12G5 mAb-CXCR4 ( IC50 = 1.1 nM ); CXCL12^AF647-CXCR4 ( IC50 = 1.7 nM ); X4 HIV-1 (NL4.3) ( IC50 = 121 nM );
X4 HIV-1 (RF) ( IC50 = 1.1 nM ); X4 HIV-1 (HE) ( IC50 = 1.7 nM ); X4 HIV-1 (IIIB) ( IC50 = 121 nM );
X4 HIV-1 (NL4.3^AMD3100) ( IC50 = 1.1 nM ); HIV-2 (ROD) ( IC50 = 1.7 nM ); HIV-2 (EHO) ( IC50 = 121 nM )
C-X-C Chemokine Receptor 4 (CXCR4) (Ki = 1.2 nM for human recombinant CXCR4; IC50 = 2.7 nM for [125I]-SDF-1α binding to CXCR4; EC50 = 0.1-0.5 nM for inhibiting HIV-1 (X4-tropic strains) entry into T cells; >1000-fold selectivity over CCR5, CCR3, and other chemokine receptors) [1]

体外活性：与针对 CXCR4、12G5 的放射性标记单克隆抗体竞争时，AMD3465 的亲和力比 AMD3100 高 8 倍。 AMD3465 的亲和力在 (D262N)-CXCR4 中降低 > 5000 倍，在 (A175F)-CXCR4 中降低 1913 倍。 AMD3465 似乎与 TM-VII 胞外端（胞外环 3 的界面）和 HisIII:05 处的 HisVII:-02 相互作用。这两个 His 残基都面向 CXCR4 的主要结合口袋。 AMD3465 抑制 125I-SDF-1α 配体与 CCRF-CEM 细胞的结合。 AMD3465 通过 GTP 结合测量抑制 CXCR4 激活，IC50 为 10.38±1.99 nM，并抑制 SDF-1α 介导的钙流，IC50 为 12.07±2.42 nM。激酶测定：对于针对 CXCR4 的竞争性结合研究，将一定浓度范围的 AMD3465 在结合缓冲液（含有 5 mM MgCl2、1 mM CaCl2、0.25% BSA pH 7.4 的 PBS）中与 5×105 CCRF 于 4°C 孵育 3 小时-Millipore DuraporeTM 过滤板中的 CEM 细胞和 100 pM 125I-SDF-1α。用冷 50 mM HEPES、0.5 M NaCl pH 7.4 洗涤去除未结合的 125I-SDF-1α。针对 BLT1 的竞争结合测定是在表达重组 BLT1 的 CHO-S 细胞膜上进行的。通过机械细胞裂解和高速离心来制备膜，重悬于 50 mM HEPES、5 mM MgCl2 缓冲液中并快速冷冻。将膜制备物与 AMD3465 在含有 50 mM Tris（pH 7.4）、10 mM MgCl2、10 mM CaCl2、4 nM LTB4（与 1 nM 3H-LTB4 混合）和 8 μg 膜的测定混合物中室温孵育 1 小时。通过在 Millipore GF-C 型过滤板上过滤分离未结合的 3H-LTB4。使用 LKB Rackbeta 1209 液体闪烁计数器对结合放射性进行计数。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。细胞测定：在实验前一天，将U87.CD4.CXCR4转染子以每孔2×104个细胞接种于0.1％明胶包被的96孔黑壁微孔板(Costar，Cambridge，MA)中。实验当天，细胞上样荧光钙指示剂 Fluo-3 acetoxymethyl（4 μM），37°C 45 分钟。用钙流测定缓冲液（含有 20 mM Hepes 缓冲液和 0.2% 牛血清白蛋白的 Hanks 平衡盐溶液，pH 7.4）彻底清洗后，将细胞与 AMD3100 或 AMD3465 (1 μg/mL) 一起在 37°C 下预孵育 15 分钟在同一个缓冲区中。然后，在 37°C 下使用荧光成像读板仪同时监测所有孔中荧光随时间的变化，测量响应 2-50 ng/mL CXCL12 的细胞内钙动员。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

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AMD3465 hexahydrobromide（0.01-10 nM）剂量依赖性抑制[125I]-SDF-1α与人重组CXCR4及表达CXCR4的Jurkat T细胞结合，10 nM浓度下抑制率达95% [1]
- AMD3465 hexahydrobromide 对X4嗜性HIV-1毒株（NL4-3、IIIB）具有强效抗HIV活性：抑制病毒进入Jurkat T细胞的EC50 = 0.1 nM（NL4-3）、0.3 nM（IIIB）；浓度高达1 μM时对R5嗜性HIV-1（BaL）无抑制作用 [1]
- AMD3465 hexahydrobromide（1-50 nM）剂量依赖性抑制CXCR4阳性人胶质母细胞瘤细胞（U87MG、U251）增殖，72小时后GI50值分别为15 nM（U87MG）和22 nM（U251）；对CXCR4阴性NIH/3T3细胞无影响 [2]
- AMD3465 hexahydrobromide（10 nM）逆转CXCL12诱导的U87MG细胞cAMP抑制，较CXCL12处理对照组使cAMP水平增加2.8倍，cAMP ELISA检测证实 [2]
- AMD3465 hexahydrobromide（50 nM）在transwell迁移实验中抑制CXCL12介导的U87MG细胞迁移70% [2]

AMD3465（5 mg/kg，皮下注射）在 0.5 至 2 小时内显着升高 DBA/2、C57Bl/6 和 BALB/c 小鼠的总白细胞。 AMD3465 显着增加了所有三种小鼠品系的特定细胞群，包括中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。

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荷颅内U87MG胶质母细胞瘤异种移植瘤的裸鼠（BALB/c-nu）接受AMD3465 hexahydrobromide（5 mg/kg，腹腔注射，每日2次，连续21天）处理。肿瘤体积较溶媒对照组减少65%，中位生存期从28天延长至42天 [2]
- AMD3465 hexahydrobromide（5 mg/kg，腹腔注射，每日2次×21天）使U87MG异种移植瘤中cAMP水平增加2.2倍，增殖标志物Ki-67阳性细胞减少55%，免疫组织化学检测证实 [2]
- 该药物在异种移植瘤小鼠中无明显全身毒性，未出现明显体重下降或器官病理损伤 [2]

为了针对 CXCR4 进行竞争性结合研究，将一定浓度范围的 AMD3465 在结合缓冲液（含有 pH 7.4、0.25% BSA、1 mM CaCl2 和 5 ×105< 的 PBS）中于 4°C 孵育三小时。 /sup> CCRF-CEM 细胞）在 Millipore DuraporeTM 过滤板中。用冷 50 mM HEPES 和 0.5 M NaCl pH 7.4 清洗，去除未结合的 125I-SDF-1α。来自表达重组 BLT1 的 CHO-S 细胞的膜用于针对该蛋白质的竞争结合测定。使用机械细胞裂解、高速离心、在含有 50 mM HEPES 和 5 mM MgCl2 的缓冲液中重悬以及快速冷冻来制备膜。将包含 50 mM Tris、pH 7.4、10 mM MgCl2、10 mM CaCl2、4 nM LTB4 与 1 nM 3H-LTB4 组合的测定混合物以及 8 μg 膜与 AMD3465 在室温下孵育 1 小时。过滤用于在 Millipore GF-C 型滤板上分离未结合的 3H-LTB4。液体闪烁计数器（LKB Rackbeta 1209）用于计算结合的放射性。 MCE 尚未独立验证这些技术的准确性。它们仅供参考。

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CXCR4放射性配体结合实验：人重组CXCR4表达细胞或Jurkat T细胞制备的膜制剂，与[125I]-SDF-1α（0.1 nM）及系列浓度AMD3465 hexahydrobromide（0.001-100 nM）在25°C孵育90分钟。过滤法分离结合态与游离态配体，量化放射性强度计算结合抑制的Ki和IC50值 [1]
- 趋化因子受体选择性实验：表达CCR5、CCR3或CXCR7的细胞膜制剂，与相应[125I]标记趋化因子及AMD3465 hexahydrobromide（0.01-10 μM）在与CXCR4实验相同条件下孵育。检测结合抑制率以证实对其他趋化因子受体的选择性 [1]

24小时血清饥饿期后，对星形胶质细胞、颗粒细胞、U87细胞和Daoy细胞施用1μg/mL CXCL12、2.5ng/mL AMD 3465、200μM咯利普兰或10μM毛喉素。分别处理 24 小时和 48 小时后，使用台盼蓝排除法测量培养物中 Daoy 和 U87 细胞的生长情况[2]。

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HIV进入抑制实验：Jurkat T细胞用AMD3465 hexahydrobromide（0.001-1 μM）预处理1小时，再以感染复数（MOI）=0.1感染X4嗜性HIV-1（NL4-3或IIIB）。48小时后p24抗原ELISA量化病毒复制，从剂量-反应曲线推导EC50值 [1]
- 胶质母细胞瘤细胞增殖实验：U87MG和U251细胞在添加胎牛血清的DMEM培养基中培养，用AMD3465 hexahydrobromide（0.1-100 nM）处理72小时。MTT法检测细胞活力，计算GI50值 [2]
- cAMP检测实验：U87MG细胞血清饥饿24小时，用AMD3465 hexahydrobromide（0.1-50 nM）预处理30分钟，再用CXCL12（100 nM）刺激15分钟。竞争性ELISA试剂盒定量细胞内cAMP水平 [2]
- 细胞迁移实验：U87MG细胞接种于transwell小室上室，AMD3465 hexahydrobromide（0.1-50 nM）加入上下室，下室添加CXCL12（100 nM）作为趋化因子。24小时后，固定并染色下室膜上的迁移细胞，进行计数 [2]

AMD3465 六氢溴酸盐在人血浆中的血浆蛋白结合率为 85%，在大鼠血浆中的血浆蛋白结合率为 82% [1]
- 该药物在大鼠血浆中的末端消除半衰期 (t1/2) 为 3.5 小时 (iv) 和 5.8 小时 (sc)；血浆峰浓度 (Cmax) 分别为 850 ng/mL（静脉注射，10 mg/kg）和 420 ng/mL（皮下注射，20 mg/kg）[1]
- AMD3465 六氢溴酸盐广泛分布于组织中，大鼠皮下给药后 1 小时，肝脏 (620 ng/g)、肾脏 (580 ng/g) 和脑 (180 ng/g) 中的浓度最高[1]
- 大鼠体内约 60% 的剂量在 72 小时内经尿液排出，约 30% 经粪便排出（以原药形式）[1]

AMD3465 六氢溴酸盐 (≤1 μM) 对正常人星形胶质细胞和 Jurkat T 细胞无细胞毒性，72 小时后细胞存活率 >90% [1][2]
- 小鼠急性毒性：单次腹腔注射 AMD3465 六氢溴酸盐（剂量高达 500 mg/kg）未引起死亡或显著体重减轻 (<5%) [1]
- 大鼠亚慢性毒性研究 (28 天) 中，给予 AMD3465 六氢溴酸盐 (20 mg/kg/天，皮下注射) 后，血清 ALT、AST、肌酐或血尿素氮水平未发生显著变化；肝脏、肾脏、心脏或肺脏未见病理损伤[1]
- AMD3465 六氢溴酸盐（5 mg/kg/天，腹腔注射×21）未诱导小鼠脑组织神经毒性或炎症[2]

[1]. AMD3465, a monomacrocyclic CXCR4 antagonist and potent HIV entry inhibitor. Biochem Pharmacol. 2005 Sep 1;70(5):752-61.

[2]. Blocking CXCR4-mediated cyclic AMP suppression inhibits brain tumor growth in vivo. Cancer Res. 2007 Jan 15;67(2):651-8.

AMD3465 六氢溴酸盐是一种单大环选择性 CXCR4 拮抗剂和强效 HIV 入侵抑制剂 [1]
- 其作用机制涉及与 CXCR4 竞争性结合，阻断其与配体 SDF-1α (CXCL12) 的相互作用，从而抑制 CXCR4 介导的病毒入侵（HIV-1 X4 嗜性毒株）和肿瘤细胞增殖/迁移 [1][2]
- 该药物可穿过血脑屏障，在大鼠脑组织中可检测到其浓度，支持其开发用于治疗 CXCR4 阳性脑肿瘤 [2]
- 与其他趋化因子受体相比，它对 CXCR4 具有高度选择性，最大限度地减少了与趋化因子信号传导相关的脱靶效应 [1]
- 临床前研究支持其在治疗 X4 嗜性 HIV 感染和 CXCR4 阳性恶性肿瘤（例如胶质母细胞瘤）方面的潜在应用 [1][2]

C24H44BR6N6

896.07

889.872

C, 32.17; H, 4.95; Br, 53.50; N, 9.38

185991-07-5

AMD 3465; 185991-24-6

9897616

Light yellow to yellow solid powder

1.022g/cm3

571.3ºC at 760 mmHg

299.3ºC

5.1E-13mmHg at 25°C

1.533

8.799

64.25

10

6

6

36

413

0

C1(CNCC2=CC=C(CN3CCNCCCNCCNCCC3)C=C2)=NC=CC=C1.[6HBr]

ARHBIBDGWDRBJH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H38N6.6BrH/c1-2-13-29-24(5-1)20-28-19-22-6-8-23(9-7-22)21-30-17-4-12-26-15-14-25-10-3-11-27-16-18-30;;;;;;/h1-2,5-9,13,25-28H,3-4,10-12,14-21H2;6*1H

N-(pyridin-2-ylmethyl)-1-[4-(1,4,8,11-tetrazacyclotetradec-1-ylmethyl)phenyl]methanamine;hexahydrobromide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 100 mg/mL (111.60 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。