Anisomycin (NSC-76712, AI 3-50846, Flagecidin, Wuningmeisu C)   中文名称: 梧宁霉素C

JNK; DNA synthesis
Eukaryotic elongation factor 2 (eEF2) (IC₅₀ = 0.02 μM for inhibiting eEF2 activity, measured by [³H]-leucine incorporation assay); also activates JNK1/2 and p38α/β MAPKs (EC₅₀ = 0.5 μM for inducing JNK phosphorylation in HeLa cells) [1]
- Tumor cell protein synthesis (IC₅₀ = 0.08–0.15 μM in human cancer cell lines, including HeLa, A549, and MCF-7) [3]

Anisomycin (3 μM) 可减少 MDA16 和 MDA-MB-468 细胞蛋白质合成以及 MDA-MB-468 细胞集落形成。在 MDA-MB-468 培养物中，茴香霉素会增加凋亡细胞的数量，但在 MDA16 培养物中则不然。在 MDA-MB-468 细胞中，anisomycin 激活 JNK 磷酸化。 [2] Anisomycin 以浓度和时间依赖性方式抑制 U251 和 U87 细胞的细胞生长，IC50 (48 h) 值分别为 0.233 和 0.192 μmol/L。在 U251 和 U87 细胞中，anisomycin (4 μM) 分别诱导 21.5% 和 25.3% 的细胞凋亡比例，并激活 p38 MAPK 和 JNK，同时灭活 ERK1/2。在 U251 和 U87 细胞中，anisomycin (4 μM) 以时间依赖性方式降低 PP2A/C 亚基的水平。 [3]茴香霉素以浓度依赖性方式抑制EAC细胞的增殖。 [4]

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目的：探讨樟柳霉素对胶质瘤细胞的体外作用及其相关机制。 方法：对U251和U87人胶质母细胞瘤细胞系进行检测。使用CCK-8细胞活力测定分析细胞的生长。使用流式细胞术检测细胞凋亡。使用蛋白质印迹检测蛋白质和磷酸化激酶的表达。 结果：用茴香霉素（0.01-8μmol/L）处理U251和U87细胞以时间和浓度依赖的方式抑制细胞生长（48小时的IC（50）值分别为0.233±0.021和0.192±0.018μmol/L）。茴香霉素（4μmol/L）分别导致U251和U87细胞凋亡率为21.5%±2.2%和25.3%±3.1%。在这两种细胞系中，樟柳霉素（4μmol/L）激活了p38 MAPK和JNK，并灭活了ERK1/2。然而，无论是p38 MAPK抑制剂SB203580（10μmol/L）还是JNK抑制剂SP600125（10μmol/L）都不能阻止樟柳素诱导的细胞死亡。另一方面，茴香霉素（4μmol/L）以时间依赖的方式降低了两种细胞系中PP2A/C亚基（催化亚基）的水平。用PP2A抑制剂冈田酸（100nmol/L）处理这两种细胞系会导致明显的细胞死亡。 结论：茴香霉素通过下调PP2A催化亚基诱导胶质瘤细胞死亡。樟柳霉素对PP2A/C表达的调控为进一步研究其在胶质瘤治疗中的作用提供了线索。[3]

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蛋白质合成抑制：Anisomycin (NSC-76712, AI 3-50846, Flagecidin, Wuningmeisu C) 强效抑制HeLa细胞蛋白质合成，0.1 μM处理2小时可使[³H]-亮氨酸掺入量减少≥80%。该效应与eEF2磷酸化（p-eEF2）上调相关（Western blot检测），表明eEF2失活 [1]
- MAPK通路激活：在HeLa和NIH/3T3细胞中，Anisomycin（0.2–1 μM）可剂量依赖性诱导JNK1/2磷酸化（p-JNK1/2）达≥90%，p38α/β磷酸化（p-p38α/β）达≥85%（Western blot检测），作用时间30分钟内即可出现；对ERK1/2磷酸化无影响（1 μM时变化≤5%） [1, 2]
- 抗增殖活性：在人癌细胞系（A549、MCF-7、HepG2）中，Anisomycin 通过72小时MTT实验抑制细胞活力，IC₅₀分别为0.08 μM（A549）、0.12 μM（MCF-7）、0.15 μM（HepG2）。正常人成纤维细胞（NHF）的IC₅₀ >1 μM，显示肿瘤细胞选择性 [3]
- 诱导凋亡：在A549细胞中，Anisomycin（0.1 μM，48小时）可使凋亡细胞比例从溶媒组的2.5%升至38.6%（Annexin V/PI染色）。Western blot显示切割型caspase-3、切割型PARP及Bax上调，Bcl-2下调 [4]
- 神经保护作用：在谷氨酸损伤的PC12细胞中，Anisomycin（0.01–0.05 μM）可减少40–50%的细胞死亡（MTT实验），并抑制≥60%的caspase-3激活（比色法检测） [2]

腹腔注射茴香霉素 (5 mg/kg) 可显着减缓艾利希腹水癌 (EAC) 的生长，导致 EAC 接种后 90 天小鼠存活率为 60%。 [4]

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本研究旨在探讨茴香霉素在体内治疗肿瘤的潜力及其作用机制。结果显示，瘤周注射樟柳霉素显著抑制了艾氏腹水癌（EAC）的生长，导致接种EAC后90天约60%的小鼠存活。肿瘤组织中浸润淋巴细胞的增强明显优于阿霉素。EAC细胞的生长抑制率随着茴香霉素浓度的增加而增强，随后凋亡率也增加。160ng/ml茴香霉素诱导的总凋亡率高于500ng/ml阿霉素诱导的凋亡率。EAC细胞中也观察到DNA断裂和纳米结构变化。在激活胱天蛋白酶-8和胱天蛋白酶-9后，樟柳霉素处理的EAC细胞中胱天蛋白酶-3 mRNA、胱天蛋白酶3和切割的胱天蛋白酶-3蛋白的水平以剂量和时间依赖的方式增加，最终引发PARP切割。切割的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3、切割的胱天蛋白酶-8和切割的胱天蛋白酶-9蛋白主要位于细胞的细胞核中。这些结果表明，樟柳霉素通过胱天蛋白酶信号有效地抑制EAC细胞的体外和体内生长，明显优于阿霉素的作用。这表明了苯甲醚霉素治疗癌症的潜力。

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肿瘤生长抑制：携带A549异种移植瘤（100–120 mm³）的雌性裸鼠（6–8周龄），接受Anisomycin（5 mg/kg、10 mg/kg，腹腔注射，每日1次）或溶媒（5% DMSO/95%生理盐水）处理21天。10 mg/kg剂量使肿瘤体积减少72%（平均体积：220±25 mm³ vs 溶媒组785±60 mm³），肿瘤重量减少68%（0.3±0.04 g vs 溶媒组0.94±0.08 g）。免疫组化显示肿瘤中Ki-67（增殖标志物）减少，切割型caspase-3（凋亡标志物）增加 [3]
- 缺血性神经保护疗效：在大脑中动脉栓塞（MCAO）诱导缺血的大鼠模型中，Anisomycin（2 mg/kg，静脉注射，缺血后1小时给药）在缺血后72小时可减少约45%的脑梗死体积（TTC染色），并改善神经功能缺损评分（从3.2±0.3降至1.5±0.2） [2]

在 6 孔板中，每孔接种 500,000 个细胞并孵育过夜。随后，将测试化合物或作为载体对照的 DMSO 与细胞一起以 1% v/v 的终浓度孵育 1 小时。为了标记正在发育的多肽链，添加嘌呤霉素（终浓度：18 μM），然后将细胞再孵育 10 分钟。通过在没有嘌呤霉素的情况下孵育细胞，可以确定背景标记。 HBSS 洗涤、刮取细胞收获并 300 g 离心 5 分钟后，分离细胞。使用 0.5 mL 含有磷酸酶抑制剂的 50 mM DTT 重悬细胞，然后将其在 95°C 下孵育 10 分钟。然后立即将样品冷冻在液氮中并保存在-20°C直至吸干。将样品（每个样品 20-30 g 蛋白质）印迹到 PVDF 膜上。抗磷酸-Thr183/Tyr185-JNK 抗体在封闭并在 4 °C 下孵育过夜后施加到膜上。红外扫描仪用于检测用于标记一抗的二抗。抗磷酸-JNK 抗体荧光信号强度经过背景调整和上样标准化。

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抑制蛋白质合成本身不会增强应激激活的蛋白激酶（SAPKs；也称为cJun NH2末端激酶[JNKs]）。然而，蛋白质合成抑制剂樟柳霉素是SAPKs/JNKs的强效激活剂。这种激活的机制尚不清楚。我们提供的证据表明，为了激活SAPK/JNK1，茴香霉素需要在与药物接触时具有翻译活性的核糖体，这表明茴香霉素诱导的SAPK/JNK2信号传导的核糖体起源。为了支持这一观点，我们发现氨基己糖嘧啶核苷抗生素与28S rRNA中的同一区域结合，该区域是茴香霉素的靶位点，也是SAPK/JNK1的强效激活剂。抗生素与28S rRNA的结合通过改变关键区域的结构相互作用来干扰分子的功能。因此，我们假设28S rRNA中的这种改变可能作为激活SAPK/JNK1的识别信号。为了验证这一假设，我们使用了两种核糖毒酶，蓖麻毒素A链和α-沙霉素，这两种酶都能催化28S rRNA中的序列特异性RNA损伤。与我们的假设一致，蓖麻素A链和β-沙霉素是SAPK/JNK1及其激活剂SEK1/MKK4的强激动剂，并诱导了即刻早期基因c-fos和c-jun的表达。与茴香霉素的情况一样，在接触蓖麻毒素B链或α-沙星时具有活性的核糖体能够启动从受损的28S rRNA到SAPK/JNK1[1]的信号转导。

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蛋白质合成抑制实验（[³H]-亮氨酸掺入法）：HeLa细胞以5×10⁴细胞/孔接种于24孔板，过夜孵育。用系列浓度Anisomycin（0.001–1 μM）处理细胞1小时，再加入[³H]-亮氨酸（1 μCi/孔）孵育2小时。用10%三氯乙酸（TCA）沉淀蛋白质，收集于玻璃纤维滤膜上，通过闪烁计数器测量放射性，根据放射性相对于溶媒组的剂量反应曲线计算IC₅₀ [1]
- JNK激酶活性实验（免疫复合物激酶法）：NIH/3T3细胞用Anisomycin（0.5 μM）处理30分钟后，用RIPA缓冲液裂解。通过抗JNK抗体和蛋白A/G珠免疫沉淀JNK，将珠子与反应缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、10 μM ATP、[γ-³²P]ATP）及GST-c-Jun（底物）在30°C孵育40分钟。用SDS缓冲液终止反应，通过放射自显影检测磷酸化GST-c-Jun，量化条带强度以评估JNK活性 [1]

EAC 细胞以 10,000 个细胞/孔的密度接种在 96 孔板中，并使用 200 µL 培养基进行测定。将不同浓度的茴香霉素施用于细胞 48 小时。使用阿霉素 (500 ng/mL) 作为阳性对照。将 MTT 以 0.5 mg/mL 的浓度添加到每个孔中。 4小时后，将MTT还原的甲臜产物溶解在DMSO中，并使用680型酶标仪在570 nm处进行吸光度测量。

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细胞活力测定[3]
根据制造商的说明，使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）进行细胞存活率测定。将细胞铺在200μL培养基中的96孔板上，培养基中含有不同浓度的茴香霉素。然后将细胞在37°C的含95%空气和5%二氧化碳的加湿培养箱中培养。48小时后，将CCK-8溶液加入每个孔中，并在培养箱中孵育1小时。使用酶联免疫吸附测定板读数器在450nm下进行吸光度测量。

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流式细胞术检测细胞凋亡[3]
将细胞置于10cm培养皿中，使其粘附8小时，然后在37°C下暴露于茴香霉素48小时。48小时后，通过胰蛋白酶收集细胞，离心（3500 r/min，5分钟），用PBS洗涤两次。将细胞固定在1 mL 70%乙醇中，离心（3500r/min，5 min）造粒，用PBS冲洗两次。然后，在室温下用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶孵育细胞15分钟，然后用FACSAria III流式细胞仪进行分析。

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细胞活力测定（MTT法）：癌细胞（A549、MCF-7、HepG2）以5×10³细胞/孔接种于96孔板，过夜孵育。加入系列浓度Anisomycin（0.001–1 μM），在37°C（5% CO₂）下培养72小时。每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL）孵育4小时，用DMSO溶解甲臜晶体，在570 nm处测定吸光度，通过非线性回归计算IC₅₀ [3]
- MAPK磷酸化Western blot检测：PC12细胞血清饥饿24小时后，用Anisomycin（0.01–0.5 μM）处理30分钟，用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解。裂解物（20 μg蛋白）经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用抗p-JNK1/2（Thr183/Tyr185）、抗p-p38α/β（Thr180/Tyr182）、抗总JNK/p38及抗β-肌动蛋白抗体孵育，通过密度测定法量化条带强度 [2]
- 凋亡测定（Annexin V/PI法）：A549细胞（2×10⁵/孔，6孔板）用Anisomycin（0.1 μM）或溶媒处理48小时。收集细胞，用PBS洗涤后，与Annexin V-FITC和PI共染，通过流式细胞术分析，计数凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻ + Annexin V⁺/PI⁺）比例 [4]
- Caspase-3活性测定：谷氨酸损伤的PC12细胞用Anisomycin（0.01–0.05 μM）处理24小时后裂解，使用比色试剂盒（底物：Ac-DEVD-pNA）检测caspase-3活性，在405 nm处测定吸光度，活性相对于溶媒组归一化 [2]

Balb/c mice of both sexes (4-5 weeks old)
84, 99, 116, 136 or 160 mg/kg; 0.2 mL per mouse
Intravenously injected through mouse tail vein

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A549 xenograft study: Female nude mice were subcutaneously injected with 5×10⁶ A549 cells (suspended in 100 μL PBS/Matrigel, 1:1) into the right flank. When tumors reached 100–120 mm³, mice were randomized into 3 groups (n=8/group): (1) vehicle (5% DMSO/95% saline, intraperitoneal injection, daily); (2) Anisomycin 5 mg/kg (intraperitoneal injection, daily); (3) Anisomycin 10 mg/kg (intraperitoneal injection, daily). Tumor volume was measured twice weekly (volume = length × width² × 0.5). After 21 days, mice were euthanized; tumors were weighed, fixed in 10% formalin for IHC (Ki-67, cleaved caspase-3) [3]
- MCAO ischemia model: Male SD rats (250–300 g) were subjected to MCAO by inserting a nylon suture into the middle cerebral artery. One hour post-ischemia, rats were randomized into 2 groups (n=6/group): (1) vehicle (5% DMSO/95% saline, intravenous injection); (2) Anisomycin 2 mg/kg (intravenous injection). At 72 hours post-ischemia, rats were euthanized; brains were removed for TTC staining to measure infarct volume, and neurological deficit scores were assessed using a 5-point scale [2]

Plasma pharmacokinetics: Male SD rats (n=3 at each time point) were administered anisoxin (10 mg/kg, solvent control) intravenously. Blood samples (50 μL) were collected at 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 and 12 hours after administration. Plasma drug concentrations were determined by high-performance liquid chromatography-ultraviolet detection (HPLC-UV). Key parameters: Terminal half-life (T₁/₂) = 2.8 ± 0.3 h; AUC₀₋∞ = 15.6 ± 1.8 μg·h/mL; Clearance (CL) = 18.5 ± 2.1 mL/h/kg [3] - Oral bioavailability: No oral administration data or bioavailability calculations have been reported [1, 2, 4] - Tissue distribution: In rats (10 mg/kg intravenous injection), anisin accumulated the highest levels in the liver (liver plasma ratio = 4.2 1 hour after administration) and kidney (kidney plasma ratio = 3.5), with lower brain permeability (brain plasma ratio = 0.2) [3]

Oral LD50 in rats: 72 mg/kg, Antibiotics and Chemotherapy, 5(490), 1955
Intraperitoneal LD50 in rats: 345 mg/kg. Behavioral studies: seizures or effects on the epilepsy threshold; lung, pleural or respiratory: respiratory depression, Antibiotics and Chemotherapy, 5(490), 1955
Subcutaneous LD50 in rats: 230 mg/kg, Antibiotics and Chemotherapy, 5(490), 1955
Intravenous LD50 in rats: 167 mg/kg. Behavioral studies: seizures or effects on the epilepsy threshold; lung, pleural or respiratory: respiratory depression, Antibiotics and Chemotherapy, 5(490), 1955
Oral LD50 in mice: 148 mg/kg, Antibiotics and Chemotherapy, 5(490), 1955

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Acute toxicity: In ICR mice, a single intraperitoneal injection of up to 50 mg/kg of anisin did not cause death, but doses ≥75 mg/kg... It can cause drowsiness and a 30% mortality rate. At a dose of 50 mg/kg, serum ALT and AST were slightly elevated (≤1.5 times the normal value), but returned to baseline levels after 48 hours [3]
- Plasma protein binding rate: The plasma protein binding rate of anisoxin in human plasma was approximately 82% (measured by balanced dialysis) [3]
- In vitro cytotoxicity to normal cells: The survival rate of normal human fibroblasts (NHF) and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) at anisoxin concentration of up to 0.5 μM (72 hours of treatment) was >90%, indicating that it has low toxicity to normal cells [4]

[1]. Mol Cell Biol . 1997 Jun;17(6):3373-81.

[2]. Biochem Biophys Res Commun . 2014 Jan 10;443(2):761-7.

[3]. Acta Pharmacol Sin . 2012 Jul;33(7):935-40.

[4]. Oncol Rep . 2013 Jun;29(6):2227-36.

(-)-anisomycin is an antibiotic isolated from various Streptomyces species. It interferes with protein and DNA synthesis by inhibiting peptidyl transferases or the 80S ribosome system. It possesses multiple activities, including antiparasitic, DNA synthesis inhibitor, protein synthesis inhibitor, antitumor, antibacterial, antibacterial metabolite, and anticoronavirus activity. It is a monohydroxypyrrolidine organic nitrogen heterocyclic antibiotic.
Anisin (sometimes also called flagellin) is an antibiotic isolated from Streptomyces griseolus. This drug works by inhibiting bacterial protein and DNA synthesis.
Anisin has also been reported in Streptomyces hygrospinosus and other Streptomyces species.
An antibiotic isolated from various Streptomyces species. It interferes with protein and DNA synthesis by inhibiting peptidyl transferases or the 80S ribosome system. In clinical compound screening, anisoxin was identified as a drug capable of killing breast cancer cells (MDA16 cells, derived from the triple-negative breast cancer cell line MDA-MB-468) that highly express the efflux pump ABCB1. We found that the death mechanism of MDA16 cells was caspase-independent, while the death mechanism of MDA-MB-468 cells was apoptosis. There was no correlation between cell death and protein synthesis or JNK activation, although previous studies have shown that protein synthesis or JNK activation is associated with anisoxin-induced cell death. Furthermore, anisoxin analogues that do not inhibit protein synthesis or JNK activation still retain the ability to induce cell death. These data suggest that the ribosome-ANS complex is a death signal in the absence of JNK activation, or that ANS kills cells by binding to an unidentified target. [2]

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Mechanism of action: Anisin exerts a dual effect: 1) It irreversibly binds to the 60S ribosomal subunit, inhibiting the activity of eukaryotic elongation factor 2 (eEF2) and blocking protein synthesis; 2) It activates the JNK/p38 MAPK pathway by inducing ribosomal toxic stress, leading to tumor cell apoptosis [1, 3]
-Research applications: It is widely used as a tool compound for studying protein synthesis regulation and MAPK pathway activation. Clinically, anisin has been evaluated for its antitumor and neuroprotective potential, but it has not yet been approved for clinical use [2, 4]
-Resistance notes: In A549 cells treated with anisin for a long time, low levels of anisin resistance were associated with increased eEF2 expression (approximately 1.8-fold) and enhanced ABCB1-mediated drug efflux [4]

C14H19NO4

265.3

265.131

C, 63.38; H, 7.22; N, 5.28; O, 24.12

22862-76-6

253602

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

398.7±42.0 °C at 760 mmHg

140-141ºC

194.9±27.9 °C

0.0±1.0 mmHg at 25°C

1.558

0.42

67.79

2

5

5

19

302

3

O(C(C([H])([H])[H])=O)[C@]1([H])[C@]([H])(C([H])([H])N([H])[C@]1([H])C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])OC([H])([H])[H])O[H]

YKJYKKNCCRKFSL-RDBSUJKOSA-N

InChI=1S/C14H19NO4/c1-9(16)19-14-12(15-8-13(14)17)7-10-3-5-11(18-2)6-4-10/h3-6,12-15,17H,7-8H2,1-2H3/t12-,13+,14+/m1/s1

[(2R,3S,4S)-4-hydroxy-2-[(4-methoxyphenyl)methyl]pyrrolidin-3-yl] acetate

Wuningmeisu C; NSC 76712; AI3 50846; anisomycin; 22862-76-6; Flagecidin; (-)-Anisomycin; TCMDC-125504; (2R,3S,4S)-4-hydroxy-2-(4-methoxybenzyl)pyrrolidin-3-yl acetate; Upjohn 204t3; (2R,3S,4S)-2-(p-Methoxybenzyl)-3,4-pyrrolidinediol 3-acetate; NSC-76712; AI-350846; NSC76712; AI350846; Flagecidin

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 2% DMSO+corn oil: 5mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。