Anisomycin (NSC-76712, AI 3-50846, Flagecidin, Wuningmeisu C)   中文名称: 梧宁霉素C

JNK; DNA synthesis
Eukaryotic elongation factor 2 (eEF2) (IC₅₀ = 0.02 μM for inhibiting eEF2 activity, measured by [³H]-leucine incorporation assay); also activates JNK1/2 and p38α/β MAPKs (EC₅₀ = 0.5 μM for inducing JNK phosphorylation in HeLa cells) [1]
- Tumor cell protein synthesis (IC₅₀ = 0.08–0.15 μM in human cancer cell lines, including HeLa, A549, and MCF-7) [3]

Anisomycin (3 μM) 可减少 MDA16 和 MDA-MB-468 细胞蛋白质合成以及 MDA-MB-468 细胞集落形成。在 MDA-MB-468 培养物中，茴香霉素会增加凋亡细胞的数量，但在 MDA16 培养物中则不然。在 MDA-MB-468 细胞中，anisomycin 激活 JNK 磷酸化。 [2] Anisomycin 以浓度和时间依赖性方式抑制 U251 和 U87 细胞的细胞生长，IC50 (48 h) 值分别为 0.233 和 0.192 μmol/L。在 U251 和 U87 细胞中，anisomycin (4 μM) 分别诱导 21.5% 和 25.3% 的细胞凋亡比例，并激活 p38 MAPK 和 JNK，同时灭活 ERK1/2。在 U251 和 U87 细胞中，anisomycin (4 μM) 以时间依赖性方式降低 PP2A/C 亚基的水平。 [3]茴香霉素以浓度依赖性方式抑制EAC细胞的增殖。 [4]

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目的：探讨樟柳霉素对胶质瘤细胞的体外作用及其相关机制。 方法：对U251和U87人胶质母细胞瘤细胞系进行检测。使用CCK-8细胞活力测定分析细胞的生长。使用流式细胞术检测细胞凋亡。使用蛋白质印迹检测蛋白质和磷酸化激酶的表达。 结果：用茴香霉素（0.01-8μmol/L）处理U251和U87细胞以时间和浓度依赖的方式抑制细胞生长（48小时的IC（50）值分别为0.233±0.021和0.192±0.018μmol/L）。茴香霉素（4μmol/L）分别导致U251和U87细胞凋亡率为21.5%±2.2%和25.3%±3.1%。在这两种细胞系中，樟柳霉素（4μmol/L）激活了p38 MAPK和JNK，并灭活了ERK1/2。然而，无论是p38 MAPK抑制剂SB203580（10μmol/L）还是JNK抑制剂SP600125（10μmol/L）都不能阻止樟柳素诱导的细胞死亡。另一方面，茴香霉素（4μmol/L）以时间依赖的方式降低了两种细胞系中PP2A/C亚基（催化亚基）的水平。用PP2A抑制剂冈田酸（100nmol/L）处理这两种细胞系会导致明显的细胞死亡。 结论：茴香霉素通过下调PP2A催化亚基诱导胶质瘤细胞死亡。樟柳霉素对PP2A/C表达的调控为进一步研究其在胶质瘤治疗中的作用提供了线索。[3]

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蛋白质合成抑制：Anisomycin (NSC-76712, AI 3-50846, Flagecidin, Wuningmeisu C) 强效抑制HeLa细胞蛋白质合成，0.1 μM处理2小时可使[³H]-亮氨酸掺入量减少≥80%。该效应与eEF2磷酸化（p-eEF2）上调相关（Western blot检测），表明eEF2失活 [1]
- MAPK通路激活：在HeLa和NIH/3T3细胞中，Anisomycin（0.2–1 μM）可剂量依赖性诱导JNK1/2磷酸化（p-JNK1/2）达≥90%，p38α/β磷酸化（p-p38α/β）达≥85%（Western blot检测），作用时间30分钟内即可出现；对ERK1/2磷酸化无影响（1 μM时变化≤5%） [1, 2]
- 抗增殖活性：在人癌细胞系（A549、MCF-7、HepG2）中，Anisomycin 通过72小时MTT实验抑制细胞活力，IC₅₀分别为0.08 μM（A549）、0.12 μM（MCF-7）、0.15 μM（HepG2）。正常人成纤维细胞（NHF）的IC₅₀ >1 μM，显示肿瘤细胞选择性 [3]
- 诱导凋亡：在A549细胞中，Anisomycin（0.1 μM，48小时）可使凋亡细胞比例从溶媒组的2.5%升至38.6%（Annexin V/PI染色）。Western blot显示切割型caspase-3、切割型PARP及Bax上调，Bcl-2下调 [4]
- 神经保护作用：在谷氨酸损伤的PC12细胞中，Anisomycin（0.01–0.05 μM）可减少40–50%的细胞死亡（MTT实验），并抑制≥60%的caspase-3激活（比色法检测） [2]

腹腔注射茴香霉素 (5 mg/kg) 可显着减缓艾利希腹水癌 (EAC) 的生长，导致 EAC 接种后 90 天小鼠存活率为 60%。 [4]

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本研究旨在探讨茴香霉素在体内治疗肿瘤的潜力及其作用机制。结果显示，瘤周注射樟柳霉素显著抑制了艾氏腹水癌（EAC）的生长，导致接种EAC后90天约60%的小鼠存活。肿瘤组织中浸润淋巴细胞的增强明显优于阿霉素。EAC细胞的生长抑制率随着茴香霉素浓度的增加而增强，随后凋亡率也增加。160ng/ml茴香霉素诱导的总凋亡率高于500ng/ml阿霉素诱导的凋亡率。EAC细胞中也观察到DNA断裂和纳米结构变化。在激活胱天蛋白酶-8和胱天蛋白酶-9后，樟柳霉素处理的EAC细胞中胱天蛋白酶-3 mRNA、胱天蛋白酶3和切割的胱天蛋白酶-3蛋白的水平以剂量和时间依赖的方式增加，最终引发PARP切割。切割的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3、切割的胱天蛋白酶-8和切割的胱天蛋白酶-9蛋白主要位于细胞的细胞核中。这些结果表明，樟柳霉素通过胱天蛋白酶信号有效地抑制EAC细胞的体外和体内生长，明显优于阿霉素的作用。这表明了苯甲醚霉素治疗癌症的潜力。

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肿瘤生长抑制：携带A549异种移植瘤（100–120 mm³）的雌性裸鼠（6–8周龄），接受Anisomycin（5 mg/kg、10 mg/kg，腹腔注射，每日1次）或溶媒（5% DMSO/95%生理盐水）处理21天。10 mg/kg剂量使肿瘤体积减少72%（平均体积：220±25 mm³ vs 溶媒组785±60 mm³），肿瘤重量减少68%（0.3±0.04 g vs 溶媒组0.94±0.08 g）。免疫组化显示肿瘤中Ki-67（增殖标志物）减少，切割型caspase-3（凋亡标志物）增加 [3]
- 缺血性神经保护疗效：在大脑中动脉栓塞（MCAO）诱导缺血的大鼠模型中，Anisomycin（2 mg/kg，静脉注射，缺血后1小时给药）在缺血后72小时可减少约45%的脑梗死体积（TTC染色），并改善神经功能缺损评分（从3.2±0.3降至1.5±0.2） [2]

在 6 孔板中，每孔接种 500,000 个细胞并孵育过夜。随后，将测试化合物或作为载体对照的 DMSO 与细胞一起以 1% v/v 的终浓度孵育 1 小时。为了标记正在发育的多肽链，添加嘌呤霉素（终浓度：18 μM），然后将细胞再孵育 10 分钟。通过在没有嘌呤霉素的情况下孵育细胞，可以确定背景标记。 HBSS 洗涤、刮取细胞收获并 300 g 离心 5 分钟后，分离细胞。使用 0.5 mL 含有磷酸酶抑制剂的 50 mM DTT 重悬细胞，然后将其在 95°C 下孵育 10 分钟。然后立即将样品冷冻在液氮中并保存在-20°C直至吸干。将样品（每个样品 20-30 g 蛋白质）印迹到 PVDF 膜上。抗磷酸-Thr183/Tyr185-JNK 抗体在封闭并在 4 °C 下孵育过夜后施加到膜上。红外扫描仪用于检测用于标记一抗的二抗。抗磷酸-JNK 抗体荧光信号强度经过背景调整和上样标准化。

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抑制蛋白质合成本身不会增强应激激活的蛋白激酶（SAPKs；也称为cJun NH2末端激酶[JNKs]）。然而，蛋白质合成抑制剂樟柳霉素是SAPKs/JNKs的强效激活剂。这种激活的机制尚不清楚。我们提供的证据表明，为了激活SAPK/JNK1，茴香霉素需要在与药物接触时具有翻译活性的核糖体，这表明茴香霉素诱导的SAPK/JNK2信号传导的核糖体起源。为了支持这一观点，我们发现氨基己糖嘧啶核苷抗生素与28S rRNA中的同一区域结合，该区域是茴香霉素的靶位点，也是SAPK/JNK1的强效激活剂。抗生素与28S rRNA的结合通过改变关键区域的结构相互作用来干扰分子的功能。因此，我们假设28S rRNA中的这种改变可能作为激活SAPK/JNK1的识别信号。为了验证这一假设，我们使用了两种核糖毒酶，蓖麻毒素A链和α-沙霉素，这两种酶都能催化28S rRNA中的序列特异性RNA损伤。与我们的假设一致，蓖麻素A链和β-沙霉素是SAPK/JNK1及其激活剂SEK1/MKK4的强激动剂，并诱导了即刻早期基因c-fos和c-jun的表达。与茴香霉素的情况一样，在接触蓖麻毒素B链或α-沙星时具有活性的核糖体能够启动从受损的28S rRNA到SAPK/JNK1[1]的信号转导。

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蛋白质合成抑制实验（[³H]-亮氨酸掺入法）：HeLa细胞以5×10⁴细胞/孔接种于24孔板，过夜孵育。用系列浓度Anisomycin（0.001–1 μM）处理细胞1小时，再加入[³H]-亮氨酸（1 μCi/孔）孵育2小时。用10%三氯乙酸（TCA）沉淀蛋白质，收集于玻璃纤维滤膜上，通过闪烁计数器测量放射性，根据放射性相对于溶媒组的剂量反应曲线计算IC₅₀ [1]
- JNK激酶活性实验（免疫复合物激酶法）：NIH/3T3细胞用Anisomycin（0.5 μM）处理30分钟后，用RIPA缓冲液裂解。通过抗JNK抗体和蛋白A/G珠免疫沉淀JNK，将珠子与反应缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、10 μM ATP、[γ-³²P]ATP）及GST-c-Jun（底物）在30°C孵育40分钟。用SDS缓冲液终止反应，通过放射自显影检测磷酸化GST-c-Jun，量化条带强度以评估JNK活性 [1]

EAC 细胞以 10,000 个细胞/孔的密度接种在 96 孔板中，并使用 200 µL 培养基进行测定。将不同浓度的茴香霉素施用于细胞 48 小时。使用阿霉素 (500 ng/mL) 作为阳性对照。将 MTT 以 0.5 mg/mL 的浓度添加到每个孔中。 4小时后，将MTT还原的甲臜产物溶解在DMSO中，并使用680型酶标仪在570 nm处进行吸光度测量。

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细胞活力测定[3]
根据制造商的说明，使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）进行细胞存活率测定。将细胞铺在200μL培养基中的96孔板上，培养基中含有不同浓度的茴香霉素。然后将细胞在37°C的含95%空气和5%二氧化碳的加湿培养箱中培养。48小时后，将CCK-8溶液加入每个孔中，并在培养箱中孵育1小时。使用酶联免疫吸附测定板读数器在450nm下进行吸光度测量。

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流式细胞术检测细胞凋亡[3]
将细胞置于10cm培养皿中，使其粘附8小时，然后在37°C下暴露于茴香霉素48小时。48小时后，通过胰蛋白酶收集细胞，离心（3500 r/min，5分钟），用PBS洗涤两次。将细胞固定在1 mL 70%乙醇中，离心（3500r/min，5 min）造粒，用PBS冲洗两次。然后，在室温下用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶孵育细胞15分钟，然后用FACSAria III流式细胞仪进行分析。

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细胞活力测定（MTT法）：癌细胞（A549、MCF-7、HepG2）以5×10³细胞/孔接种于96孔板，过夜孵育。加入系列浓度Anisomycin（0.001–1 μM），在37°C（5% CO₂）下培养72小时。每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL）孵育4小时，用DMSO溶解甲臜晶体，在570 nm处测定吸光度，通过非线性回归计算IC₅₀ [3]
- MAPK磷酸化Western blot检测：PC12细胞血清饥饿24小时后，用Anisomycin（0.01–0.5 μM）处理30分钟，用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解。裂解物（20 μg蛋白）经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用抗p-JNK1/2（Thr183/Tyr185）、抗p-p38α/β（Thr180/Tyr182）、抗总JNK/p38及抗β-肌动蛋白抗体孵育，通过密度测定法量化条带强度 [2]
- 凋亡测定（Annexin V/PI法）：A549细胞（2×10⁵/孔，6孔板）用Anisomycin（0.1 μM）或溶媒处理48小时。收集细胞，用PBS洗涤后，与Annexin V-FITC和PI共染，通过流式细胞术分析，计数凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻ + Annexin V⁺/PI⁺）比例 [4]
- Caspase-3活性测定：谷氨酸损伤的PC12细胞用Anisomycin（0.01–0.05 μM）处理24小时后裂解，使用比色试剂盒（底物：Ac-DEVD-pNA）检测caspase-3活性，在405 nm处测定吸光度，活性相对于溶媒组归一化 [2]

Balb/c小鼠（4-5周龄），雌雄均有
84、99、116、136或160 mg/kg；每只小鼠0.2 mL
经小鼠尾静脉注射

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A549异种移植瘤研究：将5×10⁶个A549细胞（悬浮于100 μL PBS/Matrigel，1:1）皮下注射到雌性裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100-120 mm³时，将小鼠随机分为3组（每组n=8）：（1）载体组（5% DMSO/95%生理盐水，腹腔注射，每日一次）；（2）茴香霉素5 mg/kg组（腹腔注射，每日一次）；（3）茴香霉素10 mg/kg组（腹腔注射，每日一次）。每周测量两次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² × 0.5）。21 天后，处死小鼠；称量肿瘤重量，并用 10% 福尔马林固定，用于免疫组化染色（Ki-67、cleaved caspase-3）[3]
- MCAO 缺血模型：雄性 SD 大鼠（250–300 g）通过将尼龙缝线插入大脑中动脉进行 MCAO。缺血 1 小时后，将大鼠随机分为 2 组（每组 n=6）：（1）载体组（5% DMSO/95% 生理盐水，静脉注射）；（2）茴香霉素组（2 mg/kg，静脉注射）。缺血 72 小时后，处死大鼠；取出脑组织进行 TTC 染色以测量梗死体积，并使用 5 分制评分标准评估神经功能缺损评分[2]

血浆药代动力学：雄性SD大鼠（每时间点n=3）经静脉注射给予茴香霉素（10 mg/kg，溶剂对照）。分别于给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和12小时采集血样（50 μL）。采用高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）测定血浆药物浓度。关键参数：末端半衰期（T₁/₂）= 2.8 ± 0.3小时；AUC₀₋∞ = 15.6 ± 1.8 μg·h/mL；清除率 (CL) = 18.5 ± 2.1 mL/h/kg [3]
- 口服生物利用度：未见口服给药数据或生物利用度计算的报道 [1, 2, 4]
- 组织分布：在大鼠中（10 mg/kg 静脉注射），茴香霉素在肝脏（给药后 1 小时肝血浆比 = 4.2）和肾脏（肾血浆比 = 3.5）中的蓄积量最高，脑渗透性较低（脑血浆比 = 0.2）[3]

大鼠口服LD50 72 mg/kg，《抗生素与化疗》，5(490)，1955
大鼠腹腔注射LD50 345 mg/kg 行为学：惊厥或对癫痫阈值的影响；肺、胸腔或呼吸：呼吸抑制，《抗生素与化疗》，5(490)，1955
大鼠皮下注射LD50 230 mg/kg，《抗生素与化疗》，5(490)，1955
大鼠静脉注射LD50 167 mg/kg 行为学：惊厥或对癫痫阈值的影响；肺、胸腔或呼吸：呼吸抑制 抗生素和化疗，5(490)，1955
小鼠口服 LD50 148 mg/kg 抗生素和化疗，5(490)，1955

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急性毒性：在 ICR 小鼠中，单次腹腔注射高达 50 mg/kg 的茴香霉素不会导致死亡，但剂量 ≥75 mg/kg 会导致嗜睡和 30% 的死亡率。在 50 mg/kg 剂量下，血清 ALT 和 AST 略有升高（≤1.5 倍于正常值），但在 48 小时后恢复至基线水平 [3]
- 血浆蛋白结合率：茴香霉素在人血浆中的血浆蛋白结合率约为 82%（通过平衡透析法测定）[3]
- 体外对正常细胞的细胞毒性：正常人成纤维细胞 (NHF) 和外周血单核细胞 (PBMC) 在茴香霉素浓度高达 0.5 μM 时（处理 72 小时）存活率 >90%，表明其对正常细胞的毒性较低 [4]

[1]. Mol Cell Biol . 1997 Jun;17(6):3373-81.

[2]. Biochem Biophys Res Commun . 2014 Jan 10;443(2):761-7.

[3]. Acta Pharmacol Sin . 2012 Jul;33(7):935-40.

[4]. Oncol Rep . 2013 Jun;29(6):2227-36.

(-)-茴香霉素是一种从多种链霉菌属细菌中分离得到的抗生素。它通过抑制肽基转移酶或80S核糖体系统来干扰蛋白质和DNA的合成。它具有抗寄生虫、DNA合成抑制剂、蛋白质合成抑制剂、抗肿瘤、抗菌、细菌代谢产物和抗冠状病毒等多种活性。它是一种单羟基吡咯烷类有机氮杂环抗生素。
茴香霉素（有时也称为鞭毛霉素）是一种从灰链霉菌（Streptomyces griseolus）中分离得到的抗生素。该药物通过抑制细菌蛋白质和DNA的合成发挥作用。
据报道，在粘毛链霉菌（Streptomyces hygrospinosus）和链霉菌属中也发现了茴香霉素。
一种从多种链霉菌属细菌中分离得到的抗生素。它通过抑制肽基转移酶或80S核糖体系统来干扰蛋白质和DNA的合成。

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在临床化合物筛选中，茴香霉素被鉴定为一种能够杀死高表达外排泵ABCB1的乳腺癌细胞（MDA16细胞，源自三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468）的药物。我们发现MDA16细胞的死亡机制不依赖于caspase，而MDA-MB-468细胞的死亡机制为细胞凋亡。细胞死亡与蛋白质合成或JNK激活之间均无相关性，而此前有研究表明蛋白质合成或JNK激活与茴香霉素诱导的细胞死亡有关。此外，不抑制蛋白质合成或激活JNK的茴香霉素类似物仍然保留了诱导细胞死亡的能力。这些数据表明，核糖体-ANS复合物在JNK未激活的情况下是一种死亡信号，或者ANS通过与尚未鉴定的靶点结合来杀死细胞。[2]

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作用机制：茴香霉素发挥双重作用：1）它与60S核糖体亚基不可逆地结合，抑制真核延伸因子2 (eEF2) 的活性并阻断蛋白质合成；2）它通过诱导核糖体毒性应激激活JNK/p38 MAPK通路，导致肿瘤细胞凋亡[1, 3]
- 研究应用：它被广泛用作研究蛋白质合成调控和MAPK通路激活的工具化合物。临床上，茴香霉素已评估其抗肿瘤和神经保护潜力，但尚未获准用于临床[2, 4]
- 耐药性说明：在长期接受茴香霉素治疗的A549细胞中，低水平的茴香霉素耐药性与eEF2表达增加（约1.8倍）和ABCB1介导的药物外排增强有关[4]

C14H19NO4

265.3

265.131

C, 63.38; H, 7.22; N, 5.28; O, 24.12

22862-76-6

253602

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

398.7±42.0 °C at 760 mmHg

140-141ºC

194.9±27.9 °C

0.0±1.0 mmHg at 25°C

1.558

0.42

67.79

2

5

5

19

302

3

O(C(C([H])([H])[H])=O)[C@]1([H])[C@]([H])(C([H])([H])N([H])[C@]1([H])C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])OC([H])([H])[H])O[H]

YKJYKKNCCRKFSL-RDBSUJKOSA-N

InChI=1S/C14H19NO4/c1-9(16)19-14-12(15-8-13(14)17)7-10-3-5-11(18-2)6-4-10/h3-6,12-15,17H,7-8H2,1-2H3/t12-,13+,14+/m1/s1

[(2R,3S,4S)-4-hydroxy-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]pyrrolidin-3-yl] acetate

Wuningmeisu C; NSC 76712; AI3 50846; anisomycin; 22862-76-6; Flagecidin; (-)-Anisomycin; TCMDC-125504; (2R,3S,4S)-4-hydroxy-2-(4-methoxybenzyl)pyrrolidin-3-yl acetate; Upjohn 204t3; (2R,3S,4S)-2-(p-Methoxybenzyl)-3,4-pyrrolidinediol 3-acetate; NSC-76712; AI-350846; NSC76712; AI350846; Flagecidin

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 2% DMSO+corn oil: 5mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。