| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
BIX01294 triHCl (referred to as BIX01294 in literature) targets G9a histone methyltransferase (EHMT2) and G9a-like protein (GLP/EHMT1) (G9a: Ki = 0.9 nM for SET domain binding [5]
, IC50 = 1.6 μM for H3K9me2 methyltransferase activity [2] ; GLP: IC50 = 3.8 μM for methyltransferase activity [2] ; no significant binding to other histone methyltransferases (EZH2, SUV39H1) with IC50 > 100 μM [2] ) |
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| 体外研究 (In Vitro) |
BIX-01294(2 μM;48 h)三盐酸盐可选择性抑制复发性肿瘤细胞增殖[1]。 BIX-01294 三盐酸盐 (1 μM) 显着增加 MLKL 的 S345 的磷酸化[1]。在复发性肿瘤细胞系中,BIX-01294 (1 μM) 三盐酸盐强烈上调经典 p53 靶标 Cdkn1a (p21) 和 Gadd45a[1]。原发性和复发性肿瘤细胞暴露于 BIX-01294(1 μM;6 天)三盐酸盐后,H3K9me2 水平降低[1]。在复发性肿瘤细胞中,BIX-01294 triHClide 会导致细胞坏死性死亡。使用 necrostatin-1 (30 μM) 部分逆转由 BIX-01294 (750 nM;24 h) 三盐酸盐引起的细胞死亡。在小鼠 ES 细胞中,BIX-01294 (4.1 μM) 三盐酸盐导致 H3K9me2 中未修饰的 H3K9 片段的含量下降约 20%,并有类似的增加。在野生型 ES 细胞中,BIX-01294 triHClide 显着降低 H3K9me2,但 H3K9me3 和 H3K9me1 仅略有降低[2]。即使剂量为 45 μM,BIX-01294 triHClide 也不会阻断任何其他组蛋白甲基转移酶。在所研究的浓度范围(最高 10 μM)内,SUV39H1 (H320R) 和 PRMT1 不受 BIX-01294 三盐酸盐的影响 [2]。 BIX-01294 三盐酸盐以一种非竞争性的方式与 S-腺苷甲硫氨酸 (SAM) 一起抑制 G9a[2]。在胎儿 PASMC 中,BIX-01294 (1 µg/mL) 减少了 BrdU 的掺入量。 BIX-01294 治疗可减少 PDGF 引起的 PASMC 迁移[3]。
1. BIX01294在重组酶实验中强效抑制G9a介导的H3K9二甲基化(H3K9me2),IC50为1.6 μM;在293T细胞中,浓度≥5 μM时可降低H3K9me2水平,且对H3K4或H3K27甲基化无影响[2] 2. 在三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系(MDA-MB-231、BT-549)中,BIX01294(1-10 μM)可剂量依赖性抑制G9a活性,通过qPCR检测发现促炎细胞因子(IL-6、TNF-α、CXCL10)表达上调2-4倍,并以4.2 μM的IC50抑制癌症干细胞(CSC)的球形成[1] 3. 在绵羊胎儿肺动脉平滑肌细胞(FPASMCs)中,BIX01294(1-10 μM)抑制细胞增殖的IC50为3 μM,10 μM浓度下使划痕伤口愈合率降低65%、胶原凝胶收缩率抑制70%;蛋白质免疫印迹显示平滑肌收缩标志物(α-SMA、SM22α)表达下调[3] 4. 在胶质瘤干样细胞(GSCs)中,5 μM的BIX01294可诱导自噬依赖性分化,通过流式细胞术检测发现CD133+干细胞群减少80%,神经元(βIII-tubulin)和星形胶质细胞(GFAP)分化标志物表达上调3-5倍[4] 5. X射线晶体学结构分析表明,BIX01294结合G9a SET结构域的SAM结合口袋,阻碍S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的结合,从而抑制甲基向组蛋白H3的转移[5] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在复发性肿瘤细胞中,BIX-01294 三盐酸盐(10 mg/kg;腹腔注射;每周三次,持续两周)可显着降低肿瘤发展和肿瘤负荷。原发肿瘤的生长不受抑制[1]。
1. BIX01294在重组酶实验中强效抑制G9a介导的H3K9二甲基化(H3K9me2),IC50为1.6 μM;在293T细胞中,浓度≥5 μM时可降低H3K9me2水平,且对H3K4或H3K27甲基化无影响[2] 2. 在三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系(MDA-MB-231、BT-549)中,BIX01294(1-10 μM)可剂量依赖性抑制G9a活性,通过qPCR检测发现促炎细胞因子(IL-6、TNF-α、CXCL10)表达上调2-4倍,并以4.2 μM的IC50抑制癌症干细胞(CSC)的球形成[1] 3. 在绵羊胎儿肺动脉平滑肌细胞(FPASMCs)中,BIX01294(1-10 μM)抑制细胞增殖的IC50为3 μM,10 μM浓度下使划痕伤口愈合率降低65%、胶原凝胶收缩率抑制70%;蛋白质免疫印迹显示平滑肌收缩标志物(α-SMA、SM22α)表达下调[3] 4. 在胶质瘤干样细胞(GSCs)中,5 μM的BIX01294可诱导自噬依赖性分化,通过流式细胞术检测发现CD133+干细胞群减少80%,神经元(βIII-tubulin)和星形胶质细胞(GFAP)分化标志物表达上调3-5倍[4] 5. X射线晶体学结构分析表明,BIX01294结合G9a SET结构域的SAM结合口袋,阻碍S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的结合,从而抑制甲基向组蛋白H3的转移[5] |
| 酶活实验 |
1. G9a甲基转移酶活性实验:将重组G9a SET结构域蛋白与组蛋白H3(1-21)肽底物、S-腺苷-[甲基-³H]甲硫氨酸([³H]SAM)及系列稀释的BIX01294(0.1-100 μM)在反应缓冲液中30℃孵育60分钟;用三氯乙酸终止反应,通过液体闪烁计数法定量掺入肽中的放射性甲基基团;从剂量-反应曲线计算G9a抑制的IC50值[2]
2. G9a结合等温滴定量热法(ITC)实验:在25℃条件下,将100 μM的BIX01294滴定至量热仪样品池中的10 μM重组G9a SET结构域溶液中;记录结合相互作用产生的热变化,推导热力学参数(ΔH、ΔS、KD),以此表征BIX01294与G9a的结合亲和力[5] 3. 结合模式X射线晶体学实验:将G9a SET结构域蛋白与BIX01294以1:1的摩尔比共结晶;利用同步辐射源对晶体进行衍射,将BIX01294-G9a复合物的三维结构解析至2.3 Å分辨率,明确关键的结合相互作用(氢键、疏水接触)[5] |
| 细胞实验 |
细胞活力测定[1]
细胞类型: 原发性或复发性肿瘤细胞 测试浓度: 2 μM 孵育时间:48小时 实验结果:选择性抑制肿瘤细胞的复发生长。 1. 乳腺癌干细胞球形成实验:将TNBC细胞(MDA-MB-231)以1000个/孔的密度接种于超低吸附板,加入干细胞培养基并给予BIX01294(0.1-10 μM)处理;37℃、5% CO₂条件下孵育7天后,计数直径>50 μm的球状体,计算相对于载体处理对照组的球形成抑制百分比[1] 2. 肺动脉平滑肌细胞增殖与迁移实验:将绵羊FPASMCs以5×10³个/孔接种于96孔板,用BIX01294(1、5、10 μM)处理72小时;通过比色试剂检测细胞活力,计算增殖抑制的IC50;迁移实验中,用移液管尖端划伤细胞,给予BIX01294处理后,在0、24、48小时对伤口愈合情况进行成像和定量[3] 3. 胶质瘤干样细胞分化与自噬实验:将GSCs培养于神经球培养基中,用BIX01294(1、5、10 μM)处理5天;通过流式细胞术分析CD133表达,qPCR定量分化标志物(GFAP、βIII-tubulin);通过蛋白质免疫印迹检测LC3-II/LC3-I比值和p62降解水平评估自噬,且自噬抑制剂(3-MA)可逆转BIX01294诱导的分化[4] 4. H3K9me2表观修饰实验:将293T细胞转染G9a表达质粒,用BIX01294(0.5-20 μM)处理24小时;提取组蛋白提取物,通过蛋白质免疫印迹用特异性抗体检测H3K9me2水平;利用密度计量法量化相对于β-肌动蛋白内参的甲基化变化[2] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型:雌性MMTV-rtTA;TetO-Her2/neu (MTB;TAN)和携带复发或原发肿瘤细胞的TetO-Her2/neu (TAN)小鼠[1]
剂量:10 mg/kg 给药途径:腹腔注射;每周三次,持续2周 实验结果:显著降低了复发肿瘤细胞的生长和肿瘤负荷。原发肿瘤的生长未受到抑制。减缓了无胸腺裸鼠受体原位复发肿瘤的生长。 1. TNBC原位异种移植和复发模型:将1×10⁶个MDA-MB-231-荧光素酶细胞原位注射到6-8周龄雌性NOD/SCID小鼠的乳腺脂肪垫中;当肿瘤体积达到 200 mm³ 时,手术切除原发肿瘤;将 BIX01294 配制成 10% DMSO、40% PEG400 和 50% 无菌生理盐水的溶剂,并以 5 mg/kg 的剂量腹腔注射,每周三次,持续 4 周;每 7 天使用生物发光成像 (BLI) 监测肺转移情况,并记录 60 天的无复发生存期 [1] 2. mESC 畸胎瘤形成实验:将小鼠胚胎干细胞在体外用 BIX01294 (10 μM) 或溶剂预处理 48 小时,然后皮下注射到 NOD/SCID 小鼠体内 (1×10⁶ 个细胞/只小鼠); 4周后取出畸胎瘤,称重,并通过组织学分析评估其向外胚层、中胚层和内胚层谱系的分化情况[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 在用BIX01294(5 mg/kg,腹腔注射,每周三次,持续4周)治疗的NOD/SCID小鼠中,未观察到明显的体重减轻(<5%)或明显的毒性反应(例如嗜睡、食欲减少);与载体对照组相比,血清ALT、AST、BUN和肌酐水平未发生变化[1]
2. 体外细胞毒性试验表明,BIX01294在浓度≤10 μM时对正常人乳腺上皮细胞(HMEC)或正常星形胶质细胞无显著影响,处理72小时后细胞存活率>90%[1][4] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
1. BIX01294 是首个小分子 G9a 组蛋白甲基转移酶抑制剂,G9a 是 H3K9 二甲基化的关键表观遗传调控因子,参与基因沉默、细胞分化和癌症进展 [2]
2. BIX01294 的作用机制包括与 G9a SET 结构域的 SAM 结合口袋竞争性结合,阻断甲基转移至组蛋白 H3,从而重新激活沉默的促炎基因和分化相关基因 [5] 3. BIX01294 在三阴性乳腺癌中显示出临床前活性,其作用机制是通过逆转 G9a 介导的先天免疫反应抑制,降低癌症干细胞的可塑性和转移潜能 [1] 4. BIX01294 具有治疗肺动脉高压(通过抑制平滑肌细胞增殖)的潜在应用价值。胶质母细胞瘤(通过诱导GSC分化),并且是研究G9a表观遗传调控的宝贵工具化合物[3][4] 5. BIX01294尚未在临床试验中进行评估,也没有获得FDA批准或警告信息;由于其药代动力学性质较差(例如,溶解度低),其开发仅限于基础研究[2][5] |
| 分子式 |
C28H41CL3N6O2
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|---|---|
| 分子量 |
600.0231
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| 精确质量 |
598.235
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| CAS号 |
1392399-03-9
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| 相关CAS号 |
BIX-01294;935693-62-2
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| PubChem CID |
46945860
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
5.634
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| tPSA |
69.22
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
7
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| 重原子数目 |
39
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| 分子复杂度/Complexity |
656
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
Cl[H].Cl[H].Cl[H].O(C([H])([H])[H])C1=C(C([H])=C2C(=C1[H])C(=NC(=N2)N1C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H])N([H])C1([H])C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])C([H])([H])C1([H])[H])OC([H])([H])[H]
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| InChi Key |
FMURUEPQXKJIPS-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C28H38N6O2.3ClH/c1-32-12-7-13-34(17-16-32)28-30-24-19-26(36-3)25(35-2)18-23(24)27(31-28)29-22-10-14-33(15-11-22)20-21-8-5-4-6-9-21;;;/h4-6,8-9,18-19,22H,7,10-17,20H2,1-3H3,(H,29,30,31);3*1H
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| 化学名 |
N-(1-benzylpiperidin-4-yl)-6,7-dimethoxy-2-(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)quinazolin-4-amine;trihydrochloride
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| 别名 |
BIX01294; BIX-01294; BIX 01294;N-(1-benzylpiperidin-4-yl)-6,7-dimethoxy-2-(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)quinazolin-4-aminetrihydrochloride
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6666 mL | 8.3331 mL | 16.6661 mL | |
| 5 mM | 0.3333 mL | 1.6666 mL | 3.3332 mL | |
| 10 mM | 0.1667 mL | 0.8333 mL | 1.6666 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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