12G5 mAb-CXCR4 ( IC50 = 1.1 nM ); CXCL12^AF647-CXCR4 ( IC50 = 1.7 nM ); X4 HIV-1 (NL4.3) ( IC50 = 121 nM );
X4 HIV-1 (RF) ( IC50 = 1.1 nM ); X4 HIV-1 (HE) ( IC50 = 1.7 nM ); X4 HIV-1 (IIIB) ( IC50 = 121 nM );
X4 HIV-1 (NL4.3^AMD3100) ( IC50 = 1.1 nM ); HIV-2 (ROD) ( IC50 = 1.7 nM ); HIV-2 (EHO) ( IC50 = 121 nM )

体外活性：与针对 CXCR4、12G5 的放射性标记单克隆抗体竞争时，AMD3465 的亲和力比 AMD3100 高 8 倍。 AMD3465 的亲和力在 (D262N)-CXCR4 中降低 > 5000 倍，在 (A175F)-CXCR4 中降低 1913 倍。 AMD3465 似乎与 TM-VII 胞外端（胞外环 3 的界面）和 HisIII:05 处的 HisVII:-02 相互作用。这两个 His 残基都面向 CXCR4 的主要结合口袋。 AMD3465 抑制 125I-SDF-1α 配体与 CCRF-CEM 细胞的结合。 AMD3465 通过 GTP 结合测量抑制 CXCR4 激活，IC50 为 10.38±1.99 nM，并抑制 SDF-1α 介导的钙流，IC50 为 12.07±2.42 nM。激酶测定：对于针对 CXCR4 的竞争性结合研究，将一定浓度范围的 AMD3465 在结合缓冲液（含有 5 mM MgCl2、1 mM CaCl2、0.25% BSA pH 7.4 的 PBS）中与 5×105 CCRF 于 4°C 孵育 3 小时-Millipore DuraporeTM 过滤板中的 CEM 细胞和 100 pM 125I-SDF-1α。用冷 50 mM HEPES、0.5 M NaCl pH 7.4 洗涤去除未结合的 125I-SDF-1α。针对 BLT1 的竞争结合测定是在表达重组 BLT1 的 CHO-S 细胞膜上进行的。通过机械细胞裂解和高速离心来制备膜，重悬于 50 mM HEPES、5 mM MgCl2 缓冲液中并快速冷冻。将膜制备物与 AMD3465 在含有 50 mM Tris（pH 7.4）、10 mM MgCl2、10 mM CaCl2、4 nM LTB4（与 1 nM 3H-LTB4 混合）和 8 μg 膜的测定混合物中室温孵育 1 小时。通过在 Millipore GF-C 型过滤板上过滤分离未结合的 3H-LTB4。使用 LKB Rackbeta 1209 液体闪烁计数器对结合放射性进行计数。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。细胞测定：在实验前一天，将U87.CD4.CXCR4转染子以每孔2×104个细胞接种于0.1％明胶包被的96孔黑壁微孔板(Costar，Cambridge，MA)中。实验当天，细胞上样荧光钙指示剂 Fluo-3 acetoxymethyl（4 μM），37°C 45 分钟。用钙流测定缓冲液（含有 20 mM Hepes 缓冲液和 0.2% 牛血清白蛋白的 Hanks 平衡盐溶液，pH 7.4）彻底清洗后，将细胞与 AMD3100 或 AMD3465 (1 μg/mL) 一起在 37°C 下预孵育 15 分钟在同一个缓冲区中。然后，在 37°C 下使用荧光成像读板仪同时监测所有孔中荧光随时间的变化，测量响应 2-50 ng/mL CXCL12 的细胞内钙动员。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

AMD3465（5 mg/kg，皮下注射）在 0.5 至 2 小时内显着升高 DBA/2、C57Bl/6 和 BALB/c 小鼠的总白细胞。 AMD3465 显着增加了所有三种小鼠品系的特定细胞群，包括中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。

为了针对 CXCR4 进行竞争性结合研究，将一定浓度范围的 AMD3465 在结合缓冲液（含有 pH 7.4、0.25% BSA、1 mM CaCl2 和 5 ×10^{5< 的 PBS）中于 4°C 孵育三小时。 /sup> CCRF-CEM 细胞）在 Millipore DuraporeTM 过滤板中。用冷 50 mM HEPES 和 0.5 M NaCl pH 7.4 清洗，去除未结合的 125I-SDF-1α。来自表达重组 BLT1 的 CHO-S 细胞的膜用于针对该蛋白质的竞争结合测定。使用机械细胞裂解、高速离心、在含有 50 mM HEPES 和 5 mM MgCl2 的缓冲液中重悬以及快速冷冻来制备膜。将包含 50 mM Tris、pH 7.4、10 mM MgCl2、10 mM CaCl2、4 nM LTB4 与 1 nM 3H-LTB4 组合的测定混合物以及 8 μg 膜与 AMD3465 在室温下孵育 1 小时。过滤用于在 Millipore GF-C 型滤板上分离未结合的 3H-LTB4。液体闪烁计数器（LKB Rackbeta 1209）用于计算结合的放射性。 MCE 尚未独立验证这些技术的准确性。它们仅供参考。}

24小时血清饥饿期后，对星形胶质细胞、颗粒细胞、U87细胞和Daoy细胞施用1μg/mL CXCL12、2.5ng/mL AMD 3465、200μM咯利普兰或10μM毛喉素。分别处理 24 小时和 48 小时后，使用台盼蓝排除法测量培养物中 Daoy 和 U87 细胞的生长情况[2]。

[1]. AMD3465, a monomacrocyclic CXCR4 antagonist and potent HIV entry inhibitor. Biochem Pharmacol. 2005 Sep 1;70(5):752-61.

[2]. Blocking CXCR4-mediated cyclic AMP suppression inhibits brain tumor growth in vivo. Cancer Res. 2007 Jan 15;67(2):651-8.

C24H44BR6N6

896.07

410.32

C, 32.17; H, 4.95; Br, 53.50; N, 9.38

185991-07-5

AMD 3465; 185991-24-6

Solid powder

C1CNCCNCCCN(CCNC1)CC2=CC=C(C=C2)CNCC3=CC=CC=N3.Br.Br.Br.Br.Br.Br

ARHBIBDGWDRBJH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H38N6.6BrH/c1-2-13-29-24(5-1)20-28-19-22-6-8-23(9-7-22)21-30-17-4-12-26-15-14-25-10-3-11-27-16-18-30;;;;;;/h1-2,5-9,13,25-28H,3-4,10-12,14-21H2;6*1H

N-(pyridin-2-ylmethyl)-1-[4-(1,4,8,11-tetrazacyclotetradec-1-ylmethyl)phenyl]methanamine;hexahydrobromide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 100 mg/mL (111.60 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。