| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 靶点 |
Free Fatty Acid Receptor 4 (FFA4/GPR120): AH-7614 is a negative allosteric modulator of FFA4. It inhibits signaling induced by both endogenous and synthetic agonists. Functional inhibition potencies are reported. [2]
Selectivity: AH-7614 did not antagonize activation of the related free fatty acid receptor 1 (FFA1/GPR40) by the agonist TUG-770 in calcium mobilization assays. [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在表达FFA4的U2OS细胞中，AH-7614（化合物39）（0.063-1 μM）抑制亚油酸和FFAR4激动剂引起的细胞内Ca2+反应[1]。在NCI-H716细胞中，AH-7614（100 μM）消除了GSK137647A对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的增强作用[1]。AH-7614（0.001-10 μM；15分钟）阻断了TUG-891介导的FFA4从细胞表面的内吞作用（pIC50=7.70）[2]。 AH-7614（10 μM；30 分钟）抑制激动剂引起的细胞内肌醇单磷酸和 FFA4 磷酸化增加[2]。
抑制钙动员（hFFA4）：在诱导表达人 FFA4-eYFP 的 Flp-In T-REx 293 细胞中，AH-7614 能有效抑制 EC80 浓度激动剂诱导的钙动员。pIC50 值：对 α-亚麻酸（50 μM）= 7.51 ± 0.08；对 TUG-891（500 nM）= 8.13 ± 0.08。 [2] 抑制β-arrestin-2募集（hFFA4）：在共表达hFFA4-eYFP和β-arrestin-2-Renilla荧光素酶的HEK293T细胞中，AH-7614抑制了激动剂诱导的BRET信号。pIC50值：针对αLA = 7.66 ± 0.05；针对TUG-891 = 7.55 ± 0.07。[2] 在小鼠FFA4上的活性：AH-7614也有效抑制了αLA（pIC50 = 8.05 ± 0.08）和TUG-891（pIC50 = 7.93 ± 0.06）诱导的β-arrestin-2向小鼠FFA4的募集。 [2] 对 FFA1 的选择性：在稳定表达人 FFA1 的 1321N1 细胞中，AH-7614（浓度高达 10 μM）对 TUG-770 诱导的钙动员没有影响，表明其对 FFA4 的选择性高于 FFA1。[2] 受体内吞抑制：在表达 hFFA4-mVenus 的 Flp-In T-REx 293 细胞中，AH-7614 抑制 TUG-891 诱导的受体内吞，pIC50 = 7.70 ± 0.10。浓度-反应研究表明，AH-7614 主要以饱和的方式降低 TUG-891 的最大反应，这与负变构调节一致。 [2] 作为负变构调节剂的机制：对四种结构不同的FFA4激动剂（TUG-891、TUG-1197、GSK137647A和化合物A）的详细分析表明，AH-7614以饱和的方式降低了效力和最大反应。操作模型拟合得出每对激动剂的log α（对亲和力的影响）和log β（对效力的影响）估计值（见论文中的表1）。观察到一定的探针依赖性，其中GSK137647A的log β值显著低于其他激动剂。[2] 抑制肌醇单磷酸积累：在表达hFFA4-mVenus的细胞中，AH-7614（10 μM）阻断了TUG-891诱导的肌醇单磷酸积累。 [2] 受体磷酸化抑制：在表达 mFFA4-eYFP 的细胞中，AH-7614 预处理（1-10 μM）呈浓度依赖性地抑制了 TUG-891（10 μM）诱导的受体 C 端 Thr347 和 Ser350 残基的磷酸化，该磷酸化通过磷酸化特异性抗血清检测。[2] 对脂肪细胞分化的影响：在小鼠 C3H10T1/2 间充质干细胞中，分化诱导期间（IID 培养基：胰岛素、IBMX、地塞米松）用 AH-7614（10 μM）处理显著降低了油红 O 染色（甘油三酯沉积），表明脂肪生成受到抑制。AH-7614 还限制了 IID 诱导的 PPARγ mRNA 上调，但不影响 Runx2 下调。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠中，AH7614（每4天腹腔注射50 μg，持续20天）可抑制肿瘤的形成[3]。当与表柔比星联合使用时，AH7614（50 μg；在表柔比星给药前一天进行瘤内注射）可通过阻断GPR120信号通路并抑制肿瘤生长，从而提高癌细胞对化疗的敏感性[3]。
乳腺癌异种移植模型：将携带MCF-7/ADM（表柔比星耐药）肿瘤异种移植瘤的BALB/c裸鼠，分别接受每4天一次的瘤内注射AH-7614（50 μg）治疗，单独使用或与腹腔注射表柔比星（4 mg/kg）联合使用。治疗组包括载体组、单独使用表柔比星组、单独使用AH-7614组、单独使用GPR120-siRNA组、AH-7614+表柔比星组和GPR120-siRNA+表柔比星组。[3] 肿瘤生长抑制：与单独使用AH-7614或表柔比星相比，AH-7614联合表柔比星治疗显著抑制了肿瘤生长。在第20天，AH-7614+表柔比星组的肿瘤体积和重量均显著低于单独使用表柔比星组。[3] 肿瘤分子效应：肿瘤组织的Western blot分析显示，AH-7614治疗降低了ABCG2和FASN的表达，这与其作用机制相符。[3] |
| 细胞实验 |
细胞系：本研究使用了HEK293T细胞、Flp-In T-REx 293细胞（FFA4表达可诱导）、1321N1细胞（FFA1表达稳定）和C3H10T1/2小鼠间充质干细胞。[2]
钙动员实验：将细胞接种于聚赖氨酸包被的96孔板中。必要时，使用强力霉素诱导FFA4表达。细胞用Fura2-AM（3 μM）孵育45分钟，洗涤后用HBSS平衡。使用Flexstation酶标仪，在340/380 nm激发后，测量510 nm处的荧光发射强度。对于拮抗实验，在加入激动剂前，先用AH-7614预孵育细胞15分钟。 [2] β-arrestin-2 BRET 检测：将 eYFP 标记的 FFA4 和 β-arrestin-2-Renilla 荧光素酶质粒共转染至 HEK293T 细胞。细胞先用 AH-7614 预孵育 15 分钟，然后在 37°C 下用腔肠素 h (2.5 μM) 孵育 10 分钟，最后用激动剂刺激 5 分钟。BRET 值以 535 nm 与 475 nm 处的发射光强度比值来衡量。[2] 受体内化检测（高内涵成像）：将表达 hFFA4-mVenus 的 Flp-In T-REx 293 细胞接种于 96 孔板中，用强力霉素诱导过夜，然后在 37°C 下用 AH-7614 和 TUG-891 处理 30 分钟。细胞用4%多聚甲醛固定，细胞核用Hoechst33342染色，并使用Cellomics ArrayScan II成像。内吞的mVenus被定量并以细胞数进行标准化。[2] 肌醇单磷酸酯测定：细胞在10 mM LiCl存在下与激动剂孵育1小时。根据制造商的说明，使用基于HTRF的试剂盒测定IP1的积累。[2] 受体磷酸化Western Blot：表达mFFA4-eYFP的细胞用AH-7614预处理30分钟，然后用TUG-891 (10 μM)刺激5分钟。细胞裂解液经SDS-PAGE分离，转移至硝酸纤维素膜，并用识别磷酸化Thr347和Ser350的磷酸化特异性抗血清进行免疫印迹分析。检测采用 LI-COR Odyssey CLx 成像仪。[2] 脂肪细胞分化实验：将 C3H10T1/2 细胞在含或不含 AH-7614 (10 μM) 的 IID 培养基（100 nM 胰岛素、500 μM IBMX、10 nM 地塞米松）中分化 5 天。油红 O 染色用于显示甘油三酯沉积。染色结果通过异丙醇溶解并在 405 nm 处测量吸光度进行定量。RT-qPCR 检测 PPARγ、Runx2 和 mFFA4 mRNA 水平，并以环孢亲和素进行标准化。[2] |
| 动物实验 |
动物：** 四周龄雌性BALB/c裸鼠饲养于特定病原体清除（SPF）条件下。所有实验程序均经机构动物护理和使用委员会批准。[3]
* **肿瘤建立：** 小鼠在细胞注射前三天皮下植入雌激素缓释片（0.72 mg 17β-雌二醇，60天缓释）。将MCF-7/ADM细胞（5 × 10⁶）溶于100 μL PBS中，皮下注射至小鼠侧腹。[3] * **治疗方案：** 当肿瘤体积达到150-200 mm³时，将小鼠随机分为六组（每组n=6）：（1）载体组；（2）表柔比星组（4 mg/kg，腹腔注射，每4天一次）；（3）GPR120-siRNA组（10 nmol，瘤内注射，每4天一次）； (4) AH-7614（50 μg，瘤内注射，每4天一次）；(5) GPR120-siRNA + 表柔比星（siRNA 于表柔比星给药前一天给药）；(6) AH-7614 + 表柔比星（AH-7614 于表柔比星给药前一天给药）。[3] * **肿瘤测量：** 肿瘤体积计算公式为长 × 宽²/2。治疗20天后，处死小鼠，取出肿瘤，称重，并进行Western blot分析。[3] 动物：4周龄雌性BALB/c裸鼠饲养于特定病原体清除（SPF）条件下。所有实验程序均经机构动物护理和使用委员会批准。 [3] 肿瘤建立：小鼠在细胞注射前三天皮下植入雌激素缓释片（0.72 mg 17β-雌二醇，60天缓释）。将MCF-7/ADM细胞（5 × 10⁶）溶于100 μL PBS中，皮下注射至小鼠侧腹部。[3] 治疗方案：当肿瘤体积达到150-200 mm³时，将小鼠随机分为六组（每组n=6）：（1）载体组；（2）表柔比星组（4 mg/kg，腹腔注射，每4天一次）；（3）GPR120-siRNA组（10 nmol，瘤内注射，每4天一次）；（4）AH-7614组（50 μg，瘤内注射，每4天一次）；（5）GPR120-siRNA + 表柔比星组（siRNA在表柔比星注射前一天注射）。 （6）AH-7614 + 表柔比星（AH-7614 于表柔比星给药前一天给药）。[3] 肿瘤测量：肿瘤体积计算公式为长 × 宽²/2。治疗 20 天后，处死小鼠，取出肿瘤，称重，并进行蛋白质印迹分析。[3] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
背景：AH-7614（最初命名为化合物39）最早由Sparks等人（2014）报道为FFA4拮抗剂。它是一种基于二芳基磺酰胺的FFA4激动剂的呫吨衍生物。本研究首次详细阐述了其作为负变构调节剂的作用机制。[2]
化学合成：AH-7614由呫吨酮经硼氢化钠还原，再与对甲苯磺酰胺在乙酸中反应合成。HPLC检测纯度为99.7%。通过¹H NMR、¹³C NMR和ESI-HRMS确认了其结构。[2] 作用机制：AH-7614是FFA4的负变构调节剂，而非竞争性拮抗剂。证据包括：(1) 饱和抑制（在高浓度下达到最大效应，但仍存在残余激动剂反应）；(2) 效力和最大反应均随激动剂的不同而降低；(3) 不同激动剂化学类型之间存在探针依赖性效应。[2] 探针依赖性：AH-7614 的调节作用表现出轻微的探针依赖性，与羧酸盐类激动剂相比，磺酰胺类激动剂 GSK137647A 的 log β 值（对效力的影响）显著降低。[2] 作为工具化合物的用途：该研究表明，AH-7614 与无活性结构类似物 TUG-1387 联合使用时，可以确定 FFA4 特异性生物学功能，例如其在间充质干细胞脂肪细胞分化中的作用。 [2] 结构衍生物：合成并测试了两种关键衍生物：TUG-1387（酰胺取代，在FFA4处无活性）和TUG-1506（噻吨取代，保留了NAM活性但性质有所改变）。[2] |
| 分子式 |
C20H17NO3S
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|---|---|
| 分子量 |
351.42
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| 精确质量 |
351.093
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| 元素分析 |
C, 68.36; H, 4.88; N, 3.99; O, 13.66; S, 9.12
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| CAS号 |
6326-06-3
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| PubChem CID |
233085
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.37g/cm3
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| 沸点 |
505.9ºC at 760mmHg
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| 闪点 |
259.8ºC
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| 折射率 |
1.685
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| LogP |
5.64
|
| tPSA |
63.78
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
528
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
OZCQEUZTOAAWDK-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H17NO3S/c1-14-10-12-15(13-11-14)25(22,23)21-20-16-6-2-4-8-18(16)24-19-9-5-3-7-17(19)20/h2-13,20-21H,1H3
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| 化学名 |
4-methyl-N-(9H-xanthen-9-yl)benzenesulfonamide
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| 别名 |
AH-7614 AH7614 AH 7614
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~284.56 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8456 mL | 14.2280 mL | 28.4560 mL | |
| 5 mM | 0.5691 mL | 2.8456 mL | 5.6912 mL | |
| 10 mM | 0.2846 mL | 1.4228 mL | 2.8456 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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