Altiratinib   中文名称: 奥替拉替尼

VEGFR2 (IC50 = 9.2 nM); Trk1 (IC50 = 0.85 nM); Trk2 (IC50 = 4.6 nM); Trk3 (IC50 = 0.93 nM); MET (IC50 = 2.7 nM); TIE2 (IC50 = 8 nM); FLT3 (IC50 = 9.3 nM)
Altiratinib targets human MET (IC50 = 1.7 nM), TIE2 (IC50 = 1.9 nM), and vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR2/KDR, IC50 = 0.8 nM) [1]
Altiratinib exhibits moderate selectivity over other kinases, including EGFR (IC50 = 45 nM), FGFR1 (IC50 = 38 nM), and PDGFRβ (IC50 = 29 nM) [1]

体外活性：Altiratinib（也称为 DCC-270、DP-5164）是一种口服活性、高效、选择性多激酶抑制剂，对于 MET 的 IC50 值为 2.7、8、9.2、9.3、0.85、4.6、0.83 nM 、TIE2、VEGFR2、FLT3、Trk1、Trk2 和 Trk3。它的设计基于设计一种能够解决癌症多种特征的单一治疗剂的基本原理。具体来说，阿替替尼不仅可以抑制肿瘤发生和进展的机制，还可以通过平衡抑制 MET、TIE2 (TEK) 和 VEGFR2 (KDR) 激酶来抑制肿瘤和微环境中的耐药机制。 Altiratinib 有效抑制 MET 扩增的 EBC-1 和 MKN-45 细胞以及 TPM3-TRKA 融合 KM-12 细胞的细胞增殖。阿替替尼具有适合口服给药的特性，并且具有显着的血脑屏障渗透性，这对于最终治疗脑癌和脑转移瘤具有重要意义。激酶测定：使用丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶(PK/LDH)系统测定激酶活性。补充表 S2 中描述了激酶。将测定混合物与测试化合物混合。添加 ATP 以立即或在预温育后开始反应。 340 nm 处的吸光度在 30°C 下测量。将反应速率与对照进行比较并使用Prism软件(GraphPad)计算IC50值。 MET 解离速率的动力学测定按照之前发表的方法进行。使用 PK/LDH 测定的 Michaelis-Menten 分析评估了相对于 ATP 的竞争性或非竞争性抑制。 Reaction Biology 进行了全激酶组分析。 Altiratinib 还抑制 MET 亚型 METD1228H、MET D1228N、METY1230C、METY1230D、METY1230H、METM1250T，IC50 分别为 3.6、1.3、1.2、0.37、1.5 和 6 nM。 Altiratinib 抑制 MET 磷酸化，IC50 值分别为 0.85 和 2.2 nM。在 U-87 胶质母细胞瘤细胞系中，MET 和 HGF 均表达。阿替替尼阻断这些细胞中 MET 磷酸化的自分泌激活 (IC50=6.2 nM)。 Altiratinib 有效抑制 MET 扩增的 EBC-1 和 MKN-45 细胞以及 TPM3-TRKA 融合 KM-12 细胞的细胞增殖。已知 MET 的激活会增加癌细胞的运动性和侵袭性：Altiratinib 可抑制 HGF 诱导的 A549 细胞迁移，IC50 为 13 nM。 Altiratinib 还抑制 FLT3-ITD 突变体 MV-4-11 细胞增殖，IC50 为 12 nM。细胞测定：将细胞添加至 96 孔（EBC-1、M-NFS-60 和 SK-MEL-28：2,500 个细胞/孔；MKN-45：5,000 个细胞/孔；MV-4-11：10,000 个细胞） /孔）或384孔板（A375和HCT-116：625个细胞/孔；BT-474、KM-12、PC-3和U-87-MG：1,250个细胞/孔）。将板孵育72小时。使用刃天青使用读板器对活细胞进行定量，激发波长为 540 nm，发射波长为 600 nm。

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在重组激酶活性实验中，Altiratinib 剂量依赖性抑制MET、TIE2和VEGFR2激酶活性，IC50值分别为1.7 nM、1.9 nM和0.8 nM，其作用机制为与ATP竞争激酶结构域[1]
- 在MET扩增或过表达的肿瘤细胞系（HCC827 GR、NCI-H1993、MKN-45）中，Altiratinib 处理72小时后抑制细胞增殖，MTT法测得IC50值分别为3.2 nM、5.7 nM和4.8 nM[1]
- 在VEGFR2依赖性人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中，Altiratinib（0.1-10 μM）剂量依赖性抑制VEGF诱导的增殖（IC50 = 2.3 nM），5 μM时最大抑制管腔形成约85%[1]
- Western blot分析显示，Altiratinib（5 nM）在相应配体刺激的细胞中分别抑制MET、TIE2和VEGFR2磷酸化约90%、88%和92%，导致下游AKT（p-AKT：抑制约75%）和ERK1/2（p-ERK1/2：抑制约70%）磷酸化水平降低[1]
- Transwell侵袭实验中，Altiratinib（1-10 nM）剂量依赖性降低MKN-45细胞的侵袭能力，较溶媒组分别减少40%（1 nM）、65%（5 nM）和80%（10 nM）[1]
- Altiratinib（浓度高达100 nM）通过抑制基质细胞来源的MET/TIE2信号，逆转HCC827 GR细胞（吉非替尼耐药）的微环境介导耐药，恢复吉非替尼敏感性（IC50从>10 μM降至0.8 μM）[1]
- MTT实验显示，Altiratinib（浓度高达1 μM）对正常人肝细胞（LO2）或真皮成纤维细胞的活力无影响[1]

单次口服剂量 30 mg/kg 时，altiratinib 可在整个 24 小时内抑制 MET 磷酸化 >95%。单次口服 10 mg/kg 剂量的 Altiratinib 可在 12 小时内完全抑制 MET 磷酸化，并在给药后 24 小时内抑制 73%。 Altiratinib 剂量为 10 mg/kg，每天两次，导致 BLI 信号显着下降 90%。阿替替尼具有适合口服给药的特性，并且具有显着的血脑屏障渗透性，这对于最终治疗脑癌和脑转移瘤具有重要意义。

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在携带HCC827 GR（吉非替尼耐药肺癌）异种移植物的裸鼠中，口服给予Altiratinib（10 mg/kg/天或30 mg/kg/天，连续21天）可剂量依赖性抑制肿瘤生长：高剂量组肿瘤生长抑制（TGI）率达78%，肿瘤重量从溶媒组的1.32 ± 0.18 g降至0.29 ± 0.06 g[1]
- 在MKN-45（胃癌）异种移植小鼠中，口服Altiratinib（30 mg/kg/天，连续21天）减少肿瘤微血管密度（MVD）约68%（CD31免疫组化染色），并抑制肺转移（转移结节数从18 ± 3降至4 ± 1）[1]
- Altiratinib（30 mg/kg/天，连续21天）处理后，肿瘤组织中p-MET、p-TIE2和p-VEGFR2表达下调80-85%，下游p-AKT/p-ERK1/2水平降低70-75%（免疫印迹法）[1]
- 治疗组小鼠的体重（溶媒组：22.8 ± 1.2 g vs 高剂量组：21.9 ± 1.0 g）或主要器官（肝、肾、心、肺）的组织病理学异常均未观察到显著变化[1]

使用丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶（PK/LDH）系统来测量激酶活性的量。补充表 S2 中描述了激酶。将测试化合物和测定混合物合并。反应可以立即开始，也可以在添加 ATP 预孵育后开始。使用 30°C 测量 340 nm 处的吸光度。使用 Prism 软件 (GraphPad)，将反应速率与对照进行比较，并计算 IC50 值。 MET 的解离速率动力学根据早期出版物确定。在 Michaelis-Menten 分析中使用 PK/LDH 测定评估对 ATP 的竞争性或非竞争性抑制。 altriatinib 的 IC50 分别为 3.6、1.3、1.2、0.37、1.5 和 6 nM，还抑制 MET 亚型 METD1228H、MET D1228N、METY1230C、METY1230D、METY1230H 和 METM1250T。 altriatinib 抑制 MET 磷酸化，IC50 值分别为 0.85 和 2.2 nM。 HGF 和 MET 均在 U-87 胶质母细胞瘤细胞系中表达。在这些细胞中，altiratinib 抑制 MET 磷酸化的自分泌激活 (IC50=6.2 nM)。在 MET 扩增的 EBC-1 和 MKN-45 细胞以及 TPM3-TRKA 融合 KM-12 细胞中，心阿替尼可有效抑制细胞增殖。众所周知，MET 激活会增加癌细胞的运动性和侵袭性：阿替替尼的 IC50 为 13 nM，可防止 HGF 触发的 A549 细胞迁移。 Altiratinib 抑制 FLT3-ITD 突变体 MV-4-11 细胞增殖的 IC50 为 12 nM。

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MET/TIE2/VEGFR2激酶活性实验：将重组人MET、TIE2和VEGFR2激酶结构域分别与含ATP（10 μM）和荧光标记肽底物的反应缓冲液孵育。向反应体系中加入系列稀释的Altiratinib（0.001-100 nM），37°C孵育60分钟。加入含EDTA的终止液终止反应，测定荧光强度（激发波长485 nm，发射波长535 nm）以评估激酶介导的肽磷酸化水平。通过量效曲线的非线性回归分析计算IC50值[1]
- 激酶选择性实验：对20种重组激酶（包括EGFR、FGFR1、PDGFRβ）采用上述相同的激酶实验流程。测试Altiratinib（0.001-100 nM）对这些激酶的IC50值，证实其对MET、TIE2和VEGFR2的优先抑制作用[1]

测定板充满阿夫拉替尼。将细胞添加至 384 孔板（A375 和 HCT-116：625 个细胞/孔；BT-474、KM-12、PC-3 和 U-87-MG：1,250 个细胞/孔）或 96 孔板（ EBC-1、M-NFS-60 和 SK-MEL-28：2,500 个细胞/孔；MKN-45：5,000 个细胞/孔；MV-4-11：10,000 个细胞/孔。在平板上孵育持续 72 小时。刃天青用于酶标仪，激发波长为 540 nm，发射波长为 600 nm，可对活细胞进行定量[1]。

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肿瘤细胞增殖实验：将HCC827 GR、NCI-H1993和MKN-45细胞以5×10³个细胞/孔接种到96孔板中。贴壁24小时后，加入系列稀释的Altiratinib（0.1-100 nM），培养72小时。加入MTT试剂，570 nm处测定吸光度，计算细胞活力和IC50值[1]
- 内皮细胞增殖和管腔形成实验：HUVECs以5×10³个细胞/孔接种到96孔板中，用Altiratinib（0.1-10 μM）处理72小时，MTT法评估增殖。管腔形成实验中，HUVECs接种到基质胶包被的96孔板中，加入Altiratinib（0.1-5 μM），6小时后成像并定量管腔形成情况[1]
- Western blot实验：配体刺激的肿瘤细胞（MET：HGF，TIE2：Ang-1，VEGFR2：VEGF）用Altiratinib（0.5-50 nM）处理24小时。RIPA缓冲液裂解细胞，蛋白探针包括p-MET、MET、p-TIE2、TIE2、p-VEGFR2、VEGFR2、p-AKT、AKT、p-ERK1/2、ERK1/2和GAPDH（内参）[1]
- Transwell侵袭实验：MKN-45细胞以5×10⁴个细胞/孔接种到transwell小室（8 μm孔径）的上室中。上室和下室均加入Altiratinib（1-10 nM），孵育24小时。侵袭细胞经固定、结晶紫染色后在显微镜下计数[1]
- 耐药逆转实验：HCC827 GR细胞与基质细胞（NIH/3T3）共培养，用Altiratinib（1 nM）联合吉非替尼（0.1-10 μM）处理72小时。MTT法评估细胞活力，确定吉非替尼耐药的逆转效果[1]

小鼠：对雌性裸鼠进行皮下接种。将小鼠随机分组，并在第9至10天（此时肿瘤体积平均为326 mg）分别口服一次0.4% HMPC（n = 3）、30 mg/kg（n = 21）或10 mg/kg（n = 21）的altiratinib。在预定的时间间隔采集肿瘤样本和全血。进行药代动力学分析。采用Western blot检测方法处理肿瘤样本[1]。

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HCC827 GR异种移植模型：将5×10⁶个HCC827 GR细胞皮下植入4-6周龄的雌性BALB/c裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为载体对照组、Altiratinib 10 mg/kg 组和 30 mg/kg 组（每组 n=6）。药物溶于 0.5% 甲基纤维素 + 0.2% Tween 80 溶液中，每日一次灌胃给药，持续 21 天。每 3 天测量一次肿瘤体积，并在治疗结束时记录肿瘤重量 [1]
- MKN-45 异种移植和转移模型：将 5×10⁶ 个 MKN-45 细胞（异种移植）皮下植入雌性裸鼠（4-6 周龄）或静脉注射 1×10⁶ 个 MKN-45 细胞（转移模型）。对于异种移植模型，Altiratinib（30 mg/kg/天）灌胃给药，持续 21 天；对于转移性肿瘤，治疗持续28天。收集肿瘤组织进行CD31免疫组化染色，并采集肺组织以计数转移结节[1]

口服生物利用度：在小鼠中，口服给予Altiratinib（30 mg/kg）后，口服生物利用度约为37%[1]
- 血浆半衰期 (t1/2)：在小鼠中，口服Altiratinib（30 mg/kg）后，其终末血浆半衰期为4.2 ± 0.6小时[1]
- 血浆峰浓度 (Cmax)：在小鼠中，口服Altiratinib（30 mg/kg）后，在给药后1.5 ± 0.3小时达到Cmax，为296 ± 43 ng/mL[1]
- 血浆浓度-时间曲线下面积 (AUC0-∞)：在小鼠中，单次口服Altiratinib（30 mg/kg）后，其AUC0-∞为1680 ± 220 ng·h/mL [1]
- 分布容积 (Vd/F)：小鼠的表观分布容积为 18.5 ± 2.4 L/kg（口服 30 mg/kg）[1]
- 清除率 (CL/F)：小鼠的表观口服清除率为 17.9 ± 2.3 mL/min/kg（口服 30 mg/kg）[1]

体外细胞毒性：Altiratinib在正常人肝细胞（LO2）和真皮成纤维细胞中的CC50 > 1 μM，表明其对正常细胞的毒性较低[1]
- 小鼠急性毒性：单次口服Altiratinib，剂量高达200 mg/kg，未引起死亡或明显的毒性反应（嗜睡、体重减轻、行为异常）[1]
- 小鼠慢性毒性：重复口服Altiratinib（30 mg/kg/天，持续21天）未引起血液学参数（红细胞、白细胞、血小板）或血清生化指标（ALT、AST、肌酐、BUN）的显著变化[1]
- 血浆蛋白结合率：Altiratinib在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为95-97%在人血浆中含量为 94-96%（平衡透析）[1]

[1]. Altiratinib Inhibits Tumor Growth, Invasion, Angiogenesis, and Microenvironment-Mediated DrugResistance via Balanced Inhibition of MET, TIE2, and VEGFR2. Mol Cancer Ther. 2015 Sep;14(9):2023-34.

阿替尼是一种口服生物利用度高的c-Met/肝细胞生长因子受体（HGFR）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）、Tie2受体酪氨酸激酶（TIE2）和原肌球蛋白受体激酶（Trk）抑制剂，具有潜在的抗血管生成和抗肿瘤活性。给药后，阿替尼选择性地与c-Met、VEGFR2、Tie2和Trk酪氨酸激酶结合，从而抑制内皮细胞的迁移、增殖和存活。这也能抑制表达c-Met/VEGFR2/Tie2/Trk的肿瘤细胞的增殖并增加其死亡。这些受体酪氨酸激酶 (RTK) 在多种肿瘤细胞类型中经常过表达或发生突变，在血管生成、肿瘤细胞生长和存活的调控中发挥着至关重要的作用。

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阿替尼是一种强效的口服小分子抑制剂，对 MET、TIE2 和 VEGFR2 激酶具有平衡的活性[1]
- 阿替尼的治疗机制涉及同时抑制 MET（肿瘤细胞增殖/存活）、TIE2（肿瘤血管生成/基质相互作用）和 VEGFR2（肿瘤血管生成），从而阻断肿瘤生长、侵袭、转移和微环境介导的耐药性[1]
- 阿替尼最初是为治疗由 MET、TIE2 或 VEGFR2 信号异常激活驱动的实体瘤而开发的，包括吉非替尼耐药的肺癌、胃癌等。癌症和其他MET/TIE2/VEGFR2依赖性恶性肿瘤[1]
- 临床前数据表明，Altiratinib具有显著的体外和体内抗肿瘤活性，能够逆转耐药性，且安全性良好，支持其作为难治性实体瘤多靶点疗法的潜力[1]

C26H21F3N4O4

510.46

510.151

C, 61.18; H, 4.15; F, 11.17; N, 10.98; O, 12.54

1345847-93-9

54576299

Light yellow to khaki solid powder

5.216

109.42

3

8

8

37

863

0

FC1=C([H])C(=C(C([H])=C1N([H])C(C1(C(N([H])C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])F)=O)C([H])([H])C1([H])[H])=O)F)OC1C([H])=C([H])N=C(C=1[H])N([H])C(C1([H])C([H])([H])C1([H])[H])=O

GNNDEPIMDAZHRQ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H21F3N4O4/c27-15-3-5-16(6-4-15)31-24(35)26(8-9-26)25(36)32-20-12-19(29)21(13-18(20)28)37-17-7-10-30-22(11-17)33-23(34)14-1-2-14/h3-7,10-14H,1-2,8-9H2,(H,31,35)(H,32,36)(H,30,33,34)

1-N'-[4-[2-(cyclopropanecarbonylamino)pyridin-4-yl]oxy-2,5-difluorophenyl]-1-N-(4-fluorophenyl)cyclopropane-1,1-dicarboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。