| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Anaphase-promoting complex (APC); - Anaphase-Promoting Complex/Cyclosome (APC/C) bound to Cdc20 (APC/Cⁿᵈᶜ²⁰)
- Apcin-A is a selective inhibitor of APC/Cⁿᵈᶜ²⁰, with an IC₅₀ of 1.2 μM for recombinant human APC/Cⁿᵈᶜ²⁰ in HTRF-based activity assays [2]
- It shows no significant inhibition of APC/C bound to Cdh1 (APC/Cᶜᵈʰ¹) even at concentrations up to 50 μM [2,3] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
- 有丝分裂进程调控：
1. 癌细胞有丝分裂阻滞：Apcin-A（5–20 μM）处理HeLa、MCF-7和A549癌细胞，诱导G₂/M期阻滞。10 μM浓度下，24小时后有丝分裂细胞（磷酸化组蛋白H3阳性）比例从对照组的~5%升至~35% [1] 2. 非转化细胞悖论性有丝分裂退出：在RPE-1（正常视网膜色素上皮）细胞中，Apcin-A（10–15 μM）导致细胞未完成染色体正确分离即提前退出有丝分裂，48小时后~40%细胞出现四倍体（4N DNA含量） [2] - 抗增殖活性： 1. 癌细胞活力降低：Apcin-A抑制HeLa细胞增殖，EC₅₀为8.5 μM（CellTiter-Glo实验，处理72小时）；对MCF-7细胞的EC₅₀为12.3 μM [1] 2. 正常细胞选择性：RPE-1细胞对Apcin-A耐受性更高，CC₅₀（导致50%细胞毒性的浓度）>30 μM，对癌细胞的选择性约为3.5倍 [2] - 协同有丝分裂阻滞： 1. 与proTAME联合：HeLa细胞经Apcin-A（5 μM）与proTAME（另一种APC/C抑制剂，5 μM）联合处理，产生协同G₂/M期阻滞，有丝分裂细胞比例达~60%（单药处理分别为~20%和~18%）。联合指数（CI）为0.45，证实协同作用 [3] 2. 底物积累：Apcin-A（10 μM）单独处理使Cyclin B1和securin（APC/Cⁿᵈᶜ²⁰底物）水平分别升高2.5倍和3倍（western blot）；与proTAME联合处理进一步将其水平提升至4倍和5倍 [3] CP5V（apcin-A-PEG5-VHL1）和VHL-CP5V-Cdc20复合物的结构是使用蛋白质数据库（PDB）结构作为模板生成的，其中VHL1和apcin-A片段的id分别为5T35和4N14。[1] Cdc20小分子抑制剂apcin（APC抑制剂）和apcin-A，它们可以竞争性地占据Cdc20的D-box结合口袋，从而抑制Cdc20底物的泛素化，以及拮抗APC/C-Cdc20相互作用的小分子抑制剂TAME和proTAME。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
- 异种移植模型肿瘤生长抑制：
1. HeLa移植瘤：裸鼠（6–8周龄雌性BALB/c nu/nu）皮下接种1×10⁶个HeLa细胞，肿瘤达~100 mm³时，用Apcin-A（100 mg/kg，腹腔注射，每日两次）或溶剂处理。21天后，Apcin-A使肿瘤体积减少~55%，肿瘤重量减少~50%；肿瘤Ki-67（增殖标志物）阳性细胞减少~40% [1] 2. 联合疗效：携带HeLa移植瘤的小鼠经Apcin-A（50 mg/kg，腹腔注射，每日两次）+ proTAME（50 mg/kg，腹腔注射，每日两次）处理，肿瘤体积减少~80%（Apcin-A单药组为~55%），且未观察到毒性较单药处理显著增加 [3] |
| 酶活实验 |
- APC/Cⁿᵈᶜ²⁰活性实验（HTRF）[2]：
1. 试剂制备：将昆虫细胞纯化的重组人APC/C与Cdc20形成复合物（APC/Cⁿᵈᶜ²⁰），溶于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM ATP、1 mM DTT）；制备生物素化Cyclin B1肽（APC/C底物）和Eu³⁺标记抗泛素抗体作为检测试剂。 2. 反应体系：20 μL反应混合物含APC/Cⁿᵈᶜ²⁰（20 nM）、生物素化Cyclin B1肽（50 nM）、Eu³⁺抗体（10 nM）及Apcin-A（0.1–50 μM，溶剂为DMSO），37°C孵育90分钟以实现底物泛素化。 3. 检测：加入链霉亲和素偶联别藻蓝蛋白（SA-APC）结合生物素化底物，用酶标仪检测HTRF信号（665 nm/620 nm发射比），通过信号抑制率与Apcin-A浓度的非线性回归计算IC₅₀。 - APC/Cᶜᵈʰ¹选择性实验[2]： 1. 反应体系：实验流程同上，但APC/C与Cdh1结合（APC/Cᶜᵈʰ¹）而非Cdc20，测试Apcin-A浓度高达50 μM。 2. 结果：未观察到对APC/Cᶜᵈʰ¹活性的显著抑制（50 μM时信号降低<10%），证实对APC/Cⁿᵈᶜ²⁰的选择性 [2] Apcin-A被用作Cdc20的靶向配体，VHL和CRBN结合部分VHL1和沙利度胺分别用于在Cdc20 PROTAC中募集VHL/VBC复合物和Celebron E3连接酶。一系列聚乙二醇（PEG）分子用于连接apcin-A和VHL1/沙利度胺。[1] CP5V是基于具有中等结合亲和力的apcin-A设计的。先导优化方法可用于开发更有效的Cdc20抑制剂。Apcin和apcin-A具有相似的结合亲和力14，它们不直接与D-box结合位点周围的极性残基相互作用。apcin-P的低结合亲和力表明apcin（和apcin-A）中与Trp209相互作用的嘧啶环的芳香基团对于实现更强的亲和力14很重要。 [1] 我们决定利用 PROTAC 平台开发一种新型嵌合分子，以规避当前 Cdc20 小分子抑制剂所面临的挑战。基于 apcin-A 可以有效结合 Cdc20 且更易于修改的特点，我们使用 apcin-A 而不是 apcin 作为弹头来靶向 Cdc20。关于为 Cdc20 泛素化随后进行蛋白水解而招募的 E3 连接酶，我们考虑了 VHL/VBC (VHL-Elongin BC) 和 CRBN (Celebron)，它们都具有可靠的结合部分（分别为 VHL 配体 1 或 VHL1 和沙利度胺），已应用于多种 PROTAC 分子的设计16,17,23。为了寻找最佳化学接头以最大限度地形成稳定的 Cdc20-PROTAC-VHL/VBC 三元复合物，我们设计并测试了一系列不同长度的基于 PEG 的接头，例如 PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG6、PEG7 和 PEG9。 |
| 细胞实验 |
- 有丝分裂细胞周期分析[1,2]：
1. 细胞准备：HeLa或RPE-1细胞以2×10⁵个/孔接种于6孔板，过夜培养。 2. 药物处理：用Apcin-A（0.1–30 μM）或溶剂处理细胞24–48小时；联合实验中，Apcin-A与proTAME（5 μM）同时加入。 3. 染色与检测：收集细胞，用70%乙醇-20°C固定2小时，0.2% Triton X-100通透，加入抗磷酸化组蛋白H3抗体（1:1000）和碘化丙啶（PI，50 μg/mL）染色；流式细胞术定量有丝分裂细胞（磷酸化组蛋白H3阳性）比例及DNA含量（细胞周期时相） [1,2] - APC/C底物western blot检测[3]： 1. 蛋白提取：Apcin-A（5–20 μM）单独或联合处理HeLa细胞24小时，用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。 2. 分析：30 μg蛋白经10% SDS-PAGE分离，转移至PVDF膜，用抗Cyclin B1、抗securin及抗GAPDH（内参）抗体孵育；ImageJ定量条带强度，相对水平以GAPDH归一化 [3] - 凋亡检测[1]： 1. Annexin V/PI染色：Apcin-A（10–20 μM）处理HeLa细胞48小时，用Annexin V-FITC和PI染色；流式细胞术计数凋亡细胞（Annexin V阳性/PI阴性或双阳性）。20 μM时，Apcin-A诱导~35% HeLa细胞凋亡（对照组为~5%） [1] |
| 动物实验 |
HeLa异种移植实验[1]：
1. 肿瘤接种：将1×10⁶个HeLa细胞悬浮于100 μL PBS + 50% Matrigel中，皮下注射到裸鼠（6-8周龄，雌性BALB/c nu/nu）右侧腹部。 2. 药物配制：将Apcin-A溶解于DMSO中（100 mg/mL储备液），并用含5% Tween 80的无菌生理盐水稀释至终浓度为10 mg/mL（100 mg/kg剂量，即10 μL/g体重）。 3. 治疗分组及方案：当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为3组（每组n=6）： - 载体组：腹腔注射10 μL/g DMSO + 生理盐水 + Tween 80（相同）。 （按药物组比例），每日两次，持续21天。 - Apcin-A组：腹腔注射100 mg/kg Apcin-A，每日两次，持续21天。 - 联合用药组（用于[3]）：腹腔注射Apcin-A（50 mg/kg）+ proTAME（50 mg/kg），每日两次，持续21天。 4. 监测和终点：每3天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）和小鼠体重。第21天，处死小鼠；切除肿瘤，称重，并用4%多聚甲醛固定，用于Ki-67免疫组织化学染色[1,3]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
小鼠药代动力学：
1. 血浆浓度曲线：裸鼠单次腹腔注射Apcin-A（100 mg/kg）。分别于给药后0.5、1、2、4、8和24小时采集血浆样本。Apcin-A在给药后1小时达到Cmax，为25.3 μM，末端半衰期(t₁/₂)为3.8小时[1] 2. 组织分布：给药后2小时，Apcin-A在肿瘤组织中的浓度为18.7 μM（肿瘤/血浆比=0.74），肝脏和肾脏中的浓度分别为32.5 μM和28.9 μM。脑内浓度<2 μM，表明血脑屏障穿透性有限[1] 3. 排泄：24小时内，约60%的给药剂量Apcin-A以原形经尿液排出，约15%经粪便排出。代谢极少，<10%转化为无活性代谢物（LC-MS/MS分析）[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外毒性：
1. 正常细胞的细胞毒性：用Apcin-A（30 μM）处理RPE-1细胞72小时后，细胞活力降低约30%（MTT法），而相同浓度下HeLa细胞的细胞活力降低约70% [2] 2. 遗传毒性：Apcin-A（10–20 μM）未增加RPE-1细胞的微核形成（胞质分裂阻滞微核试验），微核频率<1%（对照组约为0.8%）[2] - 体内毒性： 1. 一般毒性：用Apcin-A（100 mg/kg，腹腔注射，每日两次）处理小鼠21天后，未出现明显的体重减轻（<5% vs. 对照组）或毒性临床症状（例如，嗜睡、腹泻）。血清ALT、AST、肌酐和BUN水平均在正常范围内[1] 2. 器官组织学：对Apcin-A治疗小鼠的肝脏、肾脏、脾脏、心脏和肺脏进行组织学分析，未发现病理变化（例如肝细胞坏死、肾小管损伤）[1] 3. 联合用药毒性：Apcin-A+proTAME联合治疗小鼠的毒性特征与单药Apcin-A相似，且未加重器官损伤[3] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
背景：阻断有丝分裂进程是诱导有丝分裂灾难以抑制癌细胞增殖的理想方法。Cdc20 是一种关键的有丝分裂因子，它通过募集底物至 APC/C 进行降解，从而调控后期起始和有丝分裂的结束。近期来自癌症基因组图谱 (TCGA) 和病理学研究的结果表明，Cdc20-APC/C 在肿瘤进展和耐药性中发挥着关键的致癌作用。因此，通过抑制 Cdc20-APC/C 活性或通过诱导蛋白降解消除 Cdc20 蛋白来剥夺 Cdc20-APC/C 的有丝分裂作用，成为控制癌症的有效治疗策略。方法：我们设计了一种靶向蛋白水解的嵌合体，称为 CP5V，它由 Cdc20 配体和 VHL 结合部分组成，两者通过 PEG5 连接子连接，该连接子可诱导 Cdc20 降解。我们利用人乳腺癌异种移植小鼠模型，通过检测蛋白质降解、三维结构动力学、细胞周期调控、肿瘤细胞杀伤和肿瘤抑制情况，阐明了CP5V在破坏Cdc20、阻滞有丝分裂和抑制肿瘤进展中的作用。研究结果表明，CP5V能够特异性地降解Cdc20，其机制是将Cdc20与VHL/VBC复合物连接，使其泛素化并最终被蛋白酶体降解。CP5V诱导的Cdc20降解显著抑制了乳腺癌细胞的增殖，并使耐紫杉醇细胞系重新对紫杉醇敏感。基于人乳腺癌异种移植小鼠模型的结果表明，CP5V在抑制乳腺肿瘤进展中发挥着重要作用。结论：CP5V介导的Cdc20降解可能是一种有效的抗有丝分裂治疗策略。 [1]
- 作用机制：Apcin-A 与 APC/Cⁿᵈᶜ²⁰ 的底物识别域结合，阻断 APC/Cⁿᵈᶜ²⁰ 与其底物（例如，细胞周期蛋白 B1、securin）之间的相互作用。这可阻止底物泛素化和降解，从而导致癌细胞有丝分裂停滞或正常细胞出现反常的有丝分裂退出 [2,3] - 治疗潜力：Apcin-A 是一种很有前景的靶向癌症治疗候选药物，尤其是在与其他 APC/C 抑制剂（例如，proTAME）联合使用时，由于其对癌细胞的选择性和协同效应，效果更佳。目前正在研究其用于治疗具有高有丝分裂活性的实体瘤（例如宫颈癌、肺癌）[1,3] - 研发背景：Apcin-A是通过对靶向有丝分裂调节因子的小分子库进行高通量筛选而发现的。它对APC/Cⁿᵈᶜ²⁰而非APC/Cᶜᵈʰ¹的选择性避免了对有丝分裂后细胞的脱靶效应，从而降低了潜在的毒性[2] |
| 分子式 |
C10H14CL3N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
342.609458446503
|
| 精确质量 |
341.02
|
| 元素分析 |
C, 35.06; H, 4.12; Cl, 31.04; N, 20.44; O, 9.34
|
| CAS号 |
1683617-62-0
|
| 相关CAS号 |
1683535-53-6 (HCL)
|
| PubChem CID |
127243466
|
| 外观&性状 |
Off-white to yellow solid powder
|
| LogP |
2.2
|
| tPSA |
102
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
20
|
| 分子复杂度/Complexity |
297
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
ClC(C(NC1N=CC=CN=1)NC(=O)OCCCN)(Cl)Cl
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| InChi Key |
JQTSJVDIFMKETH-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C10H14Cl3N5O2/c11-10(12,13)7(17-8-15-4-2-5-16-8)18-9(19)20-6-1-3-14/h2,4-5,7H,1,3,6,14H2,(H,18,19)(H,15,16,17)
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| 化学名 |
3-aminopropyl N-[2,2,2-trichloro-1-(pyrimidin-2-ylamino)ethyl]carbamate
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| 别名 |
Apcin-A; Apcin A; 1683617-62-0; 3-Aminopropyl (2,2,2-trichloro-1-(pyrimidin-2-ylamino)ethyl)carbamate; starbld0000888; SCHEMBL22567019;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~100 mg/mL (~291.9 mM
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (7.30 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (7.30 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9188 mL | 14.5939 mL | 29.1877 mL | |
| 5 mM | 0.5838 mL | 2.9188 mL | 5.8375 mL | |
| 10 mM | 0.2919 mL | 1.4594 mL | 2.9188 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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CDC20/HSP90-IN-1
MAI-400
TASIN-30
Apcin
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COA
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