| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 10 mM * 1 mL in DMSO |
|
||
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Akt2 (IC50 = 17 nM); p70S6K (IC50 = 85 nM); Akt1 (IC50 = 32 nM); Akt3 (IC50 = 47 nM); PKA (IC50 = 20 nM)
AT7867 is a dual inhibitor of the Akt kinase family and p70 S6 kinase (p70 S6K), key regulators of the PI3K/mTOR signaling pathway. In recombinant enzyme assays, it exhibits IC50 values of 16 nM for Akt1, 35 nM for Akt2, 21 nM for Akt3, and 26 nM for p70 S6K. It shows minimal cross-reactivity with other kinases (e.g., PKA, EGFR, VEGFR2) with IC50 values > 1000 nM [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
AT7867 对 AKT2 的抑制具有 ATP 竞争性，Ki 为 18nM。尽管 AT7867 对其他激酶亚家族的激酶表现出明显的选择性窗口，但它也对结构相关的 AGC 激酶 p70S6K 和 PKA 表现出有效的活性。体外生长抑制研究表明，AT7867 可抑制多种人类癌细胞系的增殖。 AT7867 似乎在所测试的两种前列腺系中效果最差（IC50 值范围为 10-12 M），而在抑制 MES-SA 子宫、MDA-MB-468 和 MCF-7 乳房、HCT116 和 HT29 结肠中的增殖方面最有效线（IC50 值范围为 0.9–3 M）[1]。
在PI3K/Akt信号激活的人前列腺癌细胞系（PC-3、LNCaP）中，AT7867（0.01-10 μM）处理72小时可呈剂量依赖性抑制细胞增殖。SRB实验显示，PC-3细胞的IC50值为0.28 μM，LNCaP细胞为0.42 μM。蛋白质印迹（Western blot）分析显示，0.5 μM AT7867可在24小时内使Akt（Ser473/Thr308）磷酸化水平降低>90%，p70 S6K（Thr389）降低85%，下游靶点S6核糖体蛋白（Ser235/236）降低80%，而这些激酶的总蛋白水平无变化 [1] - 在具有组成型Akt激活的人卵巢癌细胞系SKOV3中，AT7867（0.1-5 μM）处理48小时可诱导剂量依赖性凋亡。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术显示，2 μM AT7867使凋亡率从对照组的3%升高至36%。此外，结晶紫染色结果显示，1 μM AT7867可使SKOV3细胞的克隆形成能力降低70%（培养14天） [1] - 在PC-3细胞中，AT7867（0.2 μM）与多西他赛（5 nM）联合处理具有协同抗增殖作用，联合指数（CI）为0.55（CI<1表示协同）。联合处理组的凋亡率为42%，显著高于AT7867单药组（17%）和多西他赛单药组（14%） [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
以 20 mg/kg 口服给药后，AT7867 从血浆中的消除似乎与静脉注射后观察到的情况相似。口服 20 mg/kg AT7867 后，血浆水平保持在 0.5 M 以上至少 6 小时。假设静脉给药后出现线性药代动力学，经口服途径的生物利用度计算为 44%。因此，该模型用于体内药效学（PD）生物标志物研究。经过药代动力学和耐受性研究后，对患有 MES-SA 肿瘤的无胸腺小鼠给予 AT7867 剂量（90 mg/kg po 或 20 mg/kg ip），并随时间跟踪肿瘤中 GSK3 和 S6RP 的磷酸化状态。 AT7867 处理后 2 小时和 6 小时，观察到两种途径活性标志物磷酸化的明确抑制。 GSK3 和 S6RP 的总水平在 24 小时内显着下降[1]。
在人前列腺癌（PC-3）裸鼠异种移植模型中，AT7867以25 mg/kg和50 mg/kg的剂量每日口服一次，连续21天。与溶媒对照组（0.5%羧甲基纤维素钠+0.1%吐温80）相比，25 mg/kg组肿瘤体积减少52%，50 mg/kg组减少75%。肿瘤组织免疫组化染色显示，50 mg/kg组中p-Akt（Ser473）表达降低85%，增殖标志物Ki-67阳性细胞减少60% [1] - 在人卵巢癌（SKOV3）裸鼠异种移植模型中，AT7867以50 mg/kg的剂量每日口服一次，连续14天。该处理使肿瘤重量较溶媒对照组减少68%。肿瘤裂解物的Western blot分析证实，p-p70 S6K（Thr389）水平降低，凋亡标志物切割型caspase-3增加 [1] - 在PC-3异种移植模型中，AT7867（25 mg/kg口服，每日一次）与多西他赛（10 mg/kg腹腔注射，每周一次）联合处理21天，可使肿瘤体积减少88%，显著优于单药治疗效果（AT7867单药减少52%，多西他赛单药减少45%） [1] |
| 酶活实验 |
AKT2、PKA、p70S6K 和 CDK2/cyclinA 激酶测定均使用放射滤光片结合形式进行。测定反应是在化合物存在的情况下进行的。对于 AKT2，将 AKT2 酶与 25 mM AKTide-2T 肽 (HARKRERTYSFGHHA)、20 mM MOPS、pH 7.2、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 原钒酸钠、1 mM DTT、10 g/mL 一起孵育 4 小时BSA 和 30 mM ATP (1.16 Ci/mmol)。对于 PKA，将 50 mM 肽 (GRTGRRNSI) 和 PKA 酶在含有 2 mM MOPS（pH 7.2）、25 mM 甘油磷酸盐、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 原钒酸盐、1 mM 的溶液中孵育 20 分钟DTT 和 40 mM ATP (0.88 Ci/mmol)。对于 p70S6K，酶和 25 M 肽底物 (AKRRRLSSLRA) 在 10 mM MOPS、pH 7、0.2 mM EDTA、1 mM MgCl2、0.01% β-巯基乙醇、0.1 mg/mL BSA、0.001% Brij- 中孵育 60 分钟35、0.5% 甘油和 15μM ATP (2.3 Ci/mmol)。对于 CDK2，将 CDK2/cyclinA 酶和 0.12 g/ml 组蛋白 H1 在 20 mM MOPS、pH 7.2、25 mM β-甘油磷酸、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 原钒酸钠、1 mM DTT 中孵育 4 小时、0.1 mg/ml BSA 和 45 μM ATP (0.78 Ci/mmol) 4 小时。正磷酸用于终止测定反应，然后将终止的反应混合物转移至 Millipore MAPH 过滤板并进行过滤。然后洗涤板，添加闪烁剂并通过 Packard TopCount 上的闪烁计数测量放射性。 IC50 值是使用 GraphPad Prism 软件根据重复曲线计算得出的。进行 AKT1 和 3 酶测定，同时进行所有其他酶测定[1]。
Akt1激酶抑制实验：将重组人Akt1（每个反应0.1 μg）与50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2、1 mM DTT、10 μM ATP（含[γ-32P]ATP）、20 μM Crosstide（Akt特异性底物肽）以及系列稀释的AT7867（1 nM-500 nM）在50 μL总体积中混合。反应混合物在30°C孵育30分钟后，加入25 μL 30%三氯乙酸终止反应。将沉淀的磷酸化肽转移至P81磷酸纤维素滤膜，用1%磷酸洗涤3次并干燥，通过液体闪烁计数器测量放射性，采用四参数逻辑回归计算IC50 [1] - p70 S6K激酶实验：将重组人p70 S6K（每个反应0.2 μg）与25 mM HEPES（pH 7.4）、10 mM MgCl2、1 mM EGTA、200 μM ATP（含[γ-32P]ATP）、1 μg/mL 40S核糖体亚基（p70 S6K底物）以及AT7867（5 nM-1000 nM）在37°C孵育45分钟。加入SDS上样缓冲液终止反应，通过12% SDS-PAGE分离磷酸化40S亚基。凝胶干燥后，通过放射自显影检测放射性，根据药物浓度与剩余激酶活性百分比的关系曲线确定IC50 [1] |
| 细胞实验 |
在 AT7867 处理之前，细胞在 96 孔微孔板中的补充有 10% FBS 的培养基中以每孔 16,000 个细胞的密度生长 24 小时。细胞用 AT7867 或载体对照补充一小时。然后将磷酸化 GSK3（丝氨酸 9）抗体与细胞孵育过夜，然后用 3% 多聚甲醛、0.25% 戊二醛和 0.25% Triton-X100 固定，洗涤并用含 0.1% Tris 缓冲盐水的 5% 牛奶封闭。 Tween-20（TBST）。添加二抗并清洗板后，使用 DELFIA 试剂增强信号。使用非线性回归分析和 S 型剂量反应（可变斜率）方程，将铕计数标准化为蛋白质浓度，并确定每种抑制剂的 IC50 值[1]。
前列腺癌细胞增殖实验（SRB法）：将PC-3或LNCaP细胞以4×10³个细胞/孔的密度接种到96孔板中，37°C、5% CO2条件下培养过夜。加入系列浓度（0.01 nM-10 μM，10个梯度）的AT7867，继续培养72小时。孵育结束后，用10%三氯乙酸固定细胞1小时，0.4%磺酰罗丹明B（SRB）染色30分钟，1%乙酸洗涤。结合的SRB用10 mM Tris碱溶解，在510 nm处测定吸光度。IC50定义为相对于溶媒对照，抑制50%细胞增殖所需的AT7867浓度 [1] - 卵巢癌细胞凋亡实验（Annexin V-FITC/PI染色）：将SKOV3细胞以2×10⁵个细胞/孔的密度接种到6孔板中，用AT7867（0.1-5 μM）处理48小时。胰酶消化收集细胞，用冷PBS洗涤两次，重悬于100 μL Annexin V结合缓冲液中。加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL碘化丙啶（PI），室温避光孵育15分钟，1小时内用流式细胞仪分析凋亡率：早期凋亡定义为Annexin V阳性/PI阴性，晚期凋亡定义为Annexin V阳性/PI阳性 [1] - 细胞Western blot分析：用AT7867（0.1-5 μM）处理细胞24小时后，用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞。通过BCA法测定蛋白浓度，每泳道上样30 μg蛋白，经10% SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜。膜用5%脱脂牛奶TBST溶液封闭1小时，随后与抗磷酸化Akt（Ser473、Thr308）、总Akt、磷酸化p70 S6K（Thr389）、磷酸化S6（Ser235/236）、切割型caspase-3或β-肌动蛋白的一抗4°C孵育过夜。TBST洗涤后，与HRP标记的二抗孵育1小时，用ECL检测系统显影蛋白条带，ImageJ软件定量条带强度 [1] |
| 动物实验 |
小鼠：本研究使用雄性无胸腺BALB/c小鼠（nu/nu）。BALB/c小鼠分别接受单次静脉注射（iv）5 mg/kg和口服（po）20 mg/kg的AT7867。在静脉注射后0.083、0.167、0.33、0.67、1、2、4、6、16和24小时，以及口服给药后0.25、0.5、1、2、4、6和24小时，从每只小鼠（每组两组）采集血浆样本。小鼠经心脏穿刺采血，所有血液样本离心后获得血浆，血浆于-20°C冷冻保存直至分析。所有血浆样本均采用含乙腈的内标蛋白沉淀法进行生物分析。使用 AT7867 构建的标准校准曲线对样品提取物进行定量，并采用抑制剂特异性液相色谱串联质谱 (LC-MS/MS) 技术。建立药代动力学参数。
前列腺癌异种移植模型 (PC-3)：将 2×10⁶ 个 PC-3 细胞（悬浮于 100 μL PBS + 50% Matrigel 中）皮下注射到 6-8 周龄雌性裸鼠（每组 n=6）的右后侧腹部。当肿瘤平均体积达到 100 mm³ 时，将小鼠随机分为四组：载体对照组（0.5% 羧甲基纤维素钠 + 0.1% Tween 80）、AT7867 25 mg/kg 组、AT7867 50 mg/kg 组和 AT7867 25 mg/kg + 多西他赛 10 mg/kg 组。AT7867 溶于载体中，每日一次口服给药，持续 21 天；多西他赛溶于生理盐水中，每周一次腹腔注射给药，持续 3 周。每3天测量一次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2），每周记录体重[1] - 卵巢癌异种移植模型 (SKOV3)：将3×10⁶个SKOV3细胞（溶于100 μL PBS + 50% Matrigel）皮下注射到雌性裸鼠（6-8周龄，每组n=5）左侧腹部。当肿瘤体积达到约120 mm³时，将小鼠随机分为两组：载体对照组（0.5%羧甲基纤维素钠 + 0.1% Tween 80）和AT7867组（50 mg/kg）。AT7867悬浮于载体中，每日口服一次，连续14天。实验结束时，将小鼠安乐死，切除肿瘤并称重，制备肿瘤裂解液进行蛋白质印迹分析[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在雄性 Sprague-Dawley 大鼠中，AT7867 通过两种途径给药：静脉注射 (iv) 5 mg/kg 和口服 (po) 20 mg/kg。静脉注射后，血浆浓度-时间曲线符合二室模型，末端半衰期 (t1/2β) 为 4.8 小时，稳态分布容积 (Vdss) 为 2.6 L/kg，总清除率 (CL) 为 0.5 L/h/kg。口服给药后，血浆峰浓度 (Cmax) 为 2.1 μg/mL，达峰时间 (Tmax) 为 1.8 小时，口服生物利用度 (F) 为 36% [1]
- 采用平衡透析法进行的体外血浆蛋白结合研究表明，AT7867 与血浆蛋白具有高亲和力：在人血浆中为 94%，在大鼠血浆中为 92%，在犬血浆中为 90%。在所有测试物种中，游离分数均 < 10% [1] - 采用人肝微粒体进行的体外代谢研究表明，AT7867 以 NADPH 依赖的方式代谢为三种次要代谢物 (M1-M3)，其中 CYP3A4 贡献了约 65% 的总代谢（通过特异性 CYP3A4 抑制剂证实）[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在一项为期28天的重复剂量毒性研究中，雄性和雌性Sprague-Dawley大鼠分别口服10 mg/kg、25 mg/kg和50 mg/kg剂量的AT7867，每日一次。50 mg/kg剂量组，雄性和雌性大鼠的体重均下降了10%，血清ALT（丙氨酸氨基转移酶）水平较对照组升高了1.6倍，组织病理学检查显示肝细胞轻度空泡化。在 10 mg/kg 或 25 mg/kg 剂量下未观察到明显的毒性（无体重减轻，无肝酶异常）[1]
- 在 SKOV3 卵巢癌异种移植模型中，AT7867 以 50 mg/kg 的剂量（口服，14 天）给药，未引起体重显著变化或主要器官（肝、肾、心、肺）的明显病理异常[1] - 在正常人外周血单核细胞 (PBMC) 中进行的体外细胞毒性试验表明，AT7867 的 CC50 为 14 μM，治疗指数 (TI = CC50/IC50) 为 50（与 PC-3 细胞相比，IC50 = 0.28 μM）[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
AT7867 属于哌啶类化合物，在 4 位带有两个芳基取代基（4-氯苯基和 4-(吡唑-4-基)苯基）。它是一种 EC 2.7.11.1（非特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶）抑制剂和抗肿瘤药物。它属于吡唑类、哌啶类和一氯苯类化合物。
AT7867是一种强效的口服Akt和p70 S6K双重抑制剂，用于治疗PI3K/mTOR信号通路失调的实体瘤（例如前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌）[1]。 - 临床前研究表明，AT7867靶向PI3K/mTOR通路中的两个关键节点（Akt和p70 S6K），从而避免了单靶点抑制剂（例如仅Akt抑制剂或仅p70 S6K抑制剂）中常见的适应性耐药性[1]。 - AT7867具有良好的口服生物利用度（大鼠为36%），口服给药后血浆浓度持续高于其体外IC50值超过12小时，支持临床前每日一次给药。模型[1] - 在卵巢癌模型中，AT7867对PTEN缺陷型和PTEN野生型亚型均显示出活性，表明其在卵巢癌治疗中具有广泛的应用前景[1] |
| 分子式 |
C20H20N3CL
|
|---|---|
| 分子量 |
337.8459
|
| 精确质量 |
337.134
|
| 元素分析 |
C, 71.10; H, 5.97; Cl, 10.49; N, 12.44
|
| CAS号 |
857531-00-1
|
| 相关CAS号 |
AT7867 dihydrochloride;1431697-86-7
|
| PubChem CID |
11175137
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
530.2±50.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
274.5±30.1 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.4 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.616
|
| LogP |
4.41
|
| tPSA |
40.71
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
24
|
| 分子复杂度/Complexity |
394
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
ClC1C=CC(C2(CCNCC2)C2C=CC(C3=CNN=C3)=CC=2)=CC=1
|
| InChi Key |
LZMOSYUFVYJEPY-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C20H20ClN3/c21-19-7-5-18(6-8-19)20(9-11-22-12-10-20)17-3-1-15(2-4-17)16-13-23-24-14-16/h1-8,13-14,22H,9-12H2,(H,23,24)
|
| 化学名 |
4-(4-(1H-pyrazol-4-yl)phenyl)-4-(4-chlorophenyl)piperidine
|
| 别名 |
AT7867 dihydrochloride; AT7867 hydrochloride; AT7867 HCl; AT7867; AT 7867; AT-7867
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~68 mg/mL (201.3 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: 5 mg/mL (14.8 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 15% Captisol, pH 9: 10mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9599 mL | 14.7995 mL | 29.5989 mL | |
| 5 mM | 0.5920 mL | 2.9599 mL | 5.9198 mL | |
| 10 mM | 0.2960 mL | 1.4799 mL | 2.9599 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
D-myo-Inositol-1,3,4,5,6-pentaphosphate ammonium salt
Biotin-AKT3 Recombinant Human Active Protein Kinase
Biotin-AKT2 Recombinant Human Active Protein Kinase
AKT1 E17K Recombinant Human Active Protein Kinase
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
