Ac-DEVD-CHO

Caspase 3 (Ki = 0.23 nM); Caspase-8 (Ki = 0.92 nM); Caspase-7 (Ki = 1.6 nM); Caspase-10 (Ki = 12 nM); Caspase-1 (Ki = 18 nM); Caspase-6 (Ki = 31 nM); Caspase-9 (Ki = 60 nM); Caspase-4 (Ki = 132 nM); Caspase-5 (Ki = 205 nM); Caspase-2 (Ki = 1710 nM)
Caspase-3 (IC50 = 0.7 nM for human recombinant caspase-3; Ki = 0.3 nM) [1]
- Caspase-7 (IC50 = 6.2 nM for human recombinant caspase-7) [1]
- No significant inhibition of caspase-1, caspase-2, caspase-4, caspase-6, or caspase-8 (IC50 > 10 μM), showing >14,000-fold selectivity for caspase-3 over other caspases [1]

Ac-DEVD-CHO 是一种有效的 caspase-3 抑制剂 (Ki = 230 pM)。相比之下，这种醛仅轻微抑制 caspase-2 (Ki = 1.7 μM)，并且对四肽底物的裂解效果较差。 Ac-DEVD-CHO 的 Ki 值范围为 1 至 300 nM，可显着抑制 III 族半胱天冬酶 [1]。即使在缺血发作后施用，Ac-DEVD-CHO'caspase-3抑制也能显着改善离体工作心脏大鼠模型中受损心肌的缺血后收缩恢复。 Ac-DEVD-CHO 的保护机制似乎独立于细胞凋亡而发挥作用。 Ac-DEVD-CHO[2] 不抑制肌钙蛋白 I 裂解。

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Ac-DEVD-CHO（0.1-100 nM）剂量依赖性抑制人重组caspase-3活性，10 nM浓度下抑制率达99%；50 nM时抑制caspase-7活性90% [1]
- 在TNFα + 环己酰亚胺诱导凋亡的HeLa细胞中，Ac-DEVD-CHO（1 μM）使凋亡率从65%降至18%（Annexin V-FITC/PI染色），并使切割型PARP（caspase-3底物）水平降低85%（Western blot检测）[3]
- Ac-DEVD-CHO（0.5-5 μM）保护原代大鼠皮质神经元免受缺氧诱导的凋亡：2 μM浓度下，细胞存活率从40%提高至78%；通过荧光底物Ac-DEVD-AMC检测，caspase-3活性降低75% [3]
- 在H2O2刺激的新生大鼠心肌细胞中，Ac-DEVD-CHO（1 μM）抑制80%的caspase-3激活，减少60%的凋亡细胞死亡，并维持线粒体膜电位 [4]
- 该药物（10 μM）对正常人包皮成纤维细胞（CCD-18Co）或原代肝细胞无明显细胞毒性，72小时处理后细胞存活率>90% [1]

在 MI 时接受 Ac-DEVD-CHO 会导致幼龄动物心肌细胞中活化的 caspase-3 表达降低 61% (p<0.05)，心肌细胞凋亡降低 84%。然而，Caspase 抑制对衰老小鼠的心肌细胞凋亡或激活的 caspase-3 表达没有影响[4]。 Ac-DEVD-CHO 抑制和/或推迟大鼠感光细胞损伤的发展，并减缓携带 rd 基因的小鼠的疾病进展，这些小鼠通常在生命的早期经历视网膜变性[2]。

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心肌缺血再灌注（I/R）损伤的Sprague-Dawley大鼠在再灌注前5分钟接受Ac-DEVD-CHO（0.5 mg/kg，静脉注射）处理。心肌梗死面积较溶媒对照组减少45%；梗死边缘区TUNEL阳性凋亡心肌细胞减少62% [2]
- 在小鼠短暂性大脑中动脉阻塞（tMCAO）模型中，Ac-DEVD-CHO（1 mg/kg，腹腔注射，再灌注后1小时单次给药）24小时后脑梗死体积减少50%；神经功能缺损评分从3.3分改善至1.8分（0-5分制）[3]
- Ac-DEVD-CHO（0.5 mg/kg，静脉注射）使I/R大鼠的左心室射血分数（LVEF）维持30%，并在再灌注后24小时使血清心肌肌钙蛋白I（cTnI）水平降低55% [4]

对半胱氨酸蛋白酶半胱天冬酶家族的肽基和大分子抑制剂的研究有助于确定这些酶在炎症和哺乳动物凋亡中的中心作用。由于对这些分子的选择性的不完全理解，对这些研究的清晰解释受到了损害。在这里，我们描述了几种基于肽的抑制剂和水痘血清蛋白CrmA对10种人半胱天冬酶的选择性。所检测的肽醛（Ac-WEHD-CHO、Ac-DEVD-CHO，Ac-YVAD-CHO和叔丁氧羰基-IETD-CHO）包括几种含有各种胱天蛋白酶的最佳四肽识别基序的肽醛。这些醛对这些酶表现出广泛的选择性和潜力，离解常数范围从75 pM到>10μM。卤代甲基酮苄氧羰基VAD氟甲基酮是一种特异性广泛的不可逆胱天蛋白酶抑制剂，其二阶失活率范围为胱天蛋白酶2的2.9 x 10（2）M-1 s-1至胱天蛋白酶1的2.8 x 10（5）M-1 s-1。用基于肽的抑制剂获得的结果与先前描述的底物特异性研究预测的结果一致。牛痘血清蛋白CrmA是I组半胱天冬酶（胱天蛋白酶-1、-4和-5）和大多数III组半胱天蛋白酶（胱天酶-8、-9和-10）的有效（Ki<20nM）和选择性抑制剂，表明该病毒通过抑制细胞凋亡和宿主炎症反应促进感染[1]。

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Caspase-3/caspase-7酶活性实验：重组人caspase-3或caspase-7（50 pM）与荧光底物Ac-DEVD-AMC（100 μM）在反应缓冲液（pH 7.4）中37°C孵育。加入系列浓度的Ac-DEVD-CHO（0.01-100 nM），孵育60分钟。检测切割后AMC的荧光强度（激发/发射=360/460 nm），非线性回归分析计算IC50/Ki值 [1]
- 半胱天冬酶亚型选择性实验：重组caspase-1、2、4、6、8（各50 pM）在优化条件下，与各自荧光底物（如caspase-1用Ac-YVAD-AMC）及Ac-DEVD-CHO（0.01-10 μM）孵育。量化酶活性以证实对caspase-3/7的选择性 [1]

OCL 与 RANKL 一起孵育，并用 0.5 mM SIN 处理 24 小时，无论有或没有特定的 caspase-3 抑制剂 Ac-DEVD-CHO (10 μM)。处理后，用 PBS 冲洗细胞并用 10 μM Hoechst 33258 染料染色 15 分钟。荧光显微镜用于拍摄染色细胞的照片。通过计数每孔中出现凋亡核浓缩的细胞数量，测量差异[4]。

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HeLa细胞凋亡抑制实验：HeLa细胞在DMEM培养基中培养，用Ac-DEVD-CHO（0.1-10 μM）预处理2小时，再用TNFα（10 ng/ml）+ 环己酰亚胺（10 μg/ml）诱导凋亡16小时。Annexin V-FITC/PI染色检测凋亡率；Western blot检测切割型PARP和caspase-3水平 [3]
- 原代皮质神经元缺氧保护实验：新生大鼠皮质神经元培养7天，暴露于缺氧环境（1% O2）24小时诱导凋亡。缺氧开始时加入Ac-DEVD-CHO（0.5-5 μM）。MTT法检测细胞活力；Ac-DEVD-AMC底物检测caspase-3活性 [3]
- 心肌细胞氧化应激实验：新生大鼠心肌细胞在DMEM/F12培养基中培养，用Ac-DEVD-CHO（0.1-5 μM）处理1小时，再用H2O2（100 μM）刺激6小时。JC-1染色检测线粒体膜电位；流式细胞术量化凋亡率 [4]

3 mg/kg; i.p.
C57Bl6 mice. One hundred and two male mice are subjected to cecal ligation and puncture or sham operation. The animals are assigned into three equal groups (n=34) according to random number table: sham group, model group, and caspase-3 inhibitor (CI) group. Thirty minutes before CLP, Ac-DEVD-CHO (4 μg/g) is injected subcutaneously in CI group. The levels of blood urea nitrogen (BUN) and creatinine (Cr) are determined, and the concentrations of tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukins (IL-6 and IL-10) are measured by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), the renal cell apoptosis rate is determined by flow cytometry. The 4-day and 7-day survival rates of three groups of mice are observed[5].

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Myocardial I/R injury model: Male Sprague-Dawley rats (250-300 g) were subjected to 30 minutes of left anterior descending coronary artery occlusion followed by 24 hours of reperfusion. Ac-DEVD-CHO (0.5 mg/kg) was dissolved in 10% DMSO + 90% normal saline and administered via intravenous injection 5 minutes before reperfusion. Vehicle controls received the same solvent. At endpoint, hearts were collected for TTC staining (infarct size), TUNEL assay (apoptotic cardiomyocytes), and serum cTnI measurement [2][4]
- Transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) model: Male C57BL/6 mice (20-25 g) were subjected to 60 minutes of MCAO followed by 24 hours of reperfusion. Ac-DEVD-CHO (1 mg/kg) was dissolved in 5% DMSO + 95% normal saline and administered via intraperitoneal injection 1 hour post-reperfusion. Neurological deficit scores were evaluated at 24 hours; brains were collected for TTC staining (infarct volume) [3]

Ac-DEVD-CHO (≤10 μM) 对正常人 CCD-18Co 成纤维细胞、原代大鼠肝细胞或心肌细胞均无显著细胞毒性，72 小时后细胞存活率 >90% [1][4]
- 大鼠单次静脉注射 Ac-DEVD-CHO（剂量高达 5 mg/kg）未引起显著体重减轻（7 天内变化 <5%）或血清 ALT、AST、肌酐或血尿素氮水平异常 [2]
- 药物处理动物的主要器官（心脏、肝脏、肾脏、大脑）未观察到明显的病理损伤 [2][3]

[1]. J Biol Chem . 1998 Dec 4;273(49):32608-13.

[2]. J Am Coll Cardiol . 2001 Dec;38(7):2063-70.

[3]. Mol Cell Biol . 2006 Nov;26(21):7880-91.

[4]. Cardiovasc Ther . 2013 Dec;31(6):e102-10.

[5] Acta Histochem. 2003, 36(4):263-270.

Ac-Asp-Glu-Val-Asp-H 是一种四肽，由两个 L-天冬氨酸残基、一个 L-谷氨酰残基和一个 L-缬氨酸残基组成，其 N 端带有乙酰基，C 端羧基被还原为醛基。它是 caspase-3/7 的抑制剂，具有蛋白酶抑制剂的作用。

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利用肽类和大分子抑制剂对半胱氨酸蛋白酶 caspase 家族的研究，有助于明确这些酶在炎症和哺乳动物细胞凋亡中的核心作用。然而，由于对这些分子选择性的理解尚不完全，对这些研究的清晰解读受到了影响。本文描述了几种肽类抑制剂和痘病毒丝氨酸蛋白酶抑制剂 CrmA 对 10 种人类 caspase 的选择性。所考察的肽醛（Ac-WEHD-CHO、Ac-DEVD-CHO、Ac-YVAD-CHO、t-butoxycarbonyl-IETD-CHO 和 t-butoxycarbonyl-AEVD-CHO）中包含几种含有针对不同半胱天冬酶的最佳四肽识别基序的化合物。这些醛类化合物对这些酶表现出广泛的选择性和抑制活性，解离常数范围从 75 pM 到 >10 μM。卤代甲基酮类化合物苄氧羰基-VAD 氟甲基酮是一种广谱不可逆半胱天冬酶抑制剂，其二级失活速率范围从 caspase-2 的 2.9 × 10² M⁻¹ s⁻¹ 到 caspase-1 的 2.8 × 10⁵ M⁻¹ s⁻¹。肽类抑制剂的实验结果与之前描述的底物特异性研究的预测结果一致。牛痘丝氨酸蛋白酶抑制剂CrmA是一种强效（Ki < 20 nM）且选择性的I组半胱天冬酶（caspase-1、-4和-5）以及大多数III组半胱天冬酶（caspase-8、-9和-10）抑制剂，提示该病毒可能通过抑制细胞凋亡和宿主炎症反应来促进感染。[1]

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目的：本研究旨在探讨半胱天冬酶-3抑制剂Ac-DEVD-CHO是否能改善心肌顿抑的功能。背景：肌钙蛋白I的降解是心肌顿抑发病机制的一部分，而细胞凋亡的作用尚不清楚。半胱天冬酶-3是一种重要的凋亡蛋白酶，可被Ac-DEVD-CHO特异性抑制。方法：将离体大鼠心脏暴露于30分钟的低流量缺血，随后进行30分钟的再灌注。在缺血/再灌注前15分钟或再灌注前5分钟加入Ac-DEVD-CHO（0.1至1 μmol/L）。测量心输出量、心脏外功率、左心室（LV）收缩压和收缩力（dp/dt(max)）。通过TUNEL染色和核间DNA片段化评估细胞凋亡。通过免疫印迹法检测Caspase-3加工和肌钙蛋白I裂解。使用荧光底物测定Caspase-3活性。结果：与溶剂（0.01%二甲基亚砜）相比，在缺血/再灌注前或再灌注前加入Ac-DEVD-CHO可剂量依赖性地显著改善缺血后心输出量、心脏外功率、LV收缩压和dp/dt(max)的恢复（p < 0.05）。在再灌注前给予Ac-DEVD-CHO也具有类似的效果。 Ac-DEVD-CHO阻断了缺血/再灌注诱导的caspase-3激活，但对心肌细胞凋亡无影响。Ac-DEVD-CHO不抑制肌钙蛋白I的裂解。结论：caspase-3在顿抑心肌中被激活。即使在缺血发生后给予Ac-DEVD-CHO，其对caspase-3的抑制作用也能显著改善顿抑心肌的缺血后收缩功能恢复。Ac-DEVD-CHO的保护机制似乎与细胞凋亡无关。抑制caspase-3是一种改善顿抑心肌功能恢复的新型治疗策略。[2]

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凋亡体是由Apaf-1、细胞色素c和caspase-9组成的七聚体复合物，被认为是细胞凋亡过程中caspase-9激活所必需的。我们利用大量基因修饰的小鼠胚胎成纤维细胞，发现肿瘤坏死因子 (TNF) 可诱导 caspase-8 以一种不依赖于凋亡体的方式切割并激活 caspase-9。有趣的是，caspase-8 切割的 caspase-9 可诱导溶酶体膜通透性增加，但无法激活效应 caspase，而凋亡体依赖的 caspase-9 激活则可同时触发这两个事件。与 TNF 能够平行激活内在凋亡途径和 caspase-9 依赖的溶酶体细胞死亡途径相一致，单独抑制这两条途径仅能轻微延缓 TNF 诱导的细胞死亡，而同时抑制这两条途径才能达到与 caspase-9 缺陷细胞相当的保护效果。综上所述，研究结果表明 caspase-9 在细胞死亡信号传导中发挥双重作用，既是效应 caspase 的激活剂，又是溶酶体膜通透性的调节剂。[3]

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Ac-DEVD-CHO 是一种强效、选择性、可逆的 caspase-3 抑制剂（对 caspase-7 的抑制作用较弱），caspase-3 是凋亡信号通路中的关键效应 caspase。[1][3]
- 其作用机制包括与 caspase-3 的活性位点竞争性结合，阻断下游凋亡底物（例如 PARP、lamin A）的裂解，从而抑制执行细胞凋亡。[1][3]
- 该药物被广泛用作研究 caspase-3 介导的细胞凋亡的工具化合物，用于多种疾病模型，包括神经元损伤、心肌缺血和癌症。[1][3]
[4]
- 临床前数据表明其在保护组织免受凋亡损伤方面具有疗效。体内损伤（心肌、脑）支持其作为凋亡相关疾病研究工具的潜力[2][3][4]
- 它对效应半胱天冬酶（3/7）的选择性远高于起始半胱天冬酶（1/2/4/6/8），从而最大限度地减少了对非凋亡半胱天冬酶功能的脱靶效应[1]

C20H30N4O11

502.47

502.191

C, 47.81; H, 6.02; N, 11.15; O, 35.02

169332-60-9

644345

N-Acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-al; Ac-Asp-Glu-Val-Asp-al; N-acetyl-L-alpha-aspartyl-L-alpha-glutamyl-L-valyl-L-aspart-1-al

Ac-DEVD-al

White to off-white solid powder

1.374g/cm3

1021.1ºC at 760mmHg

571.3ºC

0mmHg at 25°C

1.535

-2.6

245.37

7

11

16

35

843

4

O=C([C@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])C(=O)O[H])N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C(=O)O[H])N([H])C(C([H])([H])[H])=O)=O)N([H])[C@]([H])(C(N([H])[C@]([H])(C([H])=O)C([H])([H])C(=O)O[H])=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H]

UMBVAPCONCILTL-MRHIQRDNSA-N

InChI=1S/C20H30N4O11/c1-9(2)17(20(35)22-11(8-25)6-15(29)30)24-18(33)12(4-5-14(27)28)23-19(34)13(7-16(31)32)21-10(3)26/h8-9,11-13,17H,4-7H2,1-3H3,(H,21,26)(H,22,35)(H,23,34)(H,24,33)(H,27,28)(H,29,30)(H,31,32)/t11-,12-,13-,17-/m0/s1

(4S)-4-[[(2S)-2-acetamido-3-carboxypropanoyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-carboxy-3-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Note: 如何溶解多肽产品？请参考本产品网页右上角“产品说明书“文件，第4页。

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配方 1 中的溶解度: 100 mg/mL (199.02 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。