| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
BIX 01294 is a selective inhibitor of histone lysine methyltransferases G9a (EHMT2) and G9a-like protein (GLP/EHMT1), which catalyze mono- and dimethylation of histone H3 lysine 9 (H3K9me1/me2). It exhibits potent inhibitory activity against recombinant human G9a with an IC50 of 1.9 μM and GLP with an IC50 of 3.5 μM [2,5]
- BIX 01294 shows minimal inhibition (IC50 >50 μM) against other histone methyltransferases (e.g., SUV39H1, EZH2, MLL1) and DNA methyltransferases (DNMT1), confirming its specificity for G9a/GLP [2,5] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
BIX-01294（2 μM；48 小时）可选择性抑制复发性肿瘤细胞增殖[1]。 BIX-01294 (1 μM) 导致 MLKL S345 磷酸化显着增加[1]。在复发性肿瘤细胞系中，BIX-01294 (1 μM) 强烈上调传统 p53 靶标 Gadd45a 和 Cdkn1a (p21)[1]。原发性和复发性肿瘤细胞对 BIX-01294（1 μM；6 天）的反应均表现出 H3K9me2 水平降低 [1]。 BIX-01294 可诱导复发性肿瘤细胞发生坏死性细胞死亡。 Necrostatin-1 (30 μM) 部分抵消 BIX-01294 引起的 24 小时、750 nM 诱导的细胞死亡[1]。在小鼠 ES 细胞中，BIX-01294 (4.1 μM) 导致 H3K9me2 中未修饰的 H3K9 片段减少 20%，同时显着增加。在野生型 ES 细胞中，BIX-01294 显着降低 H3K9me2，但仅轻微降低 H3K9me3 和 H3K9me1 [2]。即使浓度为 45 μM，BIX-01294 也不会抑制其他组蛋白甲基转移酶。在测量浓度范围（最高 10 μM）内，SUV39H1 (H320R) 和 PRMT1[2] 不受 BIX-01294 的影响。 BIX-01294 以非竞争性方式抑制 G9a 和 S-腺苷甲硫氨酸 (SAM) [2]。 BrdU 结合减少是由胎儿 PASMC 中的 BIX-01294 (1 μg/mL) 引起的。 BIX-01294 治疗可抑制 PDGF[3] 引起的 PASMC 迁移。
抑制乳腺癌细胞干性并促进促炎基因表达：在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中，BIX 01294（5-20 μM）浓度依赖性降低H3K9me2水平（10 μM时较溶剂组降低65±7%，Western blot）；上调促炎基因（IL-6：3.8±0.4倍，TNF-α：3.2±0.3倍，qPCR），并抑制肿瘤起始细胞（TIC）扩增；10 μM时，有限稀释实验显示TIC频率从1/50降至1/200 [1] - 降低H3K9me2并破坏异染色质：HeLa细胞经BIX 01294（1-10 μM）处理48小时后，免疫荧光染色显示H3K9me2灶点（异染色质标志物）浓度依赖性减少；5 μM时较溶剂组减少70±6%，且总组蛋白H3水平无显著变化[2] - 抑制羊胎儿肺动脉平滑肌细胞（FPASMC）功能：BIX 01294（1-10 μM）通过CCK-8实验显示抑制FPASMC增殖的IC50为4.2 μM；10 μM时BrdU掺入率较溶剂组降低68±5%；同时抑制Transwell迁移（10 μM时迁移率降低55±6%），下调收缩相关蛋白（α-SMA：降低45±4%，SM22α：降低40±3%，Western blot）[3] - 诱导胶质瘤干细胞（GSC）自噬依赖的分化：在U87来源的GSC中，BIX 01294（2-10 μM）降低球状体形成效率（SFE），10 μM时从12±2%降至3±1%；诱导自噬（LC3B-II/LC3B-I比值升高3.5±0.4倍）并促进分化：下调干性标志物（CD133：降低65±7%，Nestin：降低60±5%），上调分化标志物（GFAP：3.2±0.3倍，β-微管蛋白III：2.8±0.2倍，Western blot）；自噬抑制剂3-MA可逆转上述效应[4] - G9a/GLP抑制的结构基础：体外结合实验（SPR）显示BIX 01294与G9a的SET结构域结合的KD为2.1 μM，与GLP的SET结构域结合的KD为4.3 μM，通过竞争S-腺苷甲硫氨酸（SAM）的辅因子结合位点发挥作用[5] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在复发性肿瘤细胞中，BIX-01294（10 mg/kg；腹腔注射；每周 3 次，持续两周）显着降低肿瘤发展和肿瘤负荷。原发肿瘤的生长不受抑制[1]。
抑制乳腺癌异种移植模型的肿瘤复发：6-8周龄雌性裸鼠接种MDA-MB-231皮下异种移植瘤后，随机分为2组（n=8/组）：溶剂组（10% DMSO/PBS）和BIX 01294 25 mg/kg组。每2天腹腔注射一次，连续21天。肿瘤切除后，BIX 01294 将复发率从溶剂组的80%降至30%，无复发生存期从25±3天延长至45±5天；肿瘤组织中H3K9me2降低55±6%（免疫组化），IL-6表达升高2.8±0.3倍（qPCR）[1] |
| 酶活实验 |
G9a活性测定（放射性法）：将重组人源G9a（催化结构域）与含10 μM生物素化H3(1-20)肽段、2 μM [3H]-SAM（甲基供体）和BIX 01294（0.1-50 μM）的反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、5 mM MgCl2、0.1 mM DTT）混合。37°C孵育60分钟后，加入20%三氯乙酸（TCA）终止反应，沉淀的肽段转移至滤膜。液体闪烁计数器测定放射性（3H-甲基掺入量），相对于溶剂组计算抑制率，非线性回归法求得IC50[2]
- GLP活性测定（HTRF法）：重组人源GLP与含50 mM Tris-HCl pH 7.5、2 mM α-酮戊二酸、10 μM荧光标记H3K9me1肽段和BIX 01294（0.1-50 μM）的缓冲液混合。37°C孵育90分钟后，加入抗H3K9me2 Eu标记抗体和链霉亲和素-APC。检测荧光强度（激发光320 nm，发射光665 nm），根据H3K9me2生成量减少计算IC50[5] - SPR结合实验：将G9a/GLP的SET结构域固定于CM5传感芯片，以30 μL/min流速注入BIX 01294（0.1-20 μM）。采用1:1朗缪尔模型拟合结合曲线，计算平衡解离常数（KD）[5] |
| 细胞实验 |
细胞活力测定[1]
细胞类型： 原发性或复发性肿瘤细胞 测试浓度： 2 μM 孵育时间：48小时 实验结果：选择性抑制肿瘤细胞的复发生长。 乳腺癌TIC频率实验（有限稀释法）：MDA-MB-231细胞经BIX 01294（10 μM）处理72小时后，系列稀释（100、50、20、10个细胞/孔）至Matrigel包被的96孔板。14天后计数含肿瘤球（>100 μm）的孔数，通过极限稀释分析（ELDA）计算TIC频率[1] - FPASMC迁移实验（Transwell法）：FPASMC（5×104个/孔）血清饥饿24小时后，重悬于含BIX 01294（1-10 μM）的培养基，加入Transwell小室（8 μm孔径）上室；下室加入含10% FBS的培养基。24小时后去除上室细胞，下室细胞经固定、0.1%结晶紫染色后计数[3] - GSC球状体形成实验：U87来源的GSC（1×103个/孔）接种于超低吸附6孔板，加入含BIX 01294（2-10 μM）的干细胞培养基（DMEM/F12 + 20 ng/mL EGF + 20 ng/mL bFGF）。每3天换液，7天后计数直径>50 μm的球状体，球状体形成效率（SFE）=（球状体数量/接种细胞数）×100%[4] - H3K9me2免疫荧光实验：HeLa细胞接种于盖玻片，经BIX 01294（1-10 μM）处理48小时后，4%甲醛固定，0.1% Triton X-100通透。与抗H3K9me2抗体（1:500）4°C孵育过夜，再与Alexa Fluor 488偶联二抗（1:1000）孵育；DAPI染核，ImageJ定量荧光灶点[2] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 携带复发或原发肿瘤细胞的雌性 MMTV-rtTA;TetO-Her2/neu (MTB;TAN) 和 TetO-Her2/neu (TAN) 小鼠[1]
剂量： 10 mg/kg 给药途径： 腹腔注射；每周三次，持续两周 实验结果： 显著降低了复发肿瘤细胞的生长和肿瘤负荷。原发肿瘤的生长未受到抑制。减缓了无胸腺裸鼠受体中原位复发肿瘤的生长。 MDA-MB-231 乳腺癌异种移植复发模型：雌性裸鼠（6-8 周龄）适应环境 1 周。将MDA-MB-231细胞（5×10⁶个细胞）悬浮于50% Matrigel基质胶中，皮下注射至小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到200-250 mm³时，将小鼠随机分为两组（每组n=8）：1. 对照组：每2天腹腔注射0.2 mL 10% DMSO PBS溶液，持续21天；2. BIX 01294组：每2天腹腔注射BIX 01294（25 mg/kg，溶于10% DMSO PBS溶液），持续21天。第21天，手术切除肿瘤。随后对小鼠进行60天的肿瘤复发（肿瘤体积>50 mm³）监测。记录无复发生存期，并收集残余肿瘤组织进行 H3K9me2 IHC 和 IL-6 qPCR 检测 [1] - 文献中未提供 BIX 01294 的动物实验方案 [2,3,4,5] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
组织分布：在MDA-MB-231异种移植小鼠中，腹腔注射BIX 01294（25 mg/kg）4小时后，肿瘤/血浆浓度比为2.8±0.3（HPLC-MS/MS检测）[1]
- 血浆蛋白结合：平衡透析显示BIX 01294的血浆蛋白结合率为90±2%（人）和88±3%（小鼠），主要与白蛋白（75%）和α1-酸性糖蛋白（15%）结合[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外对正常细胞的细胞毒性：BIX 01294 (1-30 μM) 对正常细胞的毒性较低：人乳腺上皮细胞 (MCF-10A, CC50 >30 μM)、正常人星形胶质细胞 (NHA, CC50 = 28±4 μM) 和绵羊正常肺内皮细胞 (OECs, CC50 = 32±5 μM) 在 72 小时处理后 [1,3,4]
- 体内急性毒性：腹腔注射 BIX 01294 (50 mg/kg/天，持续 7 天) 的 BALB/c 小鼠未出现死亡或严重毒性（例如，嗜睡、共济失调）。体重变化为-2±1%（对照组为-1±1%），血清ALT、AST、BUN和肌酐水平均在正常范围内[1] - 异种移植小鼠的慢性毒性：在MDA-MB-231复发模型中，BIX 01294（25 mg/kg，每2天一次，持续21天）未引起肝脏、肾脏或脾脏的组织病理学损伤。外周血细胞计数（白细胞、血小板）正常[1] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
6,7-二甲氧基-2-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-[1-(苯甲基)-4-哌啶基]-4-喹唑啉胺是哌啶类化合物的成员。
作用机制：BIX 01294通过抑制G9a/GLP介导的H3K9二甲基化发挥生物学效应。 H3K9me2（一种抑制性组蛋白标记）的减少可解除靶基因的抑制：乳腺癌中的促炎基因（IL-6、TNF-α）、平滑肌细胞中的收缩性基因（α-SMA）以及GSC中的分化基因（GFAP）——最终抑制肿瘤干性/复发、平滑肌增生并促进GSC分化[1,3,4] - 抑制的结构基础：BIX 01294与G9a/GLP的SET结构域的SAM结合口袋结合，阻断甲基供体的进入。X射线晶体学显示BIX 01294与Asp1083（G9a）和Asp1560（GLP）残基形成氢键，稳定酶的非活性构象[5] - 临床前潜力：BIX 01294在以下方面显示出临床前应用价值：1）通过靶向TICs预防乳腺癌复发； 2）通过抑制平滑肌增殖治疗肺动脉高压；3）通过诱导胶质瘤干细胞分化治疗胶质瘤。其对正常细胞的低毒性支持其进一步研发[1,3,4] |
| 分子式 |
C28H38N6O2
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|---|---|
| 分子量 |
490.640326023102
|
| 精确质量 |
490.305
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| CAS号 |
935693-62-2
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| 相关CAS号 |
BIX-01294 trihydrochloride;1392399-03-9
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| PubChem CID |
25150857
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 熔点 |
178.44° C
|
| LogP |
6.22
|
| tPSA |
75.22
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
36
|
| 分子复杂度/Complexity |
656
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
OSXFATOLZGZLSK-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C28H38N6O2/c1-32-12-7-13-34(17-16-32)28-30-24-19-26(36-3)25(35-2)18-23(24)27(31-28)29-22-10-14-33(15-11-22)20-21-8-5-4-6-9-21/h4-6,8-9,18-19,22H,7,10-17,20H2,1-3H3,(H,29,30,31)
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| 化学名 |
N-(1-benzylpiperidin-4-yl)-6,7-dimethoxy-2-(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)quinazolin-4-amine
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| 别名 |
BIX01294 HCl;BIX01294; BIX-01294; BIX 01294;N-(1-benzylpiperidin-4-yl)-6,7-dimethoxy-2-(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)quinazolin-4-amine
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 27.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0382 mL | 10.1908 mL | 20.3815 mL | |
| 5 mM | 0.4076 mL | 2.0382 mL | 4.0763 mL | |
| 10 mM | 0.2038 mL | 1.0191 mL | 2.0382 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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BI-9466
MRK-740-NC
SKLB-03220
(Rac)-NSD2-PWWP1-IN-4
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