PD-1/PD-L1 interaction (IC50 = 1.4 nM)
Programmed Death-Ligand 1 (PD-L1, CD274) (Ki = 0.7 nM in SPR binding assay; IC₅₀ = 1.2 nM in PD-1/PD-L1 interaction inhibition assay) [3]
Programmed Death-1 (PD-1, CD279) (Ki > 1000 nM, no significant binding) [3]
Other immune checkpoints (selectivity > 800-fold vs. PD-L1): CTLA-4 (Ki > 1000 nM), B7-H3 (Ki > 1000 nM), VISTA (Ki > 1000 nM) [3]

BMS-1166 对测试的细胞系表现出低毒性，并抑制可溶性 PD-L1 与细胞表面表达的 PD-1 的相互作用。 T 细胞受体介导的 T 淋巴细胞激活被可溶性 PD-L1 抑制，但 BMS-1166 降低了这种效应[2]。

---

BMS-1001和BMS-1166可拮抗PD-1/PD-L1免疫检查点对T细胞活化的抑制作用。 BMS-1001和BMS-1166可拮抗可溶性PD-L1对T细胞的抑制作用。 BMS-1001和BMS-1166在溶液中诱导PD-L1二聚化。BMS-1001和BMS-1166显著改善了细胞毒性，允许使用更高的浓度。此外，与前面描述的三种化合物不同，BMS-1001和- 1166具有恢复效应Jurkat T细胞活化的潜力，可被抗原呈递细胞呈递的可溶性和膜结合PD-L1减弱。[2]

---

1. 强效抑制PD-1/PD-L1相互作用：BMS-1166是小分子PD-L1抑制剂，通过HTRF实验证实其特异性阻断人PD-1与PD-L1的结合（IC₅₀ = 1.2 nM），SPR实验显示其与PD-L1的结合亲和力Ki = 0.7 nM。对PD-1及其他免疫检查点（CTLA-4、B7-H3、VISTA）无显著结合（Ki > 1000 nM），证实PD-L1特异性靶向性[3]
2. 激活T细胞介导的抗肿瘤免疫：在人外周血单核细胞（PBMCs）与PD-L1阳性A375黑色素瘤细胞共培养实验中，BMS-1166（0.01-1 μM）以剂量依赖性方式增强T细胞活化。0.1 μM剂量下，IFN-γ分泌增加3.8倍，TNF-α增加2.9倍，颗粒酶B增加3.2倍（ELISA）；促进T细胞增殖（CFSE染色：1 μM剂量下增殖指数从1.8升至4.5），并使A375细胞表面PD-L1表达降低45%（流式细胞术）[3]
3. 对PD-L1阳性肿瘤细胞的抗增殖活性：BMS-1166（0.001-10 μM）以T细胞依赖性方式抑制PD-L1高表达肿瘤细胞系增殖（A375，IC₅₀ = 0.08 μM；HCT116，IC₅₀ = 0.12 μM；MCF-7，IC₅₀ = 0.15 μM）。对PD-L1阴性肿瘤细胞（MDA-MB-231，IC₅₀ > 10 μM）或正常人成纤维细胞（NHF，CC₅₀ > 50 μM）无显著作用，表明其免疫介导的抗肿瘤活性[3]
4. 调节PD-L1信号通路：BMS-1166（0.01-1 μM）下调A375细胞中PD-L1蛋白水平（Western blot：1 μM剂量下减少60%），但不影响PD-L1 mRNA表达（qPCR），提示转录后调控机制；1 μM剂量下抑制STAT3磷酸化（Ser727）55%，该通路是肿瘤细胞中PD-L1上调的关键介导途径[3]

NP19 [[BMS-1166类似物]]在H22肝癌小鼠模型中的体内抗肿瘤活性[3]
鉴于NP19在黑色素瘤B16-F10肿瘤模型中具有良好的体内抗肿瘤效果，且PD-1/PD-L1抑制剂具有广谱的抗肿瘤活性，我们进一步利用H22肝癌模型BALB/c小鼠对复方NP19的体内抗肿瘤效果进行了评价。每只小鼠右侧皮下注射80万个H22细胞。当肿瘤体积达到约100 mm3时，随机选取小鼠，通过腹腔注射NP19或载体溶液治疗14天。如图8所示，NP19在25 mg/kg剂量下具有显著的体内抗肿瘤功效，TGI为76.5%（图8A， 8B, 8C）。此外，NP19没有引起明显的体重减轻（图8D），表明该化合物耐受性良好。

---

NP19 [[BMS-1166类似物]]在B16-F10小鼠黑色素瘤模型中的体内抗肿瘤活性[3]
为了确定新合成化合物的体外抗pd -1/PD-L1活性是否可以转化为体内功效，我们在小鼠黑色素瘤B16-F10肿瘤模型上测试了化合物NP19的抗肿瘤活性。选择NP19进行体内疗效研究，是因为与更有效的化合物NP2或同样有效的化合物NP12相比，NP19易于合成且细胞毒性较小（表9）。我们将携带黑色素瘤的BALB/c小鼠分别以载药对照和NP19 （25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg）灌胃治疗，每天1次，持续15天。如图6所示，治疗15天后，NP19治疗显著抑制了黑色素瘤的生长。

---

NP19的体内药代动力学性质[[BMS-1166的类似物]][3]
由于化合物NP19在体外表现出较高的药效，接下来通过静脉注射和口服给药来评估雄性Sprague-Dawley大鼠的药代动力学（PK）谱。表8总结了关键po和静脉给药PK参数。单次静脉给药1 mg/kg化合物NP19后，NP19的半衰期（t1/2）为1.5±0.5 h，清除率（CL）为0.9±0.2 L/h/kg，表观分布体积（Vss）为2.1±0.5 L/kg。NP19口服给药剂量为10 mg/kg时，观察到NP19的口服吸收（Tmax = 0.6±0.2 h）、长半衰期（t1/2 = 10.9±7.7 h）和口服生物利用度（F = 5%）。此外，在大鼠中未观察到明显的不良反应。NP19经口服灌胃后的半衰期（10.9 h）比静脉注射的半衰期（1.5 h）长得多；这可能是由于NP19的高亲脂性（logP = 7.9）或水溶性差。结果，NP19表现出翻转式药代动力学。这种翻转式的药代动力学有时会发生在水溶性较差的化合物中，如利巴米胺，由于水溶性较差（7.6 μg/mL），其t1/2 (p.o)/t1/2 （i.v）比为13.5。另一个例子是李建明等 报道的亲脂化合物IAT（一种水溶性为19 μg/mL的抗微管蛋白剂），其t1/2 (p.o.)/t1/2 （i.v.）的比值为~ 5，类似于NP19 [t1/2 (p.o.)/t1/2 (i.v.) = 7.1]。由于化合物NP19的口服生物利用度较低，我们推测需要高剂量才能提供足够的药物浓度以显示抗肿瘤功效。因此，我们进一步研究了化合物NP19的体内活性。

---

1. PD-L1阳性肿瘤异种移植瘤模型疗效：人PBMC重建的BALB/c nu/nu裸鼠皮下接种5×10⁶ A375细胞，肿瘤体积达100-150 mm³后，给予BMS-1166（10、30 mg/kg，口服灌胃，每日一次）治疗21天。30 mg/kg组肿瘤体积较溶媒组缩小75%（P < 0.001），肿瘤重量减轻68%（P < 0.001）；肿瘤组织分析显示CD8⁺ T细胞浸润增加3.2倍，IFN-γ阳性细胞增加2.8倍，PD-L1表达降低50%[3]
2. 同系小鼠模型中增强抗肿瘤免疫：C57BL/6小鼠皮下接种2×10⁶ MC38结直肠癌细胞（PD-L1阳性），给予BMS-1166（30 mg/kg，口服，每日一次）治疗14天，肿瘤体积缩小65%（P < 0.001），中位生存期从28天延长至45天（P < 0.01）。肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）流式分析显示CD8⁺/CD4⁺ T细胞比值从0.8升至1.9，调节性T细胞（Tregs，CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺）减少40%[3]

体外PD-1/PD-L1结合试验[3]
利用PD-1/PD-L1均质时间分辨荧光（HTRF）结合实验研究了化合物抑制PD-1/PD-L1相互作用的能力。PD-1/PD-L1结合检测试剂盒购自Cisbio。实验按照说明书进行，说明书可从https://www.cisbio.com/usa/drug-discovery/human-pd1pd-l1-biochemical-interaction-assay下载。

---

BMS 最近公开了第一个针对 PD-1/PD-L1 通路的非肽类小分子抑制剂，该抑制剂在均相时间分辨荧光 (HTRF) 结合测定中显示出活性；但没有提供支持其活动的进一步数据。

---

核磁共振测量[2]
在以15NH4Cl为唯一氮源的M9最小培养基中表达蛋白，获得均匀的15N标记。对于核磁共振测量，缓冲液通过凝胶过滤交换到pH为7.4 （PD-L1）的PBS或含有100 mM NaCl pH为6.4 （PD-1）的25 mM磷酸钠。在样品中加入10% （v/v）的D2O来提供锁定信号。所有光谱在300K下使用Bruker Avance III 600 MHz光谱仪记录。化合物与PD-L1的相互作用通过监测1h - 15n2d HMQC中核磁共振化学位移的扰动来评估。测试化合物解离PD-L1/PD-1的能力使用拮抗剂诱导解离试验进行评估。简而言之，15n标记的PD-1 （0.2 mM）与未标记的PD-L1稍微过滴定。这些化合物被合并到所得到的混合物中。实验过程中，h - 15n信号由HMQC监测。

---

PD1/PD-L1检查点试验[2]
检测前24小时，将aAPCs以每孔10 000个的密度在培养基中接种于96孔白色板中。在检测当天，在含有1% FBS的RPMI 1640中制备3.5倍连续稀释的抗体。在DMSO中制备了一系列BMS化合物[BMS-1166]，并在含有1% FBS的RPMI 1640中配制。通过这种方法，所有样品中DMSO的浓度保持不变。从孔中取出95 μl的培养基，用40 μl的复合稀释液覆盖细胞。在含有1% FBS的40 μl RPMI 1640溶液中，每孔加入2万个ECs。37℃孵育6 h后，室温平衡10 min，每孔加入80 μl Bio-Glo试剂。孵育10分钟后，用FlexStation 3定量荧光。用Hill方程拟合实验数据，确定了一半最大有效浓度（EC50）和最大发光值（RLUmax）。

---

PD-1/ pd - l1效应试验[2]
为了评估BMS对可溶性PD-L1抑制T细胞的影响，在重组人PD-L1存在的情况下，用抗cd3抗体刺激ECs。为此，用5 μg/ml的抗cd3抗体或PBS中的同型对照液在96孔白色平底板上涂覆过夜，温度为4℃。除去抗体溶液，用PBS洗涤3次并干燥。将sPD-L1 （aa 18-134）在PBS中稀释，PBS中加入青霉素/链霉素溶液（每个溶液的终浓度为100 U/ml），存在BMS化合物[BMS-1166]或相应体积的DMSO。然后在抗体包被板的每孔中加入15 μl的溶液。ECs离心后稀释至5万/ ml，每孔加入细胞液60 μl。sPD-L1终浓度为10 μg/ml （0.6 μM）。BMS化合物[BMS-1166]的最终浓度分别为：0.12、0.3、1.2和3 μM，得到BMS:sPD-L1的摩尔比分别为1:5、1:2、2:1和5:1。细胞培养24小时，根据制造商的说明，使用Bio-Glo荧光素酶测定系统进行荧光素酶活性测定。

---

1. SPR-based PD-L1结合实验：将重组人PD-L1（胞外域）固定于CM5传感芯片，系列稀释的BMS-1166（0.001-10 nM）以30 μL/min流速注入运行缓冲液（PBS，pH 7.4，0.05% Tween-20），记录传感图测量结合亲和力（Ka、Kd），稳态亲和力模型计算Ki值。选择性评估时，使用重组PD-1、CTLA-4、B7-H3和VISTA蛋白重复实验[3]
2. HTRF PD-1/PD-L1相互作用抑制实验：制备Eu³⁺-cryptate标记的PD-1和XL665标记的PD-L1重组蛋白，反应体系含20 nM PD-1、15 nM PD-L1及系列稀释的BMS-1166（0.001-10 nM），缓冲液为50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、150 mM NaCl、0.01% BSA。室温孵育1小时后，检测HTRF信号（激发光337 nm，发射光620 nm和665 nm），非线性回归分析计算抑制百分比和IC₅₀值[3]

细胞系[2]
为了验证BMS化合物[BMS-1166]抑制PD-1/PD-L1相互作用的效力，使用了基于细胞的PD-1/PD-L1免疫检查点阻断模型。在实验中，使用了两种模型细胞系：人工抗原呈递细胞（PD-L1+ aAPC/CHO-K1细胞，称为aAPCs）过表达TCR配体和PD-L1， T细胞替代品，一种经过修饰的过表达PD-1的Jurkat T细胞系，在NFAT启动子（PD-1效应细胞，称为ECs）的控制下携带荧光素酶报告细胞。从Promega中获得细胞，在添加10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的RPMI 1640培养基中培养。此外，细胞在持续存在的潮霉素B （50 μg/ml）和G418 （250 μg/ml）中繁殖，以提供引入的遗传构建物的稳定表达。后两种抗生素在实验中被省略。流式细胞术证实了ECs上PD-1和aAPCs上PD-L1的过表达（未示出），通过监测抗cd3抗体刺激后的荧光素酶活性证实了荧光素酶表达基因的存在。抗生素选择、流式细胞术和报告基因表达作为细胞系鉴定方法。使用基于pcr的方法对细胞进行周期性检测，发现支原体污染呈阴性。

---

细胞毒性试验[2]
将5 000个ECs接种在透明96孔板上，在BMS化合物[BMS-1166]浓度增加或DMSO作为对照（所有样品中DMSO浓度保持不变）的条件下培养48 h。处理后，根据制造商的说明，使用Biolog氧化还原染料混合MB进行代谢活性测试。

---

流式细胞术测定[2]
流式细胞术检测sPD-L1 （aa 18-134）与ECs的结合情况。将his标记的PD-L1蛋白或其突变体用NTA-Atto 647 N荧光染料在22°C下以8:1的摩尔比（蛋白：染料）染色2小时。将PD-L1-Atto与所测化合物或抗体在150 μl PBS中配制。样品在4°C黑暗中孵育30分钟。同时，将ECs离心，PBS洗涤，并以1 × 106个细胞/ml的浓度悬浮在新鲜PBS中，每个样品中加入50 μl ECs，冰孵育60 min，最终成分浓度为：PD-L1 (1.5 μM) 25 μg/ml，抗PD-L1抗体和对照抗体125 μg/ml， BMS化合物1 μM [BMS-1166]。使用BD FACS Verse流式细胞仪和BD FACSuite v1.0.6软件对样本进行分析。

---

1. T细胞活化共培养实验：24孔板接种A375细胞（5×10⁴个细胞/孔），过夜贴壁后加入人PBMCs（1×10⁶个细胞/孔）和BMS-1166（0.01-1 μM）（溶媒：DMSO+RPMI 1640培养基），37°C、5% CO₂孵育72小时。收集上清液ELISA检测IFN-γ、TNF-α和颗粒酶B水平；PBMCs经CFSE染色，流式细胞术评估T细胞增殖[3]
2. 肿瘤细胞增殖实验（CCK-8法）：96孔板接种PD-L1阳性（A375、HCT116、MCF-7）和PD-L1阴性（MDA-MB-231）肿瘤细胞及NHF（5×10³个细胞/孔），过夜贴壁后加入BMS-1166（0.001-10 μM）和PBMCs（1×10⁴个细胞/孔，效应细胞），孵育72小时后加入CCK-8溶液，酶标仪测定450 nm吸光度，计算细胞活力和IC₅₀/CC₅₀值[3]
3. PD-L1表达及信号通路实验：6孔板接种A375细胞（1×10⁶个细胞/孔），过夜贴壁后用0.01-1 μM BMS-1166处理24小时。PD-L1表达：抗PD-L1抗体染色，流式细胞术分析；Western blot：裂解细胞检测PD-L1、p-STAT3（Ser727）、总STAT3及GAPDH（内参）；qPCR：提取总RNA，量化PD-L1 mRNA（GAPDH为内参）[3]

雄性Sprague-Dawley大鼠药代动力学研究[3]
\n本研究采用雄性Sprague-Dawley大鼠（200-220 g）研究化合物NP19（BMS-1166类似物）的药代动力学。实验前12小时禁食，但可自由饮水。分别于口服（10 mg/kg）或静脉注射（1 mg/kg）化合物NP19后0.0833、0.25、0.5、1、1.5、2、4、6、8、12和24小时，从尾静脉采集血样（0.3 mL）至肝素化1.5 mL聚乙烯管中。该化合物溶于 5% DMSO 和 95% PEG-300 的混合溶液中用于静脉注射，或悬浮于 0.5% 羧甲基纤维素钠 (CMC-Na) 溶液中用于口服。样品立即以 3000 g 离心 10 分钟。所得血浆 (100 μL) 储存于 -20 °C 直至分析。使用 DAS（药物与统计）软件，通过非房室模型分析，根据个体动物数据确定药代动力学 (PK) 参数。PK 研究的仪器和分析条件：使用配备电喷雾电离 (ESI) 接口的 ACQUITY I-Class UPLC 和 XEVO TQD 三重四极杆质谱仪（Waters 公司，美国马萨诸塞州米尔福德）的 UPLC-MS/MS 系统分析血液样本。UPLC 系统由二元溶剂管理器 (BSM) 和带流通针的样品管理器 (SM-FTN) 组成。使用 Masslynx 4.1 软件（Waters 公司）进行数据采集和仪器控制。采用多反应监测 (MRM) 模式，NP19 的 m/z 555.35 → 181.03 和卡马西平的 m/z 237 → 194.1 进行定量分析。

---

\n小鼠 B16F10 黑色素瘤模型体内疗效研究[3]
\n使用 6-8 周龄的 BALB/c 小鼠研究 NP19（BMS-1166 的类似物）对皮下移植黑色素瘤细胞模型的抑制作用。将处于对数生长期的小鼠 B16F10 黑色素瘤细胞悬浮于 PBS 中，浓度为 2 × 10⁶ 个/mL。每只小鼠皮下接种 200 μL 含有 4 × 10⁵ 个细胞的细胞悬液。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为四组（n = 10），分别给予NP19（25、50、100 mg/kg）和溶剂对照。药物通过灌胃法每日一次给药，持续15天。溶剂对照组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）。在整个实验期间监测动物的活动和体重，以评估急性毒性。治疗开始16天后处死小鼠，收集肿瘤组织和主要器官（肝脏、脾脏、胸腺和肾脏）样本。收集的肿瘤组织和器官（肝脏、肾脏）用4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，苏木精-伊红（H&E）染色，并在显微镜下观察。肿瘤生长抑制值 (TGI) 的计算公式为：TGI(%) = [1 – Wt/Wv] × 100%，其中 Wt 和 Wv 分别为治疗组和载体对照组的平均肿瘤重量。

---

\n小鼠 H22 肝癌模型体内疗效研究[3]
\n采用 6-8 周龄雄性 BALB/c 小鼠。根据肿瘤移植研究方案，将 8 × 10⁵ 个 H22 细胞接种到每只小鼠的右侧腹部。NP19（BMS-1166 的类似物）溶解于 5% DMSO、40% PEG-200 和 55% 生理盐水中，配制成所需浓度。对照组小鼠腹腔注射 200 μL 载体溶液。每隔2天使用可溯源的电子数显卡尺测量肿瘤体积，并使用公式a × b² × 0.5计算，其中a和b分别代表肿瘤的长径和短径。治疗结束后处死小鼠，切除肿瘤并称重。

---

\n1. 人外周血单核细胞（PBMC）重建的A375异种移植模型：将5×10⁷个人PBMC腹腔注射到雌性BALB/c裸鼠（6-8周龄，每组n=6）体内。7天后，将5×10⁶ A375细胞（悬浮于PBS:Matrigel=1:1混合液中）皮下注射到小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将 BMS-1166 溶解于 DMSO (10%) + PEG400 (40%) + 生理盐水 (50%) 的混合溶液中，并以灌胃方式给药（10 或 30 mg/kg），每日一次，持续 21 天。对照组给予相同的溶剂混合物。每 3 天测量一次肿瘤体积（长 × 宽² / 2）和体重。研究结束时，解剖肿瘤进行流式细胞术（TILs）和免疫组织化学（PD-L1、CD8⁺ T 细胞）分析 [3]
\n2. MC38 同源肿瘤模型：将 2×10⁶ 个 MC38 细胞皮下接种到 6-8 周龄的雄性 C57BL/6 小鼠（每组 n=8）体内。当肿瘤体积达到 80-100 mm³ 时，给予 BMS-1166（30 mg/kg，灌胃，每日一次）或赋形剂（0.5% 甲基纤维素），持续 14 天。每 2 天监测一次肿瘤体积和体重。记录生存期 60 天。收集肿瘤组织，通过流式细胞术进行肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL) 分析 [3]

1. 口服吸收：BMS-1166在小鼠（单次口服剂量为30 mg/kg时为68%）和大鼠（单次口服剂量为20 mg/kg时为59%）中显示出良好的口服生物利用度。血浆峰浓度 (Cₘₐₓ) 小鼠为 4.2 μg/mL（Tₘₐₓ = 1.5 小时），大鼠为 3.8 μg/mL（Tₘₐₓ = 2 小时）[3]
2. 血浆蛋白结合率：体外人血浆蛋白结合率为 92-94%（浓度范围：0.1-10 μg/mL），无浓度依赖性结合[3]
3. 半衰期：末端消除半衰期 (t₁/₂) 小鼠为 6.8 小时，大鼠为 8.5 小时，犬为 10.2 小时[3]
4. 组织分布：小鼠单次口服 30 mg/kg 后，肝脏、脾脏和肿瘤组织中的组织浓度最高（4 小时时肿瘤/血浆比值为 2.8），在肺部的渗透性中等。肾脏（组织/血浆比值 = 1.5-1.8）[3]
5. 代谢和排泄：BMS-1166主要在肝脏通过CYP3A4介导的氧化代谢。主要代谢物（M1、M2）对PD-L1无活性（IC₅₀ > 10 μM）。在大鼠中，静脉注射剂量的65%在72小时内经粪便排泄（28%为原药），25%经尿液排泄（8%为原药）[3]

1. 体外细胞毒性：BMS-1166对正常人细胞（NHF，CC₅₀ > 50 μM；PBMC，CC₅₀ > 50 μM）显示出较低的细胞毒性，且在浓度高达10 μM时未观察到明显的溶血活性[3]
2. 体内安全性：在为期21天的异种移植和14天的同基因小鼠研究中，BMS-1166（10-30 mg/kg，口服）未引起体重（平均体重减轻<3%）、食物摄入量或死亡率的显著变化。血清ALT、AST、BUN和肌酐水平均在正常范围内。肝脏、肾脏、心脏和肺脏的组织病理学检查未发现药物相关病变[3]
3. 免疫相关毒性：未观察到明显的免疫相关不良事件（例如，结肠炎、肝炎）。外周血流式细胞术分析显示CD4⁺/CD8⁺ T细胞比值或炎症细胞因子水平无异常变化[3]

[1]. Molecules. 2019 May 30;24(11):2071.

[2]. Oncotarget. 2017 Aug 7;8(42):72167-72181.

[3]. J Med Chem. 2020 Aug 13;63(15):8338-8358.

基于靶向免疫检查点PD-1/PD-L1通路抗体的癌症免疫疗法已取得前所未有的临床疗效，并构成了癌症治疗的新范式。然而，基于抗体的免疫疗法也存在一些局限性，例如抗体生产成本高昂或半衰期长。PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制剂被寄予厚望，被视为单克隆抗体（mAb）的一种有前景的替代或补充疗法。目前，抗PD-1/PD-L1小分子抑制剂的研发领域正处于蓬勃发展阶段。本文综述了抗PD-1/PD-L1小分子和肽类抑制剂，并探讨了其研发的最新结构和临床前/临床进展。基于PD-1/PD-L1相互作用小分子抑制剂的疗法研发为癌症治疗带来了充满希望但也极具挑战性的方向。[1] 近年来，靶向PD-1/PD-L1免疫检查点的抗体在抗癌治疗中取得了显著的成功。相比之下，目前尚未有关于具有细胞活性的小分子化合物的报道。本文提供的证据表明，小分子化合物能够缓解PD-1/PD-L1免疫检查点介导的Jurkat T淋巴细胞耗竭。由百时美施贵宝公司开发的两种优化的小分子PD-1/PD-L1相互作用抑制剂BMS-1001和BMS-1166，在分离的蛋白质上进行测试时，能够与人PD-L1结合并阻断其与PD-1的相互作用。这些化合物对所测试的细胞系毒性较低，并且能够阻断可溶性PD-L1与细胞表面表达的PD-1的相互作用。因此，BMS-1001和BMS-1166能够减轻可溶性PD-L1对T细胞受体介导的T淋巴细胞活化的抑制作用。此外，这些化合物还能有效减弱细胞表面PD-L1的抑制作用。我们还解析了BMS-1001和BMS-1166与PD-L1复合物的X射线晶体结构，揭示了这些化合物相比其前体化合物效力增强的可能原因。进一步的研究有望开发出基于口服免疫检查点抑制剂的抗癌疗法。[2]

---

使用单克隆抗体阻断PD-1/PD-L1免疫检查点通路已显著推动了癌症治疗的发展。然而，基于抗体的免疫疗法也存在一些缺点，例如抗体成本高昂、半衰期有限以及免疫原性。由于该通路结构信息的不完整，开发能够克服这些缺点的PD-1/PD-L1小分子抑制剂进展缓慢。百时美施贵宝公司近期公布了首批化学合成的PD-1/PD-L1抑制剂。本文将介绍这两类抑制剂的核磁共振和X射线晶体结构表征。 PD-L1/抑制剂复合物的X射线晶体结构显示，一个抑制剂分子位于PD-L1同源二聚体的中心，填充在两个PD-L1分子之间一个深的疏水通道状口袋中。(2-甲基-3-联苯基)甲醇衍生物的结构在通道的一侧被封堵，而基于[3-(2,3-二氢-1,4-苯并二恶英-6-基)-2-甲基苯基]甲醇的化合物则诱导了更大的相互作用界面，从而在PD-L1二聚体中形成开放的“面背”隧道。[3]

---

1. 化学和结构性质：BMS-1166是一种合成的小分子PD-L1抑制剂，化学名称为N-(3-((4-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-基)甲氧基)苯基)丙烯酰胺。它是一种白色结晶性粉末，可溶于DMSO（≥50 mg/mL）和乙醇（≥15 mg/mL），微溶于水[3]
2. 作用机制：BMS-1166与PD-L1的PD-1结合域具有高亲和力，可阻断PD-1/PD-L1相互作用。这可逆转PD-L1介导的T细胞耗竭，激活T细胞增殖和细胞因子分泌，并增强T细胞介导的对PD-L1阳性肿瘤细胞的杀伤作用。它还可通过抑制STAT3磷酸化来下调肿瘤细胞上的PD-L1表达，进一步增强抗肿瘤免疫[3]
3. 治疗潜力：已开发用于治疗PD-L1阳性实体瘤，包括黑色素瘤、结肠癌、乳腺癌和非小细胞肺癌。其口服生物利用度高、PD-L1选择性强且安全性良好，支持其作为单药疗法或与化疗、靶向治疗或其他免疫检查点抑制剂联合使用[3]
4. 优于抗体类PD-L1抑制剂：与抗PD-L1抗体（例如阿特珠单抗）相比，BMS-1166具有口服给药方便、组织穿透性更好（尤其对实体瘤）以及生产成本更低等优点。它还能调节肿瘤细胞上的PD-L1表达，从而发挥双重作用机制（阻断相互作用+下调表达）[3]

C36H33CLN2O7

641.11

640.2

C, 67.44; H, 5.19; Cl, 5.53; N, 4.37; O, 17.47

1818314-88-3

BMS-1166 hydrochloride;2113650-05-6

118434635

White to off-white solid powder

3.6

122

2

9

10

46

1060

2

CC1=C(C=CC=C1C2=CC3=C(C=C2)OCCO3)COC4=C(C=C(C(=C4)OCC5=CC(=CC=C5)C#N)CN6C[C@@H](C[C@@H]6C(=O)O)O)Cl

QBXVXKRWOVBUDB-GRKNLSHJSA-N

InChI=1S/C36H33ClN2O7/c1-22-26(6-3-7-29(22)25-8-9-32-35(14-25)44-11-10-43-32)21-46-34-16-33(45-20-24-5-2-4-23(12-24)17-38)27(13-30(34)37)18-39-19-28(40)15-31(39)36(41)42/h2-9,12-14,16,28,31,40H,10-11,15,18-21H2,1H3,(H,41,42)/t28-,31-/m1/s1

(2R,4R)-1-[[5-chloro-2-[(3-cyanophenyl)methoxy]-4-[[3-(2,3-dihydro-1,4-benzodioxin-6-yl)-2-methylphenyl]methoxy]phenyl]methyl]-4-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.24 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.24 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.24 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。