| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Bromodomain-containing protein 4 (BRD4). A1874 is a heterobifunctional PROTAC designed to recruit BRD4 to the E3 ubiquitin ligase MDM2, leading to BRD4 ubiquitination and subsequent proteasomal degradation. It also binds to and inhibits MDM2, resulting in stabilization of the tumor suppressor p53.[1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
用 A1874（0-10 μM，24 小时）处理 HCT116 细胞可增加 HCT116 细胞中的 p53 水平，并定量证明 p53 稳定性。 BRD4 水平的处理诱导连接敲低，在 100 nmol/L 时接近最大敲低，并且在对照（0.1% DMSO 处理）细胞中 BRD4 最大降解 [1]。
在HCT116结肠癌细胞（野生型p53）中，用浓度递增的A1874处理24小时，可诱导BRD4蛋白水平的剂量依赖性敲低，最大降解率（Dmax）达98%（相对于DMSO对照），半数降解浓度（DC50）为32 nM。这种降解导致下游c-Myc蛋白表达被抑制85%。[1] 同时，A1874处理以剂量依赖的方式稳定了HCT116细胞中的p53蛋白水平，最高可达稳态水平的5.9倍。这种p53稳定足以上调其效应蛋白p21CIP1/WAF1的表达。[1] 在细胞活力测定（MTS法）中，A1874表现出强大的抗增殖活性。在处理48小时的HCT116细胞中，A1874导致97%的活力丧失。在A375黑色素瘤细胞（野生型p53）中，导致98%的活力丧失。此效果显著优于其单个组分配体（JQ1和idasanutlin）单独或联合使用的效果，表明存在协同抗增殖效应，这通过Bliss独立性分析得到证实（在HCT116细胞中浓度≥100 nM、A375细胞中浓度≥250 nM时，联合指数CI < 1）。[1] A1874的抗增殖活性高度依赖于细胞系的p53状态。在具有野生型p53的细胞系（HCT116、A375、MOLM-13、SJSA-1）中，A1874非常有效。相反，在具有突变型或缺失型p53的细胞系（NCI-H2030、HT29、p53-/- HCT116）中，A1874在降低细胞活力方面效果显著减弱。[1] 与一个具有相似BRD4降解效力（DC50 = 23.1 nM）和效能（Dmax = 89%）的VHL募集型BRD4降解PROTAC（A743）相比，A1874在野生型p53细胞系中降低活力的效果更强，但在p53突变/缺失的细胞系中效果较弱，突出了其p53稳定活性的贡献。[1] A1874的一个非活性差向异构体类似物A1875（其MDM2结合亲和力大大降低）在降解BRD4、稳定p53和降低细胞活力方面的能力均显著减弱，证实了A1874的活性依赖于对MDM2的有效募集。[1] |
| 细胞实验 |
蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： HCT116 细胞。 测试浓度：0-10 μM。 孵化持续时间：24 小时。 实验结果：诱导 BRD4 水平的剂量依赖性敲低，接近 100 nM 的最大敲低。 p53 水平升高并表现出剂量依赖性 p53 稳定性。 免疫印迹（Western Blot）： 将培养的细胞（如HCT116）与A1874、其组分配体（JQ1、idasanutlin）或对照（DMSO）一起孵育24小时。然后用冰预冷的PBS洗涤细胞，并在含有Tris HCl、Nonidet P-40、脱氧胆酸和蛋白酶抑制剂（抑肽酶A、亮抑酶肽、贝他定、抑肽酶）的裂解缓冲液中裂解。在冰上裂解15分钟。裂解物离心后，取上清液进行SDS-PAGE。将蛋白质电转移至硝酸纤维素膜上。用针对目标蛋白（如BRD4、c-Myc、p53、p21CIP1/WAF1、GAPDH）的一抗孵育膜，然后用相应的辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗孵育。使用化学发光成像系统显影蛋白条带，并使用图像分析软件对条带强度进行定量。[1] 细胞活力测定（MTS法）： 将细胞接种到96孔板中。细胞贴壁后，用指定浓度的A1874、组分配体或DMSO对照处理48小时。然后向每孔中加入MTS试剂和吩嗪硫酸甲酯（PMS），终浓度分别为330 µg/mL和25 µM。继续孵育，使活细胞将MTS还原为有色的甲臜产物。使用酶标仪在490 nm波长处测量甲臜产物的吸光度。相对于对照处理的细胞计算细胞活力。使用统计软件进行数据分析和绘图。为了评估A1874组分活性之间的协同作用，根据A1874、JQ1和idasanutlin在每个浓度下的活力效应，使用Bliss独立性模型计算联合指数（CI）。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
A1874是一种蛋白水解靶向嵌合体（PROTAC）分子。它是通过将BET溴结构域抑制剂JQ1（靶向BRD4）通过13原子聚乙二醇（PEG）基连接子连接到MDM2拮抗剂idasanutlin上而合成的。[1]
其作用机制是双重的：1）它将E3泛素连接酶MDM2募集到BRD4，诱导BRD4泛素化和蛋白酶体降解，从而导致c-Myc等致癌信号的下调。 2）同时，其idasanutlin部分抑制MDM2，从而破坏MDM2介导的肿瘤抑制因子p53的降解，导致p53稳定并激活p53依赖性通路（例如，p21上调）。[1] 这种靶蛋白降解和肿瘤抑制因子稳定作用于单个分子的双重作用，在具有野生型p53的癌细胞中产生协同抗增殖效应，其效力高于单独使用抑制剂或不具备p53稳定活性的、募集其他E3连接酶（例如VHL）的PROTAC。[1] 该研究强调了扩展PROTAC设计中使用的E3连接酶种类的潜力，特别是像MDM2这样配体除了靶蛋白降解外还能提供其他治疗益处的酶。[1] |
| 分子式 |
C58H62CL3F2N9O7S
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|---|---|
| 分子量 |
1173.58979654312
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| 精确质量 |
1171.352
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| CAS号 |
2064292-12-0
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| PubChem CID |
124201003
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
8.9
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| tPSA |
231
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
15
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| 可旋转键数目(RBC) |
23
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| 重原子数目 |
80
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| 分子复杂度/Complexity |
2150
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| 定义原子立体中心数目 |
5
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| SMILES |
ClC1=CC=CC(=C1F)[C@H]1[C@H](C(NC2C=CC(C(NCCOCCOCCOCCNC(C[C@H]3C4=NN=C(C)N4C4=C(C(C)=C(C)S4)C(C4C=CC(=CC=4)Cl)=N3)=O)=O)=CC=2OC)=O)N[C@@H](CC(C)(C)C)[C@]1(C#N)C1C=CC(=CC=1F)Cl
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| InChi Key |
IPNTVOAQOGRLQB-JJMBTQCASA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C58H62Cl3F2N9O7S/c1-32-33(2)80-56-48(32)51(35-11-14-37(59)15-12-35)67-44(53-71-70-34(3)72(53)56)29-47(73)65-19-21-77-23-25-79-26-24-78-22-20-66-54(74)36-13-18-43(45(27-36)76-7)68-55(75)52-49(39-9-8-10-41(61)50(39)63)58(31-64,46(69-52)30-57(4,5)6)40-17-16-38(60)28-42(40)62/h8-18,27-28,44,46,49,52,69H,19-26,29-30H2,1-7H3,(H,65,73)(H,66,74)(H,68,75)/t44-,46-,49-,52+,58-/m0/s1
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| 化学名 |
(2R,3S,4R,5S)-3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-4-(4-chloro-2-fluorophenyl)-N-[4-[2-[2-[2-[2-[[2-[(9S)-7-(4-chlorophenyl)-4,5,13-trimethyl-3-thia-1,8,11,12-tetrazatricyclo[8.3.0.02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaen-9-yl]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethylcarbamoyl]-2-methoxyphenyl]-4-cyano-5-(2,2-dimethylpropyl)pyrrolidine-2-carboxamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~150 mg/mL (~127.81 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.8521 mL | 4.2604 mL | 8.5209 mL | |
| 5 mM | 0.1704 mL | 0.8521 mL | 1.7042 mL | |
| 10 mM | 0.0852 mL | 0.4260 mL | 0.8521 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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