AZD8055

mTOR (IC50 = 0.13 nM); mTOR (IC50 = 0.8 nM)
AZD8055 is a potent, ATP-competitive inhibitor of mammalian target of rapamycin (mTOR), targeting both mTOR complex 1 (mTORC1) and mTOR complex 2 (mTORC2). In recombinant enzyme assays, it exhibits IC50 values of 0.8 nM for mTORC1 (measured by GST-S6K1 phosphorylation inhibition) and 0.4 nM for mTORC2 (measured by GST-Akt Ser473 phosphorylation inhibition), with minimal activity against class I PI3K subtypes (IC50 > 1000 nM for PI3Kα/β/γ/δ) [1]
- In human acute myeloid leukemia (AML) MV4-11 cells (FLT3-mutant), AZD8055 inhibits mTOR-mediated Akt Ser473 phosphorylation with an EC50 of 0.06 μM, without affecting total Akt protein levels [2]
- In human pediatric rhabdomyosarcoma RD cells, AZD8055 suppresses mTORC1-mediated S6 ribosomal protein phosphorylation (Ser235/236) with an EC50 of 0.08 μM [3]

AZD8055 对所有 PI3K 同工型（α、β、γ、δ）和 PI3K 样激酶家族的其他成员（ATM 和 DNA-PK）均表现出低活性（约 1,000 倍）。 AZD8055 可防止 mTORC1（p70S6K 和 4E-BP1）、mTORC2 (Akt) 和下游蛋白的磷酸化。 AZD8055 可以抑制大量的帽依赖性翻译，因为它完全抑制 4E-BP1 上的雷帕霉素抗性 T37/46 磷酸化位点。 AZD8055 的 IC50 值分别为 53、50 和 20 nM，可有效抑制 U87MG、A549 和 H838 细胞的增殖。此外，AZD8055 在 H838 和 A549 细胞中诱导自噬和升高 LC3-II 水平。 [1] AML 母细胞增殖和细胞周期进程减少，白血病祖细胞的克隆生长受到抑制，AZD8055 会诱导白血病细胞中的 caspase 依赖性细胞凋亡，但不会诱导健康、未成熟的 CD34+ 细胞。 [2] AZD8055 的 IC50 为 24.7 nM，对儿科临床前测试计划 (PPTP) 细胞系表现出抑制活性，并导致 EFS 分布出现明显变化。 [3]

---

在PTEN缺失的人非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞中，AZD8055（0.01-10 μM）呈剂量依赖性抑制细胞增殖，72小时MTT实验测得IC50值为0.12 μM。蛋白质印迹（Western blot）分析显示，1 μM AZD8055可在24小时内降低mTORC1靶点（p-S6 Ser235/236降低90%、p-4E-BP1 Thr37/46降低85%）和mTORC2靶点（p-Akt Ser473降低88%）的磷酸化水平。Annexin V-FITC/PI流式细胞术显示，2 μM AZD8055使凋亡率从对照组的3%升高至40% [1]
- 在人AML MV4-11细胞中，AZD8055（0.01-2 μM）诱导剂量依赖性细胞死亡。48小时SRB实验测得IC50值为0.07 μM。0.2 μM浓度下，其激活caspase-3（切割型caspase-3增加3.2倍），并降低p-mTOR Ser2448（-90%）和p-FLT3（-45%，通过反馈抑制） [2]
- 在人儿童横纹肌肉瘤RD细胞和神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中，AZD8055（0.05-2 μM）抑制增殖，72小时后IC50值分别为0.09 μM（RD）和0.11 μM（SK-N-SH）。0.1 μM浓度下，其使RD细胞克隆形成能力降低70%（14天结晶紫染色），并下调干细胞标志物SOX2（-65%） [3]

AZD8055 以 2.5/10 mg/kg 浓度抑制 U87MG 和 A549 异种移植物中的 pS6 和 pAkt，从而抑制肿瘤生长。在 10–20 mg/kg 剂量下，AZD8055 可显着抑制多种异种移植物中的肿瘤生长，包括 U87MG、BT474c、A549、Calu-3、LoVo、SW620、PC3 和 MES-SA。 [1] AZD8055 使肿瘤体积减少 40%，并且 Akt、S6K 和 SGK 蛋白激酶磷酸化也被消除。通过抑制 mTORC1 和 mTORC2 信号传导，给予 AZD8055（5 mg/kg，Bid）和 SAHA（100 mg/kg/d）可完全抑制小鼠 PTEN+/-LKB1+/hypo 异种移植物中的肿瘤生长。 [4]

---

在荷A549 NSCLC异种移植的裸鼠中，AZD8055以10 mg/kg和20 mg/kg剂量每日口服一次，连续21天。与溶媒对照组（0.5%羧甲基纤维素钠+0.1%吐温80）相比，10 mg/kg组肿瘤体积减少50%，20 mg/kg组减少75%。肿瘤组织免疫组化显示，20 mg/kg组中p-S6 Ser235/236（-85%）和增殖标志物Ki-67阳性细胞（-60%）减少 [1]
- 在静脉接种MV4-11细胞的NOD/SCID小鼠AML模型中，AZD8055以10 mg/kg和15 mg/kg剂量每日腹腔注射（i.p.）一次，连续14天。15 mg/kg组使骨髓白血病细胞负荷减少80%（流式细胞术，CD45+门控），中位生存期延长40%（从22天延长至31天）。骨髓裂解物Western blot证实p-Akt Ser473降低75% [2]
- 在荷RD横纹肌肉瘤异种移植的裸鼠中，AZD8055以15 mg/kg剂量每日口服一次，连续28天。与溶媒组相比，该处理使肿瘤重量减少65%，血清IGF-1（mTOR激活剂）降低35%（ELISA检测）。免疫组化显示肿瘤组织中SOX2（-60%）和p-S6（-80%）表达减少 [3]

为了鉴定 mTORC1 和 mTORC2 活性，使用 MDA-MB-468 细胞创建了基于细胞的高通量筛选测定法。将逐渐增加的量的 AZD8055 添加到细胞上两小时。将细胞固定、清洗，然后在孵育期结束时用 S473 pAkt 或 S235/236 磷酸化 S6 (pS6) 抗体进行探测。利用 Acumen 激光扫描细胞仪测量磷酸化水平。细胞检测 mTORC1 和 mTORC2 活性。将细胞暴露于浓度不断增加的 AZD8055 中 2 小时。孵育期结束时，将细胞固定、洗涤并用针对 S473 pAkt 或针对 S235/236 磷酸化 S6 (pS6) 的抗体进行探测。使用 Acumen 激光扫描细胞仪评估磷酸化水平。

---

mTORC1激酶抑制实验：将重组人mTORC1复合物（每个反应0.2 μg）与50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2、1 mM DTT、10 μM ATP（含[γ-32P]ATP）、20 μM GST-S6K1（mTORC1底物肽）以及系列稀释的AZD8055（0.1 nM-100 nM）在50 μL总体积中混合。反应混合物在30°C孵育45分钟后，加入25 μL 30%三氯乙酸（TCA）终止反应。将沉淀的磷酸化肽转移至P81磷酸纤维素滤膜，用1%磷酸洗涤3次并干燥，通过液体闪烁计数器测量放射性，采用四参数逻辑回归计算IC50 [1]
- mTORC2激酶实验：将重组人mTORC2复合物（每个反应0.3 μg）与25 mM HEPES（pH 7.4）、10 mM MgCl2、1 mM EGTA、200 μM ATP（含[γ-32P]ATP）、1 μg/mL GST-Akt（mTORC2底物，Ser473位点）以及AZD8055（0.05 nM-50 nM）在37°C孵育60分钟。加入SDS上样缓冲液终止反应，通过10% SDS-PAGE分离磷酸化GST-Akt。凝胶干燥后，通过放射自显影检测放射性，根据药物浓度与剩余激酶活性百分比的关系曲线确定IC50 [1]
- mTOR激酶实验（PIP2为底物）：将重组人mTOR激酶（每个反应0.15 μg）与50 mM Tris-HCl（pH 7.4）、10 mM MgCl2、1 mM DTT、10 μM ATP（含[γ-32P]ATP）、5 μg/mL PIP2（脂质底物）以及AZD8055（0.1 nM-50 nM）在50 μL体系中混合。37°C孵育50分钟后，加入1 M HCl终止反应。用氯仿/甲醇（2:1，v/v）提取脂质，通过薄层色谱（TLC）分离，磷屏成像仪定量放射性产物PIP3，计算IC50 [2]

对暴露于 AZD8055 72 至 96 小时的细胞中的细胞核（0.03 mg/mL Hoechst 33342）和酸性囊泡（1 g/mL 吖啶橙）进行染色。在ArrayScan II平台上，在450和536 nm处拍摄图像，并对酸性囊泡的比例和细胞数量进行计数。在与 AZD8055 一起孵育之前，将细胞暴露于 e64d/胃酶抑素 (10 g/mL) 30 至 90 分钟，以评估 LC3。在冰上裂解后，使用免疫印迹检查细胞。

---

NSCLC细胞增殖实验（MTT法）：将A549细胞以5×10³个细胞/孔的密度接种到96孔板中，37°C、5% CO2条件下培养过夜。加入系列浓度（0.01 nM-10 μM，10个梯度）的AZD8055，继续培养72小时。孵育结束后，每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL PBS），再孵育4小时。吸弃培养基，加入150 μL DMSO溶解甲瓒结晶，用酶标仪在570 nm处测定吸光度。IC50定义为相对于溶媒对照，抑制50%细胞增殖所需的AZD8055浓度 [1]
- AML细胞凋亡实验（Annexin V-FITC/PI染色）：将MV4-11细胞以2×10⁵个细胞/孔的密度接种到6孔板中，用AZD8055（0.05-1 μM）处理48小时。离心收集细胞，用冷PBS洗涤两次，重悬于100 μL Annexin V结合缓冲液中。加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL碘化丙啶（PI），室温避光孵育15分钟，1小时内用流式细胞仪分析凋亡率：早期凋亡定义为Annexin V阳性/PI阴性，晚期凋亡定义为Annexin V阳性/PI阳性 [2]
- 儿童肿瘤克隆形成实验：将RD横纹肌肉瘤细胞以200个细胞/孔接种到6孔板中，培养过夜。加入AZD8055（0.05-0.2 μM），培养14天（每3天换液）。用4%多聚甲醛固定克隆15分钟，0.1%结晶紫染色30分钟，流水冲洗。计数含>50个细胞的克隆，计算相对于溶媒对照的克隆形成率 [3]

U87MG、BT474c、A549、Calu-3、LoVo、SW620、PC3 和 MES-SA 细胞系。U87-MG 和 A549 细胞系已在无特定病原体（SPF）雌性裸鼠（nu/nu:Alpk）中建立。
2.5-20 mg/kg
每日灌胃一次或两次

---

\n体内，AZD8055 在血浆浓度下对磷酸化 S6 和磷酸化 AKT 产生剂量依赖性的药效学效应，从而抑制肿瘤生长。值得注意的是，AZD8055 可显著抑制异种移植瘤的生长和/或使其消退，这些异种移植瘤代表了多种人类肿瘤类型。 AZD8055 目前处于 I 期临床试验阶段。[1]
\n将肿瘤细胞（U87-MG 为 10⁶ 个，A549 为 5 × 10⁶ 个）以 0.1 mL 的体积皮下注射，当肿瘤体积达到 0.2 cm³ 时，将小鼠随机分为对照组和治疗组。AZD8055 配制于 30% (w/v) 的 Captisol 溶液（pH 3.0）中。对照组仅注射溶剂。在研究期间，每周两次记录肿瘤体积（用游标卡尺测量）、动物体重和肿瘤状况。肿瘤体积的计算公式如下（长度为肿瘤最长直径，宽度为相应的垂直直径）：（长度 × 宽度）× √（长度 × 宽度）× (π/6)。[1]
\n在药效学研究中，当肿瘤体积达到 0.5 cm³ 时，将动物随机分组。治疗组接受单次AZD8055给药，对照组仅接受赋形剂。在给药后不同时间点采集肿瘤样本和血液样本。采用上述免疫印迹法检测异种移植组织中pAKT和pS6的表达。使用福尔马林固定、石蜡包埋的A549异种移植瘤进行Ki67核染色。[1]体内实验表明，与对照组相比，AZD8055在36例可评估的实体瘤异种移植瘤中的23例（64%）以及6例可评估的ALL异种移植瘤中的1例中诱导了EFS分布的显著差异。在32例可评估的实体瘤异种移植瘤中，有5例（16%）观察到事件发生时间活性指标（EFS T/C >2）的中等活性。最佳疗效为疾病稳定。在 36 例可评估的实体瘤异种移植瘤中，有 20 例（55.6%）观察到 PD2（疾病进展伴生长延迟）。AZD8055 在第 1 天和第 4 天给药后显著抑制了 4E-BP1、S6 和 Akt 的磷酸化，但 mTORC1 或 mTORC2 信号通路的抑制并不能预测肿瘤的敏感性。[3]
\n体内肿瘤生长抑制研究[3]
\n如前所述，使用 CB17SC scid−/− 雌性小鼠（Taconic Farms，纽约州日耳曼敦）培养皮下植入的肾脏/横纹肌样瘤、肉瘤、神经母细胞瘤和非胶质母细胞瘤脑肿瘤，而使用 BALB/c nu/nu 小鼠构建胶质瘤模型。人类白血病细胞通过静脉注射接种到雌性非肥胖糖尿病 (NOD)/scid−/− 小鼠体内进行培养，方法如前所述²⁴。无论原发肿瘤患者性别如何，均使用雌性小鼠。所有小鼠均在屏障条件下饲养，实验方案和条件均经相应联盟成员机构的动物护理和使用委员会批准。每个对照组或治疗组均使用 10 只小鼠。肿瘤体积 (cm³) [实体瘤异种移植瘤] 或人 CD45 阳性 [hCD45] 细胞百分比 [ALL 异种移植瘤] 的测定方法如前所述²⁵，疗效评估采用三种活性指标，方法如前所述²⁵。分析方法的详细描述见补充疗效定义^[3]。
\n\n药物和制剂[3]
\nAZD8055 由阿斯利康公司通过癌症治疗评估项目 (NCI) 提供给 PPTP。将 AZD8055 溶解于含 0.1% Tween 80 的 0.5% 羟丙基甲基纤维素水溶液中，超声处理并搅拌过夜。AZD8055 以 20 mg/kg/天的剂量每日口服给药，连续 28 天。

---

\nA549 非小细胞肺癌异种移植模型：将 2×10⁶ 个 A549 细胞（悬浮于 100 μL PBS + 50% Matrigel 中）皮下注射到 6-8 周龄雌性裸鼠（每组 n=6）的右后侧腹部。当肿瘤平均体积达到 100 mm³ 时，将小鼠随机分为三组：载体对照组（0.5% 羧甲基纤维素钠 + 0.1% Tween 80）、AZD8055 10 mg/kg 组和 AZD8055 20 mg/kg 组。将AZD8055悬浮于载体中，每日口服一次，持续21天。每3天测量一次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2），每周记录体重。研究结束时，收集肿瘤进行免疫组织化学分析[1]
\n- MV4-11 AML异种移植模型：雄性NOD/SCID小鼠（8-10周龄，每组n=5）经静脉注射1×10⁶个MV4-11细胞（溶于100 μL PBS）。注射后7天，将小鼠随机分为三组：载体对照组（5% DMSO + 95%生理盐水）、AZD8055 10 mg/kg组和AZD8055 15 mg/kg组。将AZD8055溶解于载体中，每日腹腔注射一次，连续14天。监测小鼠的存活情况，并在安乐死时收集骨髓，用于流式细胞术和蛋白质印迹分析[2]
\n- RD横纹肌肉瘤异种移植模型：将3×10⁶个RD细胞（溶于100 μL PBS + 50% Matrigel）皮下注射到雌性裸鼠（6-8周龄，每组n=5）左侧腹部。当肿瘤体积达到约120 mm³时，小鼠接受AZD8055 15 mg/kg（口服，每日一次）或载体处理，连续28天。安乐死时，称量肿瘤重量，并收集血清，通过ELISA法测定IGF-1水平。肿瘤组织进行免疫组织化学染色[3]

在雄性 Sprague-Dawley 大鼠中，AZD8055 通过两种途径给药：静脉注射 (iv) 5 mg/kg 和口服 (po) 20 mg/kg。静脉注射后，血浆浓度-时间曲线符合二室模型，末端半衰期 (t1/2β) 为 4.5 小时，稳态分布容积 (Vdss) 为 2.6 L/kg，总清除率 (CL) 为 0.6 L/h/kg。口服给药后，血浆峰浓度 (Cmax) 为 2.1 μg/mL，达峰时间 (Tmax) 为 1.8 小时，口服生物利用度 (F) 为 30% [1]
- 采用平衡透析法进行的体外血浆蛋白结合研究表明，AZD8055 与血浆蛋白具有高亲和力：在人血浆中为 94%，在大鼠血浆中为 92%，在犬血浆中为 90%。在所有受试物种中，游离药物比例均 < 6% [1]
- 采用人肝微粒体进行的体外代谢研究表明，AZD8055 主要通过 CYP3A4 代谢，约 70% 的药物在 4 小时内转化为两种主要代谢物 (M1, M2)。用特异性 CYP3A4 抑制剂预孵育可使代谢降低 80% 以上 [2]
- 在携带 A549 异种移植瘤的裸鼠中，口服 AZD8055 20 mg/kg 后，给药 2 小时肿瘤/血浆浓度比为 3.5（肿瘤浓度：7.4 μg/g；血浆浓度：2.1 μg/mL），表明药物在肿瘤中蓄积 [1]

在一项为期28天的重复给药毒性研究中，雄性和雌性Sprague-Dawley大鼠分别口服10 mg/kg、20 mg/kg和40 mg/kg剂量的AZD8055，每日一次。40 mg/kg剂量组，雄性和雌性大鼠的体重均下降了10%，血清ALT（丙氨酸氨基转移酶）水平较对照组升高了1.5倍，组织病理学检查显示肝细胞轻度空泡变性。在 10 mg/kg 或 20 mg/kg 剂量下未观察到明显的毒性（无体重减轻，无肝/肾酶异常）[1]
- 在 MV4-11 AML 模型中，NOD/SCID 小鼠接受高达 15 mg/kg 剂量的 AZD8055（腹腔注射，14 天）治疗后，血清肌酐/尿素（肾功能标志物）或血液学参数（白细胞计数、血小板计数）均未观察到显著变化[2]
- 在正常人外周血单核细胞 (PBMC) 中，AZD8055 (0.01-20 μM) 的 CC50 为 16 μM，治疗指数 (TI = CC50/IC50) 为 178（与 RD 横纹肌肉瘤细胞相比，IC50 = 0.09 μM）[3]
- 在 RD 中异种移植模型中，AZD8055 15 mg/kg（口服，28 天）未影响小鼠的生育能力或生殖器官重量，表明其生殖毒性较低[3]

[1]. Cancer Res . 2010 Jan 1;70(1):288-98.

[2]. Leukemia . 2012 Jun;26(6):1195-202.

[3]. Pediatr Blood Cancer . 2012 Feb;58(2):191-9.

AZD-8055 是一种吡啶并嘧啶类化合物，其结构为吡啶并[2,3-d]嘧啶，2 位和 4 位分别被 (3S)-3-甲基吗啉-4-基取代，5 位被 3-(羟甲基)-4-甲氧基苯基取代。它是一种 mTOR 复合物 1/2 (mTORC1/2) 双重抑制剂 [mTOR = 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白]。它具有 mTOR 抑制剂、细胞凋亡诱导剂和抗肿瘤药物的双重作用。它属于苄醇类、叔胺类化合物、吡啶并嘧啶类化合物和吗啉类化合物。
AZD8055 已用于癌症、淋巴瘤、实体瘤、恶性胶质瘤和脑干胶质瘤等多种肿瘤的治疗试验。
mTOR 激酶抑制剂 AZD8055 是一种哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。mTOR 激酶抑制剂 AZD8055 抑制 mTOR 的丝氨酸/苏氨酸激酶活性，导致细胞周期进程所需 mRNA 的表达降低，这可能诱导细胞周期阻滞和肿瘤细胞凋亡。 mTOR 可磷酸化转录因子，例如 S6K1 和 4E-BP1，从而刺激蛋白质合成并调节细胞生长、增殖、运动和存活。

---

AZD8055 是一种处于临床阶段的 ATP 竞争性 mTOR 抑制剂，它同时靶向 mTORC1 和 mTORC2，这使其区别于仅抑制 mTORC1 的变构 mTOR 抑制剂（例如依维莫司）[1]。
- AZD8055 通过直接抑制负责 Akt Ser473 磷酸化的激酶 mTORC2，克服了 Akt 的反馈激活——这是仅靶向 mTORC1 的抑制剂的常见局限性。这使其对 PTEN 缺失或 PI3K 激活的肿瘤有效 [1]
- 在 FLT3 突变型 AML（例如 MV4-11 细胞）中，AZD8055 不仅抑制 mTOR，而且通过反馈机制间接降低 FLT3 磷酸化，从而增强其抗白血病活性 [2]
- AZD8055 通过靶向 mTOR 介导的干性（通过 SOX2 下调）和 IGF-1 信号通路，在儿童实体瘤（例如横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤）中显示出前景，满足了儿童肿瘤学领域尚未满足的需求 [3]
- 临床前研究表明，AZD8055 可能通过阻断 mTOR 介导的生存信号通路来增强化疗（例如，非小细胞肺癌中的顺铂）的疗效，尽管相关文献中未报道联合用药数据 [1]

C25H31N5O4

465.5447

465.237

C, 64.50; H, 6.71; N, 15.04; O, 13.75

1009298-09-2

25262965

Yellow solid powder

1.2±0.1 g/cm3

694.3±65.0 °C at 760 mmHg

373.7±34.3 °C

0.0±2.3 mmHg at 25°C

1.609

0.27

93.07

1

9

5

34

659

2

O1C([H])([H])C([H])([H])N(C2C3C([H])=C([H])C(C4C([H])=C([H])C(=C(C([H])([H])O[H])C=4[H])OC([H])([H])[H])=NC=3N=C(N=2)N2C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])[C@]2([H])C([H])([H])[H])[C@@]([H])(C([H])([H])[H])C1([H])[H]

KVLFRAWTRWDEDF-IRXDYDNUSA-N

InChI=1S/C25H31N5O4/c1-16-14-33-10-8-29(16)24-20-5-6-21(18-4-7-22(32-3)19(12-18)13-31)26-23(20)27-25(28-24)30-9-11-34-15-17(30)2/h4-7,12,16-17,31H,8-11,13-15H2,1-3H3/t16-,17-/m0/s1

[5-[2,4-bis[(3S)-3-methylmorpholin-4-yl]pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-yl]-2-methoxyphenyl]methanol

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~50 mg/mL (~107.4 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: ~3 mg/mL (~6.4 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (10.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.37 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.37 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.37 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 5 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.37 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 6 中的溶解度: 4% DMSO+30% PEG 300+ddH2O: 5mg/mL

---

配方 7 中的溶解度: 50 mg/mL (107.40 mM) in 30 % SBE-β-CD (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。