HSV-1(IC50=7.7-20 ng/mL);HSV-2(IC50=15-58 ng/mL)

体外活性：阿美那韦是除阿昔洛韦、伐昔洛韦和泛昔洛韦等核苷化合物之外的一类新型抗病毒药物。 ASP2151 抑制 HSV-1 的体外复制，平均 50% 有效浓度 (EC(50)) 为 14 ng/ml。激酶测定：Amenamevir（以前称为 ASP2151）是一种 HSV（单纯疱疹病毒）解旋酶引物酶抑制剂，对 HSV 具有有效的抗病毒活性，EC50 为 14 ng/mL。细胞测定：使用空斑减少测定来测试 Amenamevir (ASP2151) 和 ACV 对 HSV 的抗病毒活性。简而言之，将 HEF 细胞接种到多孔板中并孵育直至形成单层。除去培养基后，用HSV-1或HSV-2感染细胞，并将板进一步在37℃下孵育1小时。将细胞用维持培养基洗涤两次，然后用测试化合物（包括阿美那韦）处理，直至出现清晰的斑块。然后用含10%福尔马林的磷酸盐缓冲盐水固定细胞，用0.02%结晶紫溶液染色，并在光学显微镜下测定噬菌斑的数量。 EC50 代表将斑块数量减少 50% 所需的测试化合物的浓度，使用 S 形最大效应 (Emax) 模型的非线性回归分析计算得出。

---

ASP2151（阿门那韦）的体外抗病毒活性。[2]
使用空斑减少试验检测ASP2151（阿门那韦）和ACV对HEF细胞中10株HSV-1和HSV-2毒株的抗病毒活性。表1总结了每种受检HSV毒株的ASP2151和ACV的EC50。ASP2151抑制了日本和美国分离的临床菌株以及实验室储备菌株的复制。ASP2151对HSV-1和HSV-2的平均EC50分别为14（范围为7.7至20）和30 ng/ml（范围为15至58），而ACV的平均EC50s分别为29（范围为18至38）和71 ng/ml（范围在45至95）。ASP2151对HSV毒株的EC50显著低于ACV。

在皮肤 HSV-1 感染的小鼠模型中，ASP2151 剂量依赖性地抑制皮内 HSV-1 生长，在剂量为 30 mg/kg 体重/天时，效果达到稳定水平。剂量分割研究表明，以 100 mg/kg/天分为两次每日剂量的 ASP2151 治疗的小鼠以及以 30 或 100 mg/kg/天分为三个每日剂量的 ASP2151 治疗的小鼠，皮内 HSV-1 滴度低于检测限。皮内HSV-1滴度与血清中药物最大浓度(C(max))、24小时浓度-时间曲线下面积(AUC(24h))以及ASP2151浓度在体内的时间相关。血浆浓度高于 100 ng/ml (T(>100))。持续输注ASP2151有效地将皮内HSV-1滴度降低至血浆中ASP2151浓度达到79至145ng/ml的小鼠的检测限以下。我们的研究结果表明，ASP2151 的抗病毒功效与 HSV-1 感染小鼠中的 PK 参数 T(>100) 密切相关。基于这些结果，我们提出血浆 ASP2151 浓度每天超过 100 ng/ml 持续 21 至 24 小时可在 HSV-1 感染的小鼠中提供最大功效。

---

ASP2151（阿门那韦）是一种强效的解旋酶引物酶抑制剂，是除核苷化合物（如阿昔洛韦、伐昔洛韦和泛昔洛韦）之外的一类新型抗病毒药物。这项研究是第一项随机、双盲、伐昔洛韦对照的3期研究，旨在评估阿门那韦在日本带状疱疹患者皮疹发作后72小时内治疗的有效性和安全性。共有751名患者被随机分配接受阿门那韦400mg或200mg口服，每日一次，或伐昔洛韦1000mg，每日三次（日剂量3000mg），持续7天。主要疗效终点是第4天新病变形成停止的比例（“第4天停止比例”）。阿门那韦400和200mg以及伐昔洛韦的第4天停药比例分别为81.1%（197/243）、69.6%（172/247）和75.1%（184/245）。通过封闭式测试程序证实了阿门那韦400mg与伐昔洛韦的非劣效性。将停止新病变形成、完全结痂、愈合、疼痛缓解和病毒消失的天数作为次要终点进行评估。在所有治疗组中均未观察到显著差异。阿米那韦400和200mg以及伐昔洛韦耐受良好。阿门那韦400和200mg以及伐昔洛韦组发生药物相关不良事件的患者比例分别为10.0%（25/249）、10.7%（27/252）和12.0%（30/249）。总之，阿门那韦400mg似乎对免疫功能正常的日本患者治疗带状疱疹有效且耐受良好。[1]

---

ASP2151（阿门那韦）对皮内HSV-1滴度的影响。[2]
在用HSV-1毒株WT51对小鼠进行皮肤感染后，从感染后第4天开始出现皮肤损伤，皮内HSV-1滴度迅速增加，在感染后第4~5天达到峰值（图1）。在该模型中，载体组中几乎所有感染HSV-1毒株WT51的小鼠都在感染后第6天死亡并出现神经系统症状，而ASP2151和VCV降低了HSV-1感染小鼠的死亡率（6）。感染另一种HSV-1毒株CI-116的小鼠的损伤评分和皮内HSV-1滴度显示出几乎相似的时间过程（数据未显示）。使用经皮HSV-1感染的小鼠模型，从感染后第4天开始，每天以3、10、30、100和300mg/kg/天的总剂量重复口服ASP2151三次，持续3天。收集接受治疗的小鼠的皮肤，然后使用空斑法测定皮内HSV-1滴度（图2）。
ASP2151（阿门那韦）给药以剂量依赖的方式加速了病毒滴度的降低，范围在3至30mg/kg/天（图2A）。然而，ASP2151在30mg/kg/天及更高剂量下的疗效相当（图2B），表明ASP2151以30mg/kg/日的剂量完全抑制了HSV-1的生长。
治疗疱疹性疾病的目标是通过在早期抑制病毒生长来预防疾病进展并加速治愈病毒感染引起的病变。因此，ASP2151的临床疗效可以认为在完全抑制病毒生长的剂量下具有最大效果。然而，由于小鼠和人类之间PK模式的可能差异，仅基于小鼠模型的实验很难估计临床研究中病毒抑制所需的抗病毒药物的给药方案。因此，我们进行了一系列非临床PK/PD分析，以估算HSV-1生长完全抑制的血浆ASP2151浓度（PK/PD参数）。

---

HSV-1感染小鼠的剂量分级研究。[2]
动物模型中的剂量分级疗效研究是阐明靶药物PK/PD关系的一种有用方法，因为即使在相同的日剂量下，剂量分级也会导致不同的血浆药物浓度模式（14,30）。作为ASP2151（阿门那韦）PK/PD分析的一部分，我们研究了每日剂量分级对HSV-1感染小鼠模型中ASP2151抗病毒疗效的影响。从HSV-1感染之日起，对小鼠施用1、3、10、30和100mg/kg/天的ASP2151剂量，持续5天，可以单次剂量或分两次或三次剂量给药。然后在感染后第5天评估HSV-1的平均滴度和病变评分（图3）。ASP2151治疗以剂量依赖的方式降低了病变评分和HSV-1滴度，与给药间隔无关。在用以下ASP2151剂量和给药间隔治疗的小鼠中没有观察到损伤发展：每24小时30和100mg/kg/天（q24h）；10、30和100mg/kg/天，每12小时一次；或30和100mg/kg/天q8h（图3A）。在以100mg/kg/天q12h和30或100mg/kg/天q8h的剂量用ASP2151治疗的感染小鼠中，HSV-1滴度接近检测下限（图3B）。 感染后第5天，每只动物的病变评分与HSV-1滴度之间的关系如图3C所示。HSV-1滴度低于5 log10 PFU/皮肤的动物没有出现皮肤损伤（评分，0），表明HSV-1滴度作为HSV-1感染的直接PD标志物比损伤评分更敏感。这些结果表明，与单剂量相同的日剂量相比，分割ASP2151的日剂量在降低HSV-1滴度方面具有更大的疗效。

菌斑减少试验。[2]
如前所述，使用空斑减少试验测试了ASP2151（阿门那韦）和ACV对HSVs的抗病毒活性。简而言之，将HEF细胞接种到多孔板中并孵育直至形成单层。移除培养基后，将细胞感染HSV-1或HSV-2，并在37°C下进一步孵育1小时。用维持培养基洗涤细胞两次，然后用测试化合物处理，直到出现透明斑块。然后用磷酸缓冲盐水中的10%福尔马林固定细胞，用0.02%结晶紫溶液染色，在光学显微镜下测定斑块数量。EC50代表将斑块数量减少50%所需的试验化合物浓度，使用S型最大效应（Emax）模型的非线性回归分析计算。

---

ATP酶测定[3]
使用根据先前描述的方法修改的测定法测定HSV-1解旋酶-引物酶复合物的ssDNA依赖性ATP酶活性。10反应缓冲液含有20 mM HEPES（pH 7.6）、2 mM MgCl2、10 mM二硫苏糖醇（DTT）、9μg/mL使用小牛胸腺DNA制备的ssDNA、90μM ATP和25 ng酶复合物，反应体积为10μL。将含有浓度为0.0001–3μM的ASP2151（阿门那韦）的混合物在37°C下孵育75分钟。根据制造商的说明，通过添加10μL Biomol®green来测定ATP水解。

---

DNA解旋酶测定[3]
如前所述，使用在5′端用Alexa Fluor®488（Invitrogen）标记和未标记的5′-GTCGCCCACCCCTGTTTATTGACTGGCCCGCGCGGTTTACAACCGTGTGTGGACGCGCGGCGCCGCGCGCGCAGTTATTGCATGAAAGCCCGGCTG-3′的寡核苷酸制备分叉DNA解旋酶底物。20反应混合物（10μL）含有20 mM HEPES（pH 7.6）、1 mM DTT、5 mM MgCl2、2 mM ATP、1μg解旋酶-引物酶复合物、20 nM分叉DNA解偶联酶底物和200 nM浓度的捕获链（5′-CAGTCAGCGTTAAAACGACGGCAG-CAGT-3′）。将含有ASP2151（阿门那韦）的反应在30°C下进行60分钟，然后通过20%非变性聚丙烯酰胺凝胶对产物进行电泳。使用ProXPRESS®2D蛋白质组成像系统检测荧光。

---

蛋白酶测定[3]
在荧光标记的CTP存在下，使用51-mer DNA寡核苷酸5′-CTCTTCGGTCTCGGACTACCCCTCCCGACTGCCTATGATTTATCTTTG-3′作为模板，通过检测合成的RNA引物来测量灵长类酶活性。13,19含有50mM Tris-HCl（pH 8.0）、10mM MgCl2、1mM DTT、1mM ATP、1mM GTP、1mM UTP、2μM荧光标记CTP、10pmol 51-mer模板和2µg解旋酶-灵长类酶复合物的反应混合物（10μL）在载体（0.1%DMSO）或存在下在30°C下孵育90分钟。ASP2151（阿门那韦）。然后用10μL含有50 mM EDTA（pH 8.0）和90%（v/v）甲酰胺的终止缓冲液淬灭反应。产品在95°C下热变性5分钟，通过变性PAGE（15%聚丙烯酰胺-7M尿素）分离，然后使用ProXPRESS®2D蛋白质组学成像系统检测荧光。

---

菌斑减少试验（PRA）和细胞毒性试验[3]
将HEF细胞接种到多孔板中并孵育，直至细胞形成单层。去除培养基后，以40个噬斑形成单位（pfu）/孔的滴度用VZV、HSV-1或HSV-2感染细胞。然后将平板在37°C下孵育1小时。用维持培养基洗涤两次后，用试验化合物处理细胞，直至出现透明斑块。然后用PBS中的10%福尔马林固定细胞，并用0.02%结晶紫溶液染色。在显微镜下计数存在的斑块数量。使用HEF细胞进行MTT测定或中性红测定，以确定导致活细胞数量减少50%的细胞毒性浓度（CC50）。

---

病毒特异性PCR片段的PAGE[3]
感染HSV-1、HSV-2、VZV和HCMV的HEF细胞暴露于ASP2151（阿门那韦），并孵育至病毒对照孔中明显出现斑块。然后收集细胞，使用Gentra®Puregene®细胞试剂盒提取整个DNA。使用分别针对HSV-1和HSV-2、VZV或HCMV的US4、ORF31或UL83的特异性引物组进行PCR[表S1，可在JAC Online上作为补充数据获得(http://jac.oxfordjournals.org/)]. 对每个PCR进行电泳、染色和可视化。人β-肌动蛋白基因被用作内部对照。

---

ASP2151（阿门那韦）抗性VZV突变体[3]
在ASP2151浓度从0.1到60μM逐步增加的情况下，使用HEF细胞对VZV毒株CaQu进行连续传代，筛选出ASP2151抗性VZV突变体“C2151rm”。简而言之，首先用亲本菌株CaQu的无细胞VZV原液感染25 cm2烧瓶中的单层HEF细胞，并在50%有效浓度（EC50）的ASP2151（0.1μM）存在下培养，直至可见细胞病变效应。收集细胞后，将10%的收集细胞分散在新鲜单层HEF细胞上作为细胞相关VZV源，并在先前使用的ASP2151浓度的1倍、2倍或4倍的条件下孵育。孵育4-6天后，将培养瓶中细胞病变效应明显的细胞（<50%的细胞）用作下一代的病毒源。该过程一直持续到ASP2151浓度达到60μM（600×EC50）。在ASP2151浓度达到60µM后，在60µM ASP2151的存在下重复病毒传代五次，以避免污染。该过程的总传代次数和总周期分别为16天和72天。然后根据之前描述的方法制备无细胞VZV原液，命名为C2151rm。22通过PCR扩增包括解旋酶（ORF55）和引物酶（ORF6）基因全长开放阅读框的DNA区域，使用相应的引物组（ORF55，5′-TGGTCATTGGTTTACC-3′和5′-AGTGAACCCGCCTAC-3′；ORF6，5′-CAGCGGGTTAAAAGCCTTG-3′和5’-CGGTCACCATTAATCACC-3′）和从C2151rm及其亲本CaQu的无细胞原液中提取的病毒DNA。每种PCR产物都用作直接测序的模板（BigDye®Terminator v3.1循环测序试剂盒；Applied Biosystems）。使用GENETYX®软件分析氨基酸置换。

空斑减少试验用于评估 Amenamevir (ASP2151) 和 ACV 对 HSV 的抗病毒功效。简而言之，HEF 细胞在多孔板中培养并生长成单层。除去培养基后，将 HSV-1 或 HSV-2 添加到细胞中，然后将板在 37°C 下再孵育 1 小时。在维持培养基中洗涤细胞两次后，将包含阿美那韦的测试化合物应用于细胞，直到开始形成透明斑块。用 0.02% 结晶紫溶液对细胞进行染色，并用磷酸盐缓冲液中的 10% 福尔马林固定它们生理盐水，在光学显微镜下计数斑块的数量。在非线性回归分析中使用 S 型最大效应 (Emax) 模型，可以确定 EC50 或将斑块数量减少 50% 所需的测试化合物的浓度[1]。

将7至8周龄的雌性无毛小鼠（HOS:HR-1）在麻醉状态下，用针头在其背外侧皮肤上剥离一小块方形区域，然后注射HSV-1 WT51株（15 μL/只；滴度2×10⁸ PFU/mL）或CI-116株（15 μL/只；滴度4×10⁷ PFU/mL）的悬液。感染当天为感染后第0天。将感染HSV-1的小鼠（n=5）分别口服1、3、10、30或100 mg/kg/天的ASP2151，持续5天。阿米那韦（ASP2151）治疗在HSV感染后2至3小时开始。该药物每日服用一次（每24小时一次，q24h）、每日两次（每12小时一次，q12h）或每日三次（每8小时一次，q8h）。感染后第五天，测量病变评分和皮内HSV-1滴度[1]。

---

小鼠HSV感染模型。[2]
所有动物实验程序均已获得安斯泰来制药株式会社动物伦理委员会的批准。在麻醉状态下，用针头将HSV-1 WT51株（15 μl/只；滴度，2 × 10⁸ PFU/ml）或CI-116株（15 μl/只；滴度，4 × 10⁷ PFU/ml）的悬液注射到用针头剥离的小方块背外侧皮肤上。 HSV-1感染当天被指定为感染后第0天。

---

剂量分割研究。对感染HSV-1的小鼠（n = 5）口服给予每日总剂量为1、3、10、30或100 mg/kg/天的ASP2151（阿米那韦），连续5天。ASP2151治疗在HSV感染后2至3小时开始，每日一次给药（每24小时一次，q24h），或分两次（每12小时一次，q12h）或三次（每8小时一次，q8h）给药。在感染后第5天测量病变评分和皮内HSV-1滴度，如下所述。

---

持续输注研究。 [2]每组小鼠（n = 10）在感染前1至2小时皮下植入装有ASP2151（阿米那韦）溶液（浓度分别为1、3、10和20 mg/g，溶于聚乙二醇400 [PEG 400]）或载体的Alzet微型渗透泵。初步研究已证实，该输注方式可使血浆中ASP2151浓度在研究期间所用ASP2151溶液的浓度范围内保持稳定。根据输注速率（23.28 μl/天）和平均动物体重（20.4 g），分别输注 1、3、10 和 20 mg/g ASP2151 溶液的各组动物的每日 ASP2151 剂量分别约为 1.1、3.3、11 和 22 mg/kg 体重/天。输注持续 5 天。感染后第 5 天，按照以下所述方法测量病变评分、皮内 HSV-1 滴度和血浆中 ASP2151（阿米那韦）浓度。

---

测量病变评分、皮内 HSV-1 滴度和血浆中 ASP2151（阿米那韦）浓度。 [2]
根据先前发表的标准 (6)，基于带状疱疹样皮损和一般症状的严重程度，对每只动物的疾病严重程度进行0至7分的综合评分。对疾病症状进行评分后，采集每只动物的皮肤和/或血液样本。将皮肤样本在10 ml冰冷的生理盐水中匀浆，然后通过离心去除碎片。使用噬斑试验测定每个样本中的HSV-1滴度。使用液相色谱-串联质谱 (LC/MS/MS) 法测定小鼠血浆中ASP2151的浓度。

---

重复口服ASP2151（阿米那韦）后的药代动力学模拟。[2]
为了估计重复口服ASP2151后的药代动力学参数，在小鼠单次口服给药后测量血浆中ASP2151的浓度。将 ASP2151 以 0.33、3、30 和 100 mg/kg 的剂量给予小鼠（n = 3），并在给药后 0.25、0.5、1、2、4、8 和 12 小时从心脏采集血样。使用 WinNonlin 软件，通过非参数叠加法模拟重复给药后血浆中 ASP2151 的浓度，并获得单次 30 mg/kg 剂量 ASP2151 给药的数据。

---

PK/PD 建模。[2]
使用 sigmoid-Emax 模型检验了 ASP2151（阿米那韦） 的稳态药代动力学参数（峰浓度 (Cmax)、浓度-时间曲线下面积 (AUC24 h) 和高于阈值浓度的时间）与抗病毒疗效之间的关系。阈值浓度是指在剂量分割实验中完全抑制HSV-1生长所需的ASP2151浓度。使用GraphPad Prism的S型剂量反应（可变斜率）程序，将PK参数拟合到平均皮内HSV-1滴度（log10 PFU/皮肤）。使用的方程如下：y = bottom + (top − bottom)/(1 + 10[(log EC50− x) × hill slope])，其中x是每个PK变量的对数，y是响应皮内HSV-1滴度（log10 PFU/皮肤）。将载体组的平均值固定为“顶部”值，“底部”值固定为 log10 250 值，该值代表 HSV-1 滴度的检测限值。

---

体内抗病毒活性[3]
在麻醉状态下，用 27 号针头在小鼠背外侧划出网格状的皮肤，然后用 HSV-1 WT51 株（15 μL/只，滴度为 8.0 × 105 pfu/mL）感染小鼠（感染后第 0 天）。 ASP2151（阿米那韦）剂量分别为0.3、1、3、10和30 mg/kg，或伐昔洛韦剂量分别为3、10、30和100 mg/kg（溶于0.5%甲基纤维素溶液中），于病毒接种后3小时开始，每日两次口服给药，连续5天。每组试验小鼠10只。每日监测疾病进展，持续17天，并根据带状疱疹样病变和一般症状的严重程度，采用0至7分的综合评分标准进行评分，评分标准如下：0分，无感染迹象；1分，局限性、几乎无法察觉的小水疱；2分，水疱轻微扩散；3分，形成大片水疱；4分，带状疱疹样水疱；5分，形成大片溃疡；评分 6 分，出现大面积带状疱疹样溃疡（严重）；评分 7 分，出现后肢瘫痪或死亡。

在小鼠体内对ASP2151（阿米那韦）进行药代动力学研究。[2]
小鼠单次口服0.33、3、30和100 mg/kg剂量的ASP2151后，血浆中ASP2151的浓度随剂量增加而升高，并在给药后0.25至1.0小时达到Cmax（图4A）。0.33、3、30和100 mg/kg剂量对应的Cmax分别为50、646、5199和14903 ng/ml，AUC0–∞值分别为0.22、2.37、21.97和56.12 μg·h/ml。采用单室模型分析了单次口服30 mg/kg ASP2151后测得的血浆浓度。图 4B 显示了 ASP2151 在 100 mg/kg/天 q24h、100 mg/kg/天 q12h 和 30 mg/kg/天 q8h 剂量下的血浆模拟浓度。当皮内 HSV-1 滴度降至检测下限以下时，采用 30 mg/kg/天 q8h 和 100 mg/kg/天 q12h 两种给药方案时，ASP2151 在血浆中的谷浓度估计约为 100 ng/ml。

安全性[1]
不良事件采用医学术语集（MedDRA）进行编码。各治疗组不良事件的总体发生率相似（范围：45.4%–46.6%）。阿米那韦400 mg组、200 mg组和伐昔洛韦组中，发生药物相关不良事件的患者比例分别为10.0% (25/249)、10.7% (27/252)和12.0% (30/249)。各组中发生率≥2%的不良事件包括：鼻咽炎、β-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶升高、纤维蛋白降解产物升高、α-1-微球蛋白升高、口腔炎、蛋白尿、接触性皮炎、糖尿、湿疹、腹泻、头痛和毛囊炎（表4）。发生率≥2%的药物相关不良事件包括：阿米那韦400 mg组2.0%（5/249）和伐昔洛韦组2.4%（6/249）的患者出现纤维蛋白降解产物升高，阿米那韦200 mg组2.4%（6/252）的患者出现α1-微球蛋白升高。大多数不良事件为轻度，未观察到药物相关不良事件中的严重不良事件（表S4）。本研究中未报告死亡病例。共报告了5例患者的6例严重不良事件（SAE）：阿米那韦400 mg组1例（传染性单核细胞增多症），阿米那韦200 mg组1例（心绞痛），伐昔洛韦组3例（意识丧失、栓塞性脑梗死、恶性肺肿瘤和肌腱断裂）。所有严重不良事件均被认为与研究药物无关。阿米那韦200 mg组有1例患者（头痛和恶心）因不良事件而停止研究治疗，伐昔洛韦组有2例患者（腹痛、肝功能异常和脑病）因不良事件而停止研究治疗。这些不良事件均与药物相关，除中度脑病外，其余均为轻度。所有不良事件在充分治疗和停用研究药物后均恢复正常。临床实验室检查（血液学、生化和尿液分析）、生命体征或心电图均未见明显变化。

[1]. J Dermatol.2017 Nov;44(11):1219-1227.

[2]. Antimicrob Agents Chemother.2013 Mar;57(3):1339-46.

[3]. J Antimicrob Chemother. 2010 Aug;65(8):1733-41.

阿米那韦已用于研究带状疱疹、单纯疱疹、生殖器疱疹的治疗以及其安全性的临床试验。
阿米那韦是一种新型解旋酶-引物酶抑制剂，对水痘-带状疱疹病毒和1型、2型单纯疱疹病毒均有效。阿米那韦可稳定解旋酶-引物酶与其DNA底物之间的相互作用，阻止解旋酶或引物酶催化循环的进行，从而干扰病毒DNA复制和病毒增殖。

---

ASP2151（阿米那韦）是一种针对1型单纯疱疹病毒（HSV-1）、2型单纯疱疹病毒（HSV-2）和水痘-带状疱疹病毒的解旋酶-引物酶抑制剂。为了确定并分析ASP2151的药效学（PD）和药代动力学（PK）参数之间的相关性，我们采用体外噬斑减少试验和HSV-1感染小鼠模型，研究了ASP2151的PD特征。ASP2151在体外抑制HSV-1的复制，平均半数有效浓度（EC50）为14 ng/ml。在皮肤感染HSV-1的小鼠模型中，ASP2151呈剂量依赖性地抑制皮内HSV-1的生长，当剂量达到30 mg/kg体重/天时，抑制作用达到平台期。剂量分割研究表明，每日两次给予100 mg/kg体重/天的ASP2151，以及每日三次给予30或100 mg/kg体重/天的ASP2151，均能使小鼠皮内HSV-1滴度低于检测限。皮内HSV-1滴度与血清药物最大浓度(C_max)、24小时浓度-时间曲线下面积(AUC_24h)以及血浆中ASP2151浓度高于100 ng/ml的时间(T₁₀₀)相关。在血浆中ASP2151浓度达到79至145 ng/ml的小鼠中，持续输注ASP2151可有效降低皮内HSV-1滴度至检测限以下。我们的研究结果表明，在HSV-1感染小鼠中，ASP2151的抗病毒疗效与药代动力学参数T₁₀₀密切相关。基于这些结果，我们提出，在HSV-1感染小鼠中，血浆ASP2151浓度每日维持在100 ng/ml以上21至24小时可达到最佳疗效。 [2]

---

目的
评估并描述新型非核苷类含恶二唑基苯基的疱疹病毒解旋酶-引物酶复合物抑制剂ASP2151（阿美那韦）的抗疱疹病毒作用。
方法
评估了ASP2151对重组HSV-1解旋酶-引物酶复合物相关酶活性的抑制作用。为研究其对病毒DNA复制的影响，我们分析了感染疱疹病毒[单纯疱疹病毒(HSV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)和人巨细胞病毒]的细胞中的病毒DNA。对ASP2151耐药的VZV突变株进行了测序分析。采用噬斑减少试验和HSV-1感染小鼠带状疱疹样扩散模型评估了体外和体内抗病毒活性。
结果
ASP2151抑制了与HSV-1解旋酶-引物酶复合物相关的单链DNA依赖性ATP酶、解旋酶和引物酶活性。抗病毒试验表明，与其他已知的HSV解旋酶-引物酶抑制剂不同，ASP2151通过抑制病毒DNA复制，对VZV、HSV-1和HSV-2均具有同等效力。此外，ASP2151的抗VZV活性（EC50，0.038–0.10 µM）对所有测试毒株均强于阿昔洛韦（EC50，1.3–27 µM）。ASP2151对阿昔洛韦耐药的VZV也有效。在ASP2151耐药的VZV的解旋酶和引物酶亚基中发现了氨基酸替换。在小鼠带状疱疹样扩散模型中，ASP2151 具有口服活性，并且比伐昔洛韦更能有效抑制疾病进展。
结论
ASP2151 是一种新型疱疹解旋酶-引物酶抑制剂，值得进一步研究，以期用于治疗水痘-带状疱疹病毒 (VZV) 和单纯疱疹病毒 (HSV) 感染。[3]

C24H26N4O5S

482.55

482.162

C, 59.74; H, 5.43; N, 11.61; O, 16.58; S, 6.64

841301-32-4

1039623-01-2 (LB-80380 maleate)

11397521

White to off-white solid powder

4.303

130.85

1

7

6

34

800

0

O=C(CN(C1C(C)=CC=CC=1C)C(C1CCS(=O)(=O)CC1)=O)NC1C=CC(C2N=CON=2)=CC=1

MNHNIVNAFBSLLX-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H26N4O5S/c1-16-4-3-5-17(2)22(16)28(24(30)19-10-12-34(31,32)13-11-19)14-21(29)26-20-8-6-18(7-9-20)23-25-15-33-27-23/h3-9,15,19H,10-14H2,1-2H3,(H,26,29)

N-(2-((4-(1,2,4-oxadiazol-3-yl)phenyl)amino)-2-oxoethyl)-N-(2,6-dimethylphenyl)tetrahydro-2H-thiopyran-4-carboxamide 1,1-dioxide

ASP-2151; ASP2151; Amenamevir; 841301-32-4; Amenamevir [INN]; 94X46KW4AE; AMENAMEVIR [MI]; ASP 2151

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : 50~96 mg/mL ( 103.62~198.94 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.31 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.31 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.31 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: 10% DMSO+40% PEG300+5% Tween-80+45% Saline: ≥ 2.08 mg/mL (4.31 mM)

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。