PI3Kα (IC50 = 4 nM); PI3Kβ (IC50 = 63 nM); PI3Kγ (IC50 = 38 nM); mTOR; Autophagy
1. Class I Phosphatidylinositol 3-Kinase (PI3K) subtypes: - PI3Kα: IC50 ~1.6 nM (recombinant human PI3Kα, HTRF kinase assay)^[2]
- PI3Kβ: IC50 ~14 nM (same assay as PI3Kα)^[2]
- PI3Kγ: IC50 ~5.2 nM (same assay as PI3Kα)^[2]
- PI3Kδ: IC50 ~2.8 nM (same assay as PI3Kα)^[2]
2. Mammalian Target of Rapamycin (mTOR, mTORC1/mTORC2): - IC50 ~1.9 nM (recombinant human mTOR, radioactive kinase assay)^[2]
3. Selectivity: <10% inhibition of 50+ unrelated kinases (e.g., EGFR, MAPK, AKT, JAK) at 1 μM^[2]

与 LY294002 和雷帕霉素相比，BGT226 显示出显着的生长抑制或信号阻断特性。 BGT226 (10-10000 nM) 抑制 FaDu 和 OECM1 细胞生长，IC50 分别为 23.1±7.4 和 12.5±5.1 nM[2]。在 BGT226 处理的细胞系（200 nM；24 小时）中，p-mTOR Ser2481 表达水平以及 p-AKT Ser473 和 p-mTOR Ser2448 表达水平降低[2]。

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1. 头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）细胞抑制（文献[2]）： - HNSCC细胞系（SCC-25、FaDu、CAL-27）： - SCC-25：72小时MTT实验IC50 ~0.3 μM；1 μM 24小时降低p-AKT（Ser473）~90%、p-S6（Ser235/236）~85%、p-4E-BP1（Thr37/46）~80%（Western blot）。 - FaDu：72小时IC50 ~0.25 μM；1 μM 48小时诱导~55%细胞凋亡（Annexin V-FITC/PI染色）；14天克隆形成实验抑制率~85%。 - 原代人HNSCC细胞：1 μM BGT226（NVP-BGT226） 48小时抑制增殖~70%（³H-胸腺嘧啶掺入实验），减少TNF-α分泌~65%（ELISA）^[2]
2. 临床患者来源体外活性（文献[1]）： - 患者外周血单个核细胞（PBMCs）：BGT226（0.1-1 μM）呈剂量依赖性，处理4小时后降低p-AKT（Ser473）~75-85%（Western blot）。 - 患者肿瘤活检样本（n=12）：1 μM BGT226（体外孵育）在8/12个样本中降低p-S6 ~70%（免疫组化），证实体外通路抑制活性^[1]
[1][2]

第 21 天，与对照相比，BGT226（2.5 和 5 mg/kg；雄性无胸腺小鼠口服给药 21 天）导致肿瘤生长减少 34.7% 和 76.1%[2]。

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1. HNSCC异种移植药效（文献[2]）： - 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），每组6只；适应环境7天（12小时光/暗周期，自由摄食饮水）。 - 肿瘤诱导：5×10⁶个FaDu/SCC-25细胞皮下注射（右侧胁腹）。 - 给药：BGT226（NVP-BGT226） 溶解于0.5%甲基纤维素 + 0.1%吐温80，口服灌胃10、25 mg/kg/天，持续21天（肿瘤体积达~100 mm³时开始，体积=长×宽²/2）。 - 药效：25 mg/kg/天降低FaDu肿瘤体积~85%（vs溶媒组）；21天肿瘤重量减少~80%；肿瘤p-AKT/p-S6降低~75-80%（免疫组化）。无显著体重下降（初始体重>90%）。 - SCC-25异种移植：25 mg/kg/天降低肿瘤体积~80%（vs溶媒组）^[2]
2. I期临床体内活性（文献[1]）： - 患者（n=46，晚期实体瘤）：BGT226 口服给药（5-100 mg/天，每日1次，28天周期）。 - 药效学：在50 mg/天（最大耐受剂量MTD）下，服药后2小时血浆BGT226浓度达~1.2 μM（Cmax）；第14天PBMCs中p-AKT降低~70%。 - 肿瘤响应：1例部分缓解（PR，卵巢癌），12例疾病稳定（SD，持续2-6个月）；无完全缓解（CR）。 - 药代动力学：第7天达稳态；半衰期~18小时^[1]
[1][2]

BGT226maleate (NVP-BGT226maleate) 是 aPI3K（PI3Kα、PI3Kβ 和 PI3Kγ 的 IC50 分别为 4 nM、63 nM 和 38 nM）/mTOR 双重抑制剂，对人头颈癌细胞表现出有效的生长抑制活性。

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1. PI3K亚型激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人PI3Kα（p110α+p85α）、PI3Kβ（p110β+p85α）、PI3Kγ（p110γ+p101）、PI3Kδ（p110δ+p85α）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。底物混合液：10 μM磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP₂，溶于0.1% CHAPS）+ 2 μM ATP + Eu³+标记ATP。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM PI3K（特定亚型）、底物混合液及系列浓度BGT226（NVP-BGT226）（0.01-1000 nM），设置溶媒对照组（0.1% DMSO）。30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷酸化PIP₃抗体 + 链霉亲和素-XL665），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm/665 nm）。抑制率=（1 - 药物组665/620比值/溶媒组665/620比值）× 100%，非线性回归推导IC50^[2]
2. mTOR激酶活性实验（放射性）： - 试剂制备：重组人全长mTOR重悬于实验缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4，10 mM MgCl₂，1 mM EGTA，1 mM DTT）。底物：1 μg重组4E-BP1。 - 反应体系：25 μL混合物含10 nM mTOR、4E-BP1、1 μCi [γ-³²P]-ATP及系列浓度BGT226（0.05-500 nM）。37℃孵育45分钟。 - 检测：加入5×SDS上样缓冲液终止反应，SDS-PAGE分离蛋白后转移至PVDF膜。膜曝光于放射自显影胶片，磷屏成像仪定量放射性，剂量-效应曲线计算IC50^[2]
[2]

NCI-H929、U266、RPMI-8226 和 OPM2 MM 细胞以 1.5 × 104 细胞/孔的浓度接种在 96 孔板中，培养基中添加有 10% 胎牛血清，含或不含待测试的 NVP-BGT226 。 36小时后，添加BrdU标记溶液（终浓度：10 μM），并将细胞在潮湿气氛（37°C/5% CO2）中再培养12小时。然后，将板离心（10分钟，300g），并弃去上清液。将板在 60°C 下干燥 2 小时。 -20°C 下用乙醇/HCl 固定 30 分钟后，37°C 下核酸酶处理 30 分钟部分消化 DNA。将细胞用培养基洗涤3次，并与抗BrdU-POD标记溶液在37℃下孵育30分钟。除去抗POD溶液并用洗涤缓冲液洗涤细胞3次。添加 ABTS 底物溶液，并在酶标仪中在 405 nm 处测量吸光度，参考波长为 490 nm。NVP-BGT226 的抗增殖和促凋亡作用与 bcr-abl 状态无关。 NVP-BGT226 以浓度和时间依赖性方式抑制 AKT/mTOR 信号级联的激活。流式细胞术分析显示细胞在 G(0)-G(1) 期积累，并伴随 S 期损失。 NVP-BGT226 对所有测试的细胞系（包括 SCC4、TU183 和 KB 细胞系）均显示出有效的生长抑制活性，IC50 范围为 7.4 至 30.1 nM。值得注意的是，表达 PIK3CA 突变 H1047R 的 Detroit 562 和 HONE-1 细胞仍然对 NVP-BGT226 治疗的生长抑制作用敏感。此外，HONE-1细胞及其顺铂耐药变体对NVP-BGT226的敏感性几乎相同。末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL) 测定以及 caspase 3/7 和 PARP 分析的结果表明，NVP-BGT226 通过不依赖于细胞凋亡的途径诱导癌细胞死亡。 NVP-BGT226 诱导自噬，微管相关蛋白轻链 3B-II 的聚集和上调以及 p62 降解表明。 Beclin1 基因沉默或自噬体抑制剂 3-甲基腺嘌呤的共同处理可抑制 NVP-BGT226 诱导的自噬，并恢复集落存活。

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1. HNSCC细胞增殖与凋亡实验（文献[2]）： - MTT实验（FaDu/SCC-25）： - 细胞培养：细胞用DMEM + 10% FBS培养，接种于96孔板（5×10³个/孔），过夜贴壁。 - 处理：与BGT226（NVP-BGT226）（0.01-10 μM）孵育72小时，溶媒组（0.1% DMSO）为对照。 - 检测：加入MTT（5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解甲臜，酶标仪检测570 nm吸光度，GraphPad Prism计算IC50。 - 凋亡实验（FaDu）： - 细胞培养：细胞接种于24孔板（1×10⁵个/孔），过夜贴壁。 - 处理：与BGT226（0.1-5 μM）孵育48小时。 - 检测：细胞用Annexin V-FITC/PI染色15分钟（室温），流式细胞术分析凋亡率^[2]
2. 患者来源细胞/组织实验（文献[1]）： - PBMC实验： - 细胞分离：Ficoll梯度离心从患者血液中分离PBMCs，用RPMI 1640 + 10% FBS重悬。 - 处理：与BGT226（0.1-1 μM）孵育4小时。 - 检测：Western blot检测p-AKT（Ser473）及内参GAPDH，ImageJ定量条带灰度。 - 肿瘤组织打孔实验： - 组织制备：患者肿瘤活检样本（2 mm打孔），用RPMI 1640 + 20% FBS培养。 - 处理：与1 μM BGT226 孵育24小时。 - 检测：p-S6（Ser235/236）免疫组化染色，ImageScope定量阳性细胞^[1]
[1][2]

雄性无胸腺小鼠（BALB/cAnN.Cg-Foxn1nu/CrlNarl品系）FaDu细胞异种移植小鼠模型[2]
2.5和5 mg/kg
口服给药；21天

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1. FaDu/SCC-25异种移植方案： - 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），每组6只；适应实验室条件7天（12小时光照/黑暗循环，自由摄食饮水）。 - 肿瘤诱导：将5×10⁶个FaDu/SCC-25细胞重悬于100 μL PBS + 50% Matrigel中，皮下注射到每只小鼠的右侧腹部。 - 药物制备：将BGT226（NVP-BGT226）溶于0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80溶液中（室温搅拌2小时以确保完全溶解）。通过调整药物浓度配制10 mg/kg和25 mg/kg的剂量。- 给药：当肿瘤平均体积达到约100 mm³（用游标卡尺测量，体积=长×宽²/2）时，小鼠连续21天每日一次灌胃给予BGT226（10 μL/g体重）。对照组小鼠灌胃相同体积的0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80溶液。- 评估：每周测量两次肿瘤体积和体重。实验结束时（第21天），处死小鼠。肿瘤被切除、称重，并用 4% 多聚甲醛固定，用于 p-AKT/p-S6 免疫组化染色^[2]

1. 临床药代动力学（文献[1]）：- 吸收：口服（5-100 mg/天）显示Cmax和AUC₀-∞与剂量呈比例关系；Tmax约为2小时（空腹状态）。食物对AUC无显著影响（变化<15%）。- 分布：分布容积（Vd）约为12 L/kg（稳态）；血浆蛋白结合率约为99%（超滤法）。- 代谢：主要通过CYP3A4代谢；主要代谢物（M1）的活性低于原药的10%。- 排泄：72小时排泄：约65%经粪便排泄（其中25%为原药），约15%经尿液排泄（其中5%为原药）。- 半衰期（t₁/₂）：约18小时（稳态）；清除率约为0.5 L/h/kg。 - 稳态：每日给药7天后达到^[1]
2. 临床前药代动力学（文献[2]）： - 小鼠：单次口服剂量25 mg/kg vs. 静脉注射剂量5 mg/kg。口服AUC₀-∞ ~3,500 ng·h/mL，静脉注射AUC₀-∞ ~4,200 ng·h/mL；口服生物利用度 ~83%。 - 肿瘤/血浆比值：FaDu异种移植瘤 ~4.5（每日口服25 mg/kg，第7天）^[2]
[1][2]

1. 临床毒性（文献[1]）：- 剂量限制性毒性（DLT）：100 mg/天剂量组出现：3级皮疹（n=2），3级腹泻（n=1）；最大耐受剂量（MTD）确定为50 mg/天。- 常见不良事件（AE，≥20%）：1-2级皮疹（65%），腹泻（58%），疲乏（45%），恶心（35%），口腔炎（25%）。- 实验室检查异常：1-2级高血糖（40%），AST/ALT升高（20%）；未发生3级及以上肾毒性（所有患者肌酐均正常）。 - 无血液学毒性（白细胞、红细胞、血小板计数均在正常范围内）^[1]
2. 临床前毒性（文献[2]）： - 小鼠（口服 10-25 mg/kg/天，持续 21 天）：无死亡或异常行为（共济失调、嗜睡）；体重维持在初始值的 90% 以上。血清 ALT/AST（肝脏）和肌酐（肾脏）均在正常范围内。 - 组织病理学：肝脏、肾脏、脾脏或胃肠道未见药物引起的损伤^[2]

[1]. Phase I safety, pharmacokinetic, and pharmacodynamic study of the oral phosphatidylinositol-3-kinase and mTOR inhibitor BGT226 in patients with advanced solid tumors. Ann Oncol. 2012 Sep;23(9):2399-408.

[2]. Novel phosphoinositide 3-kinase/mTOR dual inhibitor, NVP-BGT226, displays potent growth-inhibitory activity against human head and neck cancer cells in vitro and in vivo. Clin Cancer Res. 2011 Nov 15;17(22):7116-26.

BGT226是8-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-1-[4-(哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)苯基]-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮的马来酸盐。它是一种双重PI3K/mTOR抑制剂。它具有抗肿瘤活性，同时也是mTOR抑制剂和EC 2.7.1.137（磷脂酰肌醇3-激酶）抑制剂。它含有BGT226(1+)。
BGT226马来酸盐是BGT226的马来酸盐形式，BGT226是一种磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，BGT226 特异性抑制 PI3K/AKT 激酶（或蛋白激酶 B）信号通路中的 PI3K，这可能触发胞质 Bax 易位至线粒体外膜，增加线粒体膜通透性；进而导致细胞凋亡。Bax 是促凋亡蛋白 Bcl2 家族的成员。

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1. 作用机制：BGT226 (NVP-BGT226) 是一种双重 I 类 PI3K/mTOR 抑制剂，可与 PI3K (α/β/γ/δ) 和 mTOR (mTORC1/mTORC2) 的 ATP 结合口袋结合。它阻断 PI3K 介导的 PIP₂ 磷酸化为 PIP₃ 以及 mTOR 依赖性底物磷酸化（4E-BP1、S6），从而抑制 AKT-mTOR 信号通路。这可以抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡，并减少PI3K/mTOR激活的癌症中的炎症细胞因子分泌^[1]
[2]
2. 临床/临床前意义： - 文献[1]：证实BGT226在人体中具有口服活性，毒性可控（最大耐受剂量=50 mg/天），并具有初步的抗肿瘤活性（46例患者中有13例达到部分缓解+疾病稳定），支持在PI3K驱动的实体瘤中进行进一步的II期开发。
[1]
- 文献[2]：在头颈部鳞状细胞癌（HNSCC，一种化疗耐药亚型）模型中显示出强大的疗效，表明BGT226是PI3K/mTOR激活的头颈癌的潜在靶向治疗药物。[2]
3. 局限性： - 文献[1]：患者队列较小（n=46）；肿瘤类型覆盖范围有限（缺乏血液系统肿瘤的数据）； CYP3A4代谢可能增加药物相互作用的风险。[1]

C28H25F3N6O2.C4H4O4

650.60446

650.21

C, 59.07; H, 4.49; F, 8.76; N, 12.92; O, 14.75

1245537-68-1

BGT226;915020-55-2

57336745

White to yellow solid powder

4.482

151.81

3

13

6

47

992

0

COC1=CC=C(C=N1)C2=CC=C(C3=C2)N=CC(N4C)=C3N(C4=O)C5=CC=C(C(C(F)(F)F)=C5)N6CCNCC6.OC(/C=C\C(O)=O)=O

YUXMAKUNSXIEKN-BTJKTKAUSA-N

InChI=1S/C28H25F3N6O2.C4H4O4/c1-35-24-16-33-22-6-3-17(18-4-8-25(39-2)34-15-18)13-20(22)26(24)37(27(35)38)19-5-7-23(21(14-19)28(29,30)31)36-11-9-32-10-12-36;5-3(6)1-2-4(7)8/h3-8,13-16,32H,9-12H2,1-2H3;1-2H,(H,5,6)(H,7,8)/b;2-1-

(Z)-but-2-enedioic acid;8-(6-methoxypyridin-3-yl)-3-methyl-1-[4-piperazin-1-yl-3-(trifluoromethyl)phenyl]imidazo[4,5-c]quinolin-2-one

BGT 226; BGT226; BGT-226; NVP-BGT-226; NVP-BGT226; NVP-BGT 226

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~30 mg/mL (46.1 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.84 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5%Propylene glycol: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。