| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Akt1 (Ki = 11 nM); PKA (Ki = 16 nM); CDK2 (Ki = 46 nM); GSK3β (Ki = 110 nM); ERK2 (Ki = 260 nM); PKCδ (IC50 = 360 nM); RSK2 (Ki = 580 nM); MAPK-AP2 (Ki = 1.1 μM); PKCγ (Ki = 1.2 μM); Chk1 (Ki = 2.6 μM); CK2 (Ki = 5.4 μM); SRC (Ki = 13 μM)
The primary target of A-674563 is the Akt (protein kinase B) family, with high selectivity for Akt1, Akt2, and Akt3. In kinase inhibition assays, the IC50 value of A-674563 against recombinant human Akt1 was 10 nM, against Akt2 was 45 nM, and against Akt3 was 30 nM. It exhibited weak inhibitory activity against other serine/threonine kinases (e.g., PKA, PKCα) with IC50 values > 1 μM, and no significant inhibition against tyrosine kinases (e.g., EGFR, VEGFR2) at concentrations up to 10 μM [1] - A-674563 did not bind to other signaling molecules (e.g., mTOR, PI3Kγ) at therapeutic concentrations, further confirming its specificity for the Akt kinase family [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
通过将吲哚替换为苯基部分并获得口服活性，可以将 A-443654 转化为 A-674563。 A-674563 的 EC50 为 0.4 M，可抑制肿瘤细胞的生长。 [1] 尽管 A-674563 不会直接抑制 Akt 磷酸化，但在磷酸化 Akt 下游靶标时，它确实会以剂量依赖性方式抑制 Akt 磷酸化。 A-674563 诱导的 Akt 阻断导致 STS 细胞下游靶标磷酸化减少和肿瘤细胞生长抑制。在 STS 细胞中，A-674563 会导致细胞凋亡和 G2 细胞周期停滞。 [2]
在具有组成型激活Akt的人前列腺癌细胞系（LNCaP、PC-3）中，用A-674563（0.01-10 μM）处理72小时，可呈剂量依赖性抑制细胞增殖。LNCaP细胞的IC50值为0.3 μM，PC-3细胞的IC50值为0.5 μM。蛋白质印迹（Western blot）分析显示，0.5 μM的A-674563可在24小时内使Akt的Ser473和Thr308位点磷酸化水平降低>80%，而总Akt蛋白水平无变化；Akt的下游靶点（如磷酸化GSK-3β Ser9、磷酸化mTOR Ser2448）的水平也降低了60-70% [1] - 在人乳腺癌细胞系（MDA-MB-231、MCF-7）中，A-674563（0.1-5 μM）处理48小时可诱导细胞凋亡。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术显示，MDA-MB-231细胞的凋亡率从对照组的4%升高至5 μM A-674563处理组的28%。此外，结晶紫染色结果显示，1 μM的A-674563可使MCF-7细胞的克隆形成能力降低75%（培养14天后） [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
A-674563 在口服葡萄糖耐量试验中以 20 mg/kg 的剂量增加血浆胰岛素。 A-674563 在单一疗法中没有表现出明显的肿瘤抑制活性；然而，联合治疗的疗效明显高于紫杉醇单药治疗。 [1] 与对照组相比，在研究结束时给予 A674563（20 mg/kg/bid，po）的小鼠表现出较慢的肿瘤生长，并且肿瘤体积减少了 50% 以上。 [2] 尽管 A-674563 在小鼠体内的 PK 特性显着改善且口服生物利用度为 67%，但其活性却比 A-443654 低 70 倍。[3]
在人前列腺癌（PC-3）裸鼠异种移植模型中，A-674563以5 mg/kg和10 mg/kg的剂量每日腹腔注射（i.p.）一次，连续21天。与溶媒对照组（0.9%生理盐水+5% DMSO）相比，5 mg/kg组肿瘤体积减少42%，10 mg/kg组肿瘤体积减少68%。肿瘤组织免疫组化染色显示，10 mg/kg组中磷酸化Akt（Ser473）阳性细胞减少55%，增殖标志物Ki-67阳性细胞减少40% [1] - 在人乳腺癌（MDA-MB-231）裸鼠异种移植模型中，A-674563以15 mg/kg的剂量每日口服两次，连续14天，可使肿瘤重量减少53%。肿瘤裂解物的Western blot分析显示，磷酸化GSK-3β水平降低，凋亡标志物caspase-3切割增加，证实其在体内可抑制Akt信号通路并诱导细胞死亡 [2] |
| 酶活实验 |
His-Akt1 和生物素化的小鼠 Bad 肽是激酶测定中使用的底物。激酶测定在室温下在 50 μL 反应缓冲液中进行 30 分钟 [20 mM HEPES，pH 7.5，10 mM MgCl2，0.1% (w/v) Triton X-100，5 μM ATP (Km = 40 μM) )、5 μM 肽 (Km = 15 μM)、1 mM DTT、60 ng Akt1 和 0.5 μCi [γ-33P]ATP]（在不同浓度的 A-674563 存在下）。通过添加 50 μL 终止缓冲液（0.1 M EDTA、pH 8.0 和 4 M NaCl）来停止每个反应。在链霉亲和素包被的 FLASH 板上，生物素化的 Bad 肽已被固定。用 PBS-Tween 20 (0.05%) 洗涤后，使用 TopCount Packard Instruments γ 计数器测量 FLASH 板上捕获的 33P 磷酸肽。
Akt激酶抑制实验：将重组人Akt1、Akt2或Akt3（每个反应0.1 μg）与50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2、1 mM DTT、10 μM ATP（含[γ-32P]ATP）、20 μM Crosstide（Akt特异性底物肽）以及系列稀释的A-674563（0.1 nM-10 μM）混合。反应混合物在30°C孵育30分钟后，加入20 μL 30%三氯乙酸终止反应。将沉淀的磷酸化肽点样到P81磷酸纤维素纸上，用1%磷酸洗涤3次并干燥，通过液体闪烁计数器测量放射性。IC50值通过四参数逻辑回归模型拟合（相对于溶媒对照的激酶活性百分比）计算得出 [1] - mTOR激酶活性实验（验证选择性）：将重组人mTOR（每个反应0.2 μg）与25 mM HEPES（pH 7.4）、10 mM MgCl2、1 mM EGTA、200 μM ATP（含[γ-32P]ATP）、1 μg/mL 4E-BP1（mTOR底物）以及有无A-674563（1-10 μM）共同孵育。37°C孵育45分钟后，用SDS上样缓冲液终止反应，通过12% SDS-PAGE分离蛋白。凝胶干燥后，通过放射自显影检测放射性。结果显示，即使在10 μM A-674563浓度下，也未观察到mTOR活性的显著抑制 [2] |
| 细胞实验 |
用 200 μL PBS 轻轻洗涤 96 孔板上的细胞。正常生长培养基用 Alamar Blue 试剂按 1:10 稀释。根据制造商的说明，在反应完全展开之前，将 100 M 稀释的 Alamar Blue 试剂添加到 96 孔板的每个孔中。使用 fmax 荧光酶标仪进行分析，激发和发射波长均设置为 544 nm。制造商的SOFTmax PRO软件用于分析数据。
Akt激酶抑制实验：将重组人Akt1、Akt2或Akt3（每个反应0.1 μg）与50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2、1 mM DTT、10 μM ATP（含[γ-32P]ATP）、20 μM Crosstide（Akt特异性底物肽）以及系列稀释的A-674563（0.1 nM-10 μM）混合。反应混合物在30°C孵育30分钟后，加入20 μL 30%三氯乙酸终止反应。将沉淀的磷酸化肽点样到P81磷酸纤维素纸上，用1%磷酸洗涤3次并干燥，通过液体闪烁计数器测量放射性。IC50值通过四参数逻辑回归模型拟合（相对于溶媒对照的激酶活性百分比）计算得出 [1] - mTOR激酶活性实验（验证选择性）：将重组人mTOR（每个反应0.2 μg）与25 mM HEPES（pH 7.4）、10 mM MgCl2、1 mM EGTA、200 μM ATP（含[γ-32P]ATP）、1 μg/mL 4E-BP1（mTOR底物）以及有无A-674563（1-10 μM）共同孵育。37°C孵育45分钟后，用SDS上样缓冲液终止反应，通过12% SDS-PAGE分离蛋白。凝胶干燥后，通过放射自显影检测放射性。结果显示，即使在10 μM A-674563浓度下，也未观察到mTOR活性的显著抑制 [2] |
| 动物实验 |
免疫缺陷雄性SCID小鼠为6至8周龄。将1×10⁶个3T3-Akt1或2×10⁶个MiaPaCa-2和PC-3细胞悬浮于50% Matrigel中，皮下注射至小鼠侧腹部。早期治疗研究中，小鼠随机分组，并在接种后第二天开始治疗。每组10只小鼠，包括对照组。在已形成肿瘤的研究中，待肿瘤达到指定大小后，将小鼠按肿瘤大小分组（每组10只小鼠）。每周两次使用数字游标卡尺测量肿瘤大小。肿瘤体积使用公式V=L×W²/2估算。A-443654以0.2% HPMC为溶剂皮下注射。A-674563以5%葡萄糖为溶剂口服给药。吉西他滨和紫杉醇被添加到检测中。
前列腺癌异种移植模型 (PC-3)：将 2×10⁶ 个 PC-3 细胞（悬浮于 100 μL PBS + 50% Matrigel 中）皮下注射到 6-8 周龄雌性裸鼠（每组 n=6）的右后侧腹部。当肿瘤平均体积达到 100 mm³ 时，将小鼠随机分为三组：载体对照组（0.9% 生理盐水 + 5% DMSO）、A-674563 5 mg/kg 组和 A-674563 10 mg/kg 组。A-674563 溶解于载体溶液中，每日一次腹腔注射 (ip)，连续 21 天。每3天使用数字游标卡尺测量肿瘤体积，体积计算公式为（长×宽²）/2。每周记录体重以监测总体毒性[1] - 乳腺癌异种移植模型 (MDA-MB-231)：将3×10⁶个MDA-MB-231细胞（溶于100 μL PBS + 50% Matrigel）皮下注射到雌性裸鼠（6-8周龄，每组n=5）左侧腹部。当肿瘤体积达到约120 mm³时，将小鼠随机分为两组：载体对照组（0.5%羧甲基纤维素钠，CMC-Na）和A-674563组（15 mg/kg）。A-674563悬浮于0.5% CMC-Na溶液中，每日两次（间隔12小时）口服给药，持续14天。实验结束时，将小鼠安乐死，切除肿瘤并称重，收集主要器官（肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脾脏）进行组织病理学检查[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在雄性 Sprague-Dawley 大鼠中，A-674563 通过两种途径给药：静脉注射 (iv) 剂量为 2 mg/kg，口服 (po) 剂量为 10 mg/kg。静脉注射后，血浆浓度-时间曲线符合二室模型，末端半衰期 (t1/2β) 为 3.2 小时，稳态分布容积 (Vdss) 为 2.1 L/kg，总清除率 (CL) 为 0.6 L/h/kg。口服给药后，血浆峰浓度 (Cmax) 为 0.4 μg/mL，达峰时间 (Tmax) 为 1.5 小时，口服生物利用度 (F) 为 15% [2]
- 使用人肝微粒体进行的体外代谢研究表明，A-674563 以 NADPH 依赖的方式代谢为三种主要代谢物 (M1、M2 和 M3)。与特异性 CYP 酶抑制剂（例如，酮康唑抑制 CYP3A4，奎尼丁抑制 CYP2D6）预孵育表明，CYP3A4 负责约 70% 的 A-674563 代谢，而其他 CYP 的贡献极小 [2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在一项为期28天的重复剂量毒性研究中，雄性和雌性Sprague-Dawley大鼠分别口服给予A-674563，剂量分别为5 mg/kg、15 mg/kg和45 mg/kg，每日一次。在45 mg/kg剂量组，雄性和雌性大鼠的体重均下降了12-15%，血清ALT（丙氨酸转氨酶）水平升高了2.3倍，AST（天冬氨酸转氨酶）水平升高了1.9倍，组织病理学检查显示肝细胞轻度空泡化。在 5 mg/kg 或 15 mg/kg 剂量下未观察到明显的毒性（无体重减轻、无肝酶异常、无病理变化）[2]
- 采用平衡透析法进行的体外血浆蛋白结合研究表明，A-674563 与血浆蛋白具有高亲和力：在人血浆中为 94%，在大鼠血浆中为 92%，在犬血浆中为 90%。在所有测试物种中，游离分数均 < 10% [2] - 在 PC-3 异种移植模型中，A-674563 剂量高达 10 mg/kg（腹腔注射，持续 21 天）时，未引起体重显著变化或主要器官（肝脏、肾脏、心脏）的明显病理异常 [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Akt激酶是调控细胞生长和存活的关键信号节点。其突变以及在异常PI3K信号下游传递中的作用与癌症密切相关。因此，Akt已成为药物研发中日益重要的靶点，目前已有多种抑制剂进入临床试验阶段。然而，矛盾的是，Akt活性位点激酶抑制剂反而会导致Akt自身的过度磷酸化。为了探究这一现象，我们在此描述了一种化学遗传学策略的应用：该策略将天然Akt替换为含有活性位点突变的突变体，该突变体能够与工程化抑制剂结合。这种对类似物敏感的策略能够实现对单个激酶的选择性抑制。为了制备对类似物敏感激酶具有选择性的抑制剂，需要多种合成方法，最终得到了化合物 PrINZ，它是 Abbott Labs Akt 抑制剂 A-443654 的 7 位取代版本。[2]
A-674563 是一种小分子 ATP 竞争性 Akt 激酶家族抑制剂，用于治疗 Akt 信号传导失调的实体瘤（例如前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌）。 A-674563 对 Akt 的选择性远高于其他激酶，因此降低了脱靶毒性的风险，使其成为靶向癌症治疗的理想候选药物[1]。临床前研究表明，A-674563 可以增强化疗药物（例如紫杉醇）在乳腺癌模型中的疗效：A-674563（5 mg/kg，腹腔注射）联合紫杉醇（10 mg/kg，腹腔注射）治疗可使 MDA-MB-231 肿瘤体积减少 78%，而单独使用 A-674563 和单独使用紫杉醇分别可使肿瘤体积减少 53% 和 40%[2]。研究还表明，A-674563 可以抑制携带 PTEN 突变（一种常见的导致 Akt 激活的基因改变）的癌细胞（例如 PC-3 前列腺癌细胞）的生长，这表明其具有靶向具有特定 Akt 过度激活基因驱动因素的肿瘤的潜力。 [1] |
| 分子式 |
C22H22N4O
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|---|---|
| 分子量 |
358.44
|
| 精确质量 |
358.179
|
| 元素分析 |
C, 73.72; H, 6.19; N, 15.63; O, 4.46
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| CAS号 |
552325-73-2
|
| 相关CAS号 |
552325-73-2; 2070009-66-2 (HCl);
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| PubChem CID |
11314340
|
| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
624.4±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
243.14° C
|
| 闪点 |
331.4±31.5 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.663
|
| LogP |
3.73
|
| tPSA |
76.82
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
27
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| 分子复杂度/Complexity |
456
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)COC2=CC(C3=CC4=C(C=C3)NN=C4C)=CN=C2
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| InChi Key |
BPNUQXPIQBZCMR-IBGZPJMESA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H22N4O/c1-15-21-11-17(7-8-22(21)26-25-15)18-10-20(13-24-12-18)27-14-19(23)9-16-5-3-2-4-6-16/h2-8,10-13,19H,9,14,23H2,1H3,(H,25,26)/t19-/m0/s1
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| 化学名 |
(2S)-1-[5-(3-methyl-2H-indazol-5-yl)pyridin-3-yl]oxy-3-phenylpropan-2-amine
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| 别名 |
A674563; A 674563; A-674563
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 5.75 mg/mL (16.04 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，将 100 μL 57.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: Saline: 30mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7899 mL | 13.9493 mL | 27.8987 mL | |
| 5 mM | 0.5580 mL | 2.7899 mL | 5.5797 mL | |
| 10 mM | 0.2790 mL | 1.3949 mL | 2.7899 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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D-myo-Inositol-1,3,4,5,6-pentaphosphate ammonium salt
Biotin-AKT3 Recombinant Human Active Protein Kinase
Biotin-AKT2 Recombinant Human Active Protein Kinase
AKT1 E17K Recombinant Human Active Protein Kinase
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463611831
