PDGFRα^V561D (IC50 = 40 nM); PDGFRα^D842V (IC50 = 81 nM); c-Kit^D816H (IC50 = 10 nM); c-Kit^V560G (IC50 = 34 nM); c-Kit^V654A (IC50 = 127 nM); c-Kit^D816V (IC50 = 950 nM)

体外活性：MP-470 的盐酸盐还抑制 c-Kit 的多种突变体，包括 c-KitD816V、c-KitD816H、c-KitV560G 和 c-KitV654A，以及 Flt3 突变体 (Flt3D835Y) 和两种 PDGFRα突变体（PDGFRαV561D 和 PDGFRαD842V），IC50 为 10 nM 至 8.4 μM。 MP-470 有效抑制 OVCAR-3、A549、NCI-H647、DMS-153 和 DMS-114 细胞的增殖，IC50 为 0.9 μM–7.86 μM。 MP-470 还抑制 c-Kit 和 PDGFRα，IC50 值分别为 31 μM 和 27 μM。 MP-470 对 MiaPaCa-2、PANC-1 和 GIST882 细胞具有有效的细胞毒性，IC50 为 1.6 μM 至 3.0 μM。 MP-470 还结合并抑制多种 c-Kit 突变体，包括 c-KitK642E、c-KitD816V 和 c-KitK642E/D816V。在 MDA-MB-231 细胞中，MP-470 (1 μM) 抑制 AXL 的酪氨酸磷酸化。在 LNCaP 和 PC-3（而非 DU145 细胞）中，MP-470 表现出细胞毒性，IC50 分别为 4 μM 和 8 μM，并在 10 μM 时诱导细胞凋亡。在 LNCaP 细胞中，MP-470 (10 μM) 引起 G1 期阻滞并降低 Akt 和 ERK1/2 的磷酸化。在 SF767 细胞中，MP-470 (10 μM) 抑制 c-Met 磷酸化并使细胞对辐射敏感。与辐射相结合，MP-470 (10 μM) 可抑制糖原合成酶激酶 (GSK)3β 活性，诱导细胞凋亡，并可能通过抑制 Rad51 来破坏 dsDNA 断裂的修复。激酶测定：为了测试对 c-Kit 和 PDGFRα 的抑制活性，将酶与不同浓度的 MP-470 和放射性标记的 γ-32P-ATP 一起孵育。 30分钟后，将反应混合物在丙烯酰胺凝胶上进行电泳，并通过掺入酶中的放射性量来定量自磷酸化。细胞测定：第 0 天，将细胞（MiaPaCa-2、PANC-1 和 GIST882 细胞）以每孔 2 × 103 至 1 × 104 个细胞的密度接种在 100 μL 培养基中，置于 96 孔 Falcon 微量滴定板中。第 1 天，将 10 μL 连续稀释的 MP-470 添加到板中，一式四份。孵育4天后，用10%三氯乙酸溶液固定细胞。随后，用 1% 乙酸中的 0.04% Sulforhodamine B (SRB) 对其进行标记。多次洗涤去除多余的染料后，向每个孔中添加 100 μL 50 mM Tris 溶液以溶解染料。在读板器上在 570 nm 处读取每个孔的吸光度。日期表示为根据校正背景吸光度的吸光度计算的对照存活百分比。通过将单克隆抗体的平均吸光度值除以对照的平均吸光度值并乘以 100 来确定细胞的存活百分比。

在 HT-29、A549 和 SB-CL2 细胞的小鼠异种移植模型中，MP-470（腹腔注射 10 mg/kg–75 mg/kg 或口服 50 mg/kg–200 mg/kg）可抑制肿瘤生长。在携带 LNCaP 异种移植物的小鼠中，MP-470 (20 mg/kg) 与厄洛替尼联合显着诱导肿瘤生长抑制 (TGI)。

将不同浓度的 MP-470 和放射性标记的 γ-32P-ATP 与酶一起孵育，以测试它们对 c-Kit 和 PDGFRα 的抑制活性。 30分钟后，将反应混合物在丙烯酰胺凝胶上进行电泳，并使用已掺入酶中的放射性量来测量自磷酸化。

第 0 天，将细胞以每孔 2 × 10³ 至 1 × 10⁴ 细胞的密度置于 96 孔 Falcon 微量滴定板中，置于 100 μL 培养基中。首先，将 10 μL MP-470 系列稀释液一式四份添加到板中。孵育四天后，使用 10% 三氯乙酸溶液固定细胞。然后用 1% 乙酸中的 0.04% Sulforhodamine B (SRB) 进行标记。为了溶解多余的染料，在多次洗涤后向每个孔中添加 100 μL 50 mM Tris 溶液。在酶标仪上，在 570 nm 处测量每个孔的吸光度。

Forty eight 6-7 week-old SCID male mice with LNCaP xenograft model[2]
10 mg/kg and 20 mg/kg, 50 mg/kg
Administered i.p. daily from days 1 to 24

Absorption, Distribution and Excretion
Orally available

[1]. Safety, tolerability, and pharmacokinetics of amuvatinib from three phase 1 clinical studies in healthy volunteers. Cancer Chemother Pharmacol. 2012 Jul;70(1):183-90.

[2]. A phase I, first-in-human dose-escalation study of amuvatinib, a multi-targeted tyrosine kinase inhibitor, in patients with advanced solid tumors. Cancer Chemother Pharmacol. 2013 Feb;71(2):463-71.

[3]. Plasma and cerebrospinal fluid pharmacokinetics of MP470 in non-human primates. Cancer Chemother Pharmacol. 2011 Apr;67(4):809-12.

[4]. Pharmaceutical formulations comprising salts of a protein kinase inhibitor and methods of using same. US20080226747A1.

[5]. MP470, a novel receptor tyrosine kinase inhibitor, in combination with Erlotinib inhibits the HER family/PI3K/Akt pathway and tumor growth in prostate cancer. BMC Cancer. 2009 May 11;9:142.

N-(1,3-benzodioxol-5-ylmethyl)-4-(4-benzofuro[3,2-d]pyrimidinyl)-1-piperazinecarbothioamide is a N-arylpiperazine.
Amuvatinib has been used in trials studying the treatment of Solid Tumors and Small Cell Lung Carcinoma. Amuvatinib is an oral, selective multi-targeted tyrosine kinase inhibitor that suppresses c-MET, c-RET and the mutant forms of c-KIT, PDGFR and FLT3. Amuvatinib also suppresses Rad51 protein, a critical component of double-stranded DNA repair in cancer cells.
Amuvatinib is an orally bioavailable synthetic carbothioamide with potential antineoplastic activity. Multitargeted receptor tyrosine kinase inhibitor MP470 binds to mutant forms of the stem cell factor receptor (c-Kit; SCFR), inhibiting clinically relevant mutants of this receptor tyrosine kinase that may be associated with resistance to therapy. In addition, MP470 inhibits activities of other receptor tyrosine kinases, such as c-Met, Ret oncoprotein, and mutant forms of Flt3 and PDGFR alpha, which are frequently dysregulated in variety of tumors. This agent also suppresses the induction of DNA repair protein Rad51, thereby potentiating the activities of DNA damage-inducing agents. Mutant forms of c-Kit are often associated with tumor chemoresistance.

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Drug Indication
Amuvatinib is a selective multi-targeted tyrosine kinase inhibitor that suppresses c-MET, c-RET and the mutant forms of c-KIT, PDGFR and FLT3. Amuvatinib also suppresses Rad51 protein, a critical component of double-stranded DNA repair in cancer cells.

C23H21N5O3S

447.51

447.136

C, 61.73; H, 4.73; N, 15.65; O, 10.73; S, 7.17

850879-09-3

Amuvatinib hydrochloride;1055986-67-8

11282283

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

649.5±65.0 °C at 760 mmHg

346.6±34.3 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.739

2.79

115.02

1

7

3

32

678

0

S=C(N1CCN(C2C3OC4C(C=3N=CN=2)=CC=CC=4)CC1)NCC1C=C2C(OCO2)=CC=1

FOFDIMHVKGYHRU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H21N5O3S/c32-23(24-12-15-5-6-18-19(11-15)30-14-29-18)28-9-7-27(8-10-28)22-21-20(25-13-26-22)16-3-1-2-4-17(16)31-21/h1-6,11,13H,7-10,12,14H2,(H,24,32)

N-(1,3-benzodioxol-5-ylmethyl)-4-([1]benzofuro[3,2-d]pyrimidin-4-yl)piperazine-1-carbothioamide

Amuvatinib; MP470; HPK-56; MP-470; HPK 56; HPK56; MP 470

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。