| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
BI-3812 is a potent inhibitor of the BTB (Broad-Complex, Tramtrack, and Bric a brac) domain of the oncogenic transcription factor BCL6 (B-cell lymphoma 6) [1].
BCL6 BTB domain (IC₅₀ ≤ 3 nM in ULight biochemical assay; cellular binding IC₅₀ = 40 nM in LUMIER assay) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
BI-3812 是一种高效、有效的BCL6抑制剂探针化合物。在细胞实验（LUMIER）中，它能有效抑制BCL6 BTB结构域与转录辅阻遏物（如NCOR1）的相互作用，IC₅₀为40 nM。与降解剂化合物BI-3802不同，BI-3812在多种弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系（SU-DHL-4, Farage, OCI-Ly1, BJAB）中不诱导BCL6蛋白的泛素化和蛋白酶体依赖性降解。它被归类为“非降解剂”，即使在较高浓度下也仅引起BCL6蛋白水平的极小降低（<30%）。在转录研究中，用BI-3812处理可诱导DLBCL细胞系中已知的BCL6靶基因（如PRDM1、IRF4、PTPN6）的去抑制，但诱导程度始终弱于降解剂BI-3802。在多个DLBCL细胞系（如SU-DHL-4, Farage, OCI-Ly7, OCI-Ly1）的长期增殖实验中，BI-3812仅显示出微弱的抗增殖作用，且仅在浓度远高于其BCL6抑制的生化和细胞IC₅₀值时才能观察到。不表达BCL6的细胞，如Toledo细胞，对BI-3812不敏感。结构相关但低亲和力的BCL6结合剂BI-5273对增殖没有影响，这证实了BI-3812的靶向活性[1]。
氢氘交换质谱分析表明，BI-3812与BCL6 BTB结构域的结合保护了结合位点附近的区域免受氘交换，但与降解剂BI-3802相比，在远端区域的保护作用较弱，表明蛋白质稳定效应存在差异[1]。 使用降解剂BI-3802的固定化类似物进行的化学亲和力下拉实验将BCL6鉴定为DLBCL细胞中的主要靶点；未鉴定出其他含有BTB/POZ结构域的蛋白质，表明该相关化合物系列在此蛋白质家族内具有选择性[1] 。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
BCL6 试剂 BI-3812 的 IC50 小于 3 nM。对于 BCL6 的抑制，BI-3812 的 IC50 值为 40 nM[1]。
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| 酶活实验 |
使用荧光偏振实验和时间分辨荧光共振能量转移实验（ULight实验）评估了BI-3812对BCL6 BTB结构域的抑制活性。对于FP实验，将DMSO中的测试化合物分配到检测板中。在检测缓冲液中加入生物素化的BCL6 BTB结构域蛋白片段和来源于辅阻遏物BCOR的荧光标记肽。孵育后，测量荧光偏振。实验包括阴性对照（肽+缓冲液）和阳性对照（蛋白质+肽）。对于更灵敏的ULight实验（用于IC₅₀ < 50 nM的化合物），先分配测试化合物，然后加入低浓度的生物素化BCL6蛋白。孵育后，加入含有ULight标记的BCOR肽和链霉亲和素-铕的混合物。进一步孵育后，测量TR-FRET信号。使用阴性对照（蛋白质+肽混合物）和阳性对照（不含蛋白质的肽混合物）进行标准化。ULight实验对于像BI-3812这样最有效的抑制剂达到了其灵敏度极限（“检测壁”），报告的IC₅₀为≤ 3 nM[1]。
使用表面等离子体共振确认了初始命中化合物与BCL6 BTB结构域的直接的、剂量依赖性的、可饱和的结合[1]。 进行氢氘交换质谱分析以探测受化合物结合影响的BCL6 BTB结构域区域。将蛋白质与或不与化合物一起孵育，然后稀释到氘代缓冲液中。在不同时间点，终止反应并消化蛋白质。通过质谱分析肽段的氘掺入，以确定配体结合后受到保护免于交换的区域[1] 。 |
| 细胞实验 |
在SU-DHL-4细胞中定量BCL6降解。将细胞悬浮并用数字分配器以对数剂量系列的化合物处理。孵育90分钟后，裂解细胞。使用毛细管电泳系统分析裂解液中的BCL6蛋白水平，并使用抗BCL6和抗GAPDH抗体进行标准化，生成剂量反应曲线和DC₅₀（降解效力）值[1]。
在DLBCL细胞系中进行长期增殖实验。将细胞接种并在多孔板中维持恒定的化合物浓度。定期传代以维持密度，并通过随时间乘以分裂比来计算累积细胞数，从而生成生长曲线[1]。 使用LUMIER实验测量细胞靶点结合。将HEK293T细胞与表达海肾荧光素酶标记的BCL6（包含BTB结构域）和萤火虫荧光素酶标记的辅阻遏物NCOR1的构建体共转染。化合物处理后，裂解细胞，并使用抗海肾荧光素酶抗体对裂解液进行免疫沉淀。测量共沉淀的萤火虫荧光素酶活性（代表BCL6-NCOR1相互作用），并将其与输入裂解液中的海肾荧光素酶活性进行标准化[1]。 对于基因表达的qPCR分析，在96孔板中处理细胞，裂解后，使用基因特异性引物通过逆转录定量PCR定量mRNA水平。数据以GAPDH mRNA水平进行标准化[1]。 为了研究降解所需的结构域，将BCL6的各种突变体和嵌合构建体（例如缺失锌指结构域或融合异源DNA结合结构域）瞬时转染到HEK293细胞中。在化合物处理后，通过蛋白质印迹评估蛋白水平[1] 。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
BI-3812 是一种高效且强效的 BCL6 抑制剂探针化合物。其结构与降解剂 BI-3802 非常相似，但其功能为“非降解剂”，这使得研究人员能够区分 BCL6 抑制和 BCL6 蛋白降解所引起的生物学效应。研究表明，虽然抑制剂和降解剂化合物都能解除对一组相似的 BCL6 靶基因的抑制，但在弥漫性大B细胞淋巴瘤 (DLBCL) 细胞系中，降解剂的抗增殖作用显著更强。BI-3812 通过抑制 BTB 结构域而不引起降解，为研究破坏 BCL6 共抑制因子相互作用的具体后果提供了一种工具 [1]。
该研究确立了 BCL6 BTB 结构域是一个极具成药潜力的靶点。从同一化学系列中发现强效、非降解性抑制剂如BI-3812和降解剂如BI-3802，为研究BCL6生物学和开发潜在的淋巴瘤治疗药物提供了新的途径[1] |
| 分子式 |
C26H32CLN7O5
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|---|---|
| 分子量 |
558.029184341431
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| 精确质量 |
557.215
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| CAS号 |
2166387-64-8
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| PubChem CID |
134691741
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| 外观&性状 |
Off-white to pink solid powder
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| LogP |
2.2
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| tPSA |
129
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
39
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| 分子复杂度/Complexity |
928
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C=NC(=NC=1NC1C=C(C2=C(C=C(C(N2C)=O)OCC(NC)=O)C=1)OC)N1CCC(C(N(C)C)=O)CC1
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| InChi Key |
XCGYXEVLQIIEJH-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C26H32ClN7O5/c1-28-21(35)14-39-20-11-16-10-17(12-19(38-5)22(16)33(4)25(20)37)30-23-18(27)13-29-26(31-23)34-8-6-15(7-9-34)24(36)32(2)3/h10-13,15H,6-9,14H2,1-5H3,(H,28,35)(H,29,30,31)
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| 化学名 |
1-(5-Chloro-4-((8-methoxy-1-methyl-3-(2-(methylamino)-2-oxoethoxy)-2-oxo-1,2-dihydroquinolin-6-yl)amino)pyrimidin-2-yl)-N,N-dimethylpiperidine-4-carboxamide
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| 别名 |
BI3812; BI 3812; BI-3812
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~20.83 mg/mL (~37.33 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.73 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7920 mL | 8.9601 mL | 17.9202 mL | |
| 5 mM | 0.3584 mL | 1.7920 mL | 3.5840 mL | |
| 10 mM | 0.1792 mL | 0.8960 mL | 1.7920 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Bamirastine
戊双氟酚
PROTAC-PEG3-Amino
MT-3014
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COA
粤公网安备 44011102003439号
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