| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Histone deacetylase 1 (HDAC1) (IC50 = 7 nM) [1]
Histone deacetylase 2 (HDAC2) (IC50 = 18 nM) [1] Histone deacetylase 3 (HDAC3) (IC50 = 1300 nM) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
ACY-957对HDAC4/5/6/7/8/9没有抑制作用，但它是HDAC1和HDAC2的选择性抑制剂，对HDAC1/2/3的IC50分别为7 nM、18 nM和1300 nM，分别。对于原代造血祖细胞中的 HDAC2，ACY-957 的 IC50 为 304 nM [1]。
用1 μM或5 μM的ACY-957处理原代人成红细胞，会导致组蛋白H3赖氨酸9和14（H3K9/14ac）、H3赖氨酸56（H3K56ac）、H3赖氨酸79（H3K79ac）和H2B赖氨酸5（H2BK5ac）的乙酰化呈剂量依赖性积累，而组蛋白H3赖氨酸9三甲基化（H3K9me3）不受影响。[1] 在两种不同的红系祖细胞培养系统（CS1和CS2）中，用1 μM ACY-957处理可诱导γ-珠蛋白（HBG）mRNA占总β样珠蛋白mRNA的百分比出现显著的时间依赖性增加，在第5天时，CS1中达到约35%，CS2中达到约24，这相当于比载体对照增加了约3.5倍。这种诱导作用超过了30 μM羟基脲观察到的效果。[1] 通过流式细胞术检测，用1 μM ACY-957处理可使HbF阳性细胞的百分比增加2至3倍，并且使每个细胞的HbF平均荧光强度（MFI）增加高达2倍。[1] ACY-957处理（1 μM）显著增加了胚胎ε-珠蛋白（HBE）和胎儿γ-珠蛋白（HBG）的mRNA水平，同时降低了成人δ-珠蛋白（HBD）和β-珠蛋白（HBB）的mRNA水平，这与珠蛋白转换的延迟或逆转相一致。[1] 在培养14天的爆式红系集落形成单位（BFU-E）中，ACY-957以剂量依赖性方式增加了HBG mRNA的百分比：载体组为15%，1 μM组为48%，2 μM组为82%。[1] 在来自四名镰状细胞病（SCD）供体的外周血单个核细胞（PBMC）中，用1 μM ACY-957处理显著提高了HBG mRNA水平（例如，在一名供体中从12%提高到58%）。它还诱导了HbF阳性细胞数量和每个细胞HbF蛋白丰度的剂量依赖性增加。[1] 基因表达谱分析显示，ACY-957处理（1 μM）诱导了1294个基因，抑制了681个基因。这些表达变化与HDAC1或HDAC2基因敲低导致的变化显著重叠。关键变化包括HBG抑制因子BCL11A（下调1.3倍）和SOX6（下调2.5倍）的下调，以及GATA2（上调2.8倍）的上调。[1] 定量PCR证实，ACY-957处理阻止了GATA2在红系分化过程中的正常抑制，在第4天时相对于对照组增加了3.3倍。GATA1和KLF1的表达未受影响。[1] 在原代红系祖细胞中通过慢病毒过表达GATA2，显著增加了HBG mRNA的百分比和HBG转录本水平，同时降低了HBB mRNA水平，模拟了ACY-957的效果。[1] 使用shRNA敲低GATA2，使ACY-957诱导的HBG mRNA减少了约25%。[1] 在载体处理的原代红系祖细胞中进行的染色质免疫沉淀测序（ChIP-Seq）显示，HDAC1和HDAC2在GATA2基因座的一个15 kb区域内均有高占据率，该区域包含已知的自调节增强子区域（+9.5 kb, -1.8 kb, -2.8 kb, -3.9 kb）。[1] ACY-957处理导致GATA2增强子区域的组蛋白乙酰化（H2BK5ac， H3K9ac， H3K27ac）显著增加（在-1.8 kb区域增加高达8倍），并增加了GATA2蛋白在这些相同区域的结合（在-1.8 kb区域增加高达3倍）。[1] GATA2 ChIP-Seq还揭示，ACY-957处理增加了GATA2在β-珠蛋白基因座内HBD基因启动子附近区域的结合（1.8倍）。[1] 用1 μM ACY-957处理导致TFRCposGYPAmid原成红细胞积累，并抑制其分化为TFRCposGYPApos嗜碱性成红细胞，培养周期为8天。[1] |
| 酶活实验 |
进行了体外生化试验以评估ACY-957对纯化HDAC酶的抑制。将化合物溶解并稀释在测定缓冲液中。将HDAC酶在测定缓冲液中稀释，并在加入底物（乙酰化赖氨酸或三氟乙酰化赖氨酸三肽，取决于HDAC亚型）前与ACY-957预孵育24小时。底物使用浓度等于其米氏常数（Km）。监测脱乙酰作用后7-氨基-4-甲氧基香豆素的释放超过30分钟，并计算线性反应速率以确定IC50值。[1]
使用生物发光HDAC2特异性底物进行了细胞HDAC2抑制试验。将原代人骨髓来源的造血祖细胞在培养物中扩增6天，然后用ACY-957再处理48小时。根据测定方案以裂解形式检测发光，以确定细胞IC50。[1] |
| 细胞实验 |
使用两种不同的两阶段红系分化系统（培养系统1，CS1和培养系统2，CS2）培养来自骨髓（健康供体）或外周血（SCD患者）的原代人CD34+细胞。细胞在特定的细胞因子补充培养基中扩增，然后转移到含有促红细胞生成素和其他因子的分化培养基中。在分化开始时加入ACY-957或载体。[1]
在不同时间点收获细胞。通过流式细胞术使用抗转铁蛋白受体（TFRC）和血型糖蛋白A（GYPA）的抗体评估红系成熟阶段。[1] 分离总RNA，然后进行DNase消化。合成cDNA。使用特异性TaqMan探针或SYBR green通过定量实时PCR（QPCR）对珠蛋白mRNA种类（HBB， HBD， HBG， HBE）和其他感兴趣的基因（如GATA2， BCL11A）进行定量。HBG mRNA的百分比相对于所有β样珠蛋白转录本的总和计算。[1] 通过流式细胞术检测HbF蛋白。细胞用FITC标记的抗人HbF抗体染色，测量阳性细胞百分比和平均荧光强度。[1] 对于通过蛋白质印迹分析组蛋白乙酰化，提取组蛋白。裂解物通过凝胶电泳分离，转移到膜上，并用针对各种乙酰化组蛋白标记（H3K9/14ac， H3K56ac， H3K79ac， H2BK5ac）的抗体和用于归一化的总组蛋白H4抗体进行检测。[1] 对于通过蛋白质印迹检测GATA2蛋白，细胞在变性缓冲液中裂解，蛋白质通过毛细管电泳或标准蛋白质印迹法分离，然后用抗GATA2抗体检测。[1] 对于染色质免疫沉淀（ChIP），用甲醛固定细胞。染色质通过超声剪切，并用针对特定组蛋白修饰（H3K9ac， H2BK5ac， H3K27ac）或GATA2的抗体进行免疫沉淀。沉淀的DNA通过下一代测序（ChIP-Seq）或通过QPCR（ChIP-QPCR）进行分析，使用针对感兴趣的基因组区域（例如，GATA2增强子，HBD启动子）的引物组。[1] 对于基因表达谱分析，使用Affymetrix GeneChip芯片分析来自载体或ACY-957处理细胞的总RNA。对数据进行差异表达和基因集富集分析。[1] 对于功能研究，使用编码GATA2特异性shRNA或GATA2过表达构建体的慢病毒载体转导原代红系祖细胞。用嘌呤霉素选择转导的细胞，然后在扩增或分化培养基中用ACY-957或载体处理，随后分析mRNA和蛋白质。[1] 通过将正常人骨髓单个核细胞培养在半固体甲基纤维素培养基（含有细胞因子IL3、CSF2、KITLG、EPO）和ACY-957或载体中进行爆式红系集落形成单位（BFU-E）测定。14-16天后，挑取BFU-E集落，分离RNA用于QPCR分析。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
文献指出，非选择性HDAC抑制剂在临床应用中与显著的毒性和不良反应相关。HDAC1/2选择性抑制剂ACY-957的研发旨在最大限度地降低此类潜在毒性。[1]
该研究指出，1 μM的ACY-957对HDAC1/2的抑制作用可阻断体外原红细胞向嗜碱性红细胞的分化，提示其可能对红细胞生成具有靶向作用，可能需要在体内间歇给药以促进含HbF细胞的成熟。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
ACY-957是一种新型的、口服生物利用度高的联芳基氨基苯甲酰胺类小分子抑制剂，其设计目标是选择性抑制HDAC1和HDAC2，而非其他HDAC亚型。它通过转录后水平抑制VEGF蛋白的合成。[1]
该化合物的研发目标是诱导胎儿血红蛋白（HbF）的生成，用于治疗镰状细胞病（SCD）和β-地中海贫血，同时尽可能降低非选择性HDAC抑制剂相关的毒性。[1] 其作用机制被认为是ACY-957抑制HDAC1/2，导致GATA2增强子区域的组蛋白乙酰化水平升高。这通过正向自调节环路促进GATA2的结合，并在红系细胞成熟过程中维持GATA2基因的表达。 GATA2 水平升高可能通过增加 GATA2 与 β-珠蛋白基因座内 HBD 启动子区域的结合，促进 HBG 的诱导。[1] 该研究表明，由于 HDAC1 在红系发育中起主导作用，未来的药物研发可能侧重于实现 HDAC2 选择性，以最大限度地减少潜在的成红细胞毒性。[1] ACY-957 对 GATA2 的诱导作用也提示其在骨髓增生异常综合征 (MDS) 和急性髓系白血病 (AML) 中具有潜在的治疗价值，因为 GATA2 单倍体不足或表观遗传沉默与这些疾病相关。[1] |
| 分子式 |
C24H23N5OS
|
|---|---|
| 分子量 |
429.537323236465
|
| 精确质量 |
429.162
|
| CAS号 |
1609389-52-7
|
| PubChem CID |
72374405
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
602.7±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
318.3±31.5 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.7 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.726
|
| LogP |
2.73
|
| tPSA |
112
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
615
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
VURDNNVAYZDGDK-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H23N5OS/c25-19-6-3-17(22-2-1-13-31-22)15-21(19)28-24(30)18-4-7-20-16(14-18)5-8-23(27-20)29-11-9-26-10-12-29/h1-8,13-15,26H,9-12,25H2,(H,28,30)
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| 化学名 |
N-(2-amino-5-thiophen-2-ylphenyl)-2-piperazin-1-ylquinoline-6-carboxamide
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| 别名 |
ACY-957; ACY957; ACY 957
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~83.33 mg/mL (~194.00 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3281 mL | 11.6404 mL | 23.2807 mL | |
| 5 mM | 0.4656 mL | 2.3281 mL | 4.6561 mL | |
| 10 mM | 0.2328 mL | 1.1640 mL | 2.3281 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Bamirastine
戊双氟酚
PROTAC-PEG3-Amino
MT-3014
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COA
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