ROS/reactive oxygen species

孵育 24 和 48 小时后，芹菜素 7-葡萄糖苷对 B16F10 黑色素瘤细胞表现出强大的抗增殖作用。由于芹菜素-7-葡萄糖苷，亚G0/G1、S和G2/M期的细胞数量增加，而G0/G1期的细胞比例显着减少。在 B16F10 黑色素瘤细胞中，芹菜素-7-葡萄糖苷可增加酪氨酸酶活性、黑色素生成和产生 [1]。具体来说，芹菜素 7-葡萄糖苷抑制骨髓分化，同时诱导 CD34+ 细胞向红系谱系分化。芹菜素 7-葡萄糖苷在体外以浓度依赖性方式表现出针对活性氧 (ROS) 的强抗氧化作用 [2]。

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芹菜素-7-葡萄糖苷、根黄素和柚皮素对B16F10黑色素瘤细胞孵育24和48 h后均表现出显著的抗增殖活性。此外，apigenin-7-glucoside、根管素和柚皮素均可引起亚G0/G1期、S期和G2/M期细胞比例增加，而G0/G1期细胞比例显著降低。采用Hoechst 33,258评价的结果证实，在亚G0/G1期观察到的B16F10细胞百分比发生凋亡。此外，芹菜素-7-葡萄糖苷和柚皮素显示出增强B16F10黑色素瘤细胞黑色素生成合成和酪氨酸酶活性的能力。而根黄酮通过抑制酪氨酸酶活性诱导黑色素合成减少。 意义：我们的研究结果促进了在化妆品制剂中引入根宽素作为皮肤增白剂，而芹菜素-7-葡萄糖苷和柚皮素应作为天然美黑剂引入化妆品。[1]

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从造血干细胞产生血液细胞成分对广泛的血液系统疾病的治疗是重要的。近年来，一些证据表明，某些营养素、维生素和类黄酮可能通过维持干细胞的自我更新或刺激谱系特异性分化，在控制干细胞命运决定中发挥重要作用。本研究通过表型和分子分析研究了橄榄叶主要植物化学物质橄榄欧洲苷（Olp）、芹菜素-7-葡萄糖苷 (Api7G)和木草素7-葡萄糖苷（Lut7G）对造血干细胞分化的潜在影响。橄榄苦苷和这三种化合物的组合增强了CD34+细胞向骨髓单核细胞和淋巴细胞祖细胞的分化，并抑制了向巨核细胞和红细胞谱系的分化。Lut7G能同时刺激红系和髓系分化，而Api7G能特异性诱导CD34+细胞向红系分化，抑制髓系分化。通过α-血红蛋白、β-血红蛋白和γ-血红蛋白基因表达和红系转录因子GATA1表达的增加，证实了Api7G和Lut7G处理诱导的红系分化。微阵列分析显示，Api7G诱导造血干细胞红系分化的机制与激活JAK/STAT信号通路有关。这些发现证明了橄榄叶化合物对造血干细胞的诱导分化作用，并强调了它们在体外生成血细胞中的潜在应用。［2］

酪氨酸酶活性测定[1]
酪氨酸酶活性通过测量左旋多巴氧化率来估计，如前所述，稍加修改。简单地说，将细胞（106）分别用不同浓度的apigenin-7-glucoside，根宽素和柚皮素处理48 h，然后将细胞溶解在磷酸盐缓冲液中(0.1 M；pH 6.8)，含0.1% Triton × 100。裂解液在4°C下，17500 g离心10分钟澄清；取400 μl上清液与400 μl l-DOPA（0.15%）混合，在475 nm处分光光度测定吸光度，每分钟测定一次，持续10 min。

在这项研究中，研究人员研究了apigenin-7-glucoside/芹菜素-7-葡萄糖苷、芫花素和柚皮素对小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖的影响。还研究了这些天然产物对周期阶段细胞百分比分布和黑色素生成的影响。
使用MTT法在不同时期测定细胞存活率，而通过流式细胞术分析受试化合物对细胞周期进展的影响。此外，在475nm处用分光光度法测量黑色素和酪氨酸酶的量。此外，使用双苯甲酰亚胺三盐酸盐显色法（Hoechst 33258）评估了受试分子诱导死亡途径的机制[1]。

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流式细胞术分析细胞周期[1]
将小鼠黑色素瘤细胞（B16F10 5 × 105细胞）接种于50 cm2培养皿中，孵育24 h，用不同浓度的化合物处理48 h，胰蛋白酶化，PBS （pH = 7.4）洗涤2次。收集细胞，在室温下孵育15分钟，在冷PBS （pH = 7.4）中洗涤两次。用核糖核酸酶A （10 mg ml−1）在室温下作用30分钟，用50 ml碘化丙啶（1 mg ml−1）染色10分钟后，使用FACS系统（Beckman Coulter，瑞士）进行细胞周期分析。计算细胞周期各阶段细胞的百分比。

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定量荧光显微镜[1]
将细胞接种于96孔微滴板中，24 h后，将样品连续稀释至专用孔中。每孔细胞收获前孵育48 h， PBS洗涤，重新悬浮于含10 μg双苯并胺三盐酸（Hoechst 33,258）的1ml PBS中，室温孵育15 min。等量细胞（10 μl）置于载玻片上，使用荧光显微镜（Zeiss, Oberkochen, Germany）对每100个细胞的3个重复样本进行计数，并对凋亡染色质凝聚发生率进行评分。染色的细胞核染色质浓缩（核周围超浓缩染色质）或细胞核分裂成多个较小的致密体被认为是凋亡。染色质未凝聚和分散的细胞核被认为没有凋亡。

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细胞黑色素含量测定[1]
按照Skandrani等人的描述测量细胞的黑色素释放。简单地说，将B16F10细胞（5 × 105）接种于含有10 ml培养基的50 cm2培养皿中，孵育24 h，然后用不同浓度的apigenin-7-glucoside、根管素和柚皮素处理48 h。处理后，通过分泌到培养基中的黑色素（细胞外黑色素）的数量来估计黑色素的生成活性（与黑色素的产生密切相关）。用2.5%胰蛋白酶孵育贴壁细胞。然后将细胞置于管中，溶解于1ml Triton × 100（0.1%）中。在475 nm处测定细胞外黑色素含量的分光光度。将吸光度与已知合成黑色素浓度和估计量的标准曲线进行比较。

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根据对不同浓度化合物培养的CD34+细胞的形态和活力的初步研究，通过最终浓度为50µM的Olp、Api7G/芹菜素-7-葡萄糖苷或Lut7G处理每种化合物的单独效果进行评估（Samet et al., 2014b）。在对照细胞中加入0.05%的DMSO（载药）。为了评价这三种化合物联合作用的效果，我们还分别用Olp、Api7G和Lut7G在55µM、5µM和5µM下联合（梳状）处理细胞。我们通过对橄榄叶乙醇提取物的高效液相色谱分析和我们前期研究中化合物诱导人慢性髓性白血病K562细胞分化的有效浓度（Samet et al., 2014a）确定混合物中化合物的浓度。[2]

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细胞活力和细胞数量[2]
分别用Olp、Api7G/芹菜素-7-葡萄糖苷或Lut7G或它们的组合（Comb）在培养第3、第6和第9天用流式细胞术检测CD34+细胞的活力和数量。dmso处理的CD34+细胞作为对照细胞。在孵育指定时间后，收集处理过的细胞，悬浮在Guava viaccount试剂中，在黑暗中染色至少5分钟。Guava viaccount试剂含有两种dna结合染料。核染料只染色有核细胞，而活力染料染色垂死细胞。这两种染料的不同渗透性使Guava viaccount测定能够区分活细胞和非活细胞。使用Guava viaccount应用于Guava PCA流式细胞术，自动测量细胞数量和活力。在相差显微镜下观察其形态学变化。

[1]. Effect of apigenin-7-glucoside, genkwanin and naringenin on tyrosinase activity and melanin synthesis in B16F10 melanoma cells. Life Sci. 2016 Jan 1;144:80-5.

[2]. Olive leaf components apigenin 7-glucoside and luteolin 7-glucoside direct human hematopoietic stem cell differentiation towards erythroid lineage. Differentiation. 2015 Jun;89(5):146-55.

芹菜素7-O-β-D-葡萄糖苷是一种糖基氧基黄酮，它是芹菜素在7位通过糖苷键被β-D-吡喃葡萄糖基取代而形成的。它具有非甾体抗炎药、代谢产物和抗菌剂的活性。它是一种β-D-葡萄糖苷、二羟基黄酮、糖基氧基黄酮和单糖衍生物。它在功能上与芹菜素相关。它是芹菜素7-O-β-D-葡萄糖苷(1-)的共轭酸。它是芹菜素7-O-β-L-葡萄糖苷的对映异构体。
据报道，在无刺萼金鸡菊（Acanthus ebracteatus）、长叶金鸡菊（Coreopsis lanceolata）和其他有相关数据的生物体中均发现了Cosmosiin。
另见：洋甘菊（部分）。

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总之，本研究表明，芹菜素-7-葡萄糖苷和柚皮苷具有作为天然美黑产品应用于化妆品领域的潜力。我们还发现，金丝桃素可能是一种治疗色素沉着过度症的有效药物，并可作为美白化妆品中的有效成分。目前，人们正致力于从植物中寻找天然酪氨酸酶抑制剂，因为植物是生物活性化学物质的丰富来源，而且其中许多物质几乎没有有害的副作用。此外，芹菜素-7-葡萄糖苷、金丝桃素和柚皮苷均以剂量依赖的方式抑制小鼠黑色素瘤B16F10细胞的增殖。在对这些化合物可能的抗癌作用机制得出最终结论之前，还需要进一步研究芹菜素-7-葡萄糖苷、金丝桃素和柚皮苷影响细胞周期的分子机制。尽管还需要进一步研究来了解芹菜素-7-葡萄糖苷、金鸡纳苷和柚皮苷诱导B16F10细胞分化作用的分子机制，但我们的研究结果为开发预防和治疗黑色素瘤的新策略提供了新的视角。[1]

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本研究首次报道了橄榄叶植物化学物质对人造血干细胞的分化诱导作用。所描述的作用凸显了橄榄叶成分在优化体外生成特定造血亚群方面的潜在应用价值。特别是，在培养基中添加芹菜素-7-葡萄糖苷（Api7G）作为补充剂，即使在没有促红细胞生成素（EPO）的情况下，也能特异性地诱导CD34+细胞向红系分化。我们的研究结果表明JAK/STAT信号通路参与其中。未来将在基因和蛋白质水平上对JAK/STAT信号通路的不同组分进行更深入的分析。此外，还将研究黄酮类化合物Api7G与谱系特异性细胞因子EPO对红系分化的潜在协同作用。评估该黄酮类化合物对体外生成的造血细胞在NOD/SCID小鼠体内移植潜能的影响也将是一项有趣的研究。[2]

C21H20O10

432.3775

432.105

C, 58.34; H, 4.66; O, 37.00

578-74-5

Apigenin;520-36-5

5280704

Light yellow to yellow solid powder

1.6±0.1 g/cm3

788.9±60.0 °C at 760 mmHg

230-237ºC

280.7±26.4 °C

0.0±2.9 mmHg at 25°C

1.717

-0.39

170.05

6

10

4

31

675

5

C1=CC(=CC=C1C2=CC(=O)C3=C(C=C(C=C3O2)O[C@H]4[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O4)CO)O)O)O)O)O

KMOUJOKENFFTPU-OBJCFNGXSA-N

1S/C21H20O10/c22-8-16-18(26)19(27)20(28)21(31-16)29-11-5-12(24)17-13(25)7-14(30-15(17)6-11)9-1-3-10(23)4-2-9/h1-7,16,18-24,26-28H,8H2/t16-,18+,19+,20-,21-/m1/s1

7-(beta-D-Glucopyranosyloxy)-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one

Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside; Apigetrin; COSMOSIIN; Apigenin 7-glucoside; Cosmosiine; Cosmosioside; APIGENIN-7-GLUCOSIDE; Apigenin 7-O-beta-D-glucoside; ...; 578-74-5; . Cosmosiin; Apigetrin; COSMOSIIN; Apigenin 7-glucoside; Cosmosiine; Cosmosioside; APIGENIN-7-GLUCOSIDE; Apigenin 7-O-beta-D-glucoside; Apigenin 7-glucoside

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 100 mg/mL (~231.28 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。