| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MEK1; KSR2 (IC50 = 120 nM)
KSR2 (IC₅₀ values not provided in the literature, but it binds to the ATP-binding pocket of KSR2) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
APS-2-79 (5 μM) 抑制 293H 细胞中 KSR 刺激的 MEK 和 ERK 磷酸化[1]。 APS-2-79 (1 μM) 增强临床 MEK 抑制剂曲美替尼 (Trametinib) 在具有 K-Ras 突变的癌细胞系中的有效性。[1]
APS-2-79可稳定KSR的失活状态，拮抗RAF异源二聚化，并抑制KSR结合的MEK磷酸化和激活所需的构象变化[1] 在ATPᵇⁱᵒᵗⁱⁿ探针标记实验中，APS-2-79可与ATP竞争结合纯化KSR2–MEK1复合物中的KSR2[1] APS-2-79以KSR依赖的方式抑制BRAF和CRAF介导的MEK磷酸化，能有效抑制KSR2结合的MEK磷酸化，但对游离MEK几乎无作用[1] 在共表达全长KSR–Flag和MEK1–GFP的293H细胞中，APS-2-79（5μM，处理2小时）可抑制KSR刺激的MAPK信号通路，降低MEK（Ser218/Ser222）和ERK（Thr202/Tyr204）的磷酸化水平；该抑制作用在表达KSR(A690F)突变体的细胞中未观察到[1] APS-2-79不影响293H细胞中BRAF(V600E)诱导的MAPK激活[1] 当与MEK抑制剂（曲美替尼、比美替尼、PD0325901、AZD6244）联合使用时，APS-2-79在Ras突变细胞系（HCT116、A549、LOVO、CALU-6、SW620、SK-MEL-2、HEPG2、MEWO）中表现出协同效应，Bliss评分为正值；在RAF突变细胞系（A375、SK-MEL-239、COLO-205、H2087、SW1417）中未观察到明显协同作用[1] 在HCT116细胞中，APS-2-79（250nM、1μM）与曲美替尼联合处理可增强Ras-MAPK信号通路的下调，降低磷酸化ERK水平，并降低曲美替尼的IC₉₀值[1] 在激酶组-wide实验中，APS-2-79（1μM）可抑制246种激酶，受抑制最显著的激酶包括YES1、ERBB4、FGR、CSK、HCK和MERTK[1] |
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| 酶活实验 |
APS-2-79 充当 RAF 介导的 MEK 磷酸化的拮抗剂和 Ras (KSR) 依赖性激酶抑制剂。 APS-2-79 对 KSR2 的 IC50 为 120±23 nM，与 KSR2-MEK1 复合物中的 KSR2 特异性结合。
从昆虫细胞中纯化KSR2–MEK1复合物，流程包括冻融裂解、超声破碎、钴树脂亲和层析、TEV蛋白酶和λ-磷酸酶处理、离子交换层析（Sp-HP）及凝胶过滤层析[1] 进行ATPᵇⁱᵒᵗⁱⁿ探针标记实验，将纯化的KSR2–MEK1复合物与2μM ATPᵇⁱᵒᵗⁱⁿ在不同浓度的APS-2-79或游离ATP存在下孵育；通过生物素特异性抗体的蛋白质印迹法检测KSR2和MEK1的探针标记情况[1] 开展体外RAF磷酸化实验，将BRAF（200nM）或CRAF（10nM）与KSR2–MEK1复合物、KSR2(A690F)–MEK1复合物或游离MEK1（500nM）在1mM ATP和不同浓度的APS-2-79存在下孵育；使用磷酸化MEK（Ser218/Ser222）抗体通过蛋白质印迹法检测MEK磷酸化水平[1] 进行生物层干涉法（BLI）实验，将BRAF或BRAF突变体（F667E、R509H）固定在传感器头上，随后与不同浓度的KSR2–MEK1复合物或游离MEK1（625nM至10μM）在有无25μM APS-2-79存在下孵育；监测结合相（0-660秒）和解离相（660-1500秒），计算结合亲和力（Kd）、结合速率（Kon）和解离速率（Koff）[1] |
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| 细胞实验 |
在 96 孔板中进行细胞活力测定。为了在测定过程中实现线性生长，确定了 96 孔板测定的最佳细胞密度。 A549、HCT-116、A375、SK-MEL-239、COLO-205、LOVO、SK-MEL-2、CALU-6、MEWO、SW620 和 SW1417 细胞按每孔 500 个细胞铺板，并用在进行活力测量之前使用抑制剂（例如，APS-2-79；100-3,000 nM）。将 2000 个 H2087 和 HEPG2 细胞接种到孔中，然后将它们暴露于抑制剂（例如 APS-2-79；100–3,000 nM）72 小时。刃天青用于测量细胞活力，并通过将抑制剂处理的样品与 DMSO 对照进行比较来计算活细胞的百分比[1]。
向293H细胞转染全长KSR–Flag和MEK1–GFP（或MEK(AAAA)–GFP）质粒；转染24小时后，用5μM APS-2-79、APS-3-77或达布拉非尼处理细胞2小时；收集细胞并通过蛋白质印迹法检测磷酸化MEK（Ser218/Ser222）、磷酸化ERK（Thr202/Tyr204）、总MEK和总KSR[1] 向293H细胞转染MEK–GFP和KSR–Flag或KSR(R718H)–Flag质粒；转染24小时后，用不同浓度的曲美替尼（0.13-100nM，三倍稀释）处理细胞48小时；收集细胞并通过蛋白质印迹法分析MAPK信号通路活性[1] 用APS-2-79（100nM-3μM，三倍稀释）与MEK抑制剂（曲美替尼：0.01-100nM，三倍稀释；比美替尼、PD0325901、AZD6244：0.1-10μM，三倍稀释）联合处理Ras突变（HCT116、A549等）和RAF突变（A375、SK-MEL-239等）细胞系；孵育后评估细胞活力并计算Bliss评分以评估协同效应[1] 用不同浓度的曲美替尼联合DMSO、250nM或1μM APS-2-79处理HCT116和SK-MEL-239细胞48小时；通过蛋白质印迹法检测磷酸化ERK水平并计算曲美替尼的IC₉₀值[1] 用APS-2-79和/或曲美替尼处理HCT116细胞48小时；通过蛋白质印迹法检测磷酸化AMPK、磷酸化ERK和总MEK水平[1] |
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| 动物实验 |
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| 参考文献 | |||
| 其他信息 |
APS-2-79 is a small-molecule compound that mimics KSR alleles suppressing oncogenic Ras mutations [1]
The binding site of APS-2-79 in KSR2 is the ATP-binding pocket; key interactions include contacts with Thr802, Phe516, Phe793, and Arg692 of KSR2, which contribute to its selectivity for KSR over RAF proteins [1] Binding of APS-2-79 to KSR2 induces a conformational change, forming an "induced lock" (residues I809–Q814) and altering residues Trp685 and His686 at the KSR–RAF heterodimer interface, thereby hindering higher-order assembly of RAF–KSR–MEK complexes [1] APS-2-79 enhances the efficacy of MEK inhibitors by antagonizing MEKi-induced Ras–MAPK signalling complexes, providing a therapeutic strategy for Ras-driven cancers through co-targeting enzymatic and scaffolding activities in the Ras-MAPK pathway [1] The inactive state of KSR stabilized by APS-2-79 shifts the equilibrium of KSR2–MEK1 complexes to the OFF state, antagonizing RAF dimerization and subsequent MEK phosphorylation [1] |
| 分子式 |
C23H21N3O3
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|---|---|---|
| 分子量 |
387.44
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| 精确质量 |
387.158
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| 元素分析 |
C, 71.30; H, 5.46; N, 10.85; O, 12.39
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| CAS号 |
2002381-25-9
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| 相关CAS号 |
APS-2-79 hydrochloride;2002381-31-7
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| PubChem CID |
121499159
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
528.6±50.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
273.5±30.1 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.4 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.656
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| LogP |
5.36
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| tPSA |
65.5
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
502
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O(C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])C1C([H])=C([H])C(=C(C([H])([H])[H])C=1[H])N([H])C1C2=C([H])C(=C(C([H])=C2N=C([H])N=1)OC([H])([H])[H])OC([H])([H])[H]
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| InChi Key |
PEKZLFZZBGBOPJ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H21N3O3/c1-15-11-17(29-16-7-5-4-6-8-16)9-10-19(15)26-23-18-12-21(27-2)22(28-3)13-20(18)24-14-25-23/h4-14H,1-3H3,(H,24,25,26)
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| 化学名 |
6,7-dimethoxy-N-(2-methyl-4-phenoxyphenyl)quinazolin-4-amine
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (5.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (5.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (5.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5810 mL | 12.9052 mL | 25.8104 mL | |
| 5 mM | 0.5162 mL | 2.5810 mL | 5.1621 mL | |
| 10 mM | 0.2581 mL | 1.2905 mL | 2.5810 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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DS03090629
MEK/RAF-IN-1
Pimasertib hydrochloride
Luvometinib
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