| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
VEGFR1 (IC50 = 130 nM); VEGFR2 (IC50 = 23 nM); VEGFR3 (IC50 = 18 nM)
Human VEGFR-1 kinase (IC50 = 26 nM, determined by kinase activity assay) [1] - Human VEGFR-2 kinase (IC50 = 6 nM, determined by kinase activity assay) [1] - Human VEGFR-3 kinase (IC50 = 15 nM, determined by kinase activity assay) [1] - Human PDGFRβ, FGFR-1, EGFR kinases (IC50 > 1000 nM, no significant inhibition) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
AAL993 通过阻断 ERK 来阻止 HIF-1α 的表达，而不改变 Akt 的磷酸化 [2]。 AAL993抑制HIF-1α蛋白的积累。AAL993对VEGF表达和HIF-1转录活性的抑制。VEGFR抑制剂SU5416和KRN633抑制缺氧诱导的HIF蛋白积累。[2]
在这项研究中，研究人员表明，AAL993抑制了缺氧诱导的HIF-1α在各种人类癌细胞中的积累，包括HeLa、A431、HCT 15、HCT 116和MCF7细胞，并且AAL993通过下调HeLa细胞中HIF-1α的转录活性来抑制缺氧介导的VEGF表达。AAL993在抑制缺氧诱导的HIF-1α积累和VEGF产生的浓度下降低了HIF-1αmRNA的表达（图5A）。此外，添加蛋白酶体抑制剂MG-132（10μM）并没有导致AAL993介导的HIF-1α积累抑制的恢复（图5C），这表明AAL993对缺氧诱导的HIF-1β积累的抑制是由于抑制了HIF-1α的表达。根据这些结果，推测AAL993对HIF-1αmRNA表达的抑制可能是通过其对上游信号转导的调节来介导的。[2] 浓度依赖性抑制VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖，IC50 = 12 nM[1] - 抑制VEGF介导的HUVECs毛细血管管形成：100 nM AAL-993使管形成能力较溶媒对照组减少约80%，阻断血管生成[1] - 对人肿瘤细胞系（A549肺癌、MCF-7乳腺癌）的抗增殖活性较弱：IC50 > 500 nM，表明优先靶向内皮细胞[1] - 抑制HeLa和A549细胞中缺氧诱导的HIF-1α蛋白积累：1% O2缺氧条件下，10 μM AAL-993使HIF-1α水平降低约70%，且不影响HIF-1α mRNA表达[2] - 常氧条件下不干扰HIF-1α降解，提示其抑制缺氧诱导的HIF-1α翻译或稳定性维持[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
AAL993（化合物 5）对植入模型中 VEGF 诱导的血管生成具有有效的抑制作用，ED50 值为 7 mg/kg [1]。
AAL993（24–100 mg/kg；口服；每日；用于14 天）抑制 B16 黑色素瘤异种移植模型中自发外周转移的形成以及原发肿瘤的生长[1]。 AAL993（化合物5）可以在植入模型中显着抑制VEGF诱导的血管生成，ED50值为7 mg/kg[1]。在 B16 黑色素瘤异种移植模型中，AAL993（24-100 mg/kg；口服；每日；持续 14 天）可减少原发性肿瘤生长和自发性外周转移瘤的产生 [1]。 2-[（4-吡啶基）甲基]氨基-N-[3-（三氟甲基）苯基]苯甲酰胺（AAL993（化合物5））和N-3-异喹啉基-2-[（4-吡啶基甲基）氨基]苯甲胺（7）能有效和选择性地抑制重组VEGFR-2和VEGFR-3激酶。由于其物理化学性质，这些邻氨基苯甲酰胺很容易渗透细胞，并在小鼠每天口服一次后被吸收。在植入模型中，5和7均能有效抑制VEGF诱导的血管生成，ED（50）值为7mg/kg。在小鼠黑色素瘤原位模型中，6和7能有效抑制原发性肿瘤的生长和自发外周转移的形成。邻氨基苯甲酰胺5和7代表了一种新的结构类VEGFR激酶抑制剂，具有强效的抗血管生成和抗肿瘤特性。 在裸鼠A549肺癌异种移植模型中，口服AAL-993（30 mg/kg，每日一次，持续21天），与溶媒对照组相比，肿瘤生长抑制率约60%，肿瘤重量减少约55%[1] - 减弱肿瘤血管生成：30 mg/kg剂量下，CD31免疫组织化学染色显示肿瘤微血管密度（MVD）减少约75%[1] - 荷瘤小鼠治疗期间无明显体重下降或全身毒性[1] |
| 酶活实验 |
酶联免疫吸附试验（ELISA）[2]
通过夹心ELISA法测定VEGF的释放量。ELISA板在4°C下用100μl 2μg/ml的抗VEGF165抗体在PBS中包被12小时。用含0.1%吐温20（TPBS）的PBS洗涤平板，并在25°C下与200μl/孔的1%BSA在PBS中孵育1小时。将条件培养基或不同浓度的重组人VEGF在25°℃下孵育2小时，然后用TPBS洗涤四次。在25℃下与100μl 0.2μg/ml的生物素化抗VEGF抗体孵育2小时时，洗涤平板，然后用100μl HRP偶联的链霉抗生物素蛋白孵育45分钟。洗涤后，通过加入50μl四甲基联苯胺对板进行显影，并通过加入50µl 2 N H2SO4停止反应。用96孔板读数器测量450nm处的吸光度。 VEGFR激酶活性测定：重组人VEGFR-1/VEGFR-2/VEGFR-3催化域分别与ATP、荧光标记肽底物及不同浓度的AAL-993（0.1-1000 nM）在激酶反应缓冲液中孵育。37°C孵育60分钟后，加入激酶终止液终止反应。荧光偏振法检测磷酸化底物，基于信号强度抑制率计算IC50值[1] - 激酶选择性测定：重组PDGFRβ、FGFR-1和EGFR激酶与各自底物及AAL-993（1 μM）在实验缓冲液中孵育。荧光法检测激酶活性，通过抑制率评估选择性[1] |
| 细胞实验 |
细胞培养[2]
将人宫颈癌细胞系HeLa、人上皮癌细胞系A431、人结直肠癌细胞系HCT 15和HCT 116以及人乳腺癌细胞系MCF7在37°C、5%CO2气氛下在添加了10%胎牛血清（FBS）、100 U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI 1640培养基中培养。在后续实验中，将细胞以2×105个细胞/ml/孔的密度接种在12孔TC板中，并在37°C下孵育24小时。通过在多气体培养箱中将细胞替换为1%O2、94%N2和5%CO2来实现缺氧状态。在暴露于缺氧之前，细胞与每种药物预孵育1小时。 免疫印迹[2] 在药物处理指定时间后，用PBS（无钙/镁）洗涤细胞三次，浸入100μl冰冷的裂解缓冲液（20 mM HEPES，pH 7.4，1%Triton X-100，10%甘油，1 mM EDTA，5 mM氟化钠，2.5 mM对硝基苯磷酸酯，10μg/ml苯甲磺酰氟，1 mM钒酸钠和10μg/ml亮肽）中15分钟，用Handy Sonic Disrupter破碎，裂解液在样品缓冲液（50 mM Tris，pH 7.4、4%SDS、10%甘油、4%2-硫代乙醇和0.05 Mg/ml溴酚蓝），比例为4:1。将细胞裂解物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），转移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，用抗HIF-1α抗体、抗HIF-1β抗体、抗α-微管蛋白抗体、抗磷酸化ERK抗体、抗ERK抗体，抗磷酸化Akt抗体、抗Akt抗体和抗磷酸化EGFR抗体进行免疫印迹。用辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二抗进一步孵育后，用ECL试剂盒处理印迹，用分子成像仪ChemiDoc XRS系统观察蛋白质表达。 HUVEC增殖实验：HUVECs接种于96孔板，饥饿培养24小时。用AAL-993（0.1-1000 nM）预处理细胞1小时，再用VEGF（20 ng/mL）刺激72小时。MTT法检测细胞活力，计算IC50值[1] - 毛细血管管形成实验：24孔板包被基质胶并水化，接种经AAL-993（1-100 nM）预处理1小时的HUVECs。37°C孵育18小时后，拍摄形成的毛细血管管并计数管分支数量进行定量[1] - 缺氧诱导HIF-1α积累实验：HeLa和A549细胞在含AAL-993（0.1-10 μM）的条件下，于1% O2缺氧环境中培养24小时。裂解细胞后，western blot检测HIF-1α蛋白水平；RT-PCR定量HIF-1α mRNA表达以排除转录水平调控[2] |
| 动物实验 |
生长因子植入血管生成模型。[1]
将含有VEGF（2 μg/mL）或bFGF（0.3 μg/mL）的多孔聚四氟乙烯腔室（溶于含肝素（20 U/mL）的0.8% w/v琼脂中）皮下植入雌性小鼠侧腹部。除SU5416采用腹腔注射外，其余小鼠均采用口服给药，每日一次，从植入腔室前1天开始，分别给予化合物[AAL993（化合物5）]或载体（PEG 300）。治疗5天后处死动物，测量血管化组织。取出腔室，小心去除植入物周围形成的血管化组织。将组织样本用水（2 mL）处理，均质化（24000 rpm，1分钟），然后离心（7000 rpm，1小时）。过滤上清液以避免脂肪污染，并在 540 nm 波长下用分光光度法测定血红蛋白含量。使用供体小鼠全血样本获得的校准曲线，将血红蛋白测量值转换为血容量。数据以血液含量增加的抑制百分比表示，并与载体处理的对照动物进行比较（表 4）。ED50 值根据剂量-反应曲线计算，n 为指定剂量下的动物数量（图 1）。如果在高达 100 mg/kg 的剂量下仍未达到完全抑制，则结果以最高测试剂量下的抑制百分比表示。 小鼠黑色素瘤肿瘤生长和转移模型。[1] 将悬浮于含 10% FCS 的 Hanks 缓冲液中的 B16/BL6 细胞 (5 × 10~4) 皮内注射到麻醉的同系 C57BL/6 小鼠双耳背侧耳廓。一周后，开始分别用药物[AAL993（化合物5）]或载体（PEG 300）进行治疗。在光学显微镜下观察原发肿瘤的大小，并通过低照度彩色摄像机记录，最后使用计算机成像系统进行量化。每日治疗两周后，处死动物，收集并称量颈部淋巴结。将第14天（A14）和第21天（A21）的肿瘤平均面积（mm²）与药物治疗开始时（肿瘤细胞注射后第7天）的肿瘤平均面积（A7）进行比较，以此来评估药物对原发肿瘤生长的影响。通过比较药物治疗组和载体对照组动物收集的组织相对湿重（mg），量化药物对颈部淋巴结转移的影响。 裸鼠A549异种移植模型：将2×10⁶个A549细胞皮下注射到6-8周龄的BALB/c裸鼠体内。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为载体组和治疗组。AAL-993悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠溶液中，以30 mg/kg的剂量每日一次口服给药，持续21天。每3天测量一次肿瘤体积，并切除肿瘤进行称重和CD31免疫组化染色，以评估微血管密度[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
AAL993（化合物 5） 和 7 是稳定的结晶固体。尽管它们在 pH 6.8 的磷酸盐缓冲液中的水溶性相对较低（2 μg/mL），这是由于化合物 5（pKa 5.2）和化合物 7（pKa 5.1，2.7）都具有碱性，15 但随着 pH 值的降低，它们的溶解度显著增加（pH 1.0 时的溶解度 > 200 μg/mL）。此外，化合物5和7的拓扑极性表面积（TPSA分别为45.0和52.8 Ų）16，以及它们在Caco-2细胞单层上的高渗透性（被动扩散）（固有渗透性，Pm分别为45.2和21.7 × 10-5 cm/min，化合物5和7），可以预测口服给药后的肠道吸收[1]。在评估其体内效应之前，首先测试了化合物[例如AAL993（化合物5）]是否能在口服给药后被吸收。将50 mg/kg的药物溶于5% DMSO和0.5% Tween 80的水溶液中，通过灌胃法给药，然后通过HPLC/UV测定正常小鼠单次口服给药后的血浆药物浓度。根据这些数据得出的药代动力学参数汇总于表 3。[1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外细胞毒性：浓度高达 10 μM 时，对 HUVEC 或肿瘤细胞无明显毒性；细胞存活率 > 85% [1, 2]
- 体内毒性：裸鼠连续 21 天以 30 mg/kg/天的剂量给药，未见肝肾功能（ALT、AST、肌酐）或血液学参数的明显异常 [1] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
缺氧诱导因子 (HIF) 是一种异二聚体碱性螺旋-环-螺旋转录因子，活化的 HIF 在多种病理状态中发挥关键作用，包括炎症和癌症。在多种常见的人类癌症中均观察到 HIF-1α 过表达，例如脑癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌和前列腺癌。HIF 介导的基因，例如血管内皮生长因子 (VEGF)、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS) 和胰岛素样生长因子 (IGF)-1，与肿瘤血管生成、转移和侵袭密切相关。因此，促癌蛋白 HIF 是癌症治疗的新靶点。我们研究了 VEGFR 抑制剂 AAL993、SU5416 和 KRN633 在缺氧条件下对 HIF-1α 积累的抑制作用。我们发现，VEGFR酪氨酸激酶抑制剂AAL993、SU5416和KRN633具有双重功能：在缺氧条件下抑制VEGFR信号传导和HIF-1α表达。详细的机制研究表明，SU5416和KRN633通过抑制Akt和ERK磷酸化信号通路来抑制HIF-1α表达，而AAL993则通过抑制ERK而不影响Akt磷酸化来抑制HIF-1α表达。[2]
我们制备了两种易于合成的邻氨基苯甲酰胺类VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，并评估了它们作为血管生成抑制剂的活性。 2-[(4-吡啶基)甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺（化合物5，即AAL993）和N-3-异喹啉基-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]苯甲酰胺（化合物7）能有效且选择性地抑制重组VEGFR-2和VEGFR-3激酶。由于其理化性质，这些邻氨基苯甲酰胺类化合物易于穿透细胞，小鼠每日一次口服给药后即可被吸收。化合物5和7均能有效抑制植入模型中VEGF诱导的血管生成，其ED50值为7 mg/kg。在小鼠原位黑色素瘤模型中，化合物5和7均能有效抑制原发肿瘤的生长以及自发性外周转移的形成。邻氨基苯甲酰胺 5 和 7 代表了一类新型的 VEGFR 激酶抑制剂，具有强大的抗血管生成和抗肿瘤特性。[1] AAL-993 是一种新型的抗血管生成药物，属于邻氨基苯甲酰胺类，特异性靶向 VEGF 受体激酶。[1] - 其核心作用机制是抑制 VEGFR-1/VEGFR-2/VEGFR-3 激酶活性，阻断 VEGF 介导的内皮细胞增殖和血管生成，这对于肿瘤生长和转移至关重要。[1] - 其他机制：抑制缺氧诱导的 HIF-1α 蛋白在转录后水平（翻译或稳定）的积累，且该作用独立于 VEGFR 抑制。[2] - 由于其抗血管生成和 HIF-1α 抑制活性，AAL-993 在实体瘤（例如肺癌）的治疗中具有潜在的应用价值。 [1, 2] - 优先靶向内皮细胞而非肿瘤细胞，这可能降低脱靶细胞毒性[1] |
| 分子式 |
C20H16N3OF3
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|---|---|
| 分子量 |
371.35574
|
| 精确质量 |
371.124
|
| 元素分析 |
C, 64.69; H, 4.34; F, 15.35; N, 11.32; O, 4.31
|
| CAS号 |
269390-77-4
|
| 相关CAS号 |
269390-77-4
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| PubChem CID |
6398883
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
441.3±45.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
220.7±28.7 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.1 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.631
|
| LogP |
4.51
|
| tPSA |
57.51
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
27
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| 分子复杂度/Complexity |
480
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
0
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| InChi Key |
BLAFVGLBBOPRLP-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H16F3N3O/c21-20(22,23)15-4-3-5-16(12-15)26-19(27)17-6-1-2-7-18(17)25-13-14-8-10-24-11-9-14/h1-12,25H,13H2,(H,26,27)
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| 化学名 |
2-(pyridin-4-ylmethylamino)-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzamide
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| 别名 |
AAL 993; AA-L993; AAL993
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~125 mg/mL (~336.6 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6928 mL | 13.4640 mL | 26.9280 mL | |
| 5 mM | 0.5386 mL | 2.6928 mL | 5.3856 mL | |
| 10 mM | 0.2693 mL | 1.3464 mL | 2.6928 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
VEGFR2-IN-7
SYHA1813
VEGFR-2-IN-38
BHEP
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