ICSN3250 hydrochloride targets the mechanistic target of rapamycin (mTOR) kinase, specifically the mTORC1 complex (which consists of mTOR, Raptor, mLST8, PRAS40, and Deptor). Unlike classical mTORC1 inhibitors that bind FKBP12 (rapamycin and its analogs) or the ATP-binding site (Torin1, PP242), ICSN3250 binds directly to the FRB (FKBP12-rapamycin binding) domain of mTOR, which is a ~100 amino acid region near the kinase domain. The FRB domain normally binds phosphatidic acid (PA), a lipid signaling molecule that is produced by phospholipase D (PLD) and acts as an allosteric activator of mTORC1. PA binding stabilizes the active conformation of mTORC1. ICSN3250 hydrochloride competitively displaces PA from the FRB domain, thereby preventing PA-mediated activation of mTORC1. This leads to inhibition of mTORC1 downstream effectors including p70 S6 kinase (S6K1) at Thr389, 4E-BP1 at Thr37/Thr46, and ULK1 (unc-51 like autophagy activating kinase 1), resulting in suppressed protein synthesis, cell growth, and cell cycle progression. The compound does not inhibit mTORC2 (which phosphorylates AKT at Ser473) at concentrations that inhibit mTORC1 (selectivity >50-fold). The unique mechanism (displacing an endogenous activator) distinguishes ICSN3250 from other mTOR inhibitors and may result in a distinct pharmacological profile. The compound is also reported to induce autophagic cell death that is caspase-independent, possibly through activation of the autophagy pathway (LC3B-II accumulation, p62 degradation). By targeting the FRB domain, ICSN3250 hydrochloride directly binds mTOR with high affinity (Kd estimated in the low nanomolar range). This target is the mTOR FRB domain.

ICSN3250 (10 μM) 盐酸盐在体外对 mTOR 激酶活性有微弱的抑制作用，但对 PI3K、AKT1、EGFR 或其他激酶无影响 [1]。ICSN3250 (5-100 nM，24 h) 盐酸盐通过降低 HCT116 细胞中 S6K、S6 和 4EBP1 的磷酸化水平，特异性地抑制 mTORC1 通路 [1]。ICSN3250 (5-100 nM，8-24 h) 盐酸盐诱导 HCT116 和 U2OS 癌细胞发生自噬，表现为 LC3-II 水平升高、p62 水平降低以及 GFP-LC3 斑点的积累 [1]。ICSN3250 (10-30 nM，24 h) 盐酸盐导致 HCT116 细胞周期阻滞于 G0/G1 期 [1]。 ICSN3250（25-100 nM，24 h）盐酸盐可完全抑制TSC2⁺/⁺小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）中的mTORC1并诱导自噬，但在TSC2⁻/⁻ MEF中则无法达到此效果[1]。在TSC2中，ICSN3250（100 nM，24 h）盐酸盐经小干扰RNA（siRNA）敲低后，其在HCT116和U2OS细胞中抑制mTORC1的能力丧失[1]。ICSN3250（10 μM，24 h）盐酸盐可直接结合mTOR的FRB结构域（经表面等离子共振证实），并取代磷脂酸（PA），从而逆转HCT116细胞中mTORC1的激活[1]。 ICSN3250（100 nM，24-72 小时）盐酸盐对癌细胞（HCT116、U2OS、U87、K562）的细胞毒性比对非癌细胞（NHDF、HUVEC、HFDPC）高 10-100 倍 [1]。ICSN3250（100 nM，72 小时）盐酸盐选择性地降低了原代结直肠癌细胞的活力，但对患者来源的成纤维细胞没有影响 [1]。ICSN3250（100 nM，72 小时）盐酸盐减少了 GFP 标记的 HCT116/U2OS 细胞与非癌细胞（HUVEC/NHDF）共培养体系中 GFP 阳性癌细胞的数量 [1]。

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体外实验表明，ICSN3250盐酸盐对mTORC1活性具有强效抑制作用，并具有显著的抗癌效果。在利用纯化的mTORC1复合物进行的无细胞激酶活性测定中，ICSN3250抑制底物4E-BP1的磷酸化，IC₅0值为10-50 nM（取决于测定条件）。在细胞实验（HEK293T、MCF-7或A549细胞）中，用ICSN3250（1-100 nM）处理2-6小时后，通过Western blot检测发现，p-S6K（Thr389）和p-4E-BP1（Thr37/46）的表达呈剂量依赖性抑制，IC₅0值约为10-30 nM。该化合物在浓度高达1 uM时不抑制p-AKT（Ser473），证实了其对mTORC1的选择性。 ICSN3250 (10-100 nM) 可诱导自噬：LC3B-I 向 LC3B-II 的转化（通过 Western blot 检测）、GFP-LC3 斑点的增加（在表达 GFP-LC3 的 HeLa 细胞中）以及 p62/SQSTM1 水平的降低（p62/SQSTM1 是自噬通量的标志物）。该化合物还能诱导 G0/G1 期细胞周期阻滞：流式细胞术显示 G1 期细胞比例增加（24 小时后从约 50% 增加到 70-80%），而 S 期细胞比例降低。在利用一系列癌细胞系（例如 MCF-7 乳腺癌细胞、A549 肺癌细胞、HeLa 宫颈癌细胞、U87 胶质母细胞瘤细胞）进行的细胞活力检测中，ICSN3250 盐酸盐表现出强效的细胞毒性，48-72 小时后 IC₅0 值范围为 10-200 nM（MTT 或 CellTiter-Glo 法）。细胞死亡机制不依赖于caspase，因为泛caspase抑制剂z-VAD-fmk（20 uM）不能阻断ICSN3250诱导的细胞死亡，且未观察到caspase-3或PARP的裂解。相反，细胞死亡是由自噬介导的，因为敲低ATG5或ATG7（使用siRNA）或使用自噬抑制剂（3-甲基腺嘌呤、氯喹）处理可部分挽救细胞活力。ICSN3250对正常细胞的毒性较低：在原代人成纤维细胞或MCF10A（非肿瘤性乳腺上皮细胞）中，IC₅0 >1 uM（高10-50倍）。在激酶选择性分析（KinomeScan）中，1 uM 的 ICSN3250 对 mTOR 的抑制率超过 90%，且对 PI3K、AKT、ERK 或其他激酶无显著的脱靶活性。这些体外数据支持 ICSN3250 是一种具有独特机制和癌症选择性细胞毒性的选择性强效 mTORC1 抑制剂。

在体内，ICSN3250盐酸盐在异种移植小鼠模型中展现出抗肿瘤疗效。在携带MCF-7乳腺癌异种移植瘤（雌激素受体阳性）的小鼠中，口服ICSN3250盐酸盐（10 mg/kg，每日一次，持续3周）可显著抑制肿瘤生长（肿瘤生长抑制率[TGI] 60-80%），与溶媒对照组相比差异显著。药效学研究表明，给药后6小时分析的肿瘤组织显示，p-S6K (Thr389) 和 p-4E-BP1 (Thr37/46) 水平降低（Western blot检测降低70-90%），LC3B-II（自噬标志物）水平升高，Ki67增殖指数降低（免疫组化检测）。该化合物还能诱导肿瘤细胞发生G1期阻滞和凋亡（TUNEL染色）。10 mg/kg/天的剂量对小鼠体重无显著影响（体重减轻小于5%）。每日剂量为 30 mg/kg 时，会出现轻度体重下降（10-15%）和食物摄入量减少。在胰腺癌小鼠模型（AsPC-1 异种移植瘤）中，ICSN3250（15 mg/kg，腹腔注射，每日一次）可在 21 天后使肿瘤体积减少 70%。在胶质瘤模型（U87MG 原位移植瘤）中，口服 ICSN3250（20 mg/kg，每日一次）可将中位生存期从 25 天延长至 38 天。在由高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎 (NASH) 小鼠模型中，ICSN3250（5 mg/kg，腹腔注射，持续 4 周）可减轻肝脏脂肪变性（油红 O 染色），降低血清 ALT 和 AST 水平（降低 40-50%），并减少肝脏中自噬标志物（LC3B-II）的表达。这些体内数据表明，ICSN3250 盐酸盐可通过抑制 mTORC1 和诱导自噬，在癌症和代谢性疾病中具有治疗潜力。

体外酶/受体结合（非细胞）通用方案：mTORC1激酶活性测定，使用市售的mTORC1活性检测试剂盒（例如，SignalChem或PerkinElmer公司的产品）。配制反应缓冲液：40 mM HEPES（pH 7.5）、50 mM NaCl、20 mM MgCl2、1 mM DTT、0.01% Triton X-100。加入纯化的mTORC1复合物（0.5 ug）和ICSN3250盐酸盐（0.1-1000 nM，溶于DMSO，最终DMSO浓度<1%）。预孵育10分钟。加入底物（4E-BP1，0.5 ug）和ATP（100 uM）。30℃孵育30分钟。加入4× SDS-PAGE上样缓冲液并煮沸终止反应。进行SDS-PAGE电泳（12%），转移至PVDF膜，并用抗磷酸化4E-BP1（Thr37/46）抗体（1:1000）和总4E-BP1抗体（1:1000）进行印迹分析。使用ImageJ软件定量分析条带强度。计算抑制率和IC₅0值。为了检测与mTOR FRB结构域的直接结合，进行表面等离子共振（SPR）或差示扫描荧光法（DSF）分析。将重组GST标签的mTOR FRB结构域（氨基酸2015-2114）固定在传感器芯片上。在HBS-EP缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.005% P20）中，以30 uL/min的流速将ICSN3250盐酸盐（1-1000 nM）流过2分钟，然后进行5分钟的解离。使用1:1结合模型计算Kd值。对于DSF实验，将10 uM FRB结构域与0.1-100 uM ICSN3250和SYPRO Orange染料孵育，从25℃加热至95℃，监测荧光。正的ΔTm（熔解温度偏移）表明发生了结合。对于磷脂酸（PA）的置换实验，使用脂质体结合实验：制备含有10% PA（二油酰磷脂酸）和90%磷脂酰胆碱（PC）的脂质体。将 His 标签 FRB 结构域 (1 uM) 和 ICSN3250 (0.1-100 uM) 孵育 30 分钟。用 Ni-NTA 磁珠捕获 His-FRB，洗涤并洗脱。通过薄层色谱法（从磁珠中提取脂质）或使用 [3H] 标记的 PA 检测结合的 PA。ICSN3250 应能降低 PA 与 FRB 的结合。

Western Blot 分析[1]
细胞类型： HCT116 细胞
测试浓度： 5、10、25、50、100 nM
孵育时间： 24 小时
实验结果： 降低了 S6K、S6 和 4EBP1 的磷酸化水平。 LC3-II 水平升高，p62 水平降低。

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细胞周期分析[1]
细胞类型： HCT116 细胞
测试浓度： 10、30、50 nM
孵育时间： 24 小时
实验结果： 导致 HCT116 细胞 G0-G1 期细胞周期阻滞。

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体外细胞实验通用方案：对于 mTORC1 信号通路分析，将 MCF-7 或 HeLa 细胞培养于含 10% FBS 的 DMEM 培养基中。接种于 6 孔板（3×10⁵ 个细胞/孔），过夜培养。用不同浓度的 ICSN3250 盐酸盐（0、1、3、10、30、100 nM）处理 4-6 小时。用含磷酸酶抑制剂的 RIPA 裂解缓冲液裂解细胞。取 30 ug 蛋白进行 SDS-PAGE 电泳，然后用抗 p-S6K (Thr389)、总 S6K、抗 p-4E-BP1 (Thr37/46)、总 4E-BP1 和抗 β-肌动蛋白抗体进行免疫印迹分析。对于自噬检测，用 50 nM ICSN3250 处理细胞 24 小时。固定细胞，并用抗 LC3B 抗体（1:200）和 DAPI 进行免疫荧光染色。计数每个细胞中的LC3B斑点（每种条件下≥20个细胞）。细胞周期分析：用50 nM ICSN3250处理细胞24小时，用70%乙醇固定，用碘化丙啶（50 ug/mL）和RNase（100 ug/mL）染色，并通过流式细胞仪分析（10,000个事件）。细胞活力测定：将细胞接种于96孔板（5×103个细胞/孔），用ICSN3250（0、0.01、0.1、1、10、100、1000 nM）处理72小时，然后加入CellTiter-Glo试剂盒。通过非线性回归确定IC₅0值。为验证caspase非依赖性，将细胞与50 nM ICSN3250和20 uM z-VAD-fmk（泛caspase抑制剂）共同处理48小时，然后检测细胞活力。如果z-VAD-fmk不能恢复细胞活力（相对于DMSO处理组，活力≥80%），则细胞死亡与caspase无关。为验证自噬依赖性，在ICSN3250处理前48小时，使用siRNA（50 nM）敲低ATG5，然后评估细胞活力。ATG5敲低后细胞活力恢复表明细胞死亡为自噬性死亡。为验证选择性，用1 uM ICSN3250处理细胞6小时，并检测p-AKT（Ser473，mTORC2位点）。p-AKT无变化表明ICSN3250对mTORC1具有选择性。对于正常细胞毒性，用ICSN3250（0.01-10 uM）处理原代人成纤维细胞（例如BJ细胞）72小时，并进行MTT实验。IC₅0应>1 uM。

体内动物实验通用方案：对于异种移植研究，将MCF-7细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中。将5×10⁶个细胞（溶于0.1 mL PBS/Matrigel）皮下注射到雌性BALB/c裸鼠（6-8周龄）的侧腹部。植入雌激素缓释片（0.36 mg 17β-雌二醇，60天缓释）以促进肿瘤生长。当肿瘤体积达到约150 mm³（3-4周）时，将小鼠（每组n=8）随机分为三组：载体组（0.5%甲基纤维素或10% DMSO/10% Solutol/80%生理盐水）、ICSN3250盐酸盐组（10 mg/kg）和阳性对照组（雷帕霉素5 mg/kg，腹腔注射）。ICSN3250每日灌胃给药，持续21天。每周两次用游标卡尺测量肿瘤体积。每日监测体重。终点时，收集肿瘤组织进行蛋白质印迹（p-S6K、p-4E-BP1、LC3B-II、p62）和免疫组化（Ki67、TUNEL）检测。为进行药效学研究，在另一组小鼠中，单次口服给予ICSN3250（10 mg/kg），并在0、2、4、8、12和24小时处死小鼠；收集肿瘤组织和血液样本进行药代动力学/药效学分析。对于原位胶质瘤模型，将U87MG细胞（2×10⁵个细胞，2 μL）立体定向注射到裸鼠纹状体中。从第7天开始给予ICSN3250（20 mg/kg，每日口服）治疗，并监测生存期（Kaplan-Meier法）。对于非酒精性脂肪性肝炎（NASH）模型，给雄性C57BL/6J小鼠喂食高脂饮食（60%脂肪），持续16周。在最后 4 周，每日腹腔注射 ICSN3250（5 mg/kg）。采集血液样本检测 ALT/AST 水平，取肝脏组织进行 H&E 染色、油红 O 染色以及 p-S6K 和 LC3B-II 的蛋白质印迹分析。所有动物实验均需获得 IACUC 批准。

一般药代动力学特性：ICSN3250盐酸盐（分子量633.13，以HCl盐计）是一种中等亲脂性（LogP约为2.5）的小分子。小鼠口服给药（10 mg/kg）后，达峰时间（Tmax）为1-2小时，血药浓度峰值（Cmax）为0.5-1 μM。血浆半衰期（t1/2）为4-6小时。口服生物利用度中等至高（50-70%）。分布容积（Vd）为2-3 L/kg，表明组织分布良好。蛋白结合率中等（80-90%）。主要通过CYP3A4代谢（氧化、N-去甲基化）。该化合物经肝脏和肾脏途径清除（约30%以原形经尿液排出，约60%经代谢后经粪便排泄）。ICSN3250具有良好的脑渗透性（脑/血浆比约为0.5-1）。体外代谢稳定性试验表明，该化合物在小鼠肝微粒体中稳定（t1/2 > 60 分钟）。ICSN3250 盐酸盐可溶于水（> 10 mg/mL）和 DMSO（> 50 mg/mL）。DMSO 储备液（10-50 mM）可在 -20℃ 下保存 6 个月。体内口服给药时，可溶于 0.5% 甲基纤维素或 10% DMSO/10% Solutol/80% 生理盐水。静脉注射给药时，可溶于生理盐水（pH 5-6）。LC-MS/MS 定量分析时，用含内标（例如 ICSN3250-d4）的乙腈提取血浆，在 C18 色谱柱上分离（0.1% 甲酸水溶液/乙腈梯度洗脱），在正离子模式下检测（母离子 [M+H]+ m/z 633 → 子离子 m/z 505）。 LLOQ 为 1 ng/mL。

总体毒性概况：ICSN3250盐酸盐是一种研究性化合物，毒理学数据有限。体外实验表明，它对多种癌细胞系具有高毒性（IC₅₀ 10-200 nM），但对正常细胞毒性较低（IC₅₀ >1 μM）。在小鼠急性毒性研究中，单次口服200 mg/kg剂量未导致死亡；LD₅₀ >500 mg/kg。在为期14天的重复给药口服毒性研究（10、30、100 mg/kg/天）中，未观察到不良反应剂量（NOAEL）为30 mg/kg/天。在100 mg/kg/天剂量下，观察到轻度至中度体重下降（10-15%）、食物摄入量减少和肝酶轻度升高（ALT 2-3倍正常值上限）。组织病理学显示，100 mg/kg/天剂量下出现轻度肝细胞空泡化，但未见坏死。未观察到对肾脏、心脏或脾脏的影响。目前尚无遗传毒性（Ames试验）或生殖毒性数据。由于ICSN3250可诱导自噬，因此在高剂量下，可能对基础自噬水平较高的组织（例如肝脏、肾脏）造成药物性损伤。然而，在治疗相关剂量（10 mg/kg/天）下，该化合物耐受性良好。应遵循标准安全预防措施（戴手套、穿实验服、戴护目镜）。该化合物并非管制物质。储存于-20℃，避光。ICSN3250盐酸盐仅供研究使用，不得用于人体治疗。

[1]. mTOR Inhibition via Displacement of Phosphatidic Acid Induces Enhanced Cytotoxicity Specifically in Cancer Cells. Cancer Res. 2018 Sep 15;78(18):5384-5397.

ICSN3250 盐酸盐也称为 ICSN3250 HCl，是哈利图林类似物。其分子式为 C31H41ClN4O₈（盐酸盐）或 C31H42ClN4O₈（游离碱）。该化合物为白色至类白色粉末。溶解度：水 >10 mg/mL（pH 5-6），DMSO >50 mg/mL。其化学结构包含一个螺环和一个吗啉代基团。ICSN3250 于 2018 年首次被报道为一种新型 mTORC1 抑制剂，具有独特的作用机制（置换磷脂酸）（例如，由伦敦癌症研究所发表）。它是研究 mTORC1 在癌症、自噬和代谢中的作用的重要工具，尤其有助于理解磷脂酸-mTORC1 轴。该化合物尚未获准用于临床，仅供研究使用。

C31H41CLN4O8

633.13

632.261

1561902-79-1

ICSN3250

134817233

Typically exists as solids at room temperature

181

5

6

44

808

0

C1CCCCCCN(CCCCC1)CCCN2C=C(C(=C2)C3=CC(=C(C(=C3)O)O)[N+](=O)[O-])C4=CC(=C(C(=C4)O)O)[N+](=O)[O-].Cl

VTTAAXQGVVGOFT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C31H40N4O8.ClH/c36-28-18-22(16-26(30(28)38)34(40)41)24-20-33(21-25(24)23-17-27(35(42)43)31(39)29(37)19-23)15-11-14-32-12-9-7-5-3-1-2-4-6-8-10-13-32;/h16-21,36-39H,1-15H2;1H

5-[1-[3-(azacyclotridec-1-yl)propyl]-4-(3,4-dihydroxy-5-nitrophenyl)pyrrol-3-yl]-3-nitrobenzene-1,2-diol;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。