VEGFR1/FLT1 (IC50 = 0.1 nM); VEGFR2/Flk1 (IC50 = 0.18 nM); VEGFR2/KDR (IC50 = 0.2 nM); VEGFR3 (IC50 = 0.1 nM-0.3 nM nM); PDGFRβ (IC50 = 1.6 nM)

体外活性：阿西替尼可以阻断 VEGFR 的细胞自磷酸化和 VEGF 介导的内皮细胞活力、管形成和下游信号传导。 Axitinib 抑制可变细胞系的增殖，IC50 >10,000 nM (IGR-N91)、849 nM (IGR-NB8)、274 nM (SH-SY5Y) 和 573 nM（非 VEGF 刺激的 HUVEC）。激酶测定：生成过表达全长 VEGFR2、PDGFRβ、Kit 的猪主动脉内皮 (PAE) 细胞和过表达鼠 VEGFR2 (Flk-1) 或 PDGFRα 的 NIH-3T3。 96孔板包被有100μL/孔的2.5μg/mL抗VEGFR2抗体、0.75μg/mL抗PDGFRβ抗体、0.25μg/mL抗PDGFRα抗体、0.5μg/mL抗KIT抗体，或1.20 μg/mL 抗 Flk-1 抗体用于制备 ELISA 捕获板。然后通过ELISA测量RTK的磷酸化。细胞测定：将细胞（HUVEC、SH-SY5Y、IGR-N91 和 IGR-NB8 细胞）以 5 × 104 的密度接种到 96 孔板中并培养 24 小时。阿西替尼以 1 nM 至 10 μM 的浓度添加到细胞中。 72小时后通过MTS四唑底物测量细胞活力并计算IC50值。

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Axitinib有效抑制细胞VEGF RTK活性。[2]
在转染或内源性表达rtk的细胞中，阿西替尼能有效阻断生长因子刺激的VEGFR-2和VEGFR-3磷酸化，平均IC50值分别为0.2和0.1 ~ 0.3 nmol/L(图2A；表1)。针对VEGFR-1的细胞活性为1.2 nmol/L（在存在2.3%牛血清白蛋白的情况下测量），基于阿西替尼的蛋白质结合，相当于绝对IC50为~ 0.1 nmol/L。在Flk-1转染的NIH-3T3细胞中，对小鼠VEGFR-2 （Flk-1）的效价为0.18 nmol/L，与人同源物相似。阿西替尼对密切相关的III型和V型家族rtk，包括PDGFR-β (1.6 nmol/L), KIT （1.7 nmol/L）和PDGFR-α (5 nmol/L；表1);纳摩尔浓度的阿西替尼阻断PDGF bb介导的人胶质瘤U87MG细胞（PDGFR-β阳性）的迁移，但不增殖（数据未显示）。相比之下，阿西替尼对FGFR-1的靶标和功能活性要弱得多(图1A和B；表1)。当浓度高达1 μmol/L时，axitinib对RS；411细胞中的Flt-3和TT细胞中的RET的活性最小（数据未显示）。对上述受体的重组酪氨酸激酶的酶抑制活性（Ki）也观察到类似的趋势（数据未显示）。重要的是，阿西替尼对“脱靶”蛋白激酶几乎没有抑制作用；浓度为1 μmol/L （VEGFR-2的Ki的约1000倍），跨越约100个蛋白激酶的三个激酶组(辉瑞公司内部；Upstate和Dundee面板)，阿西替尼仅抑制5种蛋白激酶：Abl、Aurora-2、Arg、AMPK、Axl和MST2（抑制率≥60%）。最后，阿西替尼在广泛的蛋白激酶筛选中没有表现出显著的活性(Cerep；数据未显示)。

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Axitinib抑制vegf介导的内皮细胞存活、迁移和小管形成。[2]
阿西替尼对vegf刺激的HUVEC存活表现出强有力的抑制作用，但对基本的fgf刺激的HUVEC存活没有抑制作用，对VEGFR-2和FGFR-1受体的选择性约为1000倍（图2B）。功能实验得出的VEGFR-2的平均IC50值（0.24±0.09 nmol/L）与细胞受体磷酸化实验得出的IC50值相似（表1），证实受体拮抗导致该化合物的功能抑制。此外，阿西替尼剂量依赖性地抑制三维纤维蛋白基质系统中球体内皮管的形成(图2C；补充图S1)。由于系统中存在较高的血清水平（4-8% FBS），因此需要比其他类型的测定法更高的化合物浓度来抑制管的形成。

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Axitinib抑制内皮细胞内信号转导。[2]
Axitinib快速且剂量依赖性地降低了VEGF下游关键信号分子Akt、内皮一氧化氮合酶（eNOS）和细胞外信号调节激酶1/2 （ERK1/2）的磷酸化水平（图2D）， IC50值与抑制VEGFR-2的IC50值相似。这表明Akt、eNOS和ERK1/2磷酸化的降低可能是由于阿西替尼对上游vegfr的拮抗作用。

阿西替尼对原位移植模型如 M24met（黑色素瘤）、HCT-116（结直肠癌）和 SN12C（肾细胞癌）表现出主要抑制作用。在 IGR-N91 侧腹异种移植物中，与对照组（口服 30 mg/kg）相比，阿西替尼延迟了肿瘤生长 11.4 天，并将平均血管密度 (MVD) 降低至 21，而对照组为 49。 10-100 mg/kg 的阿西替尼可显着抑制 BT474 乳腺癌模型的生长并破坏肿瘤微血管。阿西替尼已在多种肿瘤中表现出单药活性，包括肾细胞癌、甲状腺癌、非小细胞肺癌和黑色素瘤。

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目前的研究旨在确定单独和联合治疗的病理生理后果，分别使用分割放疗加Axitinib/阿西替尼/AG-013736（一种优先抑制血管内皮生长因子受体的受体酪氨酸激酶抑制剂）。DU145人前列腺异种移植肿瘤分别用(a)载体单独治疗，(b)阿西替尼/Axitinib/AG-013736, (c) 5x2 Gy/wk放疗分数，或(d)联合治疗。使用免疫组织化学图像的自动图像处理来确定总血管和灌注血管间距，整体缺氧，周细胞/胶原覆盖，增殖和凋亡。与单药治疗相比，联合治疗产生了更高的肿瘤反应。血管密度逐渐下降，α -平滑肌肌动蛋白阳性周细胞覆盖率略有增加，整体肿瘤缺氧增加（与对照组相比）。尽管功能性血管内皮细胞凋亡选择性地增加，但总的血管和灌注血管的减少通常是成比例的，这表明联合治疗并不是专门针对功能性血管。这些结果反对AG-013736或联合治疗诱导的肿瘤血管功能正常化。血管消融表现为游离周细胞增多和IV型胶原空洞。尽管在3周的治疗中肿瘤氧合逐渐降低，但联合治疗仍然有效，肿瘤进展最小。[1] <人力资源> 阿西替尼/Axitinib在体内的靶调制。[2]
急性阿西替尼治疗迅速显著降低视网膜血管VEGFR-2磷酸化。第二次给药1小时后，与对照组织相比，视网膜VEGFR-2磷酸化降低了80%至90%（图3A，左）。给药后6和24 - 32 h， phospho-VEGFR-2水平分别恢复到对照组的50%和100%。在整个研究过程中，phospho-VEGFR-2水平与阿西替尼血浆浓度呈负相关。抑制VEGFR-2磷酸化的EC50值为0.49 nmol/L（或0.19 ng/mL，为血浆蛋白结合校正的未结合值）；图3A，右)。［2］

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阿西替尼/Axitinib还能抑制小鼠M24met异种移植肿瘤血管生成血管中VEGFR-2的磷酸化；M24met肿瘤分泌高VEGF-A，高度血管化，不表达功能性人VEGFR-2。与对照肿瘤相比，单次口服剂量的阿西替尼（100mg /kg）可显著抑制小鼠VEGFR-2磷酸化长达7小时（图3B）。下游ERK1/2的磷酸化也从相同的样品中测量。与对照组相比，早在给药后30分钟，在处理组织中就观察到ERK1/2信号的部分抑制，并且抑制至少持续7小时（图3C）。 [2]

阿西替尼/Axitinib快速抑制vegf诱导的小鼠皮肤血管通透性；小鼠的抑制作用呈剂量依赖性，与药物浓度直接相关（图3D）。药代动力学/药效学分析显示，未结合EC50为0.46 nmol/L（补充图S2）。在没有外源性VEGF-A刺激的MV522荷瘤小鼠皮肤中也显示出类似的抑制作用（数据未显示）。 [2]

综上所述，基于抑制血管VEGFR-2磷酸化和vegf介导的通透性所需的体内药理学浓度（Ctarget）为~ 0.5 nmol/L（未结合），在人体内转化为~ 100 nmol/L（或40 ng/mL，总浓度）的Ctarget。

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阿西替尼抑制小鼠肿瘤生长和血管生成。[2] < br > 阿西替尼抑制小鼠人异种移植肿瘤的生长（表2）。无论初始肿瘤大小、模型类型或植入部位如何，阿西替尼都会产生剂量依赖性生长延迟。重要的是，Axitinib在原位植入肿瘤如M24met（黑色素瘤）、HCT-116（结直肠癌）和SN12C（肾细胞癌）中表现出原发性肿瘤抑制和远处转移控制。MV522肿瘤模型显示出剂量依赖性生长抑制（图4A）。肿瘤生长抑制（TGI）与中心坏死、微血管密度（CD31染色）和Ki-67降低以及肿瘤中caspase-3升高相关(图4B；补充图S3)。无论肿瘤类型和RTK表达如何，在所有肿瘤类型中均观察到类似的效果。总之，阿西替尼治疗在不同类型的肿瘤中产生一致的抗肿瘤功效，这种活性与血管生成和肿瘤增殖的减少以及肿瘤凋亡的增加有关。

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ED50和cef的测定。[2]
采用MV522模型测定50%抗肿瘤疗效的有效剂量（ED50）。MV522肿瘤细胞不表达功能性VEGF或PDGF RTKs。此外，肿瘤生长速度适中，是评价阿西替尼抗血管生成相关ED50的理想模型。根据剂量与相应的TGI之间的关系（图4A）， ED50被确定为8.8 mg/kg每日两次（补充图S4）， 30 mg/kg每日两次的剂量水平对应于该模型中的ED70。通过评估TGI（图4A）与血浆浓度之间的关系，确定50% TGI对应的体内有效浓度（Ceff）范围。根据Cmin（谷浓度），估计未结合Ceff为0.28 nmol/L(或0.11 ng/mL；图4C，左)；根据Cave （24 h内平均浓度），计算出的未结合Ceff为0.85 nmol/L (0.33 ng/mL；图4C，右)。因此，Ceff值范围（0.28-0.85 nmol/L）与体内靶调制研究得出的Ctarget值（0.5 nmol/L）一致。 [2]

根据药代动力学、IC50值、Ctarget和Ceff进一步分析剂量与靶标抑制的关系。在一天的大部分时间里，10 mg/kg （ED50剂量）和30 mg/kg （ED70剂量）的血浆浓度均高于和接近Ctarget（对于vegfr）和Ceff（基于tgi）（图4D）。然而，这些剂量下的血浆浓度分别只允许PDGFR-β在细胞IC50上覆盖约5和12小时（体内研究中基于抗PDGFR的Ctarget或Ceff不可用）。基于这一分析，在MV522模型（VEGFR-null, PDGFR-null）中，10 mg/kg的抗肿瘤效果似乎主要来自于阿西替尼/Axitinib对血管VEGFR的抑制。在相同的模型中，注射阿西替尼获得了接近最大的抗肿瘤疗效（80%），这与稳态血浆浓度大于vegfr的细胞IC50而低于PDGFR-β的细胞IC50相关（数据未显示）。

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阿西替尼/Axitinib在多种肿瘤模型中增强化疗药物的抗肿瘤疗效。[2]
阿西替尼与多西他赛（在LLC和人类乳腺癌模型中）、卡铂（在人类卵巢癌模型中）或吉西他滨（在人类胰腺癌模型中）联合进行抗肿瘤疗效评估。选择这些模型是因为它们对小鼠的化疗只有低或中等敏感性。 [2]

在LLC模型中，Axitinib（10或30 mg/kg口服，每日2次）联合最大耐受剂量的多西他赛（40 mg/kg每周1次）增强了肿瘤生长延迟，定义为治疗组与对照组相比，到达终点的中位时间（TTE）的增加。TTE（疾病进展的衡量标准）定义为肿瘤大小= 1,500 mm3或动物因肿瘤负担或转移而死亡。多西他赛加10或30 mg/kg阿西替尼组的肿瘤生长延迟分别为54%或100%，而多西他赛单用和30和60 mg/kg阿西替尼组分别为9%、30%和60%（数据未显示）。与单独使用多西紫杉醇相比，多西紫杉醇联合阿西替尼显著延缓了疾病进展（图5A）。在MDA-MB-435/HAL-luc模型中，阿西替尼（30 mg/kg）和多西他赛(5 mg/kg；25%的小鼠最大耐受剂量)产生了强大的肿瘤生长延迟，这表明肿瘤生物发光信号的减少（补充图S5），与单独使用任何一种药物相比，完全应答者的数量增加（数据未显示）。 [2]

在耐吉西他滨的BxPC-3人胰腺癌模型中，研究了阿西替尼联合吉西他滨在不同给药方案下的抗肿瘤疗效（图5B）。在一项研究中，单药吉西他滨（140 mg/kg，每日1、4、7和10天，单周期或三周期治疗）或阿西替尼（30 mg/kg口服，每日2次）延缓肿瘤生长。在接受吉西他滨加阿西替尼治疗的组中，无论吉西他滨疗程的多少，“早期给药”（第1天，第5组）比“晚期给药”（在开始使用吉西他滨后第11天（第6组）或第16天（第7组）开始使用阿西替尼）产生更大的肿瘤生长延迟；在相同的阿西替尼方案下，三个吉西他滨治疗周期（8、9、10组）比一个吉西他滨治疗周期（5、6、7组）产生更大的疗效。两种药物的交替剂量（12组）或早期终止阿西替尼（11组）与共给药和连续每日两次给药阿西替尼相比，肿瘤生长延迟显著降低。

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阿西替尼联合贝伐单抗在M24met模型中具有显著的抗转移活性。[2]
研究了阿西替尼增强贝伐单抗在原位植入和自发转移的人黑色素瘤M24met肿瘤模型中的疗效；M24met肿瘤不表达功能性rtk（数据未显示）。最重要的是，在该模型中，贝伐单抗的配体循环人VEGF-A被发现占体内循环VEGF-A总量的95%。 [2]

在本研究中，阿西替尼/Axitinib（60mg /kg口服，每日2次）和贝伐单抗（5mg /kg静脉注射，2xqw）均表现出中等的单药抗淋巴结肿瘤转移活性。两种药物联合使用显著提高了基于淋巴结肿瘤体积减少（图5C）、抗血管生成（补充图S6）和转移性淋巴结肿瘤增殖指数（补充图S7）评估的抗转移疗效。此外，联合治疗通过减少进展时间（TTE）显著延长了动物生存期，单药治疗与对照组相比，TTE均为13天，联合治疗与对照组相比，TTE均为20天（图5D）。正如预期的那样，贝伐珠单抗或贝伐珠单抗联合阿西替尼，而不是阿西替尼单药治疗，显著降低了游离血浆人VEGF-A（数据未显示）。

生成的是过表达全长 VEGFR2、PDGFRβ 的猪主动脉内皮 (PAE) 细胞、Kit 和过表达鼠 VEGFR2 (Flk-1) 或 PDGFRα 的 NIH-3T3 细胞。为了制备 ELISA 捕获板，每孔 100 μL 2.5 μg/mL 抗 VEGFR2 抗体、0.75 μg/mL 抗 PDGFRβ 抗体、0.25 μg/mL 抗 PDGFRα 抗体、0.5 μg/mL 抗 KIT 抗体或 1.20 μg /mL 抗 Flk-1 抗体包被在 96 孔板上。接下来，使用 ELISA 测量 RTK 磷酸化。[2]

将 5 × 10⁴ 细胞接种到 96 孔板中，并将细胞培养一整天。将浓度范围为 1 nM 至 10 μM 的阿西替尼添加到细胞中。 72小时后使用MTS四唑底物测量细胞活力，并计算IC50值。

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三维球管形成试验[2]
将500个人微血管内皮细胞添加到含有0.24%甲基纤维素的EGM-2培养基中，并将其转移到u底96孔板上过夜，形成球体。收集约50个球体，与含有4%至8%胎牛血清（FBS）的2 mg/mL纤维蛋白原溶液（含或不含化合物）混合，在涂有凝血酶（5000单位/mL）的48孔板中。得到的三维纤维蛋白凝胶覆盖含有4%至8% FBS的EGM-2，并在37℃下孵育。每天在倒置显微镜下观察内皮管的形成。

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免疫沉淀和免疫印迹[2]
内皮细胞或肿瘤细胞在1% FBS （HUVEC）或0.1% FBS（肿瘤细胞）存在下饥饿18小时。加入阿西替尼/Axitinib，在1 mmol/L Na3VO4存在下，37°C孵育45 min。在细胞中加入适当的生长因子，5分钟后，用冷PBS冲洗细胞，在裂解缓冲液和蛋白酶抑制剂鸡尾酒中裂解。裂解物与免疫沉淀抗体在4°C下孵育过夜。抗体配合物与蛋白A小珠结合，SDS-PAGE分离上清液。使用Super Signal West硬脑膜试剂盒检测化学发光信号。

小鼠和大鼠：携带 400–600 mm³ M24met 异种移植瘤的小鼠接受单次阿昔替尼给药或 0.5% 羧甲基纤维素/水作为对照。采集血液和肿瘤组织样本进行 VEGFR-2 和药代动力学分析。采用 Bradford 比色法测定肿瘤组织中的总蛋白浓度。
\n阿昔替尼（30 mg/kg）腹腔注射两次至 6 日龄 Sprague-Dawley 大鼠体内。提取并裂解视网膜组织，处死动物，进行免疫沉淀和免疫印迹实验。使用 Alpha Imager 8800 进行密度分析，并使用 ECL-Plus 进行检测。\n

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\n\n体内靶点调控[2]
\n大鼠发育模型中 VEGFR-2 磷酸化抑制。对 6 日龄 Sprague-Dawley 大鼠进行两次腹腔注射阿昔替尼。处死动物，收集并裂解视网膜，并按上述方法进行免疫沉淀/免疫印迹实验。使用 ECL-Plus 进行检测，并使用 Alpha Imager 8800 进行密度分析。\n
\n异种移植瘤中 VEGFR-2 磷酸化抑制。对携带 M24met 异种移植瘤（400-600 mm3）的小鼠单次注射阿昔替尼或对照（0.5% 羧甲基纤维素/H2O）。采集血液和肿瘤组织样本用于药代动力学和 VEGFR-2 测定。采用 Bradford 比色法测定肿瘤组织中的总蛋白浓度。免疫沉淀/免疫印迹和 ELISA 的步骤如上所述。\n

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\n\n阿昔替尼 药代动力学 [2]
\n采用配备高效液相色谱系统（Agilent 1100）的三重四极杆质谱仪，在含 0.1% 甲酸的 60:40 水/乙腈等度条件下，定量测定血浆中阿昔替尼 的浓度。采用多反应监测模式（MRM）采集数据，阿昔替尼的质荷比（m/z）为 387.3→356.2，内标物阿昔替尼/AG-013736-d7 的质荷比（m/z）为 394.2→360.2。该方法可定量小鼠血浆中浓度范围为 1 至 1000 ng/mL 的阿昔替尼。采用线性梯形法则计算阿昔替尼血浆浓度-时间曲线下面积。\n

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\n\n在未接受任何治疗或荷瘤小鼠中进行皮肤血管通透性测定[2]
\n该测定方法参考 Miles 和 Miles 的方法并进行了一些修改。裸鼠（nu/nu 小鼠，n = 5-8）单次口服阿昔替尼，随后经尾静脉注射 30 μL 伊文思蓝染料。 30分钟后，将鼠源VEGF-A（400 ng溶于10 μL PBS）或PBS注射到动物肩部后方的躯干区域。4小时后，解剖蓝色区域周围的皮肤，并将其浸入1 mL甲酰胺中。将组织在56°C的甲酰胺中孵育24小时以提取伊文思蓝。通过测量620 nm处的吸光度来量化血管通透性。\n

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\n\n小鼠异种移植模型[2]
\n通常，将肿瘤细胞在不含FBS的培养基中皮下植入无胸腺小鼠的右侧腹部，但以下情况除外：将M24met细胞以50至100 μL的体积皮内注射到BALB/C重症联合免疫缺陷小鼠中； HCT-116-GFP 和 SN12C-GFP 肿瘤的原位移植方法已在其他文献中描述；A375 细胞在 10% Matrigel 存在下进行移植；LLC 肿瘤的接种方式为：使用悬浮细胞或通过套管针接种 2 × 2 mm 的活肿瘤碎片。除非另有说明，当平均肿瘤体积约为 100 mm³ 时，小鼠被随机分组（每组 9-12 只）。每周使用电子游标卡尺测量三次肿瘤体积，并根据以下公式计算：0.5 × [长度 × (宽度)²]。治疗通常持续 2 至 4 周，或直至肿瘤体积达到 1,500 mm³。使用 IVIS 成像系统进行肿瘤生物发光成像和定量分析的方法已在其他文献中报道。\n

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\n\n\n治疗。阿昔替尼（Axitinib/AG-013736）是一种血管内皮生长因子受体（VEGFR）的受体激酶抑制剂，在高剂量下也可抑制血小板生成素受体（PDGFR）（VEGFR-1的IC50为0.1 nmol/L，VEGFR-2为0.2 nmol/L，VEGFR-3为0.1–0.3 nmol/L，PDGFRβ为1.6 nmol/L；参考文献18）。该药物由辉瑞全球研发中心提供，每日一次灌胃给药，每次0.13 mL。对照组动物灌胃给予0.5%羧甲基纤维素药物载体。在未麻醉的小鼠身上进行照射，使用137Cs放射源，剂量率为2.4 Gy/min。小鼠被固定在塑料支架上，肿瘤所在的四肢伸出支架侧面的开口，以便进行局部照射。分次给药方案为每周五次，每次 2 Gy（周末除外）。联合治疗方案中，先进行放疗，约 4 小时内给予阿昔替尼/AG-013736。治疗 1、2 或 3 周后，处死小鼠，切除肿瘤，并用液氮快速冷冻。[1]

吸收、分布和排泄
服用5毫克阿昔替尼后，约需2.5至4.1小时达到最大血浆浓度。
阿昔替尼主要以原形经粪便排出（41%），其中12%为原形阿昔替尼。另有23%经尿液排出，其中大部分为代谢物。
分布容积为160升。
阿昔替尼的平均清除率为38升/小时。

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代谢/代谢物
阿昔替尼主要在肝脏代谢。 CYP3A4 和 CYP3A5 是主要的肝酶，而 CYP1A2、CYP2C19 和 UGT1A1 酶是次要的。

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生物半衰期
阿昔替尼的半衰期为 2.5 至 6.1 小时。

肝毒性
在阿昔替尼的大型临床试验中，血清转氨酶水平升高较为常见，发生率高达 25%。然而，超过正常值上限 (ULN) 5 倍以上的数值并不常见，发生率仅为 1% 至 2%。此外，在上市前研究或获批后的更大规模使用过程中，均未报告阿昔替尼引起临床可见的肝损伤病例。尽管如此，仍建议在阿昔替尼治疗期间定期监测肝功能。
可能性评分：E（尚未证实，但怀疑是引起临床可见肝损伤的原因）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无阿昔替尼在哺乳期使用的信息。由于阿昔替尼与血浆蛋白的结合率超过 99%，因此其在乳汁中的含量可能很低。制造商建议在阿昔替尼治疗期间以及最后一次给药后 2 周内停止母乳喂养。当阿昔替尼与阿维鲁单抗或帕博利珠单抗联合使用时，请参考 LactMed 的相关记录。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
阿昔替尼的血浆蛋白结合率很高，超过 99%，主要与白蛋白结合，其次是 α1-酸性糖蛋白。

[1]. The addition of AG-013736 to rractionated radiation improves tumor response without functionally normalizing the tumor vasculature. Cancer Res. 2007 Oct 15;67(20):9921-8.

[2]. Nonclinical antiangiogenesis and antitumor activities of axitinib (AG-013736), an oral, potent, and selective inhibitor of vascular endothelial growth factor receptor tyrosine kinases 1, 2, 3. Clin Cancer Res. 2008 Nov 15;14(22):7272-83.

[3]. Metabolic Symbiosis Enables Adaptive Resistance to Anti-angiogenic Therapy that Is Dependent on mTOR Signaling. Cell Rep. 2016 May 10;15(6):1144-60.

阿昔替尼是一种吲唑类化合物，其3位被2-(吡啶-2-基)乙烯基取代，6位被2-(N-甲基氨基羧基)苯硫基取代。用于一线全身治疗失败后的晚期肾细胞癌的治疗。它具有抗肿瘤活性，是一种酪氨酸激酶抑制剂和血管内皮生长因子受体拮抗剂。它属于吲唑类、吡啶类、芳基硫醚类和苯甲酰胺类化合物。
阿昔替尼是一种第二代酪氨酸激酶抑制剂，其作用机制是通过选择性抑制血管内皮生长因子受体（VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3）。通过这种作用机制，阿昔替尼可以阻断血管生成、肿瘤生长和转移。据报道，阿昔替尼的效力比第一代VEGFR抑制剂高50-450倍。阿昔替尼是一种吲唑衍生物，最常见的商品名为Inlyta®，有口服制剂。
阿昔替尼是一种激酶抑制剂。其作用机制是作为受体酪氨酸激酶抑制剂。
阿昔替尼是一种口服酪氨酸激酶抑制剂，选择性作用于血管内皮生长因子（VEGF）受体-1、-2和-3，用于治疗晚期肾细胞癌。阿昔替尼治疗通常会导致血清转氨酶短暂升高，但通常程度较轻且无症状。目前尚未发现阿昔替尼与临床上明显的急性肝损伤病例相关。
阿昔替尼是一种口服生物利用度高的酪氨酸激酶抑制剂。阿昔替尼抑制促血管生成细胞因子血管内皮生长因子（VEGF）和血小板衍生生长因子受体（PDGF），从而发挥抗血管生成作用。
一种苯甲酰胺和吲唑衍生物，可作为血管内皮生长因子受体的酪氨酸激酶抑制剂。它用于治疗晚期肾细胞癌。

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药物适应症
用于治疗肾细胞癌，并正在研究其在胰腺癌和甲状腺癌中的应用/治疗。
FDA标签
Inlyta适用于治疗既往接受舒尼替尼或细胞因子治疗失败的晚期肾细胞癌（RCC）成人患者。

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作用机制
阿昔替尼选择性阻断酪氨酸激酶受体VEGFR-1（血管内皮生长因子受体）、VEGFR-2和VEGFR-3。

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药效学
阿昔替尼通过抑制血管生成和阻断肿瘤生长来阻止癌症进展。

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总之，目前的研究结果表明，联合治疗并不能诱导肿瘤血管的功能正常化。在本肿瘤模型中，AG-013736及其联合疗法并未收紧周细胞，而是松解了周细胞与血管以及周细胞与基底膜之间的连接。治疗显著降低了总血管密度和功能性血管密度，但与正常化假说相反，肿瘤整体缺氧程度却逐渐加重。尽管氧合作用降低，但在为期3周的联合治疗中，肿瘤进展甚微，这很可能是由于持续的血管破坏和新血管生长受到抑制所致。需要开展进一步的研究，将这些测量结果推广到其他肿瘤模型，并确定其他给药方案是否也能增强治疗反应。[1]

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目的：阿昔替尼（AG-013736）是一种强效且选择性的血管内皮生长因子（VEGF）受体酪氨酸激酶1至3抑制剂，目前正处于实体瘤治疗的临床开发阶段。本文全面描述了阿昔替尼的体外特性和活性、体内抗血管生成作用、抗肿瘤疗效以及转化药理学数据。实验设计：在多种非临床模型中评估了阿昔替尼的效力、激酶选择性、药理活性和抗肿瘤疗效。结果：阿昔替尼以皮摩尔级的IC50值抑制VEGF受体（VEGFR）的细胞自磷酸化。对多种激酶和蛋白质组的筛选表明，阿昔替尼对VEGFR具有选择性。阿昔替尼阻断VEGF介导的内皮细胞存活、管状结构形成以及通过内皮型一氧化氮合酶、Akt和细胞外信号调节激酶的下游信号传导。每日两次口服给药后，阿昔替尼产生持续且剂量依赖性的抗肿瘤疗效，这与阻断VEGFR-2磷酸化、血管通透性、血管生成以及同时诱导肿瘤细胞凋亡有关。与单药治疗相比，阿昔替尼联合化疗药物或靶向药物可增强多种肿瘤模型中的抗肿瘤疗效。在人胰腺肿瘤异种移植模型中进行的剂量方案研究表明，阿昔替尼与吉西他滨同时给药，且不中断阿昔替尼的给药或缩短阿昔替尼的给药时间，可获得最佳的抗肿瘤疗效。非临床研究中预测的有效药物浓度与临床实际达到的浓度范围一致。尽管阿昔替尼在体外以纳摩尔级的效力抑制血小板衍生生长因子受体和KIT，但基于药代动力学/药效学分析，在目前的临床暴露水平下，阿昔替尼主要作为VEGFR酪氨酸激酶抑制剂发挥作用。结论：阿昔替尼对VEGFR的选择性和效力以及强大的非临床活性，使其在改善癌症治疗方面具有广阔的应用前景。 [2]

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使用 VEGF 抑制剂靶向肿瘤血管生成，在某些人类肿瘤和小鼠癌症模型中可观察到明显的疗效，但疗效短暂，受限于非常规的适应性/逃逸性耐药机制。在一种小鼠模型中，强效的血管生成抑制剂可诱导癌细胞围绕残余血管发生区室化重组。葡萄糖和乳酸转运蛋白 GLUT1 和 MCT4 在远端缺氧细胞中以 HIF1α 依赖的方式被诱导，表明糖酵解途径的启动。而靠近血管的肿瘤细胞则表达乳酸转运蛋白 MCT1 和 p-S6，后者反映了 mTOR 信号通路。正常氧合的癌细胞摄取并代谢乳酸，通过乳酸分解代谢增强谷氨酰胺代谢，从而上调 mTOR 信号通路。因此，在血管生成受到抑制的情况下，建立了一种代谢共生关系：缺氧癌细胞摄取葡萄糖并输出乳酸，而正常氧合的癌细胞摄取并分解乳酸。 mTOR 信号抑制会破坏这种代谢共生，并导致葡萄糖转运蛋白 GLUT2 上调。[3]

C22H18N4OS

386.47

386.12

C, 68.37; H, 4.69; N, 14.50; O, 4.14; S, 8.30

319460-85-0

Axitinib-13C,d3;1261432-00-1;Axitinib-d3;1126623-89-9

6450551

white to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

668.9±55.0 °C at 760 mmHg

213-215ºC

358.3±31.5 °C

0.0±2.0 mmHg at 25°C

1.728

4.15

95.97

2

4

5

28

557

0

O=C(C1=C(SC2=CC3=C(C(/C=C/C4=CC=CC=N4)=NN3)C=C2)C=CC=C1)NC

RITAVMQDGBJQJZ-FMIVXFBMSA-N

InChI=1S/C22H18N4OS/c1-23-22(27)18-7-2-3-8-21(18)28-16-10-11-17-19(25-26-20(17)14-16)12-9-15-6-4-5-13-24-15/h2-14H,1H3,(H,23,27)(H,25,26)/b12-9+

N-methyl-2-[[3-[(E)-2-pyridin-2-ylethenyl]-1H-indazol-6-yl]sulfanyl]benzamide

AG 013736; Axitinib; 319460-85-0; AG-13,736; axitinibum; C9LVQ0YUXG; UNII-C9LVQ0YUXG; NSC-757441; N-methyl-2-((3-((1E)-2-(pyridin-2-yl)ethenyl)-1H-indazol-6-yl)sulfanyl)benzamide; AG013736; Axitinib; AG-013736; Brand name: Inlyta

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (5.38 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 0.5% CMC: 30mg/mL

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配方 5 中的溶解度: 8.33 mg/mL (21.55 mM) in 20% HP-β-CD/10 mM citrate pH 2.0 (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 需要超声波并用H2O调节pH至3。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。