Glycine transporter type 1 (GlyT1). It is a potent and noncompetitive inhibitor of glycine reuptake at GlyT1.

- Inhibition of [³H]glycine uptake at human GlyT1b: IC₅₀ = 25 ± 2 nM. [1]
- Inhibition of [³H]glycine uptake at mouse GlyT1b: IC₅₀ = 22 ± 5 nM. [1]
- Displacement of [³H]ORG24598 binding at human GlyT1b: Kᵢ = 8.1 nM. [1]
- No effect on human GlyT2-mediated glycine uptake up to 30 μM. [1]
- Inactive (binding inhibition <45%) at 10 μM against 86 other targets, including various receptors, ion channels, and enzymes. [1]

在中国仓鼠卵巢细胞膜上，bitopertin (RG1678) 可竞争性阻断人 GlyT1b 上的 [3H]ORG24598 结合位点。稳定表达 hGlyT1b 和 mGlyT1b 的细胞对 [3H]甘氨酸的摄取均被 bitopertin 有效抑制，IC50 值分别为 25±2 nM 和 22±5 nM (n=6)。相反，即使剂量高达 30 μM，bitopertin 对 hGlyT2 介导的甘氨酸吸收也无影响。Bitopertin 与重组 hGlyT1b 转运蛋白具有很强的亲和力。在平衡条件下（室温下孵育 1 小时），bitopertin 可抑制 [3H]ORG24598 的结合，其 Ki 值为 8.1 nM。 Bitopertin 在 100 nM 时改善了海马 CA1 锥体细胞中 NMDA 依赖的长期增强作用，但在 300 nM 时没有改善 [1]。进一步研究表明，Bitopertin (RG1678) 对 86 个靶点具有极高的选择性，这些靶点包括可溶性和跨膜受体、酶、离子通道和单胺转运蛋白（IC50>30 μM）（所有靶点的测量浓度均为 10 μM）[2]。

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Bitopertin 可强效且选择性地抑制 GlyT1，并调节 NMDA 受体功能。

1. 甘氨酸摄取抑制：在稳定表达人或小鼠 GlyT1b 的 CHO 细胞中，Bitopertin 可强效抑制 [³H]甘氨酸的摄取，IC₅₀ 值分别为 25 ± 2 nM 和 22 ± 5 nM。动力学分析表明，Bitopertin 可降低转运蛋白的最大反应速率 (Vmax)，但不影响其对甘氨酸的表观亲和力 (Km)，表明其对甘氨酸是一种非竞争性抑制剂。[1] 2. [³H]ORG24598 结合置换：在表达人 GlyT1b 的 CHO 细胞膜中，Bitopertin 可置换 [³H]ORG24598 的结合，Ki 值为 8.1 nM。饱和结合实验表明，Bitopertin 浓度的增加可提高 [³H]ORG24598 的解离常数 (Kd)，但不影响最大反应速率 (Bmax)，证实了 Bitopertin 与 ORG24598 在与甘氨酸结合位点不同的位点上存在竞争性相互作用。在大鼠、小鼠、猴和犬前脑膜的天然 GlyT1 转运蛋白中也观察到了这种竞争性结合特性。 [1]

3. 对长时程增强 (LTP) 的影响：在大鼠海马切片中，Bitopertin 可增强 CA1 锥体细胞中 NMDA 依赖性 LTP。这种增强作用呈浓度依赖性，在 100 nM 时显著增强（为基线的 269 ± 44%），但在 30 nM（213 ± 18%）或 300 nM（152 ± 14%，与对照组 186.3 ± 15.9% 相比无显著差异）时未观察到显著增强。最高浓度下未观察到显著增强作用提示其剂量-反应曲线呈倒 U 形。 [1]

4. 选择性分析：在 10 μM 的浓度下，Bitopertin 在针对 86 个靶点的结合试验中抑制率低于 45%，这些靶点包括甘氨酸、谷氨酸、多巴胺、GABA、5-羟色胺、肾上腺素能、毒蕈碱、腺苷、阿片和组胺受体，以及各种离子通道。在 21 项功能性试验中，它不抑制单胺氧化酶、儿茶酚-O-甲基转移酶、乙酰胆碱酯酶和几种磷酸二酯酶等酶。[1]

微透析结果显示，Bitopertin (RG1678) 可剂量依赖性地提高大鼠纹状体和脑脊液中的甘氨酸水平。此外，在用右旋安非他明或 NMDA 受体甘氨酸位点拮抗剂 L-687,414 刺激的小鼠中，Bitopertin 可减少过度运动。在长期接受苯环利定（一种 NMDA 受体开放通道阻滞剂）治疗的大鼠中，Bitopertin 也可抑制对右旋安非他明刺激的过度反应。纹状体细胞外甘氨酸水平不受溶剂的影响，并在实验过程中保持不变。另一方面，口服 Bitopertin（1–30 mg/kg）后，细胞外甘氨酸水平呈剂量依赖性增加。服用 30 mg/kg 比塞普汀后，甘氨酸水平比治疗前高出 2.5 倍。比较口服比托哌汀（1-10 mg/kg）三小时后大鼠与给予赋形剂的大鼠的脑脊液，发现两组大鼠的甘氨酸浓度均呈剂量依赖性升高。值得注意的是，比托哌汀给药三小时后脑脊液中甘氨酸水平的升高与微透析试验中同一时间观察到的升高非常相似[1]。在大鼠和猴子中进行的体内药代动力学试验表明，比托哌汀（RG1678）在两种动物中均表现出低血浆清除率、中等分布容积和良好的口服生物利用度（大鼠为78%，猴子为56%）。其终末半衰期（大鼠为5.8小时，猴子为6.4小时）也相当理想。在人体中观察到血浆蛋白结合率为98%，在两种临床前动物中观察到血浆蛋白结合率为97%。大鼠（脑/血浆比值=0.7）的鞘内注射比妥哌汀渗透率高于小鼠（脑/血浆比值=0.5）[2]。

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比妥哌汀通过提高脑内甘氨酸水平，在多种与精神分裂症相关的啮齿动物模型中显示出显著的体内活性。

1. 纹状体细胞外甘氨酸水平升高（大鼠微透析）：对自由活动的大鼠口服比妥哌汀（1-30 mg/kg，po）可使纹状体细胞外甘氨酸水平呈剂量依赖性且持续升高。该作用在给药后20-40分钟开始出现，在80-100分钟达到峰值，并持续至少3小时。在30 mg/kg剂量下，甘氨酸水平升高至基线的2.5倍。比妥哌汀不影响纹状体中D-丝氨酸的水平。 [1]

2. 脑脊液甘氨酸浓度升高（大鼠）：口服Bitopertin（1-10 mg/kg，po）3小时后，大鼠脑脊液（CSF）中甘氨酸浓度呈剂量依赖性升高，通过¹H NMR测定。升高幅度与同一时间点纹状体微透析研究中观察到的结果相似。[1]

3. 预防L-687,414诱导的活动过度（小鼠）：Bitopertin（1-10 mg/kg，po）呈剂量依赖性地完全抑制了NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂L-687,414（50 mg/kg，sc）诱导的小鼠活动过度，ID₅₀为0.63 mg/kg。每日一次给药4天后，该效应得以维持（第5天的ID₅₀为0.28 mg/kg，而急性治疗组为0.73 mg/kg）。在测试前0.5、2.5和4.5小时给药时观察到抑制作用，但在24小时后不再显著。单独使用Bitopertin不影响基线运动活性。[1]

4. 预防苯丙胺诱导的小鼠过度活动：Bitopertin（0.3-3 mg/kg，口服）显著降低了小鼠D-苯丙胺（2 mg/kg，腹腔注射）诱导的过度活动。在最低测试剂量（0.3 mg/kg）下达到最大效应。相比之下，在该模型中，抗精神病药物氯氮平和奥氮平的ID₅₀值分别为5 mg/kg和0.55 mg/kg。[1]

5. 亚慢性PCP处理后对苯丙胺激发试验的影响（大鼠）：在用PCP（5 mg/kg，腹腔注射）处理14天以模拟NMDA受体功能减退的大鼠中，随后给予苯丙胺（1 mg/kg，腹腔注射）激发试验，与对照组相比，大鼠表现出显著增强的运动亢进反应。比托哌汀（3和10 mg/kg，口服）呈剂量依赖性地显著抑制了这种苯丙胺诱导的运动亢进。在未接受PCP处理的动物中，只有10 mg/kg剂量的比托哌汀显著降低了苯丙胺诱导的运动亢进。 [1]

6. 体外[³H]雷氯必利结合（大鼠）：为了研究多巴胺能机制，对亚慢性PCP处理的大鼠进行苯丙胺激发试验后，纹状体[³H]雷氯必利（D₂受体拮抗剂）结合的下降幅度大于对照组。这表明多巴胺释放过度。该研究表明，比托哌汀可以使这种改变的多巴胺能反应恢复正常。[1]

1. [³H]甘氨酸摄取实验：将稳定表达GlyT1或GlyT2的CHO细胞接种于96孔板中。在22°C下，向细胞中加入25 μM非放射性甘氨酸和60 nM [³H]甘氨酸（GlyT1）或200 nM [³H]甘氨酸（GlyT2）的摄取缓冲液，启动细胞摄取。使用10 μM ORG24598（GlyT1）或5 μM ORG25543（GlyT2）测定非特异性摄取。孵育后（hGlyT1b为15分钟，mGlyT1b和hGlyT2为30分钟），洗涤孔板，并通过液体闪烁计数法测定放射性。使用曲线拟合软件计算IC₅₀值。 [1]

2. [³H]ORG24598 结合实验：将表达 hGlyT1b 的 CHO 细胞膜或大鼠、小鼠、猴和犬前脑的膜与 [³H]ORG24598 孵育。饱和实验中，使用递增浓度的 [³H]ORG24598。抑制实验中，将膜与 3 nM [³H]ORG24598 和不同浓度的 Bitopertin 在室温下孵育 1 小时。Schild 分析中，在递增浓度的 [³H]ORG24598 (1-300 nM) 存在下检测置换情况。通过过滤分离并测量结合的放射性。根据饱和等温线计算 Kd 和 Bmax。根据 IC₅₀ 值计算 Ki 值。[1]

1. 细胞系：Flp-In™ CHO 细胞经稳定转染人 GlyT1b、小鼠 GlyT1b 和人 GlyT2 的 cDNA 后，在含 10% 胎牛血清、1% 青霉素-链霉素、600 μg/ml 潮霉素和 1 mM 谷氨酰胺的 F-12 培养基中，于 37°C、5% CO₂ 条件下培养。实验前 24 小时，将细胞以 40,000 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中。[1]

2. 细胞内 [³H]甘氨酸摄取测定：本测定方法详见“酶活性测定”部分，用于测定 Bitopertin 对甘氨酸转运的抑制效力和机制。[1]

采用多种不同的动物实验方案评估了Bitopertin的体内效应。

1. **药物配制和给药：**所有体内研究中，Bitopertin均溶于含0.3% Tween 80的水中，并以10 ml/kg体重的剂量进行口服（po）。[1]

2. **大鼠微透析：**将微透析探针植入雄性Sprague-Dawley大鼠的纹状体（坐标：A 0.2 mm，L 2.9 mm，V 7 mm）。恢复3-4天后，收集灌注液样本。在收集基线样本后，大鼠分别接受Bitopertin（1-30 mg/kg，po）或溶剂对照。采用高效液相色谱-电化学联用（HPLC-EC）分析灌注液中的甘氨酸水平。 [1]

3. **大鼠脑脊液采集：**雄性Wistar大鼠分别灌胃给予Bitopertin（1-10 mg/kg）或溶剂。3小时后，在异氟烷麻醉下，从枕大池采集脑脊液。采用¹H NMR光谱法定量分析甘氨酸浓度。[1]

4. **L-687,414诱导小鼠活动过度：**雄性NMRI小鼠分别灌胃给予Bitopertin（0.3-10 mg/kg）或溶剂。1小时后，皮下注射L-687,414（50 mg/kg）或溶剂。适应15分钟后，使用活动监测系统记录小鼠60分钟的水平活动。在时间进程研究中，L-687,414 在给予Bitopertin后不同时间间隔给药。在亚慢性研究中，小鼠连续4天每日口服Bitopertin（1 mg/kg），并在第5天进行测试。[1]

5. **安非他明诱导的小鼠活动过度：**雄性NMRI小鼠在活动箱中适应60分钟。然后，它们分别口服Bitopertin（0.3-3 mg/kg）、氯氮平（0.3-3 mg/kg）、奥氮平（0.003-1 mg/kg）或载体。随后立即腹腔注射D-安非他明（2 mg/kg），并记录其水平活动60分钟。 [1]

6. **大鼠亚慢性PCP和安非他明激发试验：**雄性Wistar大鼠连续14天每日腹腔注射PCP HCl（5 mg/kg）或溶剂。末次注射24小时后，大鼠在测试箱中适应30分钟。随后，大鼠口服Bitopertin（1、3、10 mg/kg）或溶剂，1小时后腹腔注射D-安非他明（1 mg/kg）或溶剂。记录安非他明给药后120分钟内的水平活动。 [1]

7. **大鼠体外[³H]雷克洛必利结合实验：** 大鼠（未经处理或经14天PCP/生理盐水处理后）接受10 mg/kg未标记雷克洛必利±1 mg/kg右旋安非他明，15分钟后给予[³H]雷克洛必利。20分钟后处死大鼠，测量纹状体和额叶皮层的放射性。计算特异性结合率。[1]

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采用多种不同的动物实验方案评估了比托哌汀的体内效应。

1. 药物制剂和给药：所有体内研究中，比托哌汀均溶于含0.3% Tween 80的水中，并以10 ml/kg体重的剂量进行口服（po）。 [1]

2. 大鼠微透析：将微透析探针植入雄性Sprague-Dawley大鼠纹状体（坐标：A 0.2 mm，L 2.9 mm，V 7 mm）。恢复3-4天后，收集灌注液样本。收集基线样本后，大鼠分别接受Bitopertin（1-30 mg/kg，口服）或溶剂对照。采用高效液相色谱-电化学联用（HPLC-EC）法分析灌注液中的甘氨酸水平。[1]

3. 大鼠脑脊液采集：雄性Wistar大鼠分别接受Bitopertin（1-10 mg/kg，口服）或溶剂对照。3小时后，在异氟烷麻醉下，从枕大池采集脑脊液。采用¹H NMR光谱法定量分析甘氨酸浓度。 [1]

4. L-687,414 诱导小鼠活动过度：雄性 NMRI 小鼠分别接受 Bitopertin（0.3-10 mg/kg，口服）或载体处理。一小时后，小鼠接受 L-687,414（50 mg/kg，皮下注射）或载体处理。适应 15 分钟后，使用活动监测系统记录小鼠 60 分钟的水平活动。在时间进程研究中，L-687,414 在 Bitopertin 给药后以不同的时间间隔给药。在亚慢性研究中，小鼠每天接受 Bitopertin（1 mg/kg，口服）给药，连续 4 天，并在第 5 天进行测试。[1]

5. 苯丙胺诱导小鼠活动过度：雄性 NMRI 小鼠在活动箱中适应 60 分钟。随后，他们分别口服比妥匹汀（0.3-3 mg/kg）、氯氮平（0.3-3 mg/kg）、奥氮平（0.003-1 mg/kg）或赋形剂。紧接着，腹腔注射右旋安非他明（2 mg/kg），并记录其水平活动60分钟。[1]

6. 大鼠亚慢性PCP和安非他明激发试验：雄性Wistar大鼠连续14天每日腹腔注射PCP HCl（5 mg/kg）或赋形剂。末次注射24小时后，大鼠在测试箱中适应30分钟。随后，大鼠口服比妥匹汀（1、3、10 mg/kg）或赋形剂，1小时后腹腔注射右旋安非他明（1 mg/kg）或赋形剂。记录安非他明给药后 120 分钟的水平活动。[1]

7. 大鼠离体 [³H]雷克洛必利结合实验：大鼠（未经处理或经 14 天 PCP/生理盐水处理后）接受 10 mg/kg 未标记雷克洛必利 ± 1 mg/kg D-安非他明，15 分钟后给予 [³H]雷克洛必利。20 分钟后处死大鼠，测量纹状体和额叶皮层的放射性。计算特异性结合。[1]

该研究指出，在微透析实验中，Bitopertin 的作用持久，且与其先前在大鼠体内观察到的药代动力学特征一致。在 L-687,414 模型中，其疗效的时间进程（在 0.5、2.5 和 4.5 小时有效，但在 24 小时无效）也与其药代动力学特性相符。然而，本文并未报告具体的药代动力学参数（例如，半衰期、生物利用度、Cmax）。[1]

hERG通道抑制：Bitopertin对hERG钾通道的抑制作用较弱，IC₅₀为17 μM（膜片钳实验测定），其对GlyT1的活性选择性比GlyT1高500倍以上。[2]
- CYP450抑制：对主要CYP酶无显著抑制作用（IC₅₀ > 24 μM）。[2]
- 遗传毒性：Bitopertin在遗传毒性试验（Ames试验和微核试验，MNT）中未显示活性。[2]
- 一般安全性：在所测试剂量下的体内研究中未观察到明显的不良反应。[2]

[1]. Glycine reuptake inhibitor RG1678: A pharmacologic characterization of an investigational agent for the treatment of schizophrenia. Neuropharmacology. 2012 Feb;62(2):1152-61.

[2]. Selective GlyT1 Inhibitors: Discovery of [4-(3-Fluoro-5-trifluoromethylpyridin-2-yl)piperazin-1-yl][5-methanesulfonyl-2-((S)-2,2,2-trifluoro-1-methylethoxy)phenyl]methanone (RG1678), a Promising Novel Medicine To Treat Schizophrenia. J Me.

比托哌汀已用于临床试验，研究其在治疗精神分裂症和强迫症中的应用。

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药物适应症
治疗精神分裂症

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比托哌汀（RG1678；RO-4917838）是一种用于治疗精神分裂症的在研药物。它是一种强效、选择性且非竞争性的甘氨酸转运蛋白1型（GlyT1）抑制剂。通过抑制GlyT1，它可提高脑内细胞外甘氨酸水平，进而增强NMDA受体功能。该机制基于精神分裂症的谷氨酸假说，该假说认为NMDA受体功能低下是导致该疾病症状的原因之一。本文所述的临床前研究表明，Bitopertin能够调节与精神分裂症相关的动物模型中的谷氨酸能和多巴胺能神经传递。在本文发表时，该药物正在多项临床试验中进行研究。[1]

C21H20F7N3O4S

543.4550

543.106

845614-11-1

Bitopertin (R enantiomer);845614-12-2

24946690

White to off-white solid powder

5.018

88.19

0

13

5

36

872

1

C[C@@H](C(F)(F)F)OC1=C(C=C(C=C1)S(=O)(=O)C)C(=O)N2CCN(CC2)C3=C(C=C(C=N3)C(F)(F)F)F

YUUGYIUSCYNSQR-LBPRGKRZSA-N

InChI=1S/C21H20F7N3O4S/c1-12(20(23,24)25)35-17-4-3-14(36(2,33)34)10-15(17)19(32)31-7-5-30(6-8-31)18-16(22)9-13(11-29-18)21(26,27)28/h3-4,9-12H,5-8H2,1-2H3/t12-/m0/s1

[4-[3-fluoro-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl]piperazin-1-yl]-[5-methylsulfonyl-2-[(2S)-1,1,1-trifluoropropan-2-yl]oxyphenyl]methanone

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 50 mg/mL (~92.00 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。