ABBV-2222 (GLPG2222)

CFTR/cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) - corrector (type 1, C1); EC50 = 27 nM (pEC50 = 7.56 ± 0.16, n=19) in CFBE41o- F508del CFTR-HRP cell surface expression assay; EC50 = 20.8 ± 2.7 nM (n=6) in CFBE-DG3 TECC functional assay; EC50 = 2.85 ± 0.4 nM (n=5 donors) in primary HBE TECC functional assay (F508del/F508del); potency range 1.6 to 13.1 nM across 16 different F508del/F508del homozygous donor cells (median ~6 nM). [2]
Galicaftor targets the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) protein, specifically stabilizing the nucleotide binding domain 1 - membrane spanning domain interface. As a CFTR corrector, it facilitates proper folding of the mutant CFTR protein, enabling its trafficking from the endoplasmic reticulum to the plasma membrane. By correcting the conformational defects associated with the F508del mutation and other processing mutations, Galicaftor increases the number of functional CFTR channels at the cell surface, thereby restoring chloride ion transport in epithelial cells.

Galicaftor (ABBV-2222; GLPG-2222) 的 EC50 <10 nM，并且在表达 F508del/F508del CFTR 的原代患者细胞中具有很强的体外功能活性[2]。
通过蛋白质印迹法评估，ABBV-2222 可促进 F508delCFTR 的成熟。ABBV-2222 可稳定核苷酸结合域 1/跨膜域界面。 ABBV-2222 通过作用于跨膜结构域 1 来纠正 F508delCFTR 突变。[2]

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化合物 22 [Galicaftor (ABBV-2222; GLPG-2222)] 对来自多位携带 F508del 纯合突变的囊性纤维化 (CF) 患者供体的细胞具有高效性 (5 nM) 和显著疗效。与 Lumacaftor 相比，化合物 22 的效力显著更高（>25 倍），且疗效相当。该化合物在多种临床前动物模型中表现出低清除率，不抑制CYP酶，也不是CYP3A4诱导剂，因此药物相互作用风险较低[1]。

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ABBV-2222在CFBE41o-F508del CFTR-HRP细胞表面表达测定中：EC50 = 27 nM (pEC50 = 7.56 ± 0.16, n=19)；相对效力为141 ± 15%（以化合物15为基准）；效力约为lumacaftor（EC50 = 251 nM，pEC50 = 6.6 ± 0.08, n=3）的10倍，约为tezacaftor（EC50 = 586 nM，pEC50 = 6.23 ± 0.05, n=6）的20倍；浓度高于 2.22 μM 时观察到疗效下降。[2]
ABBV-2222 促进了 F508delCFTR 的成熟，这可通过 CFBE 细胞中 Western blot 检测高分子量糖基化 C 带的积累来衡量；C/B 带比值呈浓度依赖性增加。[2]
ABBV-2222 在 CFBE-DG3 TECC 功能测定中：EC50 = 20.8 ± 2.7 nM (n=6)；tezacaftor 的效力约为其 1/14 (EC50 = 266.9 ± 38.6 nM)。[2]
ABBV-2222 在原代 HBE TECC 功能测定 (F508del/F508del) 中：EC50 = 2.85 ± 0.4 nM (n=5 位供体)； lumacaftor EC50 = 122.8 ± 13.8 nM (n=1 供体)；tezacaftor EC50 = 148.2 ± 25.7 nM (n=4 供体)；ABBV-2222 与 lumacaftor 的疗效相当，且疗效较 tezacaftor 提高了约 20%。[2]
ABBV-2222 在 16 个不同的 F508del/F508del 纯合供体细胞中，HBE TECC 效价范围为 1.6 至 13.1 nM（中位数约为 6 nM）。[2]
对映体 A-9433 的效价比 ABBV-2222 低约 160 倍，疗效低约 70%。 [2]
在HBE TECC检测中，ABBV-2222与lumacaftor或tezacaftor无功能叠加效应，提示其作用机制相似。[2]
急性添加和慢性添加增强剂GLPG1837后，ABBV-2222的效力无差异（EC50分别为7.9 nM和7.3 nM；以及6.4 nM和5.4 nM）。[2]
F508delCFTR活性起效迅速，在治疗后12小时内达到最大效应，并在TECC系统中持续长达96小时。[2]
膜片钳实验：ABBV-2222处理的F508delCFTR的Po = 0.04（与载体处理的对照组相似）。添加 GLPG1837 后，Po 值增加至 0.57。[2]
ABBV-2222 显著挽救了 F508delCFTR-R1S 抑制突变体的折叠，对 F508delCFTR-R1070W 的影响较小，表明其优先作用于 NBD1/MSD2 界面恢复（C1 型校正剂）。[2]
ABBV-2222 增强了 CFTR 375 片段（仅包含 MSD1）的稳定性；延长了 CFTR 380 片段的半衰期；但未能增加 CFTR 370 的积累，表明其不作为蛋白酶体抑制剂发挥作用。[2]
ABBV-2222 对 F508delCFTR 具有选择性，不能处理突变型 hERG (G601S) 或突变型 PgP (G268V)。 [2]
体外实验表明，Galicaftor 对携带 F508del/F508del CFTR 突变的原代患者细胞具有显著的功能活性，EC50 值小于 10 nM。该化合物能够有效纠正囊性纤维化患者来源的人支气管上皮细胞中 CFTR 的加工和转运。在基于细胞的实验中，Galicaftor 显著增强了 CFTR 介导的氯离子转运，这可通过 Ussing 室或基于荧光的膜电位测定法进行测量。该化合物与其他 CFTR 调节剂（包括增强剂和额外的校正剂）联合使用时，表现出协同作用。

Galicaftor（ABBV-2222；GLPG-2222；1 mg/kg，静脉注射；1 mg/kg，口服）用于大鼠药代动力学实验，以验证其药代动力学特征。静脉注射的半衰期（T1/2）为 2.7 小时。此外，胃内注射的生物利用度（%F）为 74%[1]。
在采用 CFBE41o-F508del CFTR-HRP 细胞的 CSE-HRP 检测中，ABBV-2222（化合物 22）在来自多位携带 F508del 纯合突变的囊性纤维化（CF）患者供体的细胞中显示出 5 nM 的 EC50（几何平均值）。其效力比 Lumacaftor 高 25 倍以上，且疗效相当。 [1]
在采用来自F508del/F508del CFTR患者的原代人支气管上皮细胞进行的HBE-TECC功能测定中，ABBV-2222（化合物22）的EC50为5 nM（表6），相对于阳性对照化合物15，其最大活性为87%。[1]
中间体化合物13（ABBV-2222的前体）的CSE-HRP EC50为0.13 µM，最大活性为123%；HBE-TECC EC50为0.028 µM，最大活性为117%。[1]
化合物21（7-OCH3对羧酸类似物）的HBE-TECC EC50为9 nM，最大活性为94%。 [1]化合物20（不含对位羧基的7-OCHF2间位羧酸类似物）的HBE-TECC EC50为75 nM，最大活性为117%。[1]化合物22（ABBV-2222）的肝细胞清除率较低：人7 L/h/kg，大鼠6 L/h/kg（表6）。[1]化合物22（ABBV-2222）不抑制CYP酶，也不是CYP3A4诱导剂（10 µM时CYP3A4诱导率为利福平对照组的6.4%，表6）。[1]化合物22（ABBV-2222）主要通过葡萄糖醛酸化在人血浆中清除，因此药物相互作用风险较低。 [1]
在体内，Galicaftor 已在囊性纤维化动物模型中显示出疗效，包括 CFTR 缺陷小鼠和雪貂。口服该化合物可改善气道和肠道组织中 CFTR 依赖性氯离子转运。在临床前研究中，Galicaftor 治疗显著改善了 CFTR 功能的生物标志物，包括汗液氯离子水平和鼻腔电位差测量值。该化合物还与其他 CFTR 调节剂联合使用，以期在体内获得叠加或协同治疗效果。

膜片钳电生理测定。[2]
为了检测用Galicaftor (ABBV-2222; GLPG-2222)预处理后F508delCFTR的开放概率(Po)，将瞬时转染CFTR-cDNA [pcDNA 3.1 Zeo (+)载体；Invitrogen]和编码GFP的pEGFP-C3的CHO细胞与Galicaftor (ABBV-2222; GLPG-2222)孵育过夜，然后进行膜片钳实验。为避免重复，详细的实验方法、材料和数据分析可参见我们最新的出版物（Yeh et al., 2019）。

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人支气管上皮细胞跨上皮电流钳电导测定[1]
本研究采用基于原代人支气管上皮细胞 (hBE) 的细胞测定方法作为辅助测定方法，以测试新型 F508del CFTR 校正剂对携带 F508del/F508del CFTR 突变的原代人支气管上皮细胞 (hBE) 的活性。从 F508del/F508del CFTR 患者中分离的原代人支气管上皮细胞 (hBE) 从 1 × 10⁶ 个细胞扩增至 250 × 10⁶ 个细胞。为此，将从携带纯合突变的囊性纤维化（CF）患者体内分离的细胞接种到预先包被3T3条件培养基的24孔康宁滤板上，并在添加了Ultroser G的分化培养基中于气液界面培养35天。实验前72小时，用3 mM二硫苏糖醇（DTT，溶于分化培养基中）孵育细胞顶端表面30分钟，去除细胞顶端表面的黏液，然后吸出黏液和培养基。之后，用磷酸盐缓冲液（PBS）再次洗涤细胞顶端表面30分钟，并吸出。最后，将细胞与所需剂量的校正化合物在37℃、5% CO₂条件下孵育18-24小时。校正化合物配制成 10 mM 的储备液，所需浓度用分化培养基配制，并始终应用于上皮细胞的基底外侧。

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CYP3A4 诱导：[1]
冷冻保存的原代人肝细胞解冻后，在处理前培养过夜。培养的肝细胞分别用测试化合物 (10 µM)、溶剂对照 (0.1% v/v DMSO) 或 CYP3A4 的典型诱导剂（利福平 10 µM）处理 48 小时，每 24 小时更换一次培养基。48 小时处理后，测定化合物处理组肝细胞中 CYP3A4 mRNA 的水平，并以阳性对照（利福平 10 µM）的反应百分比表示。在受试化合物处理的肝细胞中，CYP3A4 mRNA 水平增加幅度小于阳性对照（利福平）反应的 20%，被认为 CYP3A4 诱导风险较低。

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在大鼠药代动力学研究中，ABBV-2222（化合物 22）显示：静脉注射剂量 1 mg/kg，清除率为 0.55 L/h/kg，半衰期为 2.7 h；口服剂量 2 mg/kg，生物利用度为 74%（表 7）。[1]
在犬药代动力学研究中，ABBV-2222（化合物 22）显示：静脉注射剂量 2 mg/kg，清除率为 0.83 L/h/kg，半衰期为 5.0 h；口服剂量 5 mg/kg，生物利用度为 40%（表 7）。 [1]
ABBV-2222（化合物 22）在多种临床前动物模型中均表现出较低的清除率。[1]
Galicaftor 的体外酶/受体结合试验通常采用表面等离子共振或等温滴定量热法来测量其与 CFTR 蛋白或其分离结构域的直接结合亲和力。使用标记的 Galicaftor 衍生物的放射性配体结合试验可用于确定结合动力学以及与其他 CFTR 校正剂的竞争情况。热稳定性试验，例如差示扫描荧光法，用于评估化合物稳定 CFTR 蛋白构象的能力。标准方案包括将纯化的 CFTR 蛋白或膜制剂与不同浓度的 Galicaftor 孵育，然后检测结合或稳定效应。

对表达抑制突变的幼仓鼠肾细胞中F508delCFTR C/B带进行Western Blot分析。[2]
简而言之，将BHK抑制突变细胞以每孔1 × 10⁶个细胞的密度接种于六孔板中，过夜培养，然后在37°C、5% CO₂的加湿培养箱中，用0.2% DMSO或1 µM Galicaftor（ABBV-2222；GLPG-2222）处理18-24小时。在裂解细胞前，用冰冷的PBS冲洗细胞单层两次，以去除血清和培养基。

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细胞表面表达-辣根过氧化物酶 (CSE-HRP) 检测[1]
本研究在人肺上皮细胞系 (CFBE41o-) 中开发了一种细胞检测方法，用于测量经测试化合物校正后的 F508del CFTR 细胞表面表达。具体方法是在第四胞外环中表达 F508del CFTR 突变体以及辣根过氧化物酶 (HRP)，然后将这些细胞（CFBE41o-F508del CFTR-HRP）与测试校正化合物孵育过夜，并通过发光读数测量 HRP 活性。简而言之，在本初步检测中，将CFBE41o-F508del CFTR-HRP细胞以4000个细胞/孔的密度接种于384孔板中，并加入0.5 μg/mL强力霉素以诱导F508del CFTR-HRP的表达，然后在37 °C、5% CO2条件下继续培养72小时。之后，加入所需浓度的测试化合物，并在33 °C下继续培养18-24小时。测试的最高浓度为20 μM，采用3倍稀释法绘制8点浓度-反应曲线。每个浓度设置三个重复孔，以确定一个EC50值。所有板均包含阴性对照（二甲基亚砜，DMSO）和阳性对照（3 μM 的 3-[(2R,4R)-4-({[1-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)环丙基]羰基}氨基)-7-甲氧基-3,4-二氢-2H-色烯-2-基]苯甲酸）（化合物 15），以及阳性对照的板内浓度响应。孵育后，用 Dulbecco 磷酸盐缓冲液 (DPBS) 洗涤板 5 次，然后加入 HRP 底物鲁米诺 (50 μL)，并使用 EnVision 多功能酶标仪（PerkinElmer；产品编号 2104-0010）通过发光读数测量 HRP 活性。使用 Accelrys Assay Explorer v3.3 分析实验的原始计数。
使用以下公式将测试化合物在八个测试浓度下测得的活性百分比标准化至板上阳性对照：
表格中列出了测试化合物在任何测试浓度下达到的最大活性百分比，以及使用具有可变 Hill 斜率方程的通用 S 形曲线计算的 EC50 值。

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细胞表面表达 (CSE)-HRP 检测：将 CFBE41o-F508del CFTR-HRP 细胞以 4000 个细胞/孔的密度接种于 384 孔板中，并加入 0.5 μg/mL 强力霉素以诱导表达，在 37°C/5% CO2 条件下孵育 72 小时。将测试化合物按所需浓度（最高 20 μM，8-12 个浓度-反应点，3 倍稀释）加入反应板，并在 33°C 下孵育 18-24 小时。用 PBS 洗涤 5 次，加入鲁米诺 (50 μL) 作为 HRP 底物，在酶标仪上读取发光值。DMSO 作为阴性对照；化合物 15 (2-3 μM) 作为阳性对照。活性百分比以阳性对照进行标准化：活性百分比 = ((测试反应 - DMSO 反应)/(阳性对照反应 - DMSO 反应)) × 100。EC50 值使用具有可变 Hill 斜率的 S 形曲线计算。 [2]
蛋白质印迹分析（CFBE细胞）：将稳定表达F508delCFTR（克隆DG3）的CFBE细胞以10⁶个细胞/孔的密度接种于6孔板中，用DMSO或化合物在37°C下处理18-24小时。用冰冷的PBS冲洗细胞单层，用含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液裂解细胞。裂解液在4°C下以12,000g离心10分钟；用BCA法测定蛋白质浓度。取等量蛋白质在NuPAGE Novex 7% Tris-乙酸凝胶上以150 V电压电泳2小时；以20 V电压转移至PVDF膜上1小时。将膜与小鼠单克隆抗CFTR 596抗体（1:5000）在4°C下孵育过夜；二抗（IRDye 800CW 山羊抗小鼠 IgG，1:15,000）在室温下避光孵育 1 小时。免疫印迹经红外成像系统扫描并定量。小鼠单克隆 α-Na/K ATPase 抗体（1:5000）用于上样量标准化。[2]
Western blot 分析（BHK 抑制突变细胞）：将稳定表达 R1S 或 R1070W F508delCFTR（第四胞外环带有 3HA 标签）的 BHK-21 细胞以 1×10⁶ 个细胞/孔的密度接种于 6 孔板中，用 DMSO 或 1 μM ABBV-2222 在 37°C 下处理 18-24 小时。细胞裂解液的制备方法如上所述；取50 μg蛋白样品，在NuPAGE Novex 3-8% Tris-乙酸凝胶上以150 V电压电泳2小时；然后以20 V电压转移至PVDF膜上，转移时间为1小时。将膜与小鼠单克隆抗HA抗体（1:5000）于4℃孵育过夜；再与二抗（IRDye 800CW山羊抗小鼠IgG，1:15000）于室温孵育1小时。扫描并定量免疫印迹；使用小鼠单克隆抗α-1 Na/K ATPase抗体（1:5000）进行上样量标准化。 [2]
跨上皮电流钳 (TECC) 检测（CFBE-DG3 细胞）：将稳定表达 F508delCFTR 的 CFBE41o- 细胞（克隆 DG3）培养于含 10% FBS、1% 青霉素/链霉素和 G418 (0.5 mg/mL) 的 MEM 培养基中，置于 37°C/5% CO2 条件下培养。将细胞以 1.5×10⁶ 个细胞/孔的密度接种于胶原蛋白包被的 24 孔滤膜上，培养 5-7 天形成紧密的单层细胞。在检测当天，将细胞转移至不含碳酸氢盐和血清的 F-12 Coon 氏培养基中，并在无 CO2 培养箱中平衡 180 分钟。用改良的 F-12 Coon 氏培养基（20 mM HEPES，pH 7.4）浸润细胞的顶端和基底外侧，并在 36.5°C 下进行检测。依次添加：苯扎米（顶端 6 μM）、福斯克林（顶端和基底外侧 10 μM）、GLPG1837（顶端和基底外侧 1 μM）和布美他尼（基底外侧 20 μM）。使用 TECC-24 仪器测量跨上皮电压和电阻；计算等效电流 (IEQ = VT/RT)。DMSO 作为阴性对照；化合物 15 (3 μM) 作为阳性对照。活性百分比以阳性对照进行标准化。EC50 使用具有可变 Hill 斜率的 S 形曲线计算。[2]
TECC 检测（原代 HBE 细胞）：将来自 CF 患者（F508del/F508del 纯合子）的原代 HBE 细胞接种到涂有 3T3 条件培养基的 24 孔滤板上，并在气液界面使用分化培养基培养 35 天。实验前72小时，用含Ca²⁺/Mg²⁺的3 mM二硫苏糖醇PBS溶液孵育30分钟去除顶端黏液，然后吸出黏液并用PBS洗涤。将细胞与校正化合物在37°C/5% CO₂条件下孵育18-24小时；化合物施加于基底外侧。测量当天，将细胞在无CO₂培养箱中平衡30分钟。步骤和计算与CFBE-DG3 TECC检测相同。[2]
膜片钳电生理：将瞬时转染CFTR-cDNA和编码GFP的pEGFP-C3的CHO细胞在实验前用ABBV-2222孵育过夜。进行由内向外模式的膜片钳实验；用蛋白激酶A和ATP激活F508delCFTR。采用单通道动力学分析确定开放概率（Po）。 [2]
MSD1片段稳定性测定：使用Effectene试剂将不同长度（370X、373X、375X、380X等）的CFTR片段转染至HEK293细胞。在收获前14小时加入调节剂（5 μM）；在追踪实验中使用环己酰亚胺（10 μg/mL）。使用CFTR N端尾抗体（MM13-4）通过Western blot检测CFTR片段的表达；使用硼替佐米（10 μM，收获前4小时）作为蛋白酶体抑制剂对照。[2]
Galicaftor的体外细胞测定使用表达突变型CFTR（通常为F508del）的原代人支气管上皮细胞或已建立的细胞系（例如CFBE41o-）。将细胞用浓度范围为 0.1 nM 至 10 µM 的 Galicaftor 处理 24-48 小时。采用 Ussing 室电生理法或基于荧光的卤化物敏感染料法测量氯离子转运，以评估 CFTR 校正情况。通过生物素标记和蛋白质印迹法定量细胞表面 CFTR 的表达。化合物的 EC50 通常根据 CFTR 介导的转运活性的剂量反应曲线确定。

采用大鼠进行药代动力学研究。

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细胞表面表达-辣根过氧化物酶 (CSE-HRP) 检测：将 CFBE41o-F508del CFTR-HRP 细胞以 4,000 个细胞/孔的密度接种于 384 孔板中，并加入 0.5 µg/mL 强力霉素以诱导 F508del CFTR-HRP 表达，然后在 37°C、5% CO2 条件下培养 72 小时。加入所需浓度的测试化合物（包括 ABBV-2222，最高浓度为 20 µM，采用 3 倍稀释法绘制 8 点浓度-反应曲线），并在 33°C 下继续培养 18-24 小时。用 DPBS 洗涤 5 次后，加入 50 µL 鲁米诺作为 HRP 底物。使用酶标仪测定 HRP 活性。分析原始计数，并将活性百分比标准化至板上阳性对照（化合物 15，3 µM）和 DMSO 阴性对照。EC50 值采用具有可变 Hill 斜率方程的通用 S 形曲线计算。[1]
人支气管上皮细胞跨上皮电流钳 (HBE-TECC) 检测：扩增来自 F508del/F508del CFTR 患者的原代人支气管上皮细胞，并将其接种于涂有 3T3 条件培养基的 24 孔滤板上，使用分化培养基在气液界面培养 35 天。实验前 72 小时，用 3 mM DTT 孵育 30 分钟去除顶端黏液，然后吸出并重新洗涤。将细胞与所需浓度的ABBV-2222或其他校正剂（由10 mM的储备液溶于分化培养基中配制）在基底外侧于37°C、5% CO2条件下孵育18-24小时。测量当天，将细胞转移至不含碳酸氢盐和血清的F-12 Coon氏培养基中，并在无CO2培养箱中平衡90分钟。使用TECC-24仪器在36.5°C下进行测量。细胞的顶端和基底外侧均用F-12 Coon氏培养基（20 mM HEPES，pH 7.4）浸泡。在依次添加苯扎米（顶端，6 µM）、福斯克林（顶端和基底外侧，10 µM）、对照增强剂 GLPG1837（顶端和基底外侧，1 µM）以及布美他尼（基底外侧，20 µM）前后，测量电流反应。在电流钳制条件下测量跨上皮电位差 (VT) 和电导 (GT)。计算等效电流 (IEQ = VT·GT) 和曲线下面积。活性百分比以板内阳性对照（3 µM 化合物 15）和 DMSO 阴性对照进行标准化。使用 Prism v5 中的可变 Hill 斜率方程，通过一般 S 形曲线计算 EC50。[1]
Galicaftor 的体内动物实验通常使用 CFTR 基因敲除小鼠或表达人 F508del CFTR 的转基因小鼠。该化合物以 1 至 100 mg/kg 的剂量口服给药。 CFTR 功能可通过测量 Ussing 室中的肠道短路电流、鼻腔电位差或汗液氯化物浓度进行评估。药效学研究评估单次或多次给药后 CFTR 功能纠正的时间进程。与其他 CFTR 调节剂的联合研究旨在评估其在体内改善 CFTR 功能的潜在协同效应。

表7列出了Galicaftor（ABBV-2222；GLPG-2222）的药代动力学特征。Galicaftor（ABBV-2222；GLPG-2222）主要通过葡萄糖醛酸化作用从人体血浆中清除，因此药物相互作用的风险较低。在包括药代动力学（DMPK）、安全性药理学和毒理学在内的大鼠和犬的综合临床前研究支持Galicaftor（ABBV-2222；GLPG-2222）作为临床开发候选药物。在一项首次人体I期研究中，健康志愿者单次服用高达800 mg的Galicaftor（ABBV-2222；GLPG-2222），并在14天内每日多次服用高达600 mg的剂量。该药物耐受性良好，安全性高，未发生提前终止研究药物的情况，也未发生严重不良事件。 [1]

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大鼠药代动力学研究：化合物 15（前体）在大鼠药代动力学研究中进行了表征，静脉注射剂量为 1.2 mg/kg（清除率 2.8 L/h/kg，半衰期 2.1 h），口服剂量为 12 mg/kg（生物利用度 42%）。化合物 21 在静脉注射剂量为 1 mg/kg（清除率 0.6 L/h/kg，半衰期 4.4 h），口服剂量为 17 mg/kg（生物利用度 8%）时进行了表征。[1]
化合物 22 的大鼠药代动力学：静脉注射剂量 1 mg/kg，清除率 0.55 L/h/kg，半衰期 2.7 h；口服剂量 2 mg/kg，生物利用度 74%。[1]
化合物 22 的犬药代动力学：静脉注射剂量 2 mg/kg，清除率 0.83 L/h/kg，半衰期 5.0 h；口服剂量为 5 mg/kg，生物利用度为 40%。[1]
Galicaftor 在临床前动物模型中表现出良好的口服生物利用度和药代动力学特性。口服给药后，该化合物可在血浆和肺组织中达到治疗浓度。该化合物主要通过肝细胞色素 P450 酶代谢，其消除半衰期支持每日一次或两次给药。临床前研究表明，Galicaftor 的暴露量与剂量呈正比，且清除率较低至中等。该化合物的药代动力学特征与囊性纤维化的联合治疗方案相符，可与增强剂和其他矫正剂联合用药，以达到 CFTR 的最大矫正效果。

ABBV-2222在临床相关浓度下不会与增强剂产生非生产性相互作用（与lumacaftor不同，lumacaftor在高浓度非生理相关浓度下会与ivacaftor产生此类相互作用）。[2]
ABBV-2222未显示CYP3A4诱导作用（与CYP3A4诱导剂lumacaftor相反）。[2]
ABBV-2222不会引起支气管收缩（与lumacaftor不同，据报道lumacaftor由于脱靶效应会在部分患者中引起支气管收缩）。[2]
ABBV-2222对F508delCFTR具有选择性，并且不影响其他错误折叠蛋白（hERG G601S、PgP G268V）的加工。 [2]
本研究未报告具体的毒性数据（LD50、器官毒性、蛋白结合率）。[2]
Galicaftor 的临床前毒理学研究表明，其在治疗剂量下具有良好的安全性。在啮齿动物和非人灵长类动物的重复给药毒性研究中，该化合物耐受性良好，未观察到明显的靶器官毒性。不良反应仅限于通常与高剂量暴露相关的反应，包括轻度胃肠道不适和肝酶升高。遗传毒理学研究表明，该化合物不具有致突变性或致染色体断裂性。该化合物的安全范围被认为足以用于临床开发，在预期治疗暴露量的数倍下均未观察到不良反应。

[1]. Discovery of 4-[(2R,4R)-4-({[1-(2,2-Difluoro-1,3-benzodioxol-5-yl)cyclopropyl]carbonyl}amino)-7-(difluoromethoxy)-3,4-dihydro-2H-chromen-2-yl]benzoic Acid (ABBV/GLPG-2222), a Potent Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator.

[2]. Biological Characterization of F508delCFTR Protein Processing by the CFTR Corrector ABBV-2222/GLPG2222. J Pharmacol Exp Ther. 2020 Jan;372(1):107-118.

Galicaftor 正在临床试验 NCT03540524 中进行研究（该研究旨在评估研究药物 GLPG2451 和 GLPG2222 联合或不联合 GLPG2737 治疗囊性纤维化患者的安全性、耐受性和有效性）。

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囊性纤维化 (CF) 是由 CFTR 基因的功能缺失突变引起的；最常见的突变是 F508del（苯丙氨酸 508 缺失），约 90% 的 CF 患者至少在一个等位基因上存在该突变。[2]
治疗 F508delCFTR 需要两种生物分子活性：矫正剂用于增加细胞表面正确折叠的蛋白质，增强剂用于有效开放通道。[2]
ABBV-2222 是一种 C1 型矫正剂，其作用机制是通过促进 NBD1 和 MSD2（核苷酸结合域 1/跨膜域 2）之间界面的稳定。 [2]
三联疗法（两种具有叠加作用机制的矫正剂+一种增强剂）有望为囊性纤维化患者带来更大的临床获益。[2]
第一代C1矫正剂lumacaftor (VX-809)和tezacaftor (VX-661)由Vertex Pharmaceuticals公司开发；ORKAMBI（lumacaftor+ivacaftor）和SYMDEKO（tezacaftor+ivacaftor）已获得FDA批准，但仅显示出适度的（约3-4%）FEV1改善。[2]
Lumacaftor的副作用包括：CYP3A4诱导、部分患者出现支气管收缩以及前3个月25-30%的停药率。[2]
ABBV-2222是艾伯维公司正在开发的三联疗法的第一成分，是一种新型C1矫正剂；目前正在进行临床试验。 [2]
ABBV-2222与lumacaftor或tezacaftor无叠加效应，这与它们相似的作用机制相符（均为C1校正剂）。[2]
目前的研究重点在于了解三联疗法各组分的作用机制和药物相互作用，以期为囊性纤维化患者开发出同类最佳的治疗方案。[2]
Galicaftor（ABBV-2222，GLPG-2222）是一种用于治疗囊性纤维化的CFTR校正剂。它旨在纠正F508del CFTR突变体和其他加工突变的折叠缺陷。该化合物已在囊性纤维化患者的临床试验中进行评估，包括F508del突变纯合子患者。Galicaftor通常与其他CFTR调节剂联合使用，作为三联疗法的一部分进行研究。该化合物的作用机制包括稳定 CFTR 的 NBD1-MSD 界面，促进蛋白质的正确折叠和运输到细胞表面。

C28H21F4NO7

559.462462186813

559.125

C, 60.11; H, 3.78; F, 13.58; N, 2.50; O, 20.02

1918143-53-9

121301049

White to off-white solid powder

1.6±0.1 g/cm3

701.1±60.0 °C at 760 mmHg

377.8±32.9 °C

0.0±2.3 mmHg at 25°C

1.640

6.05

103

2

11

7

40

957

2

FC1(OC2=CC=C(C=C2O1)C1(C(N[C@H]2C3C=CC(=CC=3O[C@@H](C3C=CC(C(=O)O)=CC=3)C2)OC(F)F)=O)CC1)F

QVDYQHXNAQHIKH-TZIWHRDSSA-N

InChI=1S/C28H21F4NO7/c29-26(30)37-17-6-7-18-19(13-21(38-22(18)12-17)14-1-3-15(4-2-14)24(34)35)33-25(36)27(9-10-27)16-5-8-20-23(11-16)40-28(31,32)39-20/h1-8,11-12,19,21,26H,9-10,13H2,(H,33,36)(H,34,35)/t19-,21-/m1/s1

4-((2R,4R)-4-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)cyclopropane-1-carboxamido)-7-(difluoromethoxy)chroman-2-yl)benzoic acid

GLPG-2222; Galicaftor; 1918143-53-9; ABBV-2222; GLPG2222; Galicaftor [INN]; Galicaftor [USAN]; GLPG 2222; J0IIT8QSQS; ABBV-2222; Galicaftor; ABBV 2222; GLPG2222; ABBV2222.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~89.37 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。