ARN272

系统性施用 anandamide 转运抑制剂 ARN272 ([(4-(5-(4-羟基苯基)-3,4-二氮杂双环[4.4.0]癸-1(6),2,4,7,9-五烯-2-基氨基)-苯基)-苯基氨基甲酮]) 来评估其对大鼠 LiCl 诱发的恶心行为 (条件性张口) 和鼩鼱 (Suncus murinus) 诱发的呕吐的预防作用。通过拮抗大麻素 1 (CB1) 受体和全身联合给药 SR141716，探索了延长 anandamide 可用性如何调节大鼠恶心的机制。全身给药 ARN272 可剂量依赖性地抑制大鼠因恶心引起的条件性张口，并剂量依赖性地减少鼩鼱的呕吐。在大鼠中全身联合给药 SR141716 和 ARN272（3.0 mg·kg(-1)）可完全逆转 ARN272 抑制的张口（1.0 mg·kg(-1)）。 SR141716 单独使用与载体溶液没有差异。这些结果表明，化合物 ARN272 对花生四烯乙醇胺转运的抑制会激活 CB1 受体，从而产生一种间接激动作用来调节毒素引起的恶心和呕吐。这些结果还提供了行为证据，支持花生四烯乙醇胺细胞再摄取中使用的促进转运机制。[1]

总共 58 只幼稚雄性 Sprague-Dawley 大鼠用于评估抗恶心行为。大鼠被单独饲养在 48 × 26 × 20 厘米的鞋盒笼中，笼子位于群居室，环境温度为 21°C。所有动物都处于反向明暗循环（07:00 关灯；19:00 开灯），可自由进食（Iams 啮齿动物饲料，18% 蛋白质）和自来水，测试期间除外，测试发生在黑暗周期。所有动物都获得了丰富的环境，包括两张干净的纸巾（每周在换笼时补充）和一个 14 厘米长、12 厘米直径的软塑料容器。
总共 21 只 S. murinus（麝鼩）在圭尔夫大学的一个群居中繁殖和饲养。将鼩鼱单独饲养在笼子中，环境温度为 21°C，光照时间为 14/10（晚上 21 点关灯）。在鼩鼱的光照周期内进行测试，时间为 09:00 至 14:00。实验中使用了雄性（42.9–53.0 克）和雌性（26.1–32.9 克）并均匀分布在各组中，实验对象年龄从 98 至 814 天不等。在任何分析中，两性的呕吐频率均无显著差异；因此，在所有报告的分析中，雄性和雌性都被合并在一起。鼩鼱之前有过呕吐经历，每次治疗之间至少需要 3 周的恢复时间。
所有实验中，anandamide 转运抑制剂 ARN272 均在 1:1:8 PEG400、Tween 80 和生理盐水的载体溶液 (VEH) 中制备。所有全身注射均通过腹腔注射给药。在实验 1 中，将 ARN272 以 0.1 mg·mL−1（0.1 mg·kg−1 剂量）、1 mg·mL−1（1 mg·kg−1 剂量）和 3 mg·mL−1（3 mg·kg−1 剂量）的浓度以及 1 mL·kg−1 的体积输送给大鼠，此剂量选择基于 Fu 等人 (2012) 进行的先前实验，其中 1 mg·kg−1 在给药后 2 小时增加血浆中 anandamide 的水平。在实验 2 中，将 ARN272 浓度为 3.0 mg·mL−1（9.0 mg·kg−1 剂量）的剂量以 3 和 3.0 mg·mL−1（18 mg·kg−1 剂量）的剂量以 6 mL·kg−1 的体积输送给鼩鼱，选择浓度和体积的依据是，在之前的实验中，S. murinus 需要的剂量至少增加到大鼠有效剂量的三倍。实验 1 中 SR141716 的浓度为 1.0 mg·mL−1（1.0 mg·kg−1 剂量），体积为 1 mL·kg−1。选择 1.0 mg·kg−1 SR141716 的剂量是基于其在逆转断点和恢复尼古丁自我给药方面的先前有效性，同时还发现与 2.5 mg·kg−1 或更高剂量的 SR141716 不同，它不会增强催吐剂的效果。
所有实验中使用的 0.15 M LiCl 药物治疗均在无菌水中制备，并在实验 1 中以 20 mL·kg−1（127 mg·kg−1）的体积给大鼠给药，在实验 2 中以 60 mL kg−1（390 mg·kg−1）的体积给鼩鼱给药。

A total of 58 naïve male Sprague-Dawley rats were used for assessment of anti-nausea-induced behaviour. Rats were single-housed in 48 × 26 × 20 cm shoebox cages in a colony room at an ambient temperature of 21°C. All animals were maintained on a reverse light/dark cycle (0700 h lights off; 1900 h lights on) with free access to food (Iams rodent chow, 18% protein) and tap water, except during testing, which occurred during the dark cycle. All animals were provided with environmental enrichment from two clean paper towels (replenished weekly during cage changes) and a soft plastic container 14 cm long and 12 cm in diameter.
A total of 21 S. murinus, house musk shrews, were bred and raised in a colony at the University of Guelph. Shrews were single-housed in cages at an ambient temperature of 21°C on a 14/10 light dark schedule (lights off at 2100 h). Shrews were tested during their light cycle, between 0900 and 1400 h. Both males (42.9–53.0 g) and females (26.1–32.9 g) were used and equally distributed among the groups, with subjects ranging from 98 to 814 days of age. The sexes did not significantly differ in vomiting frequency in any analysis; therefore, males and females were pooled in all reported analyses. The shrews had previous emetic experience with the limitation of a minimum of 3 weeks recovery between treatments.
The anandamide transport inhibitor, ARN272 , was prepared in a vehicle solution (VEH) of 1:1:8 PEG400, Tween 80 and physiological saline, respectively, for all experiments. All systemic injections were administered i.p. In experiment 1, ARN272 was delivered to rats at concentrations of 0.1 mg·mL−1 (0.1 mg·kg−1 dose), 1 mg·mL−1 (1 mg·kg−1 dose) and 3 mg·mL−1 (3 mg·kg−1 dose), and at a volume of 1 mL·kg−1, chosen on the basis of previous experiments performed by Fu et al. (2012) where 1 mg·kg−1 increased plasma anandamide levels 2 h post-administration. In experiment 2, ARN272 was delivered to shrews at concentrations of 3.0 mg·mL−1 (9.0 mg·kg−1 dose) at a volume of 3 and 3.0 mg·mL−1 (18 mg·kg−1 dose) at a volume of 6 mL·kg−1, chosen on the basis of previous experiments where S. murinus required a dose increase by at least a factor of three times an effective dose in rats . The concentration of SR141716 in experiment 1 was delivered at 1.0 mg·mL−1 (1.0 mg·kg−1 dose) at a volume of 1 mL·kg−1. The dose of 1.0 mg·kg−1 SR141716 was chosen based on prior effectiveness in reversing the breakpoint and reinstatement of nicotine self-administration , while also being found to not to potentiate the effects of emetic agents unlike doses of SR141716 at 2.5 mg·kg−1 or higher .
The LiCl drug treatment 0.15 M used in all experiments was prepared in sterile water and administered at volumes of 20 mL·kg−1 (127 mg·kg−1) in rats in experiment 1, and 60 mL kg−1 (390 mg·kg−1) in shrews in experiment 2.

Br J Pharmacol.2013 Nov;170(5):1130-6.

C27H20N4O2

432.473305702209

432.158

488793-85-7

1386351

Typically exists as solid at room temperature

1.4±0.1 g/cm3

629.1±55.0 °C at 760 mmHg

334.3±31.5 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.757

4.58

87.1

3

5

5

33

624

0

OC(C=C1)=CC=C1C2=NN=C(C3=C2C=CC=C3)NC4=CC=C(C(NC5=CC=CC=C5)=O)C=C4

UPKNGUQNXSMHBE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H20N4O2/c32-22-16-12-18(13-17-22)25-23-8-4-5-9-24(23)26(31-30-25)28-21-14-10-19(11-15-21)27(33)29-20-6-2-1-3-7-20/h1-17,32H,(H,28,31)(H,29,33)

4-[[4-(4-hydroxyphenyl)phthalazin-1-yl]amino]-N-phenylbenzamide

ARN272; ARN-272; ARN 272

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~125 mg/mL (~289.04 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。