊髓中PKG-I蛋白的水平。这种上调在1小时时即可观察到，并在48小时达到峰值。cGMP和cAMP最近均被证实是平滑肌中PKG基因表达的调节因子，但脊髓中PKG表达的调控机制尚不清楚。高剂量的8-溴-cGMP进一步增强了PKG-I的表达，并在Western blot中导致出现两条PKG条带，一条位于原始PKG大小73 kDa处，另一条位于65 kDa处。先前的研究表明，PKG可以被切割成一个具有催化活性的65 kDa片段，该片段无需与cGMP结合即可自发激活。因此，Western blot结果表明，高剂量8-溴-cGMP的给药导致了这种PKG片段的切割。由此产生的持续强烈的PKG激活可能解释了在高剂量8-溴-cGMP下出现的显著的畏缩行为增加和非特异性毒性作用。
总之，我们的研究结果表明，cGMP可能抑制或促进脊髓中伤害性刺激的突触传递。因此，先前观察到的NO的双重效应与cGMP的双重效应相呼应，其中cGMP诱导的痛觉过敏显然涉及PKG-I的激活和上调，而cGMP诱导的镇痛作用则与PKG无关。由于镇痛作用所需的cGMP量要少得多，因此镇痛似乎是其主要作用。[2]

C10H10BRN5NAO7P

446.08

444.939

C, 26.93; H, 2.26; Br, 17.91; N, 15.70; Na, 5.15; O, 25.11; P, 6.94

51116-01-9

31356-94-2 (Parent)

135419185

White to off-white solid powder

2.96 g/cm3

794.3ºC at 760 mmHg

434.2ºC

0.257

187.45

3

9

1

25

657

4

C1[C@@H]2[C@H]([C@H]([C@@H](O2)N3C4=C(C(=O)NC(=N4)N)N=C3Br)O)OP(=O)(O1)[O-].[Na+]

ZJRFCXHKYQVNFK-YEOHUATISA-M

InChI=1S/C10H11BrN5O7P.Na/c11-9-13-3-6(14-10(12)15-7(3)18)16(9)8-4(17)5-2(22-8)1-21-24(19,20)23-5;/h2,4-5,8,17H,1H2,(H,19,20)(H3,12,14,15,18);/q;+1/p-1/t2-,4-,5-,8-;/m1./s1

sodium;9-[(4aR,6R,7R,7aS)-7-hydroxy-2-oxido-2-oxo-4a,6,7,7a-tetrahydro-4H-furo[3,2-d][1,3,2]dioxaphosphinin-6-yl]-2-amino-8-bromo-1H-purin-6-one

8-Br-cGMP; 8BrcGMP; 8-Br-cGMP; 51116-01-9; 8-Br-cGMP; 8-Bromo-cGMP (sodium); 8-Bromoguanosine 3',5'-cyclic monophosphate sodium salt; 8-Bromo-cyclic GMP; CHEBI:64104; sodium 8-bromo-3',5'-cyclic GMP; MFCD00070128; 8-Bromo-cGMP (sodium); 8-Bromo-cyclic GMP; CHEBI:64104; sodium 8-bromo-3',5'-cyclic GMP; MFCD00070128; CID 16219005; 8 Br cGMP

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~100 mg/mL (~224.18 mM)

配方 1 中的溶解度: 100 mg/mL (224.18 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。