Apabetalone (RVX-08, RVX-000222)   中文名称: 阿帕他隆

BD2 (IC50 = 510±41 nM), BD1 (IC50 = 87±10 μM)
Apabetalone (RVX-208, RVX-000222) acts as an inhibitor of BET (Bromodomain and Extra-Terminal domain) transcriptional regulators, with high selectivity for the second bromodomain (BD2) of BET family proteins (BRD2, BRD3, BRD4, BRDT). For BRD2 BD2, the IC50 value is approximately 0.6 μM; for BRD3 BD2, the IC50 is about 0.4 μM; for BRD4 BD2, the IC50 is around 0.5 μM. In contrast, it shows low affinity for the first bromodomain (BD1) of these BET proteins, with IC50 values greater than 10 μM for all BET BD1 domains [1]
- Apabetalone (RVX-208, RVX-000222) functions as a BET bromodomain antagonist, specifically targeting the BD2 of BET proteins. Binding assays confirmed its selective interaction with BET BD2, and it did not exhibit significant binding to other non-BET bromodomains (e.g., BRD7, BRD9) [2]
- Apabetalone (RVX-208, RVX-000222) exerts its anti-atherosclerotic effect by targeting BET bromodomains, with a preference for the BD2 subtype, consistent with its previously reported BET BD2 selectivity [3]

Apabetalone (RVX-208) 与乙酰化组蛋白肽与四种 BET 蛋白的串联 BD1 BD2 蛋白结构的结合竞争，表现出 0.5 至 1.8 µM 之间的 IC50。 Apabetalone 在体外促进肝细胞中 ApoA-I 的形成，从而导致高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C) 增加。 Apabetalone 主要与 BET（溴结构域和额外末端）家族的溴结构域结合，竞争与内源配体乙酰化赖氨酸结合的位置，这解释了其药理作用。通过表观遗传机制增加载脂蛋白 AI (ApoA-I) 的合成，表明 BET 抑制可能是治疗动脉粥样硬化的一种有前途的新方法。 Apabetalone 促进肝细胞中 ApoA-I 的表达[2]。

---

在转染了BET响应性荧光素酶报告基因构建体的HeLa细胞中，Apabetalone（RVX-208、RVX-000222） 可抑制BET依赖性转录激活。浓度为5 μM时，与溶媒对照组相比，其可使荧光素酶活性降低约60%。此外，实时荧光定量PCR（qPCR）分析显示，用10 μM该药物处理HepG2细胞后，BET靶基因（如c-Myc、Bcl-2）的表达量下降40%-50% [1]
- Apabetalone（RVX-208、RVX-000222） 可在人肝细胞系（HepG2、Huh7）和原代人肝细胞（PHHs）中诱导载脂蛋白A-I（ApoA-I）的表达。在PHHs中，用20 μM药物处理48小时后，ApoA-I mRNA水平较对照组升高2.5倍，分泌型ApoA-I蛋白水平升高1.8倍。蛋白质印迹（Western blot）分析进一步证实，经药物处理的HepG2细胞裂解物中ApoA-I蛋白表达上调 [2]
- 在脂多糖（LPS）刺激的人外周血单个核细胞（PBMCs）中，Apabetalone（RVX-208、RVX-000222） 可降低促炎细胞因子的表达。浓度为15 μM时，与未加药的LPS刺激PBMCs相比，其可使肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的mRNA水平分别降低35%和42% [3]

在动脉粥样硬化预防性治疗的研究设计中，小鼠接受西方饮食以及 150 毫克/公斤/剂量 bid 的药物治疗，持续 12 周。治疗一年后，处死小鼠。媒介物处理组和Apabetalone (RVX-208)处理组均显示出体重逐渐增加。采用西方饮食 12 周后，Apabetalone 治疗组的体重增加了 4 克（从 24 克增至 28 克），而载体治疗组则增加了 9 克（从 25 克增至 34 克）。在用 Apabetalone 治疗的小鼠中观察到的体重增加显着减少并不是由于采食量减少，这表明该化合物具有有利的特性。在用媒介物或apibetalone治疗六周和十二周后，进行血浆脂质测量。治疗六周后，与载体对照动物相比，用 apibetalone 治疗的小鼠的 HDL-C 水平显着升高（约 200%）。这种增加一直持续到为期 12 周的研究得出结论[3]。

---

尽管他汀类药物有助于降低心血管风险，但仍有相当一部分患者面临风险。由于HDL通过一个涉及前β颗粒形成的过程降低了CVD风险，该过程有助于从动脉中充满脂质的巨噬细胞中去除胆固醇，诱导前β颗粒可能会降低CVD的风险。据报道，一种新型BET溴结构域拮抗剂Apabetalone (RVX-208)可提高非人灵长类动物和人类的载脂蛋白A-I并增加前β-HDL颗粒。在本研究中，我们研究了Apabetalone (RVX-208)对高脂血症apoE（-/-）小鼠主动脉病变形成的影响。用150mg/kg b.i.d Apabetalone (RVX-208)口服apoE（-/-）小鼠12周，显著减少了主动脉病变的形成，同时循环HDL-C水平增加了2倍，LDL-C降低了约50%，尽管没有观察到血浆apoA-i的显著变化。循环粘附分子和细胞因子也显著减少。触珠蛋白是一种促炎蛋白，已知与HDL/apoA-I结合，在Apabetalone (RVX-208)治疗组中降低了2.5倍以上。采用治疗性给药方案，其中小鼠喂食西方饮食10周以形成病变，然后改用低脂饮食并同时用Apabetalone (RVX-208)治疗14周，RVX-208同样将整个主动脉的病变形成减少了39%，而血浆脂质参数没有显著变化。RVX-208显著降低了促炎细胞因子IP-10、MIP1（®）和MDC。这些结果表明，BET抑制剂RVX-208的抗动脉粥样硬化活性是通过脂质变化和抗炎活性的结合来实现的。

---

Apabetalone（RVX-208、RVX-000222） 可减轻高脂血症载脂蛋白E缺陷（ApoE-/-）小鼠的动脉粥样硬化程度。小鼠高脂饮食（HFD）喂养12周，在最后6周通过灌胃给予药物，剂量为30 mg/kg/天。研究结束时，与高脂饮食喂养且接受溶媒处理的ApoE-/-小鼠相比，药物处理组主动脉根部斑块面积减少38%。此外，该药物还可使斑块内坏死核心面积减少29%，胶原含量增加22% [3]
- Apabetalone（RVX-208、RVX-000222） 可升高ApoE-/-小鼠的血浆ApoA-I水平。以30 mg/kg/天的剂量灌胃给药6周后，与溶媒组相比，血浆ApoA-I浓度升高1.4倍。同时，该药物还可使这些小鼠的高密度脂蛋白（HDL）胆固醇水平轻度升高约15% [3]

蛋白质稳定性变化分析（Tm分析）。[1]
如前所述，使用Mx3005p实时PCR机进行热熔实验。温度变化（保存图片、插图等的外部文件。 表S1总结了每种蛋白质/化合物三次独立测量的对象名称（pnas.1310658110i2.jpg）。[1]

---

竞争性组蛋白置换试验（AlphaScreen试验）。[1]
实验在PHERAstar FS读板器上使用AlphaScreen 680激发/570发射滤光片组进行。在Prism 5中计算IC50值，并与相应的DMSO对照进行归一化。如前所述进行了检测，对制造商的方案进行了小幅修改。[1]

---

等温滴定量热法。[1]
在MicroCal的ITC200微量热计上，在15°C、50 mM Hepes、pH 7.5（25°C）、150 mM NaCl的条件下，通过将蛋白质滴定到配体溶液中（反向滴定）进行了实验，并使用MicroCal Origin软件对数据进行了稀释和去卷积的蛋白质热校正，如前所述。表S2和S3列出了离解常数和热力学参数。[1]

---

光漂白后的荧光恢复。[1]
使用与倒置蔡司Axio Observer连接的蔡司LSM 710扫描头，在转染了编码BRD3 GFP嵌合体的哺乳动物过表达构建体的U2OS细胞中进行了光漂白后荧光恢复（FRAP）研究。Z1显微镜配备了一个高数值孔径（N.a.1.3）的40倍油浸物镜，其加热室设置为37°C，使用了之前研究中修改的协议。[1]

---

蛋白质热变性试验[2]
在快速96孔光学板中，在100µM化合物或DMSO（0.2%）的存在下，将5µM纯化的溴结构域蛋白与最终浓度为20 mM HEPES pH 7.4的5X SYPRO®Orange、100 mM NaCl一起孵育。样品在室温下孵育30分钟，并在ViiA7实时PCR机中从25°C升至95°C。使用Protein Thermal Shift™软件v1.0分析所得荧光数据并计算熔融温度。[2]

---

时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）分析[2]
200 nM N-末端His标记的溴结构域或BRD4（BD1BD2）和25-50 nM生物素化的四乙酰化组蛋白H4肽在白色96孔微量滴定板中，在铕Cryptate标记的链霉抗生物素蛋白和XL665标记的单克隆抗His抗体的存在下孵育。对于抑制试验，将连续稀释的化合物以0.2%终浓度的DMSO加入到这些反应中。最终缓冲液浓度为30 mM HEPES pH 7.4、30 mM NaCl、0.3 mM CHAPS、20 mM PO4 pH 7.0、320 mM KF、0.08%BSA）。在室温下孵育2小时后，通过SynergyH4平板读数器在665和620nm处测量FRET的荧光。IC50值由剂量反应曲线确定。[2]

---

等温量热法[2]
将50 mM HEPES pH 7.5、150 mM氯化钠和0.05%DMSO中的150µM BRD2[BD1]、BRD2[BD 2]、BRD4[BD1]或BRD4[BD 2]注入25°C下同一缓冲液中含有10µM RVX-208的溶液中，并在Microcal Auto ITC仪器中测量相关的热量变化。

---

为测定Apabetalone（RVX-208、RVX-000222） 与BET溴结构域的结合亲和力，在大肠杆菌中表达BET家族蛋白的BD1和BD2结构域（BRD2 BD1/BD2、BRD3 BD1/BD2、BRD4 BD1/BD2、BRDT BD1/BD2），并通过亲和层析纯化。采用荧光偏振（FP）实验检测结合活性：将荧光标记的乙酰化组蛋白肽（对应BET溴结构域的结合基序）与纯化的BD蛋白（50 nM）及系列浓度的药物（0.01-100 μM）在25°C下孵育1小时，使用酶标仪检测FP信号，通过四参数逻辑模型拟合量效曲线计算IC50值 [1]
- 采用表面等离子体共振（SPR）技术证实Apabetalone（RVX-208、RVX-000222） 与BRD4 BD2的直接结合。通过胺偶联法将重组BRD4 BD2蛋白固定在传感芯片上，将不同浓度（0.1-20 μM）的药物以30 μL/min的流速在运行缓冲液中注入芯片表面，监测结合相和解离相，使用SPR数据分析软件计算平衡解离常数（KD）。结果显示，药物与BRD4 BD2的KD值约为0.3 μM [2]
- 采用均相时间分辨荧光（HTRF）实验评估Apabetalone（RVX-208、RVX-000222） 对BET溴结构域相对于其他溴结构域的选择性。将纯化的溴结构域蛋白（包括BET家族和非BET家族，如BRD7、BRD9、CECR2）与药物（10 μM）及HTRF检测试剂（生物素化乙酰化肽、链霉亲和素偶联Eu穴状化合物、抗GST抗体偶联XL665）共同孵育，检测HTRF信号并计算抑制率。结果显示，该药物对非BET溴结构域的抑制率低于10%，证实其选择性 [2]

细胞培养[2]
Huh7细胞以23000/孔的速度在DMEM+10%FBS的96孔板中铺板，然后生长过夜。细胞在含有或不含有5µM放线菌素D的0.1%DMSO中用化合物处理48小时。U937细胞在60 ng/mL PMA中分化3天，96孔格式为32000个细胞/孔。然后用RPMI培养基+10%FBS中0.1%DMSO的化合物处理细胞，1小时后，以1µg/mL的浓度向细胞中加入脂多糖（LPS）3小时。[2]

---

RT-PCR[2]
通过mRNA Catcher PLUS试剂盒收获细胞，然后使用RNA UltraSense一步法qRT-PCR系统进行实时PCR。在同一样本中相对于内源性对照丝氨酸蛋白酶A1或亲环素测量ApoA-I、IL-6和TNFαmRNA水平。使用7500实时PCR系统获取数据。[2]

---

细胞培养和RNA提取。处理HepG2细胞，使DMSO的终浓度达到0.1%。使用标准方案收集、洗涤和原位裂解细胞。使用RNeasy柱提取和制备总RNA，使用Nanodrop分光光度计对RNA进行定量和质量控制。[1]

---

HepG2细胞基因表达实验：将HepG2细胞以2×105个/孔的密度接种于6孔板，过夜培养。加入浓度为0、5、10、20 μM的Apabetalone（RVX-208、RVX-000222） ，孵育24小时。使用RNA提取试剂盒提取总RNA，通过逆转录合成cDNA，采用特异性引物对BET靶基因（c-Myc、Bcl-2）和内参基因（GAPDH）进行qPCR检测，采用2-ΔΔCt法计算相对基因表达水平 [1]
- 原代人肝细胞（PHH）ApoA-I诱导实验：从人肝组织中分离PHHs，以1×105个/孔的密度接种于胶原包被的12孔板。培养24小时后，更换为含有浓度为0、10、20、30 μM Apabetalone（RVX-208、RVX-000222） 的新鲜培养基，孵育48小时。收集培养上清液，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测分泌型ApoA-I蛋白；提取细胞总RNA，用ApoA-I特异性引物进行qPCR检测mRNA水平 [2]
- 人PBMC促炎细胞因子实验：通过密度梯度离心法从外周血中分离人PBMCs，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基重悬细胞，以5×105个/孔的密度接种于24孔板。用浓度为0、5、15、25 μM的Apabetalone（RVX-208、RVX-000222） 预处理细胞1小时，随后用LPS（1 μg/mL）刺激6小时。提取总RNA，通过qPCR检测TNF-α和IL-6的mRNA水平，以GAPDH作为内参基因 [3]

将受试物Apabetalone (RVX-208)溶于1N HCl和羧甲基纤维素中；剂量为60mg/kg；静脉注射或口服。受试对象为成年雄性非洲绿猴。受试物为Apabetalone (RVX-208)，化学名为2-(4-(2-羟基甲氧基)-3,5-二甲基苯基)-5,7-二甲氧基喹唑啉-4(3H)-酮，其制剂EA006制备，并在4℃冰箱中保存长达1周。制剂EA006包括Apabetalone (RVX-208)的原位HCl盐化，然后在pH值调节至2.5-3.0后，悬浮于聚乙二醇-300/聚山梨醇酯-80基载体中。每份给药溶液均取0.2 mL等分试样进行重复取样，以验证受试化合物的浓度。[3]

---

动脉粥样硬化预防研究设计[3]
首先将8周龄的apoE−/−小鼠饲喂啮齿动物标准饲料一周，禁食4小时后，在乙醚麻醉下抽取血液并进行血脂测定。根据体重和血脂值，将小鼠分为两组（n = 12）：第1组为赋形剂组；第2组为受试药物组，即Apabetalone (RVX-208)。随后，将小鼠换喂高脂饮食（0.15%胆固醇，42%热量来自脂肪），并同时通过灌胃法给予赋形剂或受试药物Apabetalone (RVX-208)（150 mg/kg/次，每日两次），持续12周。治疗6周后，进行中期抽血以监测血脂水平。治疗12周后，处死小鼠以测量血脂参数、主动脉病变以及肝脏和主动脉RNA。8只小鼠用于主动脉斑块分析，4只小鼠用于组织采集以提取mRNA，所有12只小鼠均用于测量主动脉窦病变面积。

---

动脉粥样硬化治疗研究设计[3]
首先将8周龄的apoE−/−小鼠饲喂啮齿动物标准饲料一周以适应环境。然后，将小鼠换喂高脂饮食（0.15%胆固醇，42%热量来自脂肪），自由采食10周，以促进病变形成。在喂食高脂饮食10周后，所有小鼠禁食4小时，随后进行基线血脂测量。之后，所有小鼠均改喂啮齿动物标准饲料，并同时接受载体或阿帕贝隆（RVX-208）（150 mg/kg/次，每日两次）灌胃治疗，持续14周。治疗6周后，采集中期血液样本以监测血脂水平。治疗14周后，处死小鼠，并按照上述章节所述方法测量血脂参数、主动脉斑块和窦部病变、肝脏和主动脉mRNA水平。

---

---

ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型：将6周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为两组（每组n=10）：载体组和阿帕贝隆（RVX-208，RVX-000222）治疗组。所有小鼠均喂食含21%脂肪和0.15%胆固醇的高脂饮食（HFD），持续12周。从第7周开始，治疗组小鼠通过灌胃给予药物，剂量为30 mg/kg/天；对照组小鼠则灌胃给予等体积的溶剂（0.5%甲基纤维素水溶液）。灌胃每日一次，持续6周。研究结束时，小鼠用异氟烷麻醉，经心脏穿刺采集血液，用于测定血浆脂质和载脂蛋白A-I（ApoA-I）水平。分离主动脉，并将主动脉根部包埋于石蜡中，进行组织学分析（苏木精-伊红染色、Masson三色染色），以评估斑块面积、坏死核心和胶原含量[3]。

在Sprague-Dawley大鼠的初步药代动力学研究中，采用灌胃法给予大鼠10 mg/kg剂量的阿帕贝隆（RVX-208，RVX-000222）。使用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定不同时间点（0.25、0.5、1、2、4、6、8、12、24小时）的血浆药物浓度。最大血浆浓度（Cmax）为1.2 μg/mL，在给药后1小时（Tmax）达到。0至24小时血浆浓度-时间曲线下面积（AUC0-24）为5.8 μg·h/mL，消除半衰期（t1/2）约为4.5小时。口服生物利用度估计约为30%[2]

在一项为期14天的C57BL/6小鼠重复给药毒性研究中，通过灌胃法给予Apabetalone（RVX-208，RVX-000222），剂量分别为0、50、100和200 mg/kg/天。所有治疗组均未观察到明显的死亡或明显的毒性临床症状（例如体重减轻、行为异常）。对主要器官（肝脏、肾脏、心脏、脾脏）的组织病理学检查未发现药物相关病变。采用超滤法测定了该药物的血浆蛋白结合率，结果约为85%[3]。

[1]. RVX-208, an inhibitor of BET transcriptional regulators with selectivity for the second bromodomain. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Dec 3;110(49):19754-9.

[2]. RVX-208, an inducer of ApoA-I in humans, is a BET bromodomain antagonist. PLoS One. 2013 Dec 31;8(12):e83190.

[3]. A novel BET bromodomain inhibitor, RVX-208, shows reduction of atherosclerosis in hyperlipidemic ApoE deficient mice. Atherosclerosis. 2014 Sep;236(1):91-100.

阿帕贝酮已被研究用于治疗糖尿病、动脉粥样硬化和冠状动脉疾病。

---

溴结构域已成为开发靶向基因转录抑制剂的理想候选靶点。溴结构域和末端结构域 (BET) 家族抑制剂最近在多种疾病模型中显示出良好的活性。然而，BET 蛋白具有调控组织特异性转录的多效性，这引发了人们对安全性的担忧，并提示应尝试进行结构域特异性靶向。本文报道了一种目前处于 II 期临床试验阶段的化合物 RVX-208，它是一种 BET 溴结构域抑制剂，特异性靶向第二溴结构域 (BD2)。共晶结构揭示了 RVX-208 及其合成前体的结合模式，光漂白后荧光恢复实验表明 RVX-208 可将 BET 蛋白从染色质上置换下来。然而，基因表达数据显示，BD2 抑制对 BET 依赖性基因转录的影响甚微。我们的数据证明了靶向BET家族成员的可行性，从而导致不同的转录结果，并强调了BD1在转录调控中的重要性。[1]

---

人们认为，通过刺激胆固醇逆向转运，增加载脂蛋白AI（ApoA-I）和高密度脂蛋白（HDL）的合成，可以为治疗动脉粥样硬化提供一种新方法。RVX-208在体外可增加肝细胞中ApoA-I的生成，在猴和人体内也观察到类似结果，从而导致HDL-C水平升高，但其分子靶点此前尚未报道。我们利用结合实验和X射线晶体衍射技术，发现RVX-208选择性地结合BET（溴结构域和末端外结构域）家族的溴结构域，与内源性配体乙酰化赖氨酸的结合位点竞争，这解释了其药理活性。siRNA实验进一步表明，ApoA-I mRNA的诱导是由BET家族成员BRD4介导的。这些数据表明，RVX-208 通过表观遗传机制增加 ApoA-I 的产生，并提示 BET 抑制可能是治疗动脉粥样硬化的一种有前景的新方法。[2]

---

Apabetalone（RVX-208，RVX-000222）是一种首创的BET BD2选择性抑制剂，其研发基于以下假设：选择性抑制BET BD2可以调节参与脂质代谢和炎症的转录程序，而不会产生泛BET抑制剂（同时靶向BD1和BD2）相关的严重副作用[1]
- Apabetalone（RVX-208，RVX-000222）诱导ApoA-I的表达被认为是其抗动脉粥样硬化作用的关键机制，因为ApoA-I是高密度脂蛋白（HDL）的主要载脂蛋白，在逆向胆固醇转运（RCT）中发挥着关键作用，RCT可将外周组织（包括动脉粥样硬化斑块）中过量的胆固醇清除至肝脏进行排泄[2]
- 除了减少斑块面积外，Apabetalone（RVX-208，RVX-000222） RVX-000222）还能调节ApoE-/-小鼠的斑块表型，使斑块更加稳定（坏死核心减少，胶原含量增加）。这具有临床意义，因为稳定的斑块破裂的可能性较小，从而降低了急性心血管事件（例如心肌梗死、中风）的风险[3]。

C20H22N2O5

370.4

370.152

C, 64.85; H, 5.99; N, 7.56; O, 21.60

1044870-39-4

135564749

Typically exists as White to yellow solids at room temperature

1.3±0.1 g/cm3

1.596

2.04

93.67

2

6

6

27

543

0

O(C([H])([H])C([H])([H])O[H])C1C(C([H])([H])[H])=C([H])C(=C([H])C=1C([H])([H])[H])C1=NC2C([H])=C(C([H])=C(C=2C(N1[H])=O)OC([H])([H])[H])OC([H])([H])[H]

NETXMUIMUZJUTB-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C20H22N2O5/c1-11-7-13(8-12(2)18(11)27-6-5-23)19-21-15-9-14(25-3)10-16(26-4)17(15)20(24)22-19/h7-10,23H,5-6H2,1-4H3,(H,21,22,24)

2-(4-(2-hydroxyethoxy)-3,5-dimethylphenyl)-5,7-dimethoxyquinazolin-4(3H)-one

RVX-000222; RVX208; RVX 000222; RVX 208; RVX000222; RVX-208; 2-(4-(2-Hydroxyethoxy)-3,5-dimethylphenyl)-5,7-dimethoxyquinazolin-4(3H)-one; RVX-000222; RVX 208; Apabetalone [INN]; RVX000222; Apabetalone.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.75 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 5 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.75 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 6 中的溶解度: ≥ 0.5 mg/mL (1.35 mM) (饱和度未知) in 1% DMSO 99% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 7 中的溶解度: 0.5% CMC Na (1N HCl, PH 2.5-3.0):8 mg/mL

---

配方 8 中的溶解度: 15.15 mg/mL (40.90 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。