| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Sortilin ( IC50 = 330 nM )
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| 体外研究 (In Vitro) |
AF38469已进行进一步研究。应当注意，在3HNTS测定中，神经紧张素本身的结合IC50为360 nM，因此AF38469与这种sortilin底物基本相等。
在CEREP下运行的约70个靶标的标准选择性panel中，AF38469在10μM下没有显示出>50%的抑制或刺激。重要的是，AF38469对NTR1受体没有活性。此外，AF38469对已知结合酸性分子的选定靶点（δ-阿片类、GPR40、PPARδ、EP1、血管紧张素AT1、内皮素ETA和B、MMP-12）没有活性。因此，总体而言，AF38469的选择性分析表明其与sortilin具有高度特异性的相互作用[1]。
成功获得了sortilin和AF38469的共晶体，并通过X射线晶体学确定了其结构，分辨率为2.78Å。图1显示了AF38469晶体结构与sortilin结合的神经紧张素C末端区域结构的叠加。AF38469与sortilin的相互作用与神经紧张素的C末端Leu残基相似。AF38469通过其羧酸与Arg292形成盐桥，CF3基团与Leu侧链的iPr占据相同的疏水结合口袋，酰胺N-H与Tyr318形成氢键供体相互作用。吡啶甲基与Phe317形成疏水π相互作用，类似于神经降压素Ile12的疏水相互作用。该结构还有助于使上述许多结构-活性关系合理化，例如间甲氨基酸5取代基的关键作用、5-Ph（10f）的无活性（由于尺寸排除）以及羧酸官能团的关键作用。 图2显示了AF38469与先前报道的小分子抑制剂AF40431的结合模式的叠加。AF38469和AF40431表现出许多常见的相互作用，包括神经降压素的盐桥和亮氨酸口袋结合特征，但有趣的是，前者的吡啶环和甲基取代基与后者的吡喃环和甲基取代基几乎一致。 预计sortilin-AF38469复合物的结构将用于通过经典的基于结构的药物设计进一步推动化学型的优化[1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
AF38469 (1 mg/kg；iv) 在十二烷基苯磺酸钠中具有低循环容量（血容量为 0.7 L/kg）和低清除率（4.8 L/h/kg），半衰期（t1/2）为 1.2 h[1]。用AF38469治疗西方饮食喂养的小鼠可以降低血浆胆固醇和肝脏细胞因子的表达。它与西方饮食喂养的小鼠肝脏VLDL分泌减少和肝脏胆固醇7α水解酶表达升高有关，但不影响饮食诱导的肥胖或胰岛素抵抗[2]
Sort1抑制剂降低了WD喂养小鼠的血浆胆固醇水平、肝脏VLDL分泌和肝脏促炎细胞因子[2] 最近，已经鉴定出一种口服生物可利用的Sort1抑制剂，AF38469，IC50值约为330 nM。为了确定AF38469对Sort1的药理学抑制是否可以改善脂质稳态和炎症，我们给补充了AF38469的WD小鼠喂食，以达到估计的4 mg/kg日剂量，这与已发表的药代动力学数据一致。AF38469治疗在8周内没有影响体重增加或肝脏重量（图7A，B）。治疗组和对照组的肝脏TG和胆固醇水平没有显著差异，尽管我们注意到AF38469治疗的小鼠肝脏TG下降了约30%（P=0.19）（图7C-E）。两组的血浆AST和ALT水平相似，表明AF38469治疗8周与肝毒性无关（图7F，G）。血脂参数分析显示，AF38469显著降低了30%的血浆胆固醇（图8A），但不影响血浆TG水平（图8B）。为了进一步了解AF38469的降胆固醇作用，我们首先测量了肝脏VLDL的分泌，因为之前的遗传学研究表明肝脏Sort1在调节肝脏VLDL分泌中起作用。有趣的是，AF38469治疗的小鼠显示出肝脏VLDL分泌显著减少（图8C）。胆汁胆固醇分泌和胆汁酸合成是影响循环胆固醇水平的两种主要胆固醇消除机制。AF38469治疗不影响胆囊总胆固醇含量（图8D）。胆汁酸代谢分析显示，AF38469治疗的小鼠肝脏胆汁酸水平显著降低（图8E），而胆囊胆汁酸、肠道胆汁酸和总胆汁酸池大小没有变化（图8E）。肝脏基因表达谱分析发现，在AF38469治疗的小鼠中，肝脏CYP7A1被显著诱导，而其他胆固醇代谢基因（ABCG5、ABCG8、HMGCR、LDLR）没有改变（图8F）。在AF38469治疗的小鼠中，趋化因子MCP1和促炎细胞因子IL-1β和IL-6的肝脏mRNA表达显著降低，但TNFα的表达没有降低（图8F）。较低的肝细胞因子可能为AF38469治疗的小鼠CYP7A1 mRNA表达较高提供了可能的解释。 Sort1抑制剂不影响WD喂养小鼠的空腹血糖和糖耐量[2] 为了更全面地了解药理学Sort1抑制的代谢作用，我们接下来评估了AF38469对WD喂养小鼠胰岛素敏感性的影响。AF38469治疗不影响空腹血糖或空腹胰岛素浓度（图9A，B）。此外，AF38469治疗不影响空腹血浆游离脂肪酸浓度（图9C）或葡萄糖耐量试验中的葡萄糖耐量（图9D）。这些结果表明，AF38469不影响WD喂养小鼠的胰岛素敏感性。 |
| 酶活实验 |
如前所述（Andersen，2013，提交），用10摩尔过量的AF438469结晶1小时。将1μl sortilin-AF38469与1μl储层混合，并在24孔结晶板中在292 K下使用坐滴蒸汽扩散法与500μl储器平衡。在0.1 M HEPES Tris pH 7.3、0.4 M丙二酸钠、27%（w/v）PEG 3350和4.5%（v/v）甘油中获得了最佳的衍射晶体。晶体在两周内生长到200 x 100 x 50μm的尺寸。通过向储器中加入100μl 80%（v/v）PEG400对晶体进行脱水，并将其从母液中装入Litholoops（分子尺寸）中，用环路边缘轻轻接触滴孔侧面，将多余的母液浸入，并在液氮中快速冷却。在瑞士光源（SLS）的X06DA（PXIII）光束线上，使用PILATUS 2M-F探测器在100 K下收集了3600个振荡图像的完整单波长（λ=0.9Å）数据集，振荡角度为0.1o。衍射图像在XDS中处理，在SCALA中缩放。使用PHASER程序，使用基于sortilin与神经降压素复合物（PDB ID 3F6K）结构的搜索模型进行分子置换。在PHENIX中进行了刚体细化、配体坐标和约束的生成、省略图的计算和细化。使用Coot进行建模和分析。使用Molprobity对最终模型质量进行了分析。使用PyMol[1]进行叠加并制备结构图。[1]
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| 动物实验 |
小鼠：本研究使用C57BL/6N背景的Sort1条件性敲除小鼠。靶向策略如图1A所示。通过将Sort1条件性敲除的创始小鼠与C57BL/6J背景的FLP敲除小鼠杂交，去除NeoR盒。Cre介导的重组导致Sort1基因的第2外显子和第3外显子缺失，并引起移码突变。通过将Sort1条件性敲除小鼠与C57BL/6J背景的白蛋白-Cre敲除小鼠杂交，构建L-Sort1敲除小鼠。通过将Sort1条件性敲除小鼠与C57BL/6NJ混合背景的LysM-Cre敲除小鼠杂交，构建LysM-Sort1敲除小鼠。未携带Cre转基因的同窝小鼠作为野生型对照。小鼠饲养于铺有玉米芯垫料的微隔离笼中，并保持正常的昼夜节律。 WT C57BL/6J 小鼠购自 Jackson Laboratory。标准饲料为 PicoLab Rodent Diet 20，含 13% 脂肪热量，不添加胆固醇。WD（TD.88137）含 42% 脂肪热量和 0.2% 胆固醇。雄性 C57BL/6J 小鼠用于 AF38469 研究。AF38469 与粉末状 WD 混合，根据每只小鼠每日约 4 g 的食物摄入量计算，估计每日剂量约为 4 mg/kg。对照组给予粉末状 WD。粉末状 WD 置于笼内碟中，每 2 天更换一次。本研究仅使用雄性小鼠。[2]
葡萄糖耐量试验：喂食 WD 7 周后，对照组和 AF38469 处理组小鼠禁食过夜，然后腹腔注射 2 g/kg 体重的葡萄糖。在指定时间点，从尾部切口采集一滴血，并使用 OneTouch Ultra 血糖仪测量血糖。这些小鼠继续喂食 WD 或添加 AF38469 的 WD 1 周，然后处死并收集组织。[2] VLDL 分泌的测定：12 周龄的雄性 C57BL/6J 小鼠喂食粉状 WD 或添加 AF38469 的粉状 WD，以提供约 4 mg/kg 的日剂量。2 周后，小鼠禁食 6 小时（上午 9:00 至下午 3:00）。将 Tyloxapol 用无菌 PBS 稀释，并通过尾静脉注射以 300 mg/kg 的单次剂量给予小鼠。在注射前（0 小时）以及注射后 1.5 小时和 3 小时通过尾部切口采集血液，用于 TG 测定。[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
大鼠药代动力学：[1]
AF38469 的分布容积低（相对于 0.7 L/kg 的血容量）和清除率低（相对于约 4.8 L/h/kg 的肝血流量），半衰期为 1.2 小时。由于分布容积低，其在血浆中的初始暴露量较高。口服生物利用度为 35%。基于 Cmax、游离分数和分选蛋白效价的简单计算表明，AF38469 的游离血浆浓度约为 1.2 L/h/kg。口服 2 mg/kg 剂量后，Cmax 值比其 IC50 高 2 倍。 体外溶解度 134 μg/ml，血浆游离分数 2%，固有清除率 0.4 l/h/kg 口服 (2 mg/kg) Cmax 12850 ng/ml 静脉注射 (1 mg/kg) Clb 0.03 L/h/Kg，t1/2 1.2 h，Vss 0.02 L/kg 原则上，邻苯二甲酰亚胺可作为 AF38469 型化合物的前药，其在体内水解可生成相应的邻苯二甲酰亚胺酸，该过程与化合物 2 本身的释放和鉴定过程类似（方案 1）。不对称取代的邻苯二甲酰亚胺（例如化合物 1）水解后会生成区域异构体的混合物（即化合物 2 和 3），而对称的邻苯二甲酰亚胺则只会生成单一的邻苯二甲酸（例如方案 4）。为此，我们研究了邻苯二甲酰亚胺 14 作为邻苯二甲酸 10k 的潜在口服前药。然而，虽然口服邻苯二甲酰亚胺 14 确实能使邻苯二甲酸 10k 达到全身暴露量，但其游离暴露量并未优于口服 AF38469 所获得的暴露量。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
Sortilin 是一种 I 型膜受体，属于液泡蛋白分选 10 蛋白 (VPS10P) 家族的分选受体。Sortilin 在中枢神经系统和外周组织中广泛表达。它通过与多种不同的蛋白质伴侣进行转运和信号传导，介导许多重要的生理功能。例如，Sortilin 参与神经营养因子（如神经生长因子 (NGF) 和脑源性神经营养因子 (BDNF)）的信号传导。事实上，已有报道称，Sortilin 与 p75 蛋白形成复合物，构成前神经营养因子介导的细胞凋亡效应的受体，从而导致细胞和动物模型中的退行性变和细胞死亡。1 Sortilin 还被证实能够与高尔基体中的载脂蛋白 B100 相互作用，促进含载脂蛋白 B100 的脂蛋白的输出，从而调节血浆低密度脂蛋白 (LDL) 胆固醇水平，而 LDL 胆固醇是动脉粥样硬化和缺血性心脏病的重要致病因素。最近的研究表明，sortilin 还具有作为前粒蛋白高亲和力受体的功能，它通过结合前粒蛋白，随后被细胞摄取并分布到溶酶体，从而介导前粒蛋白的清除。[1] 总之，我们发现了一种高效、选择性强且口服生物利用度高的 VPS10P 家族分选受体 Sortilin 抑制剂。我们希望并预期 AF38469 将成为进一步阐明 Sortilin 生物学功能的重要工具，并有助于评估该蛋白的治疗潜力。[1]
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| 分子式 |
C15H11F3N2O3
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|---|---|
| 分子量 |
324.26
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| 精确质量 |
324.072
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| 元素分析 |
C, 55.56; H, 3.42; F, 17.58; N, 8.64; O, 14.80
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| CAS号 |
1531634-31-7
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| 相关CAS号 |
1531634-31-7
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| PubChem CID |
72706115
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| LogP |
3.432
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| tPSA |
79.29
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
456
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(NC1=CC=CC(C)=N1)C2=CC=C(C(F)(F)F)C=C2C(O)=O
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| InChi Key |
JWCUSQCZMQIBMR-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H11F3N2O3/c1-8-3-2-4-12(19-8)20-13(21)10-6-5-9(15(16,17)18)7-11(10)14(22)23/h2-7H,1H3,(H,22,23)(H,19,20,21)
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| 化学名 |
2-[(6-methylpyridin-2-yl)carbamoyl]-5-(trifluoromethyl)benzoic acid
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| 别名 |
AF-38469; AF38469; 1531634-31-7; 2-[(6-Methylpyridin-2-Yl)carbamoyl]-5-(Trifluoromethyl)benzoic Acid; 2-((6-methylpyridin-2-yl)carbamoyl)-5-(trifluoromethyl)benzoic acid; CHEMBL3098745; MFCD28160694; 4n7e; SCHEMBL15903106; AF 38469
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~65 mg/mL (~200.5 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (7.71 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More
配方 3 中的溶解度: 5%DMSO + Corn oil: 3.25mg/ml (10.02mM) 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0839 mL | 15.4197 mL | 30.8394 mL | |
| 5 mM | 0.6168 mL | 3.0839 mL | 6.1679 mL | |
| 10 mM | 0.3084 mL | 1.5420 mL | 3.0839 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
NTRC-739
NTRC-808
PD-149163
[D-Arg1,D-Trp5,7,9,Leu11]-Substance P
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